Hà thủ ô đỏ đã được sử dụng từ lâu trong những bài thuốc dân gian Á Đông và được lưu truyền đến ngày nay trong các sản phẩm dược phẩm, mỹ phẩm... Trong Dược điển Việt Nam, tiêu chuẩn chất lượng Hà thủ ô đỏ và thành phẩm ở nước ta chỉ dựa trên hoạt chất anthraglycosid, song những năm gần đây, các tài liệu nước ngoài không còn sử dụng hoạt chất này nữa mà dựa trên các hoạt chất thuộc nhóm stilben. Các hoạt chất thuộc nhóm stilben là thành phần chống oxy hóa có trong Hà thủ ô đỏ được chú ý nhiều do khả năng chữa được các bệnh rối loạn của tuổi già, bệnh lão khoa như rối loạn tim mạch, rối loạn nhận thức, Alzheimer… Những nghiên cứu mới trên in vivo và in vitro về khả năng chống oxy hóa, ethyl acetat được chứng minh có khả năng chiết hoạt chất stilben nhiều. Mặt khác, lần đầu tiên Dược điển Trung Quốc 2005 đã đưa tiêu chuẩn định lượng hoạt chất trên vào tiêu chuẩn Hà thủ ô đỏ và Hà thủ ô đỏ chế cũng như trong những bài thuốc chứa Hà thủ ô đỏ. Anthraglycosid bị giảm gần như không còn trong quá trình chế biến nhưng thành phần stilben phải đạt được tiêu chuẩn định lượng trong giới hạn cho phép. Do vậy khi chế biếnbào chế cao Hà thủ ô đỏ và chế phẩm theo tiêu chuẩn mới này, ngoài tiêu chuẩn cũ về hoạt chất anthraglycosid, ta cần phải đưa tiêu chuẩn mới về định lượng thành phần stilben. Việc định lượng hoạt chất này rất phức tạp như chất chuẩn khó tinh chế và phải định lượng bằng phương pháp HPLC nên ta có thể thay bằng định lượng hoạt chất thô qua chiết xuất bằng ethyl acetat. Do đó, đề tài “Bước đầu nghiên cứu bào chế cao Hà thủ ô đỏ theo tiêu chuẩn mới” được thực hiện với những nội dung sau: Kiểm nghiệm nguyên liệu nhằm chọn lựa dược liệu Hà thủ ô đỏ sống để chế biến thành Hà thủ ô đỏ chế trên cơ sở định lượng hoạt chất anthraglycosid và hàm lượng nhóm stilben thô chiết được bằng ethyl acetat. Xây dựng quy trình chế biến Hà thủ ô đỏ với Đậu đen theo phương pháp cổ truyền và khảo sát sự thay đổi của thành phần anthraquinon, hợp chất stilben thô trước và sau khi chế biến. Xây dựng quy trình bào chế cao Hà thủ ô đỏ từ Hà thủ ô đỏ chế với Đậu đen và đề xuất tiêu chuẩn thành phẩm và phương pháp kiểm nghiệm.
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH LÊ THỊ ANH THẢO BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ CAO HÀ THỦ Ơ ĐỎ THEO TIÊU CHUẨN MỚI KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC ii Thành phố Hồ Chí Minh – Năm 2010 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH LÊ THỊ ANH THẢO BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ CAO HÀ THỦ Ô ĐỎ THEO TIÊU CHUẨN MỚI KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC Thầy hướng dẫn: Th.S LÊ VĂN LĂNG ii Thành phố Hồ Chí Minh – Năm 2010 ii MỤC LỤC Lời cám ơn iv Danh mục chữ viết tắt .v Danh mục hình vi Danh mục bảng vii MỤC LỤC ii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT v DANH MỤC CÁC HÌNH v DANH MỤC CÁC BẢNG vi CHƯƠNG ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU .2 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP 16 3.1 NGUYÊN LIỆU, HÓA CHẤT, DUNG MÔI, TRANG THIẾT BỊ 16 3.1.2 Hóa chất, dung mơi 16 3.1.3 Thiết bị, dụng cụ 16 3.