Báo cáo thực hành môn hoá sinh

Bài báo cáo thực hành môn Hoá sinh dùng tham khảo cho sinh viên các trường Đại Học, Cao Đẳng, Trung cấp…. cách làm các bài báo cáo môn hoá sinh để đạt điểm cao nhất, tốt nhất . Nội dung sơ lược bài báo cáo: Phần mục lục,………………………………………………………………………………………………………………….phần nội dung: mời đọc sơ qua phần mục lục…………………………………………………………………………………….

BÀI NỘI DUNG TRANG

1 CÁC KỸ THUẬT VÀ KỸ NĂNG CƠ BẢN TRONG

5 XÉT NGHIỆM GLUCOSE, CHOLESTEROL VÀ

BÀI 1 CÁC KỸ THUẬT VÀ KỸ NĂNG CƠ BẢN TRONG PHÒNG THỰC TẬP SINH HÓA

Mục tiêu học tập: Sau khi học xong bài này sinh viên phải:

1 Trình bày được 8 nội qui trong phòng thí nghiệm sinh hóa

2 Trình bày được các nguyên tắc cấp cứu cơ bản trong phòng thí nghiệm

3 Sử dụng thành thạo một số dụng cụ cơ bản trong phòng xét nghiệm sinh hóa

4 Lấy và bảo quản được mẫu bệnh phẩm đúng quy định

5 Hiểu nguyên tắc của phương pháp đo quang để áp dụng trong việc định lượng chất

1 NỘI QUI PHÒNG THỰC TẬP SINH HÓA

- Sinh viên (SV) phải đến đúng giờ, vắng mặt phải có giấy xin phép SV đến trễ quá

10 phút không được vào phòng thí nghiệm (PTN)

- SV không được tự ý đổi nhóm thực tập

- Trước khi vào PTN, SV phải đọc kỹ lý thuyết và thực hành cho buổi thực tập

- Trong khi thực tập SV phải:

 Mặc áo blouse có đeo bảng tên

 Giữ gìn trật tự

 Kiểm tra dụng cụ (thiếu, bể), báo cho cán bộ kỹ thuật trong 15 phút đầu

 Sử dụng dụng cụ của đúng nhóm mình

 Không rời PTN trong lúc thực tập, không ra về trước giờ quy định

 Thực tập xong, SV rửa sạch sẽ dụng cụ, ký trả và dọn vệ sinh nơi thực tập

 Nếu dụng cụ bị mất mát hay hư bể, nhóm thực tập chịu trách nhiệm làm tờ tựkiểm (xử lý sẽ tùy trường hợp cụ thể)

 Mỗi sinh viên thực tập làm bài tường trình kết quả học tập và nộp lại cuốibuổi

 Kết quả kỳ thi thực tập được tính trên: điểm chuyên cần, thao tác thực tập, kếtquả bài tường tình thực tập và điểm kiểm tra cuối kỳ thực tập

 Không tự ý khởi động các thiết bị, máy móc trong PTN

 Chú ý: Để đảm bảo an toàn cần nhớ:

- Không được đổ nước vào acid đậm đặc

- Không được hút hóa chất bằng miệng.

- Không được tự sử dụng thiết bi, máy móc và hóa chất khi chưa được phép của cán

bộ phụ trách

2 CÁC KỸ THUẬT CẤP CỨU CƠ BẢN TRONG PTN SINH HÓA

Áp dụng tạm thời khi chuyển bệnh nhân đến bệnh viện hoặc cho các trường hợp nhẹ

2.1 Phỏng ở da

- Phỏng da vật nóng

- Phỏng nhẹ: Dùng gạc tẩm dung dịch acid piric bão hòa đắp lên

- Phỏng nặng: Đắp nhẹ gạc tẩm dung dịch acid piric lên vết phỏng, sau đó đưa đếnbệnh viện Tránh băng chặt và tránh dùng vaselin hay thuốc mỡ

- Phỏng do hóa chất

Trước tiên là làm trôi hóa chất khỏi da bằng cách ngâm vết phỏng vào trong chậunước lớn hoặc để dưới vòi nước chảy nhẹ Sau đó dùng hóa chất trung hòa

