So sánh sự khác biệt về tốc độ tăng trưởng của các tế bào có và không có phương tiện truyền thông khác nhau trong plasmid

So sánh khác biệt tốc độ tăng trưởng tế bào có khơng có phương tiện truyền thông khác plasmid Chúng muốn so sánh tốc độ tăng trưởng tế bào chuyển đổi với plasmid cho thấy biểu cấu thành loại protein định với tốc độ tăng trưởng tế bào không chuyển đổi với plasmid Nghiên cứu mô hình này, cần phải phát triển chủng khác tế bào phương tiện truyền thơng khác thể hình Hình 7: Thí nghiệm giúp so sánh tốc độ tăng trưởng chủng khác phương tiện truyền thông kháng sinh khác Chúng cấy thuộc địa từ chứa căng thẳng cần thiết vào phương tiện truyền thơng tương ứng (các phương tiện truyền thông với yêu cầu kháng sinh) Đó là, DH5a cấy vào LB mà khơng cần kháng sinh, RFP (trong pSB1C3) tế bào có chứa cấy vào LB chứa Chloramphenicol (CHL), CFP (trong pSB1A2) tế bào có chứa cấy vào LB chứa Ampicillin (Amp) RFP -CFP tế bào đồng chuyển vào LB có chứa thuốc kháng sinh Những sau phát triển khoảng họ đạt giá trị OD600 từ 0,1 đến 0,5 Sau đó, văn hóa dòng lấy cấy vào nước canh 5ml không chứa kháng sinh, Amp, CHL Amp-CHL để giá trị OD tất ống tiêm tươi 0,01 Bây chúng tơi có mảng 16 ống với kết hợp khác có thể:  DH5a khơng có kháng sinh, DH5a Amp, DH5a CHL Dh5a Amp-CHL  RFP (pSB1C3) khơng có kháng sinh, RFP (pSB1C3) Amp, RFP (pSB1C3) CHL RFP (pSB1C3) Amp-CHL  CFP (pSB1A2) khơng có kháng sinh, CFP (pSB1A2) Amp, CFP (pSB1A2) CHL CFP (pSB1A2) Amp-CHL  RFP (1C3)-CFP (1A2) khơng có kháng sinh, RFP (1C3)-CFP (1A2) Amp, RFP (1C3)-CFP (1A2) CHL RFP (1C3)-CFP (1A2) Amp-CHL Do đó, điểm khởi đầu cho tất mẫu - OD600 0,01 Mỗi điểm tiêm, OD tất 16 mẫu đo Điều cung cấp cho ý tưởng hợp lý tốc độ tăng trưởng chủng khác phương tiện truyền thông kháng sinh khác Giao thức thử nghiệm: Một thuộc địa DH5a cấy vào 3ml LB mà không cần kháng sinh ống 50ml máy ly tâm.Tương tự vậy, RFP (1C3) thuộc địa cấy vào 3ml LB với CHL, CFP (1A2) thuộc địa vào 3ml LB với Amp RFP-CFP thuộc địa vào 3ml LB với Amp-CHL Cấy phép phát triển khoảng OD600 mẫu qua 0.1 Sau đó, chúng tơi sử dụng OD x Vol = OD x Vol để đo lường để inoculte từ văn hóa cho 5ml tươi LB trung bình với kết hợp kháng sinh khác để OD bắt đầu 0,01 Trong trường hợp này, OD OD600 văn hóa giờ, Vol khối lượng văn hóa cần phải inoculted văn hóa 5ml tươi, OD 0,01 (bắt đầu OD cho tất văn hóa ml ) Vol khối lượng cuối (5ml + vol 1) Từ mẫu tươi tiêm này, 150ul văn hóa sử dụng để đo OD điểm tiêm phòng Các 150ul mẫu pha lỗng lần để 750ul sau OD600 đo Toàn thủ tục lặp lặp lại để kiểm tra khả tái Lưu ý: Sau ủ bệnh ban đầu (các văn hóa 3ml), sử dụng để cấy văn hóa 5ml với kháng sinh tương tự mơi trường văn hóa 3ml Các OD600 ống 5ml sau tiêm phòng 0,01 Điều sau thực để phát triển 2,5 Đây văn hóa từ tiêm 16 ống cuối mà sau sử dụng cho phép đo Bấm vào để có kết Mơ hình Phương trình bản: Ở đâu, X + tế bào với plasmid X - tế bào khơng có plasmid u + tỷ lệ tăng trưởng tế bào tế bào đặc biệt với plasmid u - mức tăng trưởng tế bào cụ thể tế bào mà khơng có plasmid p xác suất tế bào để plasmid Chúng cố gắng để đưa mơ hình tốn học cho quần thể tương đối plasmid có chứa plasmid tế bào miễn phí thời gian sử dụng đường cong tăng trưởng tạo kết từ phát huỳnh quang với Huỳnh quang hình ảnh tế bào để kiểm tra hướng plasmid Thí nghiệm thiết kế để nghiên cứu plasmid tế bào (chuyển đổi với plasmid) trồng phương tiện truyền thơng mà khơng có áp lực chọn lọc cần thiết Ở đây, thực thí nghiệm khác để nghiên cứu Các tế bào biến đổi với RFP (pSB1C3) plasmid vắng mặt Chloramphenicol môi trường Các tế bào biến đổi với CFP (pSB1A2) plasmid vắng mặt Ampicillin môi trường Tế bào cotransformed với RFP (pSB1C3) CFP (pSB1A2) RFP (pSB1C3) plasmid phát triển vắng mặt Chloramphenicol diện Ampicillin môi trường