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 3.2.1 Xử lý nguyên liệu 17 3.2.2 Kiểm nghiệm dược liệu [5], [20] 17 3.2.5 Thẩm định quy trình phân tích .24 3.2.8 Xây dựng quy trình chiết xuất tối ưu với giúp đỡ phần mềm thông minh 26 3.2.8.1 Mơ hình thực nghiệm 26 Y = 27 3.2.8.2 Quy trình chiết xuất 27 3.2.8.3 Phân tích liệu 27 3.2.8.4 Thực nghiệm kiểm chứng 28 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 30 4.1 KIỂM NGUYÊN LIỆU HÀ THỦ Ô ĐỎ: 30 4.6 XÂY DỰNG QUY TRÌNH CHIẾT XUẤT CAO HÀ THỦ Ô ĐỎ 44 4.6.1 Thiết kế mơ hình chiết xuất 44 iii LỜI CẢM ƠN Xin kính gửi lòng biết ơn sâu sắc đến thầy Lê Văn Lăng quan tâm và tận tình chỉ bao, giúp đỡ tạo điều kiện cho em hoàn thành khóa luận Xin chân thành cam ơn cô Th.S Lê Thị Thu Vân-Giang viên Bộ môn Bào chế dành thời gian quý báu để nhận xét, đánh giá và phan biện giúp cho khoá luận hoàn chỉnh Xin cam ơn thầy Đỗ Quang Dương-Bợ mơn Vi tính Dược và Võ Thị Bạch Huệ- Mơn Hóa Phân Tích – Kiểm Nghiệm giúp đõ em quá trình làm khóa ḷn Vơ cùng cam ơn sự giúp đỡ và tạo điều kiện trang thiết bị giúp cho việc hoàn thành khoá luận của quý thầy cô ở bộ mơn Bào Chế, Bợ Mơn Dược Liệu, Bợ mơn Hóa Dược, Bợ Mơn Hóa Phân Tích – Kiểm Nghiệm… Vơ cùng biết ơn Ban Chủ Nhiệm Khoa Dược và quý thầy cô tận tâm dạy dỗ và truyền đạt kiến thức suốt khoá học iv Xin chân thành cám ơn các bạn lớp D2005, đặc biệt là các bạn tham gia làm khóa ḷn bợ mơn Bào Chế và em Khoa D2006 quan tâm, động viên và nhiệt tình giúp đỡ mình suốt quá trình học tập và thực khoá luận LÊ THỊ ANH THẢO v DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DĐVN Dược điển Việt Nam DĐTQ Dược điển Trung Quốc HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao (High Performance Liquid Chromatography) In vitro Trong ống nghiệm In vivo Trên sinh vật RSD Độ lệch chuẩn tương đối (Relative Standard Deviation) SKLM Sắc ký lớp mỏng TT Thuốc thử UV Tử ngoại (Ultra Violet) DANH MỤC CÁC HÌNH MỤC LỤC ii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT v vi DANH MỤC CÁC HÌNH v DANH MỤC CÁC BẢNG vi CHƯƠNG ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU .2 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP 16 3.1 NGUYÊN LIỆU, HĨA CHẤT, DUNG MƠI, TRANG THIẾT BỊ 16 3.1.2 Hóa chất, dung mơi 16 3.1.3 Thiết bị, dụng cụ 16 3.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 3.2.1 Xử lý nguyên liệu 17 3.2.2 Kiểm nghiệm dược liệu [5], [20] 17 3.2.5 Thẩm định quy trình phân tích .24 3.2.8 Xây dựng quy trình chiết xuất tối ưu với giúp đỡ phần mềm thông minh 26 3.2.8.1 Mơ hình thực nghiệm 26 Y = 27 3.2.8.2 Quy trình chiết xuất 27 3.2.8.3 Phân tích liệu 27 3.2.8.4 Thực nghiệm kiểm chứng 28 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 30 4.1 KIỂM NGUYÊN LIỆU HÀ THỦ Ô ĐỎ: 30 4.6 XÂY DỰNG QUY TRÌNH CHIẾT XUẤT CAO HÀ THỦ Ơ ĐỎ 44 4.6.1 Thiết kế mơ hình chiết xuất 44 DANH MỤC CÁC BẢNG MỤC LỤC ii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT v DANH MỤC CÁC HÌNH v DANH MỤC CÁC BẢNG vi CHƯƠNG ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU .2 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP 16 3.1 NGUN LIỆU, HĨA CHẤT, DUNG MƠI, TRANG THIẾT BỊ 16 3.1.2 Hóa chất, dung mơi 16 3.1.3 Thiết bị, dụng cụ 16 vii 3.