Nghiên cứu ảnh hưởng của α mangostin từ vỏ quả măng cụt (garcinia mangostana l ) lên vi khuẩn streptococcus mutans trên biofilm và đi ̣nh hướng ứng dụng

MỤC LỤC MỞ ĐẦU Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Bệnh sâu vi khuẩn Streptococus mutans 1.1.1 Bệnh học sâu 1.1.1.1 Nguyên nhân gây sâu 1.1.1.2 Mảng bám (dental plaque) 1.1.1.3 Cơ chê gây sâu 1.1.1.4 Vi khuẩn Streptococcus mutans 1.1.2 Tình hình bệnh sâu giới Việt Nam 1.1.3 Các biện pháp ngăn ngừa sâu 10 1.1.3.1 Sử dụng chất kháng khuẩn 10 1.1.3.2 Sử dụng chất thay thê đường 12 1.1.3.3 Liệu pháp thay thê (replacement therapy) 12 1.1.3.4 Vacxin 13 1.1.3.5 Kiêm soat sư hinh biofilm 13 1.2 Một số chế thích nghi acid vi khuẩn xoang miệng 15 1.2.1 Bơm proton F-ATPase 16 1.2.2 Sự thay đổi màng tế bào vi khuẩn thích nghi acid 17 1.2.3 Sự sinh chất kiềm 18 1.2.3.1 Urease 18 1.2.3.2 Hệ thống arginin deiminase (ADS) 19 1.3 Giới thiệu măng cụt 20 1.3.1 Đặc điểm sinh học 20 1.3.2 Các chất xathone măng cụt 20 Số hóa Trung tâm Học liệu du.vn – ĐHTN 1.3.3 Sinh tổng hợp chất xanthone 21 1.3.4 Tác dụng sinh học chất xanthone măng cụt 23 1.3.4.1 Hoạt t́nh kháng khuẩn 23 1.3.4.2 Hoạt t́nh kháng nấm 23 1.3.4.3 Tác dụng chống oxi hóa 23 1.3.4.4 Tác dụng chống viêm (anti-inflamation) 24 1.3.4.5 Hoạt t́nh chống ung thư 24 Chƣơng : NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP 25 2.1 Chủng vi sinh vật điều kiện nuôi cấy 26 2.2 Nguyên liệu thực vật 26 2.3 Hóa chất thiết bị 26 2.4 Phƣơng pháp nghiên cứu 27 2.4.1 Các phương pháp nghiên cứu tế bào 27 2.4.1.1 Chuẩn bị dịch tê bào 27 2.4.1.2 Đo mức đô sinh acid tê bào (pH drop) 27 2.4.2 Các phương pháp xác định hoạt đô enzyme 28 2.4.2.1 Chuẩn bị tê bào thấm 28 2.4.2.2 Xác định hoạt đô enzyme phosphoryl hóa đường (PTS) 28 2.4.2.3 Xác định hoạt đô enzyme F – ATPase 29 2.4.2.4 Xác định hoạt đô enzyme glucosyltransferase (GTF) 29 2.4.3 Các phương pháp nghiên cứu biofilm 30 2.4.3.1 Tạo biofilm 30 2.4.3.2 Xác đinh phân biofilm 31 2.4.3.3 Quan sát cấu trúc biofilm dưới kin ́ h hiển vi huỳnh quang quét lase 31 2.5 Đanh gia sƣ tich luy cua α-mangostin biofilm 32 2.6 Tinh hoạt chất khoáng khuẩn S mutans từ vỏ măng cụt 32 2.6.1 Tách hợp chất polyphenol phương pháp sắc ký lớp mỏng (TLC) 32 Số hóa Trung tâm Học liệu du.vn – ĐHTN 2.6.2 Phân tích cấu trúc hoa học cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) 2.7.33 Xử lý số liệu 33 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 34 3.1 Nghiên cứu quy trình chiết xuất α-mangostin từ vỏ măng cụt 34 3.1.1 Tách chiết phân đoạn có chứa -mangostin từ vỏ măng cụt 34 3.1.2 Tinh -mangostin từ vỏ măng cụt 36 3.1.2.1 Lưa chon dung môi thich hơp đê chay côt săc ky silica gel 36 3.1.2.2 Tinh -mangostin côt sắc ký silica gel sử dụng hệ dung môi nhexane: acetone (3:1) 37 3.2 Đánh giá tác dụng kháng khuẩn α-mangostin lên S mutans biofilm 44 3.2.1 -mangostin ức chế sinh acid vi khuẩn S mutans biofilm… 44 3.2.1.1 Ức chê sư giảm pH môi trường 44 3.2.1.2 -mangostin ức chê hoạt tính enzyme liên