- Phỏng do acid: đắp vải mùng tẩm dung dịch Natri bicarbonate 8%

- Phỏng do kiềm: đắp vải mùng tẩm dung dịch acid piric 3%

 Phỏng ở mắt

 Acid hay Brom: Tắm mắt tức khắc trong ly nước đầy hoặc 2 bàn tay

chụm lại vốc nước Sau đó tắm mắt trong dung dịch Natri bicarbonate1%

 Chất kiềm vào mắt: Tắm mắt trong nước như trên, xong tắm tiếp trong

dung dịch acid boric 1%

 Ngộ độc

 Chất độc vào miệng:

- Acid: súc miệng nhiều lần bằng dung dịch Natri bicarbonate 1%

- Kiềm: súc miệng nhiều lần bằng dung dịch acid boric 1%

- Các hóa chất khác: súc miệng nhiều lần bằng nước lạnh

- Trước hết ngắt cầu dao điện ở bất cứ nơi nào có cầu dao điện, nới rộng

quần áo nạn nhân khi đem ra nơi thoáng

- Hô hấp nhân tạo khi chuyển đến bệnh viện ( trường hợp nặng)

 Hỏa hoạn

- Ngọn lửa nhỏ: dập tắt bằng khăn, vải bố ướt hay cát

- Lửa bắt cháy quần áo: lăn vài vòng dưới đất sẽ dập tắt ngon lửa trong

khi các bạn lấy vải bố trùm lên chỗ cháy và ép sát cho đến khi tắt lửa

- Tránh việc chạy hoảng loạn

Tóm lại: khi bị ngộ độc, phỏng … SV nên báo với nhân viên phụ trách PTN để được

chăm sóc kịp thời

3 CÁCH SỬ DỤNG MỘT SỐ DỤNG CỤ THƯỜNG DÙNG

3.1 Ống nghiệm

– Thường là ống hình trụ, làm bằng thủy tinh, thường được đặt trong giá để

– Ống nghiệm thường được dùng làm phản ứng (nên phân biệt với ống ly tâm).– Khi đun ống trên ngọn lửa đèn cồn cần chú ý:

 Ống nghiệm chỉ được chứa 1/3 ống nghiệm

 Ống nghiệm được kẹp bằng gỗ hay kẹp kim loại và cầm nghiêng 1 góc 450.Luôn lắc nhẹ ống nghiệm khi đun

 Miệng ống phải quay vào chỗ không có người (tránh bắn, phỏng ngườikhác)

 Không đun trực tiếp ở đáy ống nghiệm mà đun ở nửa phần trên

3.2 Cốc có mỏ (Becher)

- Cốc có mỏ dùng để đựng dung dịch trong PTN hay để đun, khi đun phải lót lưới

cách nhiệt ở phía dưới, đun xong không để trực tiếp lên vật lạnh (vỡ)

- Nhiều hình dạng và kích thước (5 ml - 5 lít) khác nhau, chia vạch hoặc không

3.3 Bình cầu (Ballon)

- Có nhiều loại và dung tích khác nhau, nhưng đều làm bằng thủy tinh chịu nhiệt

- Đáy có thể tròn hay đáy bằng Loại đáy tròn thường được dùng đun hoặc lắp vàocác hệ thống chưng cất, đáy bằng dùng chiết tách các chất rắn ra khỏi chất lỏng

- Loại bình có vạch để chỉ thể tích chính xác mà dung dịch chiếm được gọi là bìnhđịnh mức Bình định mức có nhiều thể tích khác nhau: 25ml, 50ml, 100ml bìnhđịnh mức được dùng để pha nồng độ theo thể tích của dung dịch

3.4 Ống đong

- Dùng để đong một lượng dịch gần đúng Có dung tích từ 5ml đến 2 lít

- Thường được làm bằng thủy tinh hay polythylen

3.5 Ống hút (Pipette)

- Pipette được làm bằng thủy tinh

- Trên pipette thường có chia vạch để chỉ thể tích dung dịch chứa bên trong (vd:5ml, 1ml) hoặc loại pipette thể tích (pipette volume) có bầu ở giữa để chỉ lượngdung dịch chứa bên trong

- Khi sử dụng chú ý xem đầu pipette có vạch nhám hay không (vạch nhám có thểnhám, không màu hay được sơn bằng các màu vàng, đỏ, xanh…)

 Có vạch nhám: khi hút ta thổi giọt cuối cùng

 Không vạch nhám: khi hút ta không thổi giọt cuối cùng

- Trước khi hút, kiểm tra lại thể tích và tên dung dịch cần hút

- Dùng ball cao su để hút (không hút bằng miệng)