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 3.2.1 Xử lý nguyên liệu 17 3.2.2 Kiểm nghiệm dược liệu [5], [20] 17 3.2.5 Thẩm định quy trình phân tích .24 3.2.8 Xây dựng quy trình chiết xuất tối ưu với giúp đỡ phần mềm thơng minh 26 3.2.8.1 Mơ hình thực nghiệm 26 Y = 27 3.2.8.2 Quy trình chiết xuất 27 3.2.8.3 Phân tích liệu 27 3.2.8.4 Thực nghiệm kiểm chứng 28 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 30 4.1 KIỂM NGUYÊN LIỆU HÀ THỦ Ô ĐỎ: 30 4.6 XÂY DỰNG QUY TRÌNH CHIẾT XUẤT CAO HÀ THỦ Ô ĐỎ 44 4.6.1 Thiết kế mơ hình chiết xuất 44 1-10 30 4,4708 4,63 1,8939 1,856 0,001 0,001 1-20 30 0,9995* 0,981* 1,1573 1,26 0,002 0,002 1-20 30 1,578 1,209 0,9995 0,823 0,001* 0,001* 1-30 30 0,4998 0,818 0,5261* 0,936* 0,001 0,001 1-30 30 1,1835 1,239 0,2106 0,373 0,001 0,001 1-10 60 7,3107* 7,564* 3,8923 3,88 0,003 0,003 1-10 60 7,784 7,525 3,4716* 3,693* 0,003 0,003 1-20 60 5,1278 4,998 2,6298 2,596 0,003* 0,003* 1-20 60 5,3908 5,295 1,578 1,643 0,002 0,002 1-30 60 1,6568 1,685 1,8935 1,972 0,002 0,002 1-30 60 2,4194 2,386 1,8409 1,901 0,001 0,001 1-30 60 2,8664 2,869 1,7357 1,627 0,002 0,002 *: liệu sử dụng nhóm thử nhằm đánh giá chất lượng mơ hình dự đoán 4.6.2 Phân tích liệu Đới với biến y1 là hàm lượng anthraquinon dịch chiết cồn 900 của Hà thủ ô đỏ (mg/ml) Y1 bị ảnh hưởng nhiều yếu tố tỷ lệ dược liệu: dung môi nhiệt độ Yếu tố pH có ảnh hưởng đến y1 khơng nhiều Hình 4.16: Ảnh hưởng yếu tố: tỷ lệ dược liệu: dung môi, nhiệt độ, pH lên y1 Bảng 4.11: Ảnh hưởng biến x lên biến y1 Ảnh hưởng biến x x1 x2 x3 Sự thay đổi biến y1 Đối với biến y2 hàm lượng anthraquinon dịch chiết ethyl acetat (mg/ml) Y2 bị ảnh hưởng nhiều yếu tố tỷ lệ dược liệu: dung mơi nhiệt độ Yếu tố pH có ảnh hưởng đến y2 không nhiều Bảng 4.12: Ảnh hưởng biến x lên biến y2 x1 X2 x3 Ảnh hưởng biến x Sự thay đổi biến y2 Hình 4.17: Ảnh hưởng yếu tố: tỷ lệ dược liệu: dung môi, nhiệt độ, pH lên y2 Đối với Y3 là lượng hoạt chất khô chiết ethyl acetat (mg/ml) Ảnh hưởng yếu tố: tỷ lệ dược liệu-dung môi, nhiệt độ, pH lên y3 tương đối phức tạp Khi tỉ lệ dược liệu-dung môi từ 1-25 đến 1-50 ,pH khoảng đến nhiệt độ từ 35 0C đến 50 0C y3 có biến đổi mạnh Tỉ lệ dược liệu-dung mơi thấp, nhiệt độ cao, pH acid y tăng Nếu thấp vượt qua mức này, y3 khơng có biến đổi Với tỉ lệ dược liệu-dung mơi mơi trường acid từ đến ảnh hưởng đến y Càng tiến pH y3 tăng mạnh Hình 4.18: Ảnh hưởng yếu tố: tỷ lệ dược liệu-dung mơi, nhiệt độ, pH lên y3 4.6.3 Tối ưu hóa thơng số Bảng 4.13 Đánh giá chất lượng mơ hình tối ưu hóa chiết xuất Hà thủ đỏ Y1 Y2 Y3 R2 luyện R2 thử 0.99 0.98 0.98 0.99 0,95 0,99 Dựa phần mềm BC-Pharsoft tìm được: Thông số tối ưu x1= tỷ lệ dược