quan đến trình sinh và chống chịu acid F-ATPase va PTS 45 3.2.2 Đanh gia tác dụng ưc chê sư hinh biofilm cua vi khuân 48 S mutans 3.2.2.1 -mangostin ức chê sư sinhtổng hợp EPS ngoại bào 48 3.2.2.2 -mangostin làm thay đổi cấu trúc biofilm S mutans 49 3.2.2.3 -mangostin ức chê hoạt tính enzyme GTF liên quan đ ến sư hình thành biofilm cua vi khuân S mutans 51 3.3 Khả giết vi khuẩn biofilm α-mangostin 52 3.4 Khả tích lũy α-mangostin biofilm 53 3.4.1 Bươc đâu đánh giá tac dung chống sâu dung dịch nước súc miệng có chứa α-mangostin 54 3.4.1.1 Khả ức chê sư sinh acid 54 3.4.1.2 Khả ức chê sư hinh biofilm (mảng bám răng) 55 Chƣơng KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 57 TÀI LIỆU THAM KHẢO 58 Số hóa Trung tâm Học liệu du.vn – ĐHTN PHỤ LỤC 67 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.ltc.tnu.edu.vn DANH MỤC CÁC BẢNG SỬ DỤNG TRONG LUẬN VĂN Trang Bảng Công thức hóa học số xanthone có vỏ măng cụt Bảng 2.Độ chế phâm α-mangostin so vơi chât chuân 21 40 Bảng Độ sống sót S mutans biofilm xư ly vơi -mangostin53 Bảng Khả tích lũy cua α-mangostin biofilm cua vi khuân S mutans53 Bảng Khả ức chế sinh a cid S mutans biofilm dung dịch nước súc miệng 55 Bảng Ảnh hương cua NSM ch ứa α-mangostin lên sư tich luy sinh khôi biofilm cua vi khuân S mutans56 Số hóa Trung tâm Học liệu du.vn – ĐHTN DANH MỤC CÁC HÌNH SỬ DỤNG TRONG LUẬN VĂN Trang Hình 1.1.Cấu trúc Hình 1.2 Ba giai đoạn hình thành mảng bám Hình 1.3 Vi khuẩn Streptococcus mutans Hình 1.4 Quả măng cụt (Garcinia mangostana L.) 20 Hình 1.5 Quá trình hình thành xanthone thực vật 22 Hình 2.1 Mơ hinh tao biofilm S mutans bê măt đia hydroxyapatite 31 Hình 3.1 Sắc ký đồ phân đoạn chiết vỏ măng cụt ethanol n-hexane sử dụng phương pháp sắc ký lớp mỏng 36 Hình 3.2 Sắc ký đồ phân đoạn n-hexane sử dụng phương pháp sắc ký lớp mỏng 37 Hình 3.3 Sắc ký cột silica gel phân đoạn chiết n-hexane vỏ măng cụt với hệ dung môi rửa chiết n-hexane: acetone theo tỉ lệ (3:1) 38 Hình 3.4.A Sắc ký đồ α-mangostin tinh sach tư v ỏ măng cụt với hệ dung môi Hexane: acetone (3:1 v/v) 38 Hình 3.4.B Sắc ký đồ α-mangostin tinh sach tư vỏ măng cụt với hệ dung môi TEAF (5:3:1:1 v/v) 38 Hình 3.5 Phổ HPLC chất tinh (A) so vơi chât chuân (B) sau qua cột sắc ký silica gel đo máy LC-MSD-Trap-SL 39 Hình 3.6 Phổ Proton (A) Bruker, Avance 500 13 C (B) chất -mangostin đo máy NMR 42 Hình 3.7 Cấu trúc hóa học -mangostin (C24H26O6) 43 Hình 3.8 Sơ đồ qui trình tinh -mangostin từ vỏ măng cụt 43 Số hóa Trung tâm Học liệu du.vn – ĐHTN Hình 3.9 -mangostin ức chế sinh acid vi khuẩn S mutanstrên bioflm 45 Hình 3.10 Ảnh hưởng -mangostin lên hoạt độ F-ATPase va PTS củaS mutans biofilm 46 Hình 3.11 Ảnh hưởng -mangostin lên sinh khôi biofilm cua vi khuân S mutans 49 Hình 3.12 -mangostin 150 µM làm thay đổi cấu trúc biofilm S mutans 50 Hình 3.13 -mangostin 150µM ảnh hương đên hoat độ GTF củaS mutans 51 Hình 3.14 Chê phâm nươc súc miêng chưa α-mangostin tư vo qua măng cut 54 Số hóa Trung tâm Học liệu du.vn – ĐHTN Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nguyễn Vũ Anh MỞ ĐẦU Sâu bệnh miệng phổ biến có xu hướng ngày tăng lên nước phát triển Tổ chức Y tế giới đa c ảnh báo mức độ phô bi ến cua bênh ch ỉ sau bệnh tm mạch ung thư [5] Theo số liệu (2015) Hội Răng Hàm Mặt Việt Nam, thực tế có tơi 90% dân số Việt Nam đối mặt với vấn đề miệng, phổ biến sâu dẫn đến [59], [60] Đây tỷ lệ thuộc hàng cao giới Ngay nước phát triển Hoa Kỳ, tỷ lệ sâu tới 84% lứa tuổi niên Đi kèm với sâu bệnh miệng Trong năm qua, chi phí cho việc chăm sóc, sửa chữa tai Viêt Nam đa lên t ới nhiều tỷ đồng Bệnh sâu vi khuẩn mảng bám gây Những vi khuẩn mảng bám sử dụng carbonhydrate đê lên men t ạo acid, đo chu yêu la lactic Môi trường acid se phá v ỡ sư cân b ằng hệ vi khuẩn đường miệng, tạo điều kiện thích hợp cho vi khuẩn có khả chịu pH thấp tiếp tục sinh acid Khi lượng acid đủ lớn hòa tan chất khống có men dẫn đến làm mòn men răng, tạo thành hố gây sâu [38] Sử dụng chất kháng khuẩn sản phẩm vệ sinh miệng biện pháp phòng chống sâu có hiệu Trong số chất kháng khuẩn sử dụng vào mục đích này, fluor chất có tiềm Đây chất có chế tác động hai mặt Một mặt chất có tác dụng kháng vi khuẩn sâu mạnh, mặt khác lại có vai trò giúp tái tạo lại men có tác dụng làm bền Chính thế, fluor sử dụng rộng rãi chưa có chất kháng khuẩn thay [43] Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nguyễn Vũ Anh Tuy nhiên, việc xuất hiện tượng bệnh nhiễm fluor (fluorosis) sử dụng lâu dài sản phẩm vệ sinh miệng có chứa fluor khiến cho nhà nghiên cứu công ty sản xuất sản phẩm vệ sinh miệng phải tìm kiếm thêm hợp chất để thay fluor hay kết hợp với fluor, nồng độ thấp mà có hiệu chống sâu cao Hàng loạt chất kháng khuẩn bao gồm chất tổng hợp tự nhiên acid yếu, dẫn xuất acid béo, triclosan, muối kim loại chất có nguồn gốc từ thực vật nghiên cứu thử nghiệm Việc tm kiếm sử dụng chất kháng khuẩn tự nhiên, đặc biệt chất có nguồn gốc thực vật (phytochemicals) quan tâm Hướng nghiên cứu gọi cách mạng xanh y học (green medicine) [9], [19], [43] Trong lĩnh vực bảo vệ miệng, hướng nghiên cứu có nhiều triển vọng tinh hiêu qua va an toan cao cua cac chât Những kết điều tra trước cho thấy vỏ măng cụt (Garcinia mangostanaL.) có chứa số polyphenol thuộc nhóm chất xanthone, có αmangostin, có khả ức chế sinh trưởng, sinh acid, hô hấp diệt vi khuẩn gây sâu S mutans mạnh Ngoài , vỏ măng cut cung la nguôn nguyên liêu kha phong phu va re tiên đê tach chiêt cac chât xanthone th ế, Garcinia mangostanaL đối tượng tiềm để tinh sạch, nghiên cứu ứng dụng chất kháng vi khuẩn sâu (anticaries agents).Vơi mong muôn co môt nghiên cưu đu vê chê tac dung khang vi khuân sâu cua αmangostin tư vo qua măng cụt ứng dụng chúng viêc san xuât môt loai san phâm vê sinh miêng mơi , tiến hành thưc hiên đê tai “Nghiên cứu anh hương cua α-mangostn tư vỏ măng cụt (Garcinia mangostana L.) lên vi khuân Streptococcu s mutans biofilm va đinh hương ưng dung ” nhăm muc đich đưa qui trình tách chiết α- mangostin hiêu qua , đơn gian đông thơi kh ẳng định tác dụng kