nghiên cứu bào chế hỗn dịch nhỏ mắt tobramycin và dexamethason

Mùa hè với các điều kiện tự nhiên thuận lợi, là thời điểm để các loại vi khuẩn có hại cho mắt phát triển, lan truyền và gây bệnh. Khác với những bệnh khác là có thể dùng thuốc bằng những đường sử dụng gián tiếp như đặt, uống, tiêm …, thì những bệnh về mắt chỉ có hiệu quả cao khi thuốc sử dụng được tiếp xúc trực tiếp với mắt, vì vậy đối với các bệnh về mắt thì thuốc nhỏ (tra, rửa) mắt là dạng bào chế thích hợp. Trong thuốc nhỏ mắt để trị các bệnh lây nhiễm do vi khuẩn, hai nhóm dược chất chính là nhóm kháng sinh và nhóm corticoid. Trong các kháng sinh trị nhiễm khuẩn ở mắt, tobramycin là kháng sinh được ưu tiên hàng đầu, với ưu điểm là sinh khả dụng cao và nhất là có hoạt tính mạnh đối với trực khuẩn mủ xanh Pseudomonas aeruginosae. Còn trong nhóm corticoid, dược chất có tác dụng kháng viêm mạnh là dexamethason base. Do dexamethason base không tan trong nước nên thuốc nhỏ mắt chứa dược chất này phải được bào chế dưới dạng hỗn dịch. Trên thị trường hiện nay, hỗn dịch nhỏ mắt chứa tobramcin và dexamethason base chỉ có biệt dược Tobradex của hãng Alcon với giá thành khá cao (trung bình khoảng 45.000 đồngchai). Còn trong nước, chưa có xí nghiệp dược phẩm nào sản xuất chế phẩm lọai này. Để giảm giá thành sản phẩm cũng như làm phong phú thêm nhóm sản phẩm thuốc nhỏ mắt do trong nước sản xuất, trong khuôn khổ khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ đại học, đề tài: Bước đầu nghiên cứu bào chế hỗn dịch nhỏ mắt tobramycin và dexamethason, được thực hiện. Mục tiêu cụ thể gồm: Xây dựng công thức tối ưu của dạng thuốc hỗn dịch nhỏ mắt chứa tobramycin và dexamethason. Đề nghị một số tiêu chuẩn chất luợng cho thành phẩm.

1 Chương ĐẶT VẤN ĐỀ Mùa hè với điều kiện tự nhiên thuận lợi, thời điểm để loại vi khuẩn có hại cho mắt phát triển, lan truyền gây bệnh Khác với bệnh khác dùng thuốc đường sử dụng gián tiếp đặt, uống, tiêm …, bệnh mắt có hiệu cao thuốc sử dụng tiếp xúc trực tiếp với mắt, bệnh mắt thuốc nhỏ (tra, rửa) mắt dạng bào chế thích hợp Trong thuốc nhỏ mắt để trị bệnh lây nhiễm vi khuẩn, hai nhóm dược chất nhóm kháng sinh nhóm corticoid Trong kháng sinh trị nhiễm khuẩn mắt, tobramycin kháng sinh ưu tiên hàng đầu, với ưu điểm sinh khả dụng cao có hoạt tính mạnh trực khuẩn mủ xanh Pseudomonas aeruginosae Còn nhóm corticoid, dược chất có tác dụng kháng viêm mạnh dexamethason base Do dexamethason base không tan nước nên thuốc nhỏ mắt chứa dược chất phải bào chế dạng hỗn dịch Trên thị trường nay, hỗn dịch nhỏ mắt chứa tobramcin dexamethason base có biệt dược Tobradex hãng Alcon với giá thành cao (trung bình khoảng 45.000 đồng/chai) Còn nước, chưa có xí nghiệp dược phẩm sản xuất chế phẩm lọai Để giảm giá thành sản phẩm làm phong phú thêm nhóm sản phẩm thuốc nhỏ mắt nước sản xuất, khn khổ khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ đại học, đề tài: Bước đầu nghiên cứu bào chế hỗn dịch nhỏ mắt tobramycin dexamethason, thực Mục tiêu cụ thể gồm: - Xây dựng công thức tối ưu dạng thuốc hỗn dịch nhỏ mắt chứa tobramycin dexamethason - Đề nghị số tiêu chuẩn chất luợng cho thành phẩm Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 THUỐC NHỎ MẮT DẠNG HỖN DỊCH 2.1.1 Định nghĩa Thuốc nhỏ mắt dạng hỗn dịch dạng thuốc lỏng, vô khuẩn, dùng để nhỏ vào mắt, hay nhiều dược chất, có dược chất rắn khơng hòa tan, phân tán dạng hạt nhỏ (đường kính từ 0,1µm trở lên) chất dẫn nước dầu Chế phẩm