- Khi sử dụng nhớ dùng pipette thẳng đứng, dùng ngón trỏ để, dùng ngón trỏ đểđiều chỉnh thể tích muốn lấy, chú ý phải để ống hút ngang với tầm nhìn của mắt

 Hiện nay, ngoài loại pipette thường có loại Micropipette (pipette tự động):

 Có thể dùng để hút chính xác một lượng dung dịch rất nhỏ (μl).l)

 Có thể điều chỉnh thể tích dung dịch cần lấy một cách nhanh chóng, dễdàng và ít sai số do thao tác

3.6 Bình nón (Erlenmeyer)

- Bình thủy tinh, hình nón, ùng để chứa dung dịch, hay dùng để chuẩn độ thể tích

- Có nhiều kích thước khác nhau: 50ml, 100ml, 200ml

3.7 Ball cao su

- Thường được làm bằng cao su

- Dùng cùng với pipette thủy tinh để tránh hút bằng miệng

4 CÁCH LẤY VÀ BẢO QUẢN MẪU BỆNH PHẨM

4.1 Chuẩn bị dụng cụ

Mẫu máu lấy để phân tích các chỉ số hóa sinh thường là máu tĩnh mạch, có khi làmáu động mạch hoặc mao mạch Dụng cụ để lấy máu gồm:

- Bơm, kim tiêm (loại dùng một lần)

- Dây thắt (bằng cao su mềm, độ đàn hồi tốt)

- Ống đựng bệnh phẩm: ống nghiệm 5 - 10ml, nút phải sạch và khô

- Chất chống đông sử dụng: Heparin, Natri citrat, Natri oxalat Sự lựa chọnchất chống đông tùy thuộc vào mục đích xét nghiệm

4.3 Cách lấy máu

4.3.1 Lấy máu tĩnh mạch

Thường lấy máu ở khủy tay Bệnh nhân có thể nằm hoặc ngồi, tay duỗi thoải máitrên vật cứng Dùng dây thắt ở khủy tay 2-3cm, tiêm kim vào tĩnh mạch, kéo nhẹ bơmtiêm ra kiểm tra xem kim đã vào tĩnh mạch chưa (nếu có khi kéo bơm sẽ có máu) Bỏ dâythắt rồi mới lấy máu để tránh hiện tượng ứ máu, có thể làm tăng lượng CO2, O2 và thayđổi thành phần máu

4.3.2 Lấy máu động mạch

Lấy máu động mạch phức tạp, có thể gây nguy hiểm cho bệnh nhân, vì vậy cầnnhững bác sĩ, kỹ thuật viên có kinh nghiệm Khi lấy máu động mạch nên để máu tự độngchảy vào bơm tiêm (do áp lực động mạch) Nên tráng bơm tiêm bằng heparin

4.3.3 Lấy máu ở trẻ em

Thường lấy máu toàn phần hoặc máu mao mạch Vị trí lấy máu thường là ở gótchân Dùng khăn ẩm và ấm lau vị trí lấy máu, sát khuẩn rồi dùng kim vô khuẩn để lấymáu Bỏ giọt máu đầu tiên, những giọt tiếp theo nên hứng vào ống thủy tinh chứaheparin

Máu xét nghiệm sinh hóa gồm ba loại: Máu toàn phần, huyết tương, huyết thanh.Máu sau khi lấy ra khỏi cơ thể sẽ bị đông lại do trong thành phần có ion Ca2+ Loại bỏ ion

Ca2+ thì máu sẽ không đông Các chất loại bỏ ion Ca2+ gọi là chất chống đông máu Cónhiều loại chất chống đông như EDTA (muối ethylen diamin tetraacetic acid), kali oxalat,natri citrat EDTA thường được dùng cho các xét nghiệm huyết học (15mg/ml) Kalioxalat ngày nay y học ít sử dụng, natri citrat thường dùng cho các xét nghiệm phân tíchcác yếu tố chống đông (dung dịch 3.28%) Heparin (0,01-0,1ml/ml máu) có chứa chấtkháng thrombin và kháng các yếu tố Xa Heparin thường được sủ dụng khi làm các xétnghiệm sinh hóa máu như: phân tích khí máu, phân tích hóa sinh, lâm sàng và cấp cứu Máu có chứa chất chống đông gọi là máu toàn phần, ly tâm lấy phần dịch ở trên gọi

là huyết tương có chứa các yếu tố đông máu Khi máu không chứa chất đông cục máuđông lại và hình thành theo cơ chế đông máu tự nhiên Ly tâm lấy phần dịch ở trên làhuyết thanh

4.3.4 Cách lấy huyết thanh

Lấy máu vào ống nghiệm, đậy ống nghiệm bằng nút cao su hoặc bông mỡ (bônggòn không thấm nước) rồi để ở nhiệt độ phòng trong vài giờ Nếu ta cần có huyết thanhnhanh để phân tích thì có thể cầm ống nghiệm trong lòng bàn tay hoặc có thể để ốngnghiệm trong tủ ấm để cục huyết thanh hình thành một cách tự nhiên, tiết ra huyết thanhnhiều nhất Khi cục máu đã đông, dùng que thủy tinh nhỏ sợi bạch kim nhẹ nhàng táchphần cục huyết dính vào thành ống Cục huyết sẽ co lại và nhanh tiết ra huyết thanh Gạnlấy huyết thanh trong hoặc dùng pipette để hút huyết thanh Nếu huyết thanh lẫn hồngcầu, đem ly tâm lại (300 vòng/ phút trong 5 phút) lấy phần huyết thanh Một số xétnghiệm cần lấy huyết thanh ngay (định lượng kali, natri) thì li tâm khi cục máu đông hìnhthành và tách cục huyết khỏi dính vào thành ống, thời gian không nên quá 1 giờ

4.3.5 Cách lấy máu toàn phần hay huyết tương

Xét nghiệm máu toàn phần hay huyết tương để tránh hoặc loại trừ sai số cso thể gặp

do hoại huyết và ngăn ngừa các chất khuếch tán từ hồng cầu vào huyết tương

Thường chất chống đông được cho sẵn vào ống đựng mẫu máu, khi cho máu vào cầnlắc đều liên tục để tránh máu đông lại Ly tâm lấy phần dịch ở trên

4.3.6 Bảo quản mẫu máu

Thời gian bảo quản cho phép với các mẫu huyết thanh và huyết tương khoảng 4h ởnhiệt độ phòng và trên 1-2 ngày ở nhiệt độ 2 – 80C Muốn giữ lại mẫu lâu hơn thì cần đểở nhiệt độ 00C Đối với mẫu để định lượng enzym cần tuân theo các quy địnhcụ thể củaphương pháp định lượng Thực tế có những chất tương đối bền vững ở nhiệt độ 200Ctrong khoảng thời gian dài hơn như Cl, K, Na, Mg, Fe, hemoglobin, acid uric,cholesteron, tryglycerid, phosphotid

5 LẤY NƯỚC TIỂU

 Chuẩn bị dụng cụ

Bình chứa nước tiểu, thường dùng bình thủy tinh có chia độ theo ml, lít…hoặc ốngnghiệm thủy tinh 10ml-15ml, được rửa sạch sấy khô và có nút

 Cách lấy nước tiểu

- Với các xét nghiệm định tính thông thường:

Dùng nước tiểu bất kỳ thời gian nào trong ngày, lấy nước tiểu giữa dòng, bỏ phầnđầu (dễ có tạp nhiễm bởi dịch nhầy, tế bào bong, vi khuẩn) Một số trường hợp nên lấyvào thời gian thích hợp như:

o Viêm tiết niệu thì nên lấy nước tiểu lúc ngủ dậy

o Nghi ngờ glucose niệu thì lấy nước tiểu sau bữa ăn 2 giờ

o Urobilinogen dễ phát hiện khoảng 14-16 giờ

- Với các xét nghiệm định lượng:

Thường thu góp nước tiểu 24h Thường cho thêm vào mỗi bình vài giọt thymoltrong rượu hoặc 5ml xyanua 4% Đến giờ ấn định cho bệnh nhân tiểu hết, bỏ phần nướctiểu đó Trong 24 giờ tiếp theo thu tất cả nước tiểu bệnh nhân vào 1 bình sạch, chú ý lấy

cả phần nước tiểu khi bệnh nhân đi đại tiện Ngày hôm sau vào giờ thứ 24, cho bệnh nhântiểu lần cuối cùng vào bình Đo thể tích nước tiểu 24h và lấy 0.5 lít gửi đến phòng thínghiệm kèm theo các thông tin sau: thể tích nước tiểu 24h, tên, tuổi, giới tính, chế độ ăn,khối lượng nước uống, những thuốc đã dùng, trạng thái nghỉ ngơi hay hoạt động củabệnh nhân, chẩn đoán