liệu: dung môi=1:10 x2= nhiệt độ= 600 x3= pH=5 Kết qua dự đoán Y1= hàm lượng anthraquinon dịch chiết cồn 90% Hà thủ ô đỏ (mg/ml) = 7,60 mg/ml Y2= hàm lượng anthraquinon dịch chiết ethyl acetat Hà thủ ô đỏ (mg/ml) = 3,84 mg/ml Y3= lượng chất khô chiết etyl acetate (mg/ml) = 0,003 mg/ml 4.6.4 Thực nghiệm kiểm chứng Tiến hành lặp lại lần quy trình chiết xuất tối ưu xác định hàm lượng anthraquinon dịch chiết Kết thực nghiệm kiểm chứng kết dự đoán phần mềm nghiên cứu khoa Dược Đại học Y Dược trình bày Bảng 4.14 Bảng 4.14 Kết dự đoán thực nghiệm Hà thủ ô đỏ Kết qua thực nghiệm Phần Biến số (yi) Hàm lượng anthraquinon mềm TB chiết cồn 90 (mg/ml) Hàm lượng anthraquinon 7,60 7,59 7,574 7,416 7,784 acetat(mg/ml) Lượng chất khô chiết 3,84 3,82 3,997 3,787 3,682 etyl acetate (mg/ml) 0,003 0,003 0,003 0,002 0,003 chiết ethyl Phân tích ANOVA yếu tố khơng lặp, so sánh khác biệt kết tối ưu phần mềm thực nghiệm cho thấy kết tối ưu từ phần mềm thực nghiệm khơng có khác có ý nghĩa mặt thống kê (P = 0,21 > 0,05) 4.7 QUY TRÌNH TỐI ƯU CHIẾT XUẤT HÀ THỦ Ơ ĐỎ Cơng thức: Ngun liệu: Hà thủ ô đỏ : 100 g Hà thủ ô đỏ chế xay nhỏ, rây qua rây cm Cồn 90% : 1000 ml Cồn 90% acid hóa đến pH=5 Phương pháp ngâm không khuấy trộn Dụng cụ-thiết bị Rây, becher 2000 ml, phễu, chén sứ Bếp cách thủy Cách tiến hành 100 g Hà thủ ô đỏ chế xay mịn, rây qua rây 1cm Ngâm Hà thủ ô đỏ 500 ml dung môi cồn không khuấy trộn nhiệt độ 60 oC bếp cách thủy Để nguội Lọc dịch chiết, cô bếp cách thủy nhiệt độ 50 oC đến dịch chiết khoảng 100 ml Để yên ngày, lọc lại Đóng chai, dán nhãn Quy trình Hà thủ ô đỏ - Xay mịn - Rây qua rây 1cm Bột dược liệu Hà thủ ô đỏ - Chiết cồn 900 có pH=5 - Tỷ lệ dược liệu: dung môi 1:10 - Nhiệt độ chiết giữ cố định 60 oC - Thời gian lần chiết Dịch chiết - Lọc Dịch lọc - Cô bếp cách thủy 50 oC Cao lỏng Hà thủ đỏ Hình 4.19: Quy trình chiết xuất tối ưu Hà thủ ô đỏ 4.8 ĐỀ XUẤT TIÊU CHUẨN CAO HÀ THỦ Ô ĐỎ 4.8.1 Chỉ tiêu chất lượng Cảm quan: Chất lỏng, màu nâu đen, mùi đặc trưng Hà thủ ô đỏ Độ tan: Cao lỏng Hà thủ đỏ tan hồn tồn dung môi sử dụng để điều chế cao cồn 900 Độ trong, mùi vị, độ đồng màu sắc: Cao thuốc có mùi vị đặc trưng dược liệu sử dụng, phải đồng nhất, khơng có váng mốc, khơng có cặn bã dược liệu vật lạ Tỷ trọng: Ở nhiệt độ 20 0C, tỷ trọng 0,820-0,840 pH :6-7 Định tính có phản ứng anthraquinon Định lượng - Định lượng anthraquinon: không nhỏ 5% (mg/ml) - Khối lượng chất khô chiết ethyl acetat: khơng 0,2% (g/ml) 4.8.2 Phương pháp thử Cảm quan: Mô tả màu sắc, mùi vị cao Độ tan: Lấy ml cao Hà thủ ô đỏ cho vào ml cồn 90%, cao phải hòa tan hồn tồn Độ trong, mùi vị, độ đồng màu sắc: Lấy riêng phần phía chai thuốc để lại khoảng 10 - 15 ml Chuyển phần lại chai vào bát sứ men trắng, nghiêng bát cho dịch chảy thành bát tạo thành lớp dễ quan sát Quan sát ánh sáng tự nhiên, thuốc phải đạt yêu cầu quy định Tỷ trọng: Lau tỷ trọng kế ethanol ether Dùng đũa thủy tinh trộn cao Đặt nhẹ nhàng tỷ trọng kế vào cao cho tỷ trọng kế không chạm vào thành đáy dụng cụ đựng