bào chế dạng khô (bột, bột đông khô, viên nén) vô khuẩn, phân tán vào chất lỏng vơ khuẩn thích hợp dùng [6] 2.1.2 Đặc điểm giải phẫu sinh lý mắt [1] Xương sọ Mí Giác mạc Mí Kết mạc Hình 2.1 Giải phẫu mắt (mặt cắt ngang) [15] Thuốc nhỏ mắt sử dụng tiếp xúc với phận mắt là: - Giác mạc gồm lớp: lớp biểu mô, nhu mô nội mô - Kết mạc gồm lớp: lớp lót mặt mí mắt lớp khác tương ứng với mặt ngồi tròng trắng mắt Vùng nối lớp tạo nên túi kết mạc, thuốc sử dụng túi kết mạc Nhờ kết mạc có nhiều mạch máu nên giúp phần lớn dược chất thâm nhập vào mắt 2.1.3 Các yêu cầu kỹ thuật chung thuốc nhỏ mắt Thuốc nhỏ mắt nên có tính chất gần giống nước mắt Nếu không mắt bị kích ứng, tiết thật nhiều nước mắt đẩy thuốc ngòai Việc sản xuất thuốc nhỏ mắt phải đáp ứng yêu cầu nghiêm ngặt sản xuất thuốc tiêm 2.1.3.1 Yêu cầu pH [1] Thuốc nhỏ mắt cần có pH gần với pH nước mắt (pH = 6,3 – 8,6) Nhờ có hệ đệm nước mắt, nên mắt chịu pH từ 3,5 – 10,5 pH thuốc nhỏ mắt có liên quan chặt chẽ đến: + Sự kích ứng mắt + Độ ổn định dược chất + Sinh khả dụng thuốc Trên thực tế, để đảm bảo yêu cầu phức tạp Các hệ đệm trì pH thường dùng cho thuốc nhỏ mắt - Hệ đệm Hind – Goyan - Hệ đệm Gifford (acid boric – natri carbonat ) - Hệ đệm Palitzsch (acid boric – borax) - Hệ đệm acid boric – natri acetat - Hệ đệm acid boric – natri propionat - Hệ đệm Sorensen (natri dihydrophosphat – dinatri hydrophosphat) - Hệ đệm Menghini 2.1.3.2 Yêu cầu độ đẳng trương [1] Thuốc nhỏ mắt cần đẳng trương với nước mắt, hay đẳng trương với dung dịch NaCl 0,9%, có áp suất thẩm thấu khoảng 290 – 310 mEq/L, độ hạ băng điểm: Δt = -0,52 oC đến -0,56 oC Mắt bình thường chịu đựng dung dịch NaCl từ 0,5 – 1,8% Tuy nhiên, thuốc nhỏ mắt ưu trương lại có tác dụng giúp thuốc dễ vào tổ chức mắt, kéo nước ngoài, giúp mắt bớt sưng viêm Các dược chất dùng thuốc nhỏ mắt thường nồng độ thấp nhược trương so với nước mắt, cần sử dụng chất đẳng trương hóa như: NaCl (thơng thường), Na2SO4, NaNO3, KNO3… Các phương pháp tính tốn để đẳng trương hóa - Phương pháp dựa vào độ hạ băng điểm (Công thức LUMÌERE – CHEVROTIER) - Phương pháp dùng đương lượng natri clorid [10] - Phương pháp dùng trị số Sprowls - Phương pháp tính theo phương trình White – Vincent - Phương pháp đồ thị 2.1.3.3 Yêu cầu xác – tinh khiết – suốt [1] Chính xác: Dược chất cần lưu ý loại ngậm nước kết tinh, loại khan nước loại dễ hút ẩm Tinh khiết: Dược chất, tá dược phải loại dược dụng có độ tinh khiết cao Dung mơi sử dụng thường nước cất pha tiêm Trong suốt: Đối với thuốc nhỏ mắt dạng dung dịch Không lọc thuốc nhỏ mắt dạng hỗn dịch Thuốc dạng có lắng đọng lớp chất rắn, sau lắc nhẹ phải dễ dàng phân tán toàn khối 2.1.3.4 Yêu cầu độ vô khuẩn thuốc nhỏ mắt [1], [6] Đối với thuốc nhỏ mắt dùng lần không sử dụng chất bảo quản, thường áp dụng phương pháp tiết khuẩn nhiệt độ lọc vô khuẩn Đối với thuốc nhỏ mắt dùng nhiều lần cần sử dụng chất bảo quản Đặc biệt lưu ý trực khuẩn mũ xanh P.aeruginosa dễ gây loét giác mạc, mù mắt … Các nhóm chất bảo quản thường gặp: - Hợp chất hữu thuỷ ngân - Các alcol dẫn chất alcol - Các hợp chất amoni bậc - Các nipa este (Parabens) Các phương pháp tiệt khuẩn + Phương pháp tiệt trùng sản phẩm bao bì cuối + Tiệt trùng nhiệt ẩm + Tiệt trùng nhiệt khô + Tiệt trùng xạ ion hóa + Tiệt trùng phương pháp lọc + Sản xuất vô trùng + Tiệt trùng chất khí Trong sản xuất, để tiệt khuẩn thuốc nhỏ mắt dạng hỗn dịch áp dụng phương pháp xạ ion hóa (đòi hỏi máy móc đại, Việt Nam chưa