- Bảo quản mẫu nước tiểu:

Khi phân tích nước tiểu nên dùng nước tiểu tươi, để ở nhiệt độ phòng Nếu chưaphân tích mấu ngay có thể để mẫu ở 2 – 80C trong vòng 3 ngày, đối với mục đích phân

tích hormon hoặc nồng độ thuốc, ở điều kiện không bị phân hủy Nếu cần giữ mẫu hơn 3ngày thì để mẫu dưới 00C Nói chung không dùng hóa chất để bảo quản.

6 LẤY VÀ BẢO QUẢN MỘT SỐ DỊCH KHÁC

6.1 Lấy dịch vị

Mục đích là để chẩn đoán các bệnh trong dạ dày, phát hiện vi khuẩn gây bệnh Dịch

vị lấy sau khi bệnh nhân nhịn đói 12 giờ Khi bị hẹp môn vị hay hang vị thì phải rửa dạdày từ chiều hôm trước Các thuốc ảnh hưởng đến sự bài tiết dịch vị phải được ngừng sửdụng ít nhất 24 giờ trước khi làm các nghiệm pháp Trước đây, dịch vị được lấy bằng ốnghút Einhorn Dịch vị để chẩn đoán tế bào, nghiên cứu tác dụng của HCl, pepsin trongdịch vị Ngày nay chẩn đoán bệnh dạ dày thường được dùng kỹ thuật nội soi Kỹ thuậtnày cho phép bác sĩ quan sát niêm mạc dạ dày, tình trạng bài tiết dịch vị và lấy dịch vịcũng như lấy mẫu niêm mạc dạ dày để phân tích Mẫu dịch vị nên phân tích sau khi lấy

6.2 Lấy dịch não tủy

Là lớp dịch trong các khoang dưới màng nhện bao bọc xung quanh não tủy, ở trongống nội tủy, não thất, bảo vệ cho trung ương thần kinh đối với các biến đổi về áp lực,sang chấn Mỗi thương tổn dù nhỏ của não tủy đều ảnh hưởng đến tính chất của dịch nãotủy Phân tích những biến đối đó có thể chẩn doánđược một số bệnh về thần kinh, theodõi sự tiến triển của bệnh Lấy dịch não tủy phức tạp đòi hỏi bác sĩ có kinh nghiệm Khichọc dịch não tủy nên hứng bệnh phẩm vào hai ống nghiệm có nút cao su Trong tườnghợp xuất huyết màng não hai ống đều lẫn máu Trong tường hợp dịch não tủy có lẫn máunhưng do chọc phải mạch máu thì chỉ ở 1 có máu, ống hai không có Nên tiến hành phântích mẫu ngay

6.3 Cách lấy sữa

Cần lấy 3 mẫu sữa với thời gian khác nhau

 Mẫu đầu đươc lấy vào buổi sáng sớm trước lúc cho con bú bữa đầu trong ngày

 Mẫu thứ hai được lấy lúc đang cho con bú giữa trưa

 Mẫu thứ ba lấy vào buổi tối sau khi cho bú xong bữa tối

Khi lấy mẫu nên ghi tuổi của sữa (như lấy sữa vào tháng thứ mấy) Có thể lấy mẫusữa cùng một lúc: mẫu đầu lấy trước khi cho bú, mẫu thứ hai khi đang cho bú, mẫu thứ

ba lấy sau khi cho bú, khối lượng 3 lần bằng nhau

Bảo quản sữa có thể để ở nhiệt độ 0-40C trong 24 giờ

7 NGUYÊN TẮC PHƯƠNG PHÁP ĐO QUANG

7.1 Định luật cơ bản về sự hấp thu ánh sáng: Định luật Beer – Lambert

Chiếu 1 chùm tia đơn sắc có bước sóng λ, cường độ Io vào 1 dung dịch màu đồngnhất có nồng độ C, chiều dày lớp dung dịch mà ánh sáng đi qua là 1 Khi đi qua dungdịch, một phần ánh sáng bị hấp thu (Ih), một phần bị phản xạ (Ip), phần còn lại I đi quadung dịch:

Io = Ih + Ip + I

Vì Ip rất nhỏ nên: I o = Ih + I

Trên thực nghiệm, Bongueur và Lambert đã chứng minh và nêu ra định luật

“Những lớp chất dày đồng nhất trong điều kiện khác nhau, luôn luôn hấp thu một tỉ

lệ như nhau của chùm tia rọi vào những lớp chất đó”.

Beer – Lambert mô tả sự liên hệ giữa các yếu tố trên bằng một định luật biểu diễnsau:

Với k = hệ số hấp thu, phụ thuộc vào bản chất của chất màu và dung môi, bước

sóng của chùm tia và nhiệt độ

Chú ý: Định luật Beer – Lambert chỉ đúng với chùm tia đơn sắc.

Theo công thức trên, trong cùng một điều kiện, khi k và l không đổi, ta nhận thấy

mật độ quang tỷ lệ thuận với nồng độ dung dịch Do đó, nếu so sánh nồng độ chưa biếtcủa một dung dịch với nồng độ mẫu, ta có:

D = klC

Do = klCoNếu biết được mật độ quang của ống đo (thử - D), mật đọ quang ống mẫu (chuẩn -

Do) và nồng độ của ống mẫu (chuẩn - Co), ta tính được nồng độ C của ống muốn đo

7.2 Phương pháp định lượng đo quang:

I I = 10 -klC hay log = klC

D o C o

C

C = C o

D o

Dựa trên cơ sở mật độ đo quang của dung dịch của một chất phụ thuộc vào nồng độcủa chất đó, ta dùng máy quang phổ kế (photometre) để đo mật độ quang của chất mà tacần xác định nồng độ.

Chuyển chất X cần xác định nồng độ, không màu thành hợp chất có màu đặc biệt

(X không màu, muốn đo; RX có màu)Đặc điểm: ánh sáng sau khi đi qua dung dịch, được chiếu lên tế bào quang điện đểchuyển thành dòng điện mà cường độ của nó đo nhờ 1 điện kế nhạy

Trong các phép định lượng đo quang, người ta thường đo OD (mật độ quang) củacác dung dịch màu đối chiếu với ống trắng (ống chứng) Ống trắng là ống chứa thuốc thửnhư ống đo, trừ chất ta cấn xác định

BÀI 2 ĐỊNH TÍNH PROTEIN VÀ ACIDE AMIN

MỤC TIÊU

1 Trình bày được các nguyên tắc của phương pháp định tính protein và acid amin

2 Thực hiện một số phản ứng hóa học dựa trên các tính chất hóa học và vật lý củaacid amin, peptid, protein đã học

3 Áp dụng tìm protein trong nước tiểu bằng phương pháp acid Sulfosalicylic 3%

4 Nhận định, biện luận và giải thích kết quả

NỘI DUNG: gồm 7 phản ứng

1 Phản ứng Ninhydrin

2 Phản ứng Biuret

3 Phản ứng tủa protein bởi nhiệt với môi trường acid yếu

4 Phản ứng tủa protein bởi acid mạnh và không đun nóng

5 Tìm protein trong nước tiểu bằng 2 phương pháp: đông kết và Heller

THÍ NGHIỆM 1: Phản ứng Ninhydrin

có màu xanh tím

Đây là phản ứng chung cho các protid và acid amin tự do Phản ứng này cho phépnhận dạng tất cả các acid amin có nhóm -NH2 và -COOH tự do Ngoại trừ prolin, cónhóm -OH tác dụng với Ninhydrin cho màu vàng

t0

khử tạo nên sản phẩm màu xanh tím

Thí nghiệm 2: Phản ứng Biuret (xác nhận các liên kết peptid)

NH2

NHC

DD CuSO4 1 %

1 ml-0.5 ml

3 giọt

-1 ml0.5 ml

- Ống 2: màu tím hồng.

4 Biện Luận

- Ống 1: có màu xanh nhạt là màu của Cu(OH)2.

- Ống 2: dung dịch có màu tím hồng là do dung dịch có protein tác dụng với Cu2+

trong môi trường kiềm tạo phức chất màu tím hồng

Thí nghiệm 3: Phản ứng tủa protein bởi nhiệt và môi trường acid yếu

1 Nguyên tắc:

Protein hòa tan trong nước hình thành dung dịch keo, protein tích điện cùng dấu vàmang lớp áo nước (hydrat hóa) Nhờ tích điện cùng dấu nên các tiểu phân protein đẩynhau và nhờ có lớp áo nước nên chúng ngăn cách nhau, vì vậy dung dịch keo được bềnvững

Nếu làm mất 2 yếu tố trên thì các tiểu phân protein do chuyển động sẽ gặp nhau,dính vào nhau thành những hạt to và kết tủa

a Làm mất điện tích của protein

- Thêm chất điện giải: NaCl, (NH4)2SO4…

- Đưa pH của môi trường chứa protein về pHi đẳng điện của protein

b Làm mất lớp áo nước của protein

- Thêm chất khử nước: alcohol, aceton, (NH4)2SO4

- Biến tính protein: đun sôi, acid, kiềm mạnh hoặc muối kim loại nặng

2 Thuốc thử:

- Dung dịch Acid acetic 1 % và 10 %

- Dung dịch NaCl bão hòa

1 ml

2 giọt -

1ml-

5 giọt

1ml-

5 giọt

2 giọt-

1ml -

2 giọt

Đun sôi cách thủy 90 0 trong 5 phút

Nhận xét, ghi kết quả từng ống và giải thích hiện tượng

4 Kết quả:

5 Biện luận:

- Ống 1: bị nhiệt đun làm biến tính protein, mất lớp áo nước của protein tích điệncùng dấu và tạo tủa

- Ống 2: mất lớp áo nước của protein tích điện cùng dấu và tạo tủa

- Ống 3: acid acetid không đủ làm mất lớp áo nước của protein tích điện cùng dấu

và không tạo tủa

- Ống 4: vừa mất điện tích vừa mất lớp áo nước nên tạo tủa nhiều

- Ống 5: không tủa vì lượng kiềm không đủ mạnh làm biến tính protein và lớp áonước của protein

Thí nghiệm 4: Phản ứng tủa bởi acid mạnh và không đun nóng

Thí nghiệm 5: Tìm protein trong nước tiểu

1 Phương pháp đông kết: tủa protein bằng acid yếu + đun nóng.

- Cho vào ống nghiệm 2 ml nước tiểu, đun sôi trong 2 phút

- Sau đó thêm vào khoảng 3 - 5 giọt acid acetic 1%

- Nếu trong nước tiểu có protein thấy trầm hiện (tủa)

2 Phương pháp Heller: tủa protein bằng acid mạnh và không đun

- Cho vào ống nghiệm 2 ml nước tiểu

1 2 3 4

- Nghiêng ống nghiệm và cho vào từ từ 1 ml HNO3 đậm đặc.

- Quan sát ở mặt phân cách 2 chất lỏng thấy protein kết tủa như một đám mâymờ

Chú ý: Nếu nước tiểu quá cô đặc hoặc có acid uric cũng cho kết quả như trên (dương

tính giả) Trường hợp này có thể tránh được bằng cách pha loãng nước tiểu 3 - 4 lần

3 Kết quả:

- Ống 1: dương tính

- Ống 2: âm tính

BÀI 3 HOẠT ĐỘNG CỦA ENZYM

S.G.O.T (Serum Glutamic Oxaloacetic Transaminase)

S.G.P.T (Serum Glutamic Pyruvic Transaminase)

Được tổng hợp từ gan và tim, thuộc nhóm phân hoá tố chuyển nhóm amin

Xét nghiệm GOT và GPT giúp ta chẩn đoán, theo dõi các bệnh về gan, tim

Phương pháp ENZYMATIC (U.V Test)

1 NGUYÊN TẮC

xảy ra theo phản ứng sau đây:

α - cetoglutarat + L Aspartat GOT L Glutamat + Oxaloacetat Oxaloacetat + NADH + H+ MDH L Malat + NAD+

xảy ra theo phản ứng sau đây:

α Cetoglutarat + L Alanin GPT L Glutamat + Pyruvat

Pyruvat + NADH + H+ MDH L Lactat + NAD+

2 MẪU THỬ

Huyết thanh hay huyết tương (kháng đông Heparin)

3 THUỐC THỬ: Dạng KIT pha sẵn, gồm các hoá chất sau đây:

- Reagent 1: Tris buffer pH 7.5

 L Aspartate (GOT) hoặc L Alanin (GPT)

 α - cetoglutarat

- Reagent 2: Enzym/ Coenzym

 Malat dehydrogenase/ NADH,H+

 Lactat dehydrogenase/ NADH,H+