chất thử Chỉnh nhiệt độ tới 20 0C tỷ trọng kế ổn định, đọc kết vòng khum mực chất lỏng Định tính A Lấy ml cao dược liệu cho vào ống nghiệm, cô cạn, ngâm với 10 ml nước 30 phút, gạn lấy ml, thêm - giọt dung dịch natri hydroxyd (TT) có màu đỏ sẫm B Lấy 0,1 ml cao, thêm 10 ml dung dịch natri hydroxyd 10% (TT) đun cách thủy phút, để nguội, lọc, dịch lọc acid hóa dung dịch acid hydrocloric 10% (TT) đến môi trường acid (thử giấy quỳ), sau lắc với 20 ml ether etylic (TT), lớp ether etylic có màu vàng cam, gạn lấy ml ether, thêm ml dung dịch amoniac đậm đặc (TT), lớp amoniac có màu đỏ C Lấy 0,2 ml cao dược liệu cô cạn, đun cách thủy với 10 ml ethanol 96% (TT) phút, để nguội, lọc, lấy ml dịch lọc để bay đến khô, thêm ml dung dịch antimoni clorid (TT) có màu đỏ hay tím đỏ D Phương pháp sắc ký lớp mỏng Bản mỏng: silica gel 60 F254 Dung dịch thử: Lấy 0,25 ml cao dược liệu cô cạn, đun cách thủy với 20 ml ethanol 96% (TT) 30 phút, để nguội, lọc, để bay đến cắn khô Cắn thêm vào 10 ml nước ml dung dịch acid hydrocloric 10% (TT) đun cách thủy 30 phút, để nguội sau lắc với 20 ml ether etylic (TT) lần, dịch ether bay khoảng ml dùng làm dung dịch thử Dung dịch đối chiếu: Dùng 0,25 g bột Hà thủ ô đỏ (mẫu chuẩn), chiết dung dịch thử Cách tiến hành: Chấm riêng biệt lên mỏng µl dung dịch thử dung dịch đối chiếu Sau triển khai, để khơ mỏng khơng khí nhiệt độ phòng, phát vết ánh sáng tử ngoại bước sóng 365 nm Trên sắc ký đồ dung dịch thử phải cho vết có màu sắc giá trị Rf với vết sắc ký đồ dung dịch đối chiếu Định lượng - Định lượng anthraquinon: Lấy ml cao lỏng cô bếp cách thủy đến cắn khô Thêm vào ml H 2SO4, ml H2O2 Sau 15 phút, thêm vào 100 ml ether etylic (TT) chiết nóng với sinh hàn lạnh (t=10 0C) 30 phút Để nguội, lọc qua bơng vào bình lắng gạn 250 ml, rửa 10 ml ether etylic, lấy lớp ether etylic Cho lớp acid trở lại bình nón, lặp lại cách chiết lần, lần dùng 30 ml ether etylic 15 phút Tập trung dịch lọc vào bình lắng gạn trên, lấy lớp ether etylic Thêm cẩn thận 50 ml dung dịch kiềm–amoniac (TT) vào dịch chiết ether etylic đựng bình lắng gạn, lắc Sau hỗn hợp phân lớp hoàn toàn, gạn lớp nước màu đỏ suốt vào bình định mức 250 ml Tiếp tục chiết lớp ether lần, lần 40 ml dung dịch kiềmamoniac, Tập trung dịch chiết kiềm vào bình định mức 250 ml thêm dung dịch kiềmamoniac vạch Đo mật độ quang bước sóng 520 nm cốc dày cm so sánh với dung dịch kiềmamoniac Nồng độ anthranoid dung dịch cần đo biểu thị 1,8-dihydro anthraquinon xác định đường tuyến tính xây dựng theo cobalt clorid (TT) Theo quy ước, mật độ quang dung dịch cobalt clorid 1% mật độ quang 0,36 mg 1,8 dihydroxy anthraquinon 100 ml dung dịch kiềm-amoniac Hàm lượng phần trăm dẫn chất anthraquinon so với cao tính theo cơng thức: x= c × 250 a c : Nồng độ dẫn chất anthraquinon mg/100ml tính theo đường tuyến tính a : Thể tích cao dược liệu tính ml - Khối lượng chất khô chiết ethyl acetat: Cho ml cao lỏng vào bình nón 250 ml, bếp cách thủy đến cắn khơ.Thêm xác 100 ml ethyl acetat, đậy kín, ngâm