sử dụng) sản xuất vô trùng [6] 2.1.4 Các yêu cầu kỹ thuât riêng thuốc nhỏ mắt dạng hỗn dịch 2.1.4.1 Sự phân tán dược chất rắn [2] Dựa vào tính thấm bề mặt dược chất chất lỏng, dược chất rắn không tan chất lỏng chia làm loại dược chất rắn thân nước (hydrophilic solid) dược chất rắn sơ nước (hydrophobic solid) Đối với dược chất rắn sơ nước, làm giảm sức căng liên bề mặt pha rắn pha lỏng chất gây thấm làm cho dược chất rắn dễ thấm nước Các tác nhân gây thấm thường dùng chất diện hoạt (HLB từ – cao hơn), chất keo thân nước, chất rắn dạng hạt nhỏ số dung mơi Ngòai chất diện họat giúp hỗn hòa thuốc nhỏ mắt với màng nước mắt 2.1.4.2 Kích thước tiểu phân dược chất rắn [1], [2] Theo hệ thức Stokes: V= 2r2(d1 – d2)g 9η V: Vận tốc sa lắng tiểu phân pha phân tán (cm/s) r: bán kính tiểu phân pha phân tán (cm) d1 – d2: chênh lệch tỉ trọng pha (g/ml) η : độ nhớt môi trường phân tán (cP hay mPas) g: gia tốc trọng trường (980 cm/s2 ) Vai trò gia tốc trọng trường ứng dụng việc theo dõi độ ổn định hỗn dịch cách ly tâm để gia tốc tách lớp Kích thước tiểu phân rắn nhỏ tốc độ lắng chậm, hạt q mịn chúng có khuynh hướng kết hợp với lắng xuống Mặt khác tiểu phân phải có kích thước đồng để tránh hạt to tách nhanh kéo theo hạt nhỏ tách Kích thước tiểu phân dược chất rắn thuốc nhỏ mắt liên quan đến vận tốc hòa tan thời gian lưu lại dược chất túi giác mạc Để tránh kích ứng mắt hạt có kích thước nhỏ µm để khơng tạo cấu trúc nhám Kích thước tiểu phân rắn hỗn dịch thuốc nhỏ mắt nên vào khỏang 2-6 µm, có sinh khả dụng cao 2.1.4.3 Độ nhớt môi trường phân tán [1], [2] Sự tương tác bề mặt tiểu phân rắn làm hỗn dịch tồn trạng thái kết không kết Các tiểu phân rắn kết bơng liên kết với yếu, có tính chất lắng nhanh, không tạo thành khối bánh tái phân tán thành hỗn dịch đồng dễ dàng Các tiểu phân không kết lắng chậm tạo thành khối rắn, tiểu phân kết tụ lại với hình thành khối bánh cứng, khó phân tán Vì hỗn dịch khơng kết bơng phải có độ nhớt đủ cao để ngăn cản lắng cặn Hỗn dịch bền độ nhớt môi trường phân tán tăng, làm cho hỗn dịch uống khó rót tái phân tán trở lại sau lắng Chất làm tăng độ nhớt môi trường gọi chất gây treo, gia tăng lượng chất rắn làm tăng độ nhớt Ngồi độ nhớt giúp thuốc bám lâu mắt, giảm khô mắt Độ nhớt tối ưu khoảng 15 – 25 cP (USP) có chiết suất tương tự nước mắt (n = 1,336) 2.1.5 Các tá dược sử dụng Theo yêu cầu hỗn dịch thuốc nhỏ mắt, chế phẩm gồm có thành phần sau: - Dược chất - Chất gây thấm: natri lauryl sulfat, tween 80, tween 20, polyether alcol… - Chất gây treo: NaCMC, hydroxyethyl cellulose, carbomer, povidon, hydroxypropyl cellulose, hydroxypropyl methylcellose, glycerol, polyethylen glycol … - Hệ đệm: borat, phosphat, citrat, acetat… - Chất có khả thấm ướt bề mặt tiểu phân pha rắn hỗn hòa với nước, để phân tán pha rắn giai đoạn nghiền ướt: propylen glycol, glycerol, polyalcol… - Chất bảo quản: thiomersal, bezalkonium clorid, nitrat phenyl mercuric, clobutanol … - Chất chống oxi hóa: EDTA, acid ascorbic, natri metabisulfit, natri bisulfit … - Chất đẳng trương hóa (nếu cần): NaCl, Na2SO4, KNO3 … 2.1.6 Các phương pháp điều chế [2] 2.1.6.1 Phương pháp phân tán học - Phạm vi áp dụng: dược chất rắn khơng hòa tan tan chất dẫn, đồng thời khơng hòa tan hòa tan dung mơi trơ thường khác (alcol, dầu thực vật) - Các lực học gây phân tán: nghiền xay, khuấy trộn dùng siêu âm để phân chia dược chất rắn phân tán vào chất dẫn 2.1.6.2 Phương pháp ngưng kết Trong trình điều chế, dược chất rắn dạng tiểu phân phân tán chất dẫn hình thành từ trình kết tủa thay đổi dung môi phản ứng trao đổi ion tạo chất khơng hòa tan tan chất dẫn 2.1.6.3 Kết hợp phương pháp phân tán ngưng kết 2.1.6.4 Điều chế bột hay cốm để pha hỗn dịch Áp dụng dược chất không bền chất dẫn So với hỗn dịch dạng lỏng, thuốc bột cốm pha hỗn dịch hạn chế tối đa tượng biến đổi vật lý, tương kỵ thành phần 2.1.7 Bao bì [1], [6] - Thường chất dẻo nút cao su, thủy tinh trung tính; phải kiểm tra đạt tiêu chuẩn chất lượng giống vỏ đựng thuốc tiêm - Đồ đựng thuốc nhỏ mắt phải có đủ độ cần thiết để kiểm tra mắt độ dung dịch hay độ đồng hỗn dịch nhỏ mắt chứa - Đồ đựng thuốc nhỏ mắt phải vơ khuẩn khơng có tương tác mặt vật lý hay hoá học với thuốc 10 - Đồ đựng thuốc nhỏ mắt chứa nhiều liều phải có phận nhỏ giọt thích hợp, thể tích đơn vị đóng gói khơng nên vượt q 10 ml - Đối với hỗn dịch yêu cầu chai lọ đựng, phải có dung tích lớn thể tích thuốc (khoảng 1,5 lần), để thuận lợi cho việc tái phân tán hỗn dịch sau lắng 2.2 TOBRAMYCIN 2.2.1 Cấu trúc hóa học [6] C18H37N5O9 P.t.l: 467,5 Hình 2.2 Câu trúc phân tử tobramycin Tên khoa học: 4-O-(3-Amino-3-deoxy--D-glucopyranosyl)-2-deoxy-6-O-(2,6diamino-2,3-6-trideoxy--D-ribo-hexopyranosyl)-L-streptamin 2.2.2 Tính chất lý hóa 2.2.2.1 Lý tính [3] Bột trắng, dễ hút ẩm, dễ tan nước, tan alcol, khơng tan ete Góc quay cực riêng Từ + 138 đến + 148 dung dịch nước 4% (kl/tt) Dexamethason Tween 80 Propylen glycol Chất gây treo A Acid boric BZKCl EDTA HCl 1N để pH = 5,5 Nước cất vđ 0,1% 0,1% 0,1% 0,262% 2% 0,01% 0,1% ~ 2,3% 100% 4.3 PHÂN BỐ KÍCH THƯỚC HẠT Phân bố kích thước hạt xác định phòng thí nghiệm cơng nghệ nano (LNT) thuộc đại học quốc gia thành phố Hồ Chí Minh 4.3.1 Mẫu pha chế Đồ thị 4.1 Phân bố kích thước hạt mẫu thử Điểm giữa: 3107,475 nm Trung bình: 2940,037 nm Độ phân tán: 48,433% 4.3.2 Mẫu Tobradex Alcon Đồ thị 4.2 Phân bố kích thước hạt mẫu Tobradex Điểm giữa: 3636,911 nm Trung bình: 4260,299 nm Độ phân tán: 37,32388% Phiếu kết thử nghiệm: xem phụ lục III 4.3.3 Nhận xét + Về kích thước trung bình: Mẫu thử có kích thước trung bình tiểu phân nhỏ mẫu Tobradex Alcon, nên tốc độ lắng mẫu thử nhỏ mẫu Tobradex, khả kết hợp lại tiểu phân cao với lượng chất rắn, tiểu phân nhỏ có diện tích lớn sức căng liên bề mặt lớn + Về đồng kích thước tiểu phân: Mẩu thử có độ phân tán cao mẫu Tobradex, hay đồng hơn; nên khả tiểu phân to tách nhanh làm kéo theo tiểu phân nhỏ tách ra, cao + Phân bố kích thước tiểu phân mẫu thử đáp ứng yêu cầu thuốc nhỏ mắt hỗn dịch quy định phụ lục DĐVN IV 4.4 THẨM ĐỊNH QUI TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG DEXAMETHASON 4.4.1 Định lượng dexamethason Kết định lượng dexamethason trình bày bảng 4.20 Bảng 4.20 Kết hàm lượng dexamthason (H) (mg/ml), chế phẩm Số lần tiêm mẫu Trung bình Mẫu chuẩn C (mg/ml) Sđỉnh 0,04 0,04 0,04 0,04 0,04 0,04 0,04 5327404 5334113 5347371 5352642 5372837 5359201 5348928 V (ml) Mẫu thử Sđỉnh H (mg/ml) 4 4 4 4853685 4878756 4851900 4870134 4852499 4860582 4861259 0,9111 0,9146 0,9073 0,9099 0,9032 0,9070 0,9088 H% = 0,9088 /1 x 100% = 90,88% Trong đó: hàm lượng (mg/ml) lý thuyết dexamethason chế phẩm Đạt yêu cầu USP 32 hàm lượng dexamethason khơng 90% không nhiều 110% so với lượng ghi nhãn 4.4.2 Thẩm định qui trình định lượng dexamethason 4.4.2.1 Tính tương thích hệ thống Kết đánh giá tính tương thích hệ thống quy trình định lượng dexamethason HPLC dựa việc khảo mẫu chuẩn nồng độ 0,04 mg/ml, trình bày bảng 4.21 Bảng 4.21 Kết đánh giá tính tương thích hệ thống Số lần tiêm S Rt k’ T N Trung bình CV% Đánh giá 5327404 5334113 5347371 5352642 5372837 5359201 5362584 5350879 0,299 ≤ 2% Đạt 4,780 4,780 4,780 4,787 4,780 4,787 4,780 4,782 0,068 ≤ 2% Đạt 1,39000 1,39000 1,39000 1,39333 1,39000 1,39333 1,39000 1,39095 0,117 ≤ 2% Đạt 1,23390 1,24691 1,23293 1,20592 1,23595 1,22919 1,24362 1,23263 1,08 ≤ 2% Đạt 8317 8357 8326 8291 8252 8284 8287 8302 0,413 ≤ 2% Đạt Trong đó: S: diện tích đỉnh Rt: thời gian lưu k’: hệ số dung lượng T: hệ số bất đối N: số đĩa lý thuyết Tất thông số nằm giới hạn cho phép, quy trình định lượng dexamethason HPLC đạt yêu cầu tính tương thích hệ thống 4.4.2.2 Độ tuyến tính Kết thẩm định độ tuyến tính quy trình định lượng dexamethason HPLC, khảo sát qua nồng độ mẫu chuẩn, trình bày bảng 4.22 Bảng 4.22 Sự tương quan diện tích đỉnh (S) nồng độ mẫu chuẩn (C) (mg/ml) Mẫu Nồng độ (mg/ml) S Strung bình 0,008 0,024 0,040 0,056 0,072 0,080 980236 980637 981596 980823 3324390 3309209 3306971 3313523 5327404 5334113 5347371 5336296 7461516 7479255 7468923 7469898 9614286 9607852 9590327 9604155 10565316 10559064 10566385 10563588 Đồ thị 4.3 Sự liên quan tuyến tính diện tích đỉnh nồng độ dexamethason Hệ số tương quan R2 = 0,9996 thỏa yêu cầu 0,995 ≤ R ≤ 1, chứng tỏ diện tích đỉnh nồng độ dexamethason có mối quan hệ tuyến tính rõ rệt quy trình định lượng dexamethason HPLC tuyến tính khoảng nồng độ từ 0,008 – 0,08 mg/ml 4.4.2.3 Độ xác (độ lặp lại) Kết thẩm định độ lặp lại quy trình định lượng dexamethason HPLC trình bày bảng 4.23 Bảng 4.23 Kết thẩm định độ lặp lại Mẫu thử Sđỉnh 4853685 4878756 4851900 4870134 4852499 4860582 H (mg/ml) 0,9111 0,9146 0,9073 0,9098 0,9032 0,9070 CV% 0,434% Do hệ số phân tán CV% = 0,434 < 2% nên quy trình định lượng dexamethason HPLC đạt yêu cầu độ lặp lại 4.4.2.4 Độ Kết thẩm định độ quy trình định lượng dexamethason HPLC, đánh giá dựa kết mức 80%, 100%, 120% lượng chất chuẩn thêm vào so với lượng mẫu thử chế phẩm, trình bày bảng 4.24 Bảng 4.24 Kết thẩm định độ STT %Cchuẩn Hlý thuyết Hthực nghiệm Độ lệch thêm vào (mg/ml) (mg/ml) (%) 1,8 1,7727 80% 1,8 1,7512 0,639% 1,8 1,7563 2,0135 100% 2,0106 0,189% 2,0059 2,2 2,1735 120% 2,2 2,1801 0,224% 2,2 2,1830 Trong Hthực nghiệm tính cơng thức (*) với Tỉ lệ phục hồi (%) 98,49% 97,29% 97,57% 100,67% 100,53% 100,30% 98,80% 99,09% 99,23% C: nồng độ mẫu chuẩn 0,04 mg/ml rs: giá trị trung bình diện tích đỉnh mẫu chuẩn 5348928 V: thể tích mẫu thử ml, để hàm lương dexamethason nằm khoảng tuyến tính Từ bảng 4.23 ta ghi nhận: - Các giá trị độ lệch thực nghiệm CV% < 2% - Các tỷ lệ hồi phục nằm khỏang 95 – 105% Do quy trình định lương dexamethason HPLC đạt yêu cầu độ Phiếu kiểm nghiệm: xem phụ lục IV Kết luận: Qui trình định lượng dexamethason HPLC đạt yêu cầu thẩm định 4.5 ĐỀ NGHỊ TIÊU CHUẨN CHẤT LƯỢNG CHO THÀNH PHẨM 4.5.1 Tiêu chuẩn chất lượng Hình thức: Thể lỏng, khơng mùi, nhớt, màu trắng đục lắc; hay suốt trên, cặn trắng lắng để yên thời gian dài Chế phẩm lắng đọng để yên phải dễ dàng phân tán đồng lắc phải trì phân tán đồng nhỏ thuốc để sử dụng liều Độ nhớt: khoảng 18 – 22 cP 20 oC pH: khoảng – 25 oC Chỉ số khúc xạ: n20D khoảng 1335 – 1338 Tỷ trọng: d khoảng 1,0108 – 1,0122 28 oC Giới hạn cho phép thể tích: + 10% Thử vơ khuẩn: Đạt u cầu thử vơ khuẩn Định tính tobramycin: Rf(mâu thử) = Rf(mâu chuẩn) sắc ký lớp mỏng Định lượng tobramycin: Hàm lượng tobramycin phải đạt từ 0,27 – 0,36 g C18H37N5O9 Định tính dexamethason: Thời gian lưu đỉnh mẫu thử phải trùng với thời gian lưu đỉnh mẫu chuẩn sắc ký đồ chạy HPLC Đinh lượng dexamethason: Hàm lượng dexamethason phải đạt từ 0,09 – 0,11 g C22H29FO5 Kích thước tiểu phân: Khơng có q 10 tiểu phân có kích thước lớn 10 µm Khơng có q tiểu phân có kích thước lớn 20 µm Khơng có tiểu phân có kích thước lớn 30 µm Các tiêu chuẩn pH, định tính tobramycin, định lượng tobramycin, định tính dexamethason, định lượng dexamethason xây dựng dựa DĐ Mỹ USP 32 – chuyên luận thuốc hỗn dịch nhỏ mắt Dexamethason Tobramycin trang 3761 4.5.2 Phương pháp thử Hình thức: Thử cảm quan Độ nhớt: Thử theo phương pháp III, dùng nhớt kế quay phụ lục 6.3 – DĐVN IV pH: Thử theo phụ lục 6.2 – DĐVN IV Chỉ số khúc xạ: Thử theo phụ lục 6.1 – DĐVN IV Tỷ trọng: Thử theo phương pháp dùng picnomet phụ lục 6.5 – DĐVN IV Giới hạn cho phép thể tích: Thử theo phụ lục 11.1 – DĐVN IV Thử vô khuẩn: Thử theo phụ lục 13.7 – DĐVN IV Định tính Tobramycin [13] - Mẫu thử: Cho ml hỗn dịch nhỏ mắt vào ống nghiệm, thêm 100 mg natri sulphat, phân tán cách lắc đem ly tâm, lấy phần phía cắng (tobramycin mg/ml) Lấy dịch thử cô đặc áp suất giảm để dung dịch thử có nồng độ mg/ml tobramycin (giảm 1/2 thể tích đem đặc) - Mẫu chuẩn: pha dung dịch chuẩn tobramycin nước có nồng độ mg/ml - Mẫu đối chiếu: trộn đồng lượng mẫu thử mẫu chuẩn - Pha tĩnh: bảng silica gel dùng cho sắc ký dày 0,25 mm - Pha động: methanol: nhôm hydroxy : chloroform tỉ lệ 60 : 30 : 25 - Thuốc thử: dung dịch ninhydrin (1/100) hỗn hợp butyl alcohol : pyridin (100 : 1) - Tiến hành: Chấm riêng µl dung dịch Triển khai sắc ký, đến dung môi 3/4 chiều dài bảng mỏng Lấy bảng mỏng để khơ ngồi khơng khí, làm nóng đến 110 oC 15 phút Phun bảng mỏng nóng với thuốc thử tobramycin cho vết màu hồng; vết từ dung dịch thử từ hỗn hợp dung dịch thử chuẩn phải tách rời, tương ứng với vết dung dịch chuẩn tính từ vạch xuất phát Rf  a b Trong : a khoảng cách từ điểm xuất phát đến tâm vết (cm) b khoảng cách từ điểm xuất phát đến mức dung môi đo đường vết (cm) Rf : Chỉ có giá trị từ đến Định lượng tobramycin: [13] Pha động: Hòa tan 2,0 g Tris(hydroxymethyl)aminomethan vào khoảng 800 ml nước Thêm vào 20 ml dung dịch acid sulfuric 1N, bổ sung acetonitril để 2000 ml dung dịch, trộn Để nguội lọc qua lọc 0,2 µm Điều chỉnh lại cần Thuốc thử 2,4-Dinitrofluorobenzen: chuẩn bị dung dịch 2,4-dinitrofluorobenzen cồn chứa 10mg/ml Dung dịch dùng ngày giữ lạnh không sử dụng Thuốc thử Tris(hydroxymethyl)aminomethan: chuẩn bị dung dịch trữ Tris(hydroxymethyl)aminomethan nước chứa 15 mg/ml Dung dịch trữ dùng tháng giữ lạnh không sử dụng Chuyển 40 ml dung dịch trữ vào bình định mức 200 ml thêm dimethyl sulfoxid, trộn đều, thêm dimethyl sulfoxid tới vạch trộn Dùng thuốc thử vòng [Ghi chú: nhúng chìm nước đá 10 oC, thuốc thử sử dụng lên đến giờ] Mẫu chuẩn: Cân xác khoảng 55 mg tobramycin chuẩn, cho vào bình định mức 50 ml, thêm ml acid sulfuric N thêm đủ nước để hòa tan, thêm nước đến vạch, trộn Chuyển 10 ml dung dịch vào bình định mức 50 ml thứ hai, thêm nước đến vạch, trộn Dung dịch chứa khoảng 0,22 mg/ml tobramycin chuẩn Mẫu thử: Cho 1,5 ml chế phẩm (tương đương với 4,5 mg tobramycin) vào bình định mức 50 ml, thêm nước cất đến vạch, lắc Tạo dẫn xuất tobramcin: [Ghi chú: Đun tất dung dịch nhiệt độ xấp xỉ nhau, khoảng thời gian theo dẫn Chuyển tất bình vào bể ổn nhiệt 60 oC khoảng thời gian nhau] Chuyển 4,0 ml mẫu chuẩn, 10,0 ml mẫu thử, 4,0 ml nước vào bình định mức 50 ml Ở bình thêm 10 ml Thuốc thử 2,4-Dinitrofluorobenzen 10 ml Thuốc thử Tris(hydroxymethyl)aminomethan, lắc đậy nắp Đặt bình vào bể ổn nhiệt nhiêt độ 60 ± oC, vòng 50 ± phút Lấy bình khỏi bể, để yên 10 phút Thêm acetonitril đến vạch 50 ml khoảng ml, để nguội nhiệt độ phòng, sau thêm acetonil đến vạch trộn Các dung dịch thu tương ứng dẫn xuất mẫu chuẩn, dẫn xuất mẫu thử mẫu trắng Dung dịch kiểm tra hiệu cột: chuẩn bị dung dịch p-naphtholbenzein acetonitrile, nồng độ 0,24 mg/ml Chuyển ml dung dịch vào bình định mức 10 ml, thêm dẫn xuất mẫu chuẩn đến vạch sử dụng Hệ thống sắc ký: Đầu dò UV với bước sóng 365 nm Cột: 3,9 mm x 30 cm chứa gói L1 Tốc độ dòng : ml/phút Chạy sắc ký mẫu trắng, ghi lại đáp ứng Nhận dạng đỉnh dung môi thuốc thử (làm base line) Chạy sắc ký dung dịch kiểm tra độ phân giải, ghi lại đáp ứng: Thời gian lưu khoảng 0,6 p-naphtholbenzein 1,0 tobramycin độ phân giải, R, đỉnh khơng 4,0 Chạy sắc ký dẫn xuất mẫu chuẩn, ghi lại đáp ứng: độ lệch chuẩn tương đối cho lần tiêm lặp lại không vượt 2,0 % (RSD  2%) Qui trình: tiêm thể tích (khoảng 20 µl) dẫn xuất mẫu chuẩn, dẫn xuất mẫu thử vào hệ sắc ký, ghi lại sắc ký đồ, tính diện tích đỉnh Tính lượng tobramycin (mg) phần chế phẩm lấy theo công thức sau : 0,02CE(rv/rs) C: nồng độ tobramycin mẫu chuẩn (mg/ml) E: Đương lượng tobramycin (µg/mg) ru, rs : diện tích đỉnh dẫn xuất mẫu chuẩn dẫn xuất mẫu thử Định tính Dexamethason: Dựa vào sắc ký đồ tiêu chuẩn định lượng Dexamethason HPLC.[13] Định lượng Dexamethason:[13] Chuẩn bị mẫu thử: lắc chai thuốc, loại bỏ bọt khí Chuyển 4ml chế phẩm (tương đương mg dexamethason) vào bình định mức 100 ml, bổ sung đến vạch methanol, lắc Chuẩn bị mẫu chuẩn: cân xác khoảng 25 mg dexamethason chuẩn, cho vào bình định mức 25 ml, hồ tan bổ sung đến vạch methanol, lắc Hút xác ml dung dịch vào bình định mức 100 ml, bổ sung đến vạch methanol, lắc Dung dịch chứa khoảng 0,04 mg/ml dexamethason chuẩn Pha động: Hỗn hợp nước : acetonitril tỉ lệ 55 : 45, lọc qua màng lọc thích hợp với kích thước m nhỏ hơn, khử khí Điều chỉnh cần thiết Hệ thống sắc ký: Đầu dò UV với bước sóng 254 nm Cơt: 3,9 mm x 25 cm chứa gói L1 Tốc độ dòng : ml/phút Tiến hành sắc ký dung dịch chuẩn tính diện tích đỉnh đáp ứng; yếu tố kéo đuôi (tailing factor) đỉnh phân tích khơng lớn 1,5, suất cột khơng 1400 đĩa lý thuyết độ lệch chuẩn tương đối cho lần tiêm lặp lại không vượt 2% (RSD  2%) Tiến hành: Tiêm thể tích (khoảng 20 l) mẫu chuẩn mẫu thử vào hệ sắc ký, đo mức đáp ứng đỉnh Tính lượng dexamethason (mg) ml hỗn dịch theo công thức sau : 100(C/V)(ru/rs) C: Nồng độ mẫu chuẩn (mg/ml) V : Thể tích chế phẩm (ml) ru, rs: diện tích đỉnh mẫu thử mẫu chuẩn Kích thước tiểu phân: Lắc mạnh chuyển 10 µl chế phẩm (tương đương với khoảng 10 µg pha rắn) vào buồng đếm lên phiến kính thích hợp quan sát kính hiển vi có độ phóng đại 100, thử theo phụ lục 11.8, phần A – DĐVN IV Đóng gói – Ghi nhãn - Bảo quản Đóng gói: đóng 5ml hỗn dịch vào chai lọ kín có dung tích lớn thể tích thuốc Nhãn: Đúng qui cách, có thêm thơng tin khơng sử dụng tuần sau mở nắp phải có thêm dòng chữ “Lắc trước dùng” Bảo quản: nơi thoáng mát Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Với thời gian làm thực nghiệm tương đối ngắn (3 tháng: từ 20 – đến 20 – 7) có nhiều khó khăn, đề tài “bước đầu nghiên cứu bào chế thuốc nhỏ mắt dạng hỗn dịch chứa tobramycin dexamethason” thực đạt kết sau: - Xây dựng công thức thuốc nhỏ mắt dạng hỗn dịch chứa tobramycin dexamethason, có yêu cầu đặc tính bào chế cao nhất, tương ứng với nguồn nguyên liệu có - Ứng dụng phần mềm máy tính (Design-Expert v 6.0.6 BC-Pharsoft) việc tìm cơng thức tối ưu hóa - Kết thực nghiệm kiểm chứng phù hợp với kết dự đốn cúa máy tính - Xác định phân bố kích thước hạt chế phẩm máy đếm hạt chuyên dụng đạt yêu cầu DĐVN IV - Quy trình định lượng dexamethason HPLC theo USP 32, thẩm định lại cho phù hợp điều kiện xí nghiệp; cho kết tốt - Đã xây dựng đề nghị số tiêu chuẩn cho thành phầm Nhưng thời gian nghiên cứu có hạn q trình thực chắn có sai sót, nên chúng tơi đề nghị phần đề tài cần thực công việc sau, để công thức thuốc đưa vào qui mô sản xuất công nghiệp: - Nghiên cứu độ ổn định chế phẩm phương pháp theo dõi tự nhiên kết hợp với phương pháp lão hóa cấp tốc - Nghiên cứu dạng bao bì để việc tái phân tán hỗn dịch sau lắng dễ - Nghiên cứu tác dụng dược lý chế phẩm - Nghiên cứu qui trình sản xuất cơng nghiệp cho chế phẩm - Hoàn chỉnh tiêu chuẩn sở cho thành phẩm để nâng cao chất lượng chế phẩm phù hợp với điều kiện xí nghiệp TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Bộ môn Bào chế (2007), Bào chế sinh dược học – tập I, Nhà xuất y học, đại học y dược TP.HCM, tr.190-213 Bộ môn Bào chế (2007), Bào chế sinh dược học – tập II, Nhà xuất y học, đại học y dược TP.HCM, tr.32-47 Bộ mơn Hóa dược (2007), Hóa dược I, Đại học y dược TP.HCM, tr.111 Bộ mơn Hóa dược (2007), Hóa dược II, Đại học y dược TP.HCM, tr.444-445, 457- 458 Bộ môn Hóa phân tích – kiểm nghiệm (2009), Giáo trình lý thuýêt kiểm nghiệm thuốc, Đại học y dược TP Hồ Chí Minh, tr.96-126 Bộ y tế (2009), Dược điển Việt Nam IV , Nhà xuất y học, Hà Nội, tr.617-618, 208-209, PL-21, PL-12, PL-352 Bộ y tế, Dược thư quốc gia (2002), Nhà xuất y học, Hà Nội, tr.356-359, 928- 930 Đặng Văn Giáp (2002), Thiết kế tối ưu hóa cơng thức quy trình, Nhà xuất Y học, TP Hồ Chí Minh, tr.1-97 Đặng Văn Giáp (2003), Phân tích thống kê kiểm nghiệm dược phẩm, Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh TIẾNG ANH 10 David B.Troy, Remington (2006), Remington – The Science and Practice of Pharmacy – 21 st Edition, Lippincott Williams & Wilkins, USA, pp.260-265 11 Harry G.Brittain (2007), Profiles of Drug Substances, Excipients, and Related Methodology - Volume 33, Academic Press, USA, pp.612 12 Raymond C Rowe, Paul J Sheskey and Marian E Quinn (2010), Handbook of Pharmaceutical Excipients, Sixth edition, Pharmaceutical Press, London – Chicago, pp.317-322 13 U.S Pharmacopoeia (2009), USP 32 – NF 27 – Volume II , United Brook Press, The United States, pp.3761 Các trang web sử dụng 14 http://www.accessdata.fda.gov/scripts/cder/iig/getiigWEB.cfm Hình 15 http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/ency/imagepages/9553.htm ... thuốc hỗn dịch nhỏ mắt chứa tobramycin dexamethason - Đề nghị số tiêu chuẩn chất luợng cho thành phẩm 3 Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 THUỐC NHỎ MẮT DẠNG HỖN DỊCH 2.1.1 Định nghĩa Thuốc nhỏ mắt. .. giống vỏ đựng thuốc tiêm - Đồ đựng thuốc nhỏ mắt phải có đủ độ cần thiết để kiểm tra mắt độ dung dịch hay độ đồng hỗn dịch nhỏ mắt chứa - Đồ đựng thuốc nhỏ mắt phải vơ khuẩn khơng có tương tác mặt... thuốc nhỏ mắt dạng dung dịch Không lọc thuốc nhỏ mắt dạng hỗn dịch Thuốc dạng có lắng đọng lớp chất rắn, sau lắc nhẹ phải dễ dàng phân tán toàn khối 6 2.1.3.4 Yêu cầu độ vô khuẩn thuốc nhỏ mắt