Tế bào cotransformed với RFP (pSB1C3) CFP (pSB1A2) CFP (pSB1A2) plasmid phát triển vắng mặt Ampicillin diện Chloramphenicol môi trường Fig 6.3: thủ tục thử nghiệm để đo tốc độ plasmid hình ảnh huỳnh quang Chúng tơi nhận thuộc địa căng thẳng cấy lần mơi trường với kháng sinh thích hợp.Sau sử dụng để cấy môi trường phát triển cụ thể hình 6.3 RFP (pSB1C3) tế bào có chứa trồng mơi trường khơng chứa kháng sinh mơi trường có chứa Chloramphenicol CFP (pSB1A2) tế bào có chứa trồng môi trường không chứa kháng sinh mơi trường có chứa Ampicillin Di động đồng chuyển trồng môi trường không chứa kháng sinh, trung bình chứa Ampicillin, trung bình chứa Chloramphenicol, trung bình có chứa Ampicillin Chloramphenicol Hành vi dự kiến hệ thống (được liệt kê theo thứ tự điều kiện nêu trên): RFP (pSB1C3) Các tế bào có chứa phát triển mơi trường khơng có Chloramphenicol cuối plasmid cho thấy khơng có huỳnh quang đỏ chụp ảnh kính hiển vi người mà trồng chloramphenicol có chứa trung bình tất huỳnh quang màu đỏ CFP (pSB1A2) có chứa tế bào phát triển mơi trường khơng có Ampicillin cuối plasmid cho thấy khơng có Cyan huỳnh quang người mà trồng Ampicillin có chứa trung bình tất huỳnh quang Cyan Tế bào Cotransformed phát triển mơi trường khơng có thuốc kháng sinh cuối plasmid cho thấy khơng có huỳnh quang màu đỏ Cyan, người mà trồng Ampicillin có chứa trung bình tất huỳnh quang Cyan, người mà trồng Chloramphenicol có chứa trung bình tất huỳnh quang đỏ người phát triển mơi trường có chứa thuốc kháng sinh tất huỳnh quang Cyan đỏ Giao thức: Cấy 3ml LB chứa Ampicillin với thuộc địa tế bào biến đổi với CFP (pSB1A2) - canh 1, cấy 3ml LB chứa Chloramphenicol với thuộc địa tế bào biến đổi với RFP (pSB1C3) - canh 2, cấy 3ml LB chứa Ampicillin Chloramphenicol với thuộc địa tế bào đồng chuyển với CFP (pSB1A2) RFP (pSB1C3) canh Văn hóa phát triển OD600 qua 0.1 Sau đó, sử dụng OD x Vol = OD x Vol để đo lường để lây từ văn hóa cho 5ml tươi LB trung bình với kết hợp kháng sinh khác để OD bắt đầu 0,01 Trong trường hợp này, OD OD600 văn hóa giờ, Vol khối lượng văn hóa cần phải tiêm vào văn hóa 5ml tươi, OD 0,01 (bắt đầu OD cho tất văn hóa ml ) Vol khối lượng cuối (5ml + vol 1) tiêm chủng bắt buộc là: a Nước dùng vào ống khơng có kháng sinh LB - ống b Nước dùng vào ống với Ampicillin LB - ống c Nước dùng vào ống khơng có antibioti LB - ống d Nước dùng vào ống với Chloramphenicol LB - ống e Nước dùng vào ống khơng có kháng sinh LB - ống f Nước dùng vào ống với Ampicillin LB - ống g Nước dùng vào ống với Chloramphenicol LB - ống h Nước dùng vào ống với hai kháng sinh LB - ống văn hóa phép phát triển cho 2,5 Đo OD giai đoạn chuẩn bị cho slide hình ảnh huỳnh quang từ ống Sau đó, chúng tơi sử dụng OD x Vol = OD x Vol để đo lường để lây từ văn hóa 2,5 cho 5ml tươi LB trung bình với kết hợp kháng sinh để OD bắt đầu 0,01 Trong trường hợp này, OD OD600 văn hóa 2,5 giờ, Vol khối lượng văn hóa 2,5 mà cần phải tiêm vào văn hóa 5ml tươi, OD 0,01 (bắt đầu OD cho tất văn hóa ml ) Vol khối lượng cuối (5ml + vol 1) Văn hóa tức từ ống dành sử dụng để inoculte ống tươi Tương tự theo cho tất loại ống khác Hãy văn hóa phát triển 2,5 lặp lại từ bước cho khoảng lần  ... bào với plasmid X - tế bào khơng có plasmid u + tỷ lệ tăng trưởng tế bào tế bào đặc biệt với plasmid u - mức tăng trưởng tế bào cụ thể tế bào mà khơng có plasmid p xác suất tế bào để plasmid. .. nghiên cứu plasmid tế bào (chuyển đổi với plasmid) trồng phương tiện truyền thông mà khơng có áp lực chọn lọc cần thiết Ở đây, chúng tơi thực thí nghiệm khác để nghiên cứu Các tế bào biến đổi... Điều cung cấp cho ý tưởng hợp lý tốc độ tăng trưởng chủng khác phương tiện truyền thông kháng sinh khác Giao thức thử nghiệm: Một thuộc địa DH5a cấy vào 3ml LB mà không cần kháng sinh ống 50ml máy