lạnh, lắc đầu, sau để yên 18 Thêm đủ khối lượng ban đầu Lọc qua phễu lọc khô vào bình hứng khơ thích hợp Lấy xác 20 ml dịch lọc cho vào cốc thuỷ tinh cân bì trước, cách thủy đến cắn khô Sấy cắn 105 0C giờ, lấy để nguội bình hút ẩm 30 phút, cân nhanh để xác định khối lượng cắn sau sấy, tính phần trăm lượng chất chiết ethyl acetat theo dược liệu khơ Bảo quản Đựng lọ kín để nơi mát Công dụng Bổ gan thận, bổ máu, thuốc dùng nhiều cho người có râu tóc bạc sớm, lưng gối đau mỏi, di tinh, đại tiện huyết, ung nhọt, tràng nhạc, thần kinh suy nhược, sốt rét lâu ngày Cách dùng Ngày dùng 12-20 ml CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN Đề tài làm mục tiêu sau: - Đánh giá khác Hà thủ ô đỏ Hà thủ đỏ chế, góp phần vào chun mục Hà thủ ô đỏ DĐVN - So sánh quy trình chế biến Hà thủ đỏ với Đậu đen nhằm có lựa chọn phương pháp phù hợp - Xây dựng dược quy trình chiết xuất tối ưu Hà thủ ô đỏ nhằm nâng cao chất lượng cao Hà thủ đỏ - Xây dựng quy trình kiểm nghiệm cao Hà thủ ô đỏ Kiểm nghiệm nguyên liệu Anthraquinon xem thành phần định chất lượng Hà thủ ô đỏ DĐVN, nhiên, hàm lượng anthraquinon Hà thủ ô đỏ giảm nhiều q trình chế biến Do đó, dựa vào thành phần anthraquinon mà đánh giá chất lượng Hà thủ ô đỏ chế Sự khác biệt mô tả thành phần hóa học Hà thủ đỏ sống chế cho thấy cần có chuyên luận riêng Hà thủ đỏ sống chế để có kết kiểm nghiệm đáng tin cậy Bên cạnh đó, tham khảo tài liệu Dược điển Trung Quốc, nhận thấy anthraquinon không xem yếu tố định chất lượng Hà thủ đỏ mà 2,3,5,4’ tetrahydroxystilbene–2–0–β–D–glucosid Do đó, để đánh giá chất lượng Hà thủ cần phải vừa dựa vào phương pháp truyền thống định lượng anthraquinon, vừa phải đánh giá khối lượng chất khô chiết ethyl acetat Chế biến Hà thủ ô đỏ với Đậu đen - So sánh hàm lượng anthraquinon mẫu chế mẫu chưa chế, ta thấy phương pháp làm giảm lượng anthraquinon nửa Tuy nhiên khác không cách biệt nhiều - Đậu đen khơng làm ảnh hưởng đến q trình định lượng anthraquinon Khảo sát ảnh hưởng dung môi đến hiệu suất chiết - Xếp theo thứ tự dung môi chiết nhiều anthraquinon đến anthraquinon nhất: Cồn 90% cồn 60% ethyl acetat cồn 30% - Cồn 90% dung mơi có khối lượng chất thơ ethyl acetat chiết nhiều Do đó, cồn 90% chọn làm dung môi chiết xuất Hà thủ ô đỏ Tối ưu hóa quy trình chiết xuất Với yếu tố cố định thời gian, dung môi, phương pháp chiết xuất, tỉ lệ dược liệu- dung môi 1-10, nhiệt độ 60 0C pH hàm lượng anthraquinon dịch chiết cồn 90% (mg/ml), hàm lượng anthraquinon dịch chiết ethyl acetat (mg/ml), lượng hoạt chất khô chiết ethyl acetat (mg/ml) cao 5.2 ĐỀ NGHỊ Thử tác dụng dược lý khả chống oxy hóa Hà thủ đỏ đánh giá tương quan tỉ lệ thành phần hóa học Hà thủ ô đỏ tác dụng dược lý TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Bộ Khoa học công nghệ (2007), Sách đỏ Việt Nam II, Nhà xuất Khoa học tự nhiên Công nghệ, tr.303-304 Bộ Khoa học Công nghệ (2007), Thực vật chí Việt Nam 11, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, tr.206-208 Bộ Y Tế (2007), Bào chế và Sinh dược học, Nhà xuất Y học, tr.227-230 Bộ Y Tế (2005), Dược học cổ truyền, Nhà xuất Y học, tr.333-334, 250-251 Bộ Y tế (2009), Dược điển Việt Nam IV, Nhà xuất Hà Nội, tr.772-773 Bộ Y tế Bộ Giáo dục đào tạo (1998), Bài giang Dược liệu I, Trung tâm thông tin- Thư viện Đại học quốc gia Hà Nội, tr.240-249 Chung Khang Kiệt, Đỗ Quang Dương (2010), Xây dựng phần mềm BCPharSoft giải toán tối ưu hố cơng thức quy trình sản xuất dược phẩm, Tạp chí Dược học, (4) tr 48-51 Đỗ Huy Bích (2004), Cây th́c và đợng vật làm thuốc ở Việt Nam tập I, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, tr.884-888 Đỗ Tất Lợi (1970), Dược liệu học và các vị thuốc Việt Nam,Nhà xuất Y Học, tr.372-375 10 Đỗ Tất Lợi (2000), Những thuốc và vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất Y học, tr.833-836 11 Lê Văn Lăng, Trần Văn Trễ (2001), Hiện đại hóa bài th́c tiêu phong nḥn gan, Báo cáo nghiệm thu đề tài nhánh cấp Nhà nước, tr.27 12 Nguyễn Trần Tăng Hòa (1997), Góp phần nghiên cứu sự biến đổi lý hóa tính và dạng bào chế của Hà thủ ô đỏ sau chế biến, luận văn tốt nghiệp dược sĩ Đại học, trường Đại học Y dược thành phố Hồ Chí Minh 13 Phạm Xuân Sinh (1998), Phương pháp chế biến thuốc cổ truyền, Nhà xuất Y học, tr.105-108 14 Trần Vân Hiền, Nguyễn Thị Minh Tâm, Đỗ Thái Hằng, Trần Thanh Loan, Trịnh Hiền Trung (2003), Sự thay đổi một số thành phần hóa học và hoạt tính antioxidant của Hà thủ ô đỏ sau bào chế cổ truyền, Báo cáo nghiệm thu đề tài nhánh cấp Nhà nước, Khoa Dược-Bệnh viện Y học cổ truyền Trung ương 15 Trung tâm Khoa học tự nhiên Công nghệ quốc gia (1994), 190% loài có ích ở Việt Nam, Nhà xuất Thế giới, tr.180 16 Viện dược liệu (2001), Công trình nghiên cứu khoa học 1987-2000, Nhà xuất khoa học kỹ thuật, tr.303-305 17 Viện dược liệu (2006), Nghiên cứu thuốc từ thao dược, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, tr.199-220 18 Võ Văn Chi (1999), Từ điển thuốc Việt Nam, Nhà xuất Y học,tr.1157, 537 Tiếng Anh 19 Chen Y., Wang M., Rosen R T., Ho C T (1999), “2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl Radical-Scavenging Active Components from Polygonum multiflorum Thunb.”, J Agric Food Chem., 47, 2226-2228 20 Chinese Pharmacopoeia Commission (2005), Pharmacopoeia of the People’s Republic of China, vol 1, People’s Medical Publishing House, Beijing, pp 228– 229 21 Horikawa K., Mohri T., Tanaka Y., Tokiwa H (1994), “Moderate inhibition of mutagenicity and carcinogenicity of benzo[a]pyrene, 1,6-dinitropyrene and 3,9dinitrofluoranthene by Chinese medicinal herbs”, Mutagenesis, 9(6), 523-526 22 Huang H C., Lee C R., Chao P D L., Chen C C., Chu S H (1991), “Vasorelaxant effect of emodin, an anthraquinone from a chinese herb”, European Journal of Pharmacology, 205, 289-294 23 Ip S P., Tse A S M., Poon M K T., Ko K M., Ma C Y (1997), “Antioxidant Activities of Polygonum multiflorum Thunb., In Vivo and In Vitro”, Phytotherapy Research, 11, 42–44 24 Jiang Z., Xu J., Long M., Tu Z., Yang G., He G (2009), “2, 3, 5, 4′tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside (THSG) induces melanogenesis in B16 cells by MAP kinase activation and tyrosinase upregulation”, Life Sciences, 85, 345–350 25 Kim H K., Choi Y H , Choi J S , Choi S U , Kim Y S , Lee K R., Kim Y K., Ryu S Y (2008), “A New Stilbene Glucoside Gallate from the Roots of Polygonum multiflorum”, Arch Pharm Res, 31(10), 1225-1229 26 Kurian G A, Suryanarayanan S., Raman A., Padikkala J (2010), “Antioxidant effects of ethyl acetate extract of Desmodium gangeticum root on myocardial ischemia reperfusion injury in rat hearts”, Chinese Medicine, 5, 27 Li S., Gu X H., Tang J., Ho C T (2007), “Antioxidant activity of stilbene glycoside from Polygonum multiflorum Thunb in vivo”, Food Chemistry, 104, 1678–1681 28 Lin L C., Nalawade S M., Mulabagal V., Yeh M S., Tsay H S (2003), “Micropropagation of Polygonum multiflorum Thunb and Quantitative Analysis of the Anthraquinones Emodin and Physcion Formed in in Vitro Propagated Shoots and Plants”, Biol Pharm Bull., 26(10), 1467—1471 29 Nguyen Phuong Nam, Do Quang Duong (2009), “Designing a Vietnamese software using soft-computing for modelling and optimising pharmaceutical formulation”, Proceedings of the Sixth Indochina Conference on Pharmaceutical Sciences in Hue, 178-182 30 Ripa F A., Nahar L., Haque M., Islam M (2009), “Antibacterial, Cytotoxic and Antioxidant Activity of Crude Extract of Marsilea Quadrifolia”, European Journal of Scientific Research, 33(1), 123-129 31 Wang R., Tang Y., Feng B., Ye C., Fang L., Zhang L., Li L (2007), “Changes in hippocampal synapses and learning-memory abilities in age-increasing rats and effects of tetrahydroxystilbene glucoside in aged rats”, Neuroscience, 149, 739746 32 Wang X., Zhao L., Han T., Chen S., Wang J (2007), “Protective effects of 2,3,5,4′-tetrahydroxystilbene-2-O-beta-D-glucoside, an active component of Polygonum multiflorum Thunb, on experimental colitis in mice”, European Journal of Pharmacology , 578, 339–348 33 Yim T.K., Wu W K., Mak D H F., Kol K M (1998), “Myocardial Protective Effect of an Anthraquinone-Containing Extract of Polygonum multiflorum Ex Vivo”, Planta Media, 64, 607-611 34 Zhang F., Chen W , Sun L (2008), “LC–VWD–MS Determination of Three Anthraquinones and One Stilbene in the Quality Control of Crude and prepared Roots of Polygonum multiflorum Thunb.”, Chromatographia, 67, 869–874 ... chuẩn Hà thủ ô đỏ Hà thủ ô đỏ chế thuốc chứa Hà thủ ô đỏ Anthraglycosid bị giảm gần khơng q trình chế biến thành phần stilben phải đạt tiêu chuẩn định lượng giới hạn cho phép Do chế biến -bào chế cao. .. truyền, chế Hà thủ đỏ với Đậu đen có tác dụng dẫn thuốc vào kinh thận 2.1.7.3 So sánh Hà thủ ô sống, Hà thủ ô đỏ chế với Đậu đen Đậu đen [4], [18] Bảng 2.1 : So sánh Hà thủ ô sống, Hà thủ ô đỏ chế với... cốt: Hà thủ ô trắng Hà thủ ô đỏ, ngâm nước vo gạo, luyện với mật Chữa đái buốt, máu: Hà thủ ô đỏ, Huyết dụ sắc uống Điều kinh bổ huyết: Hà thủ ô đỏ, Đậu đen, nấu với rượu mật ong thành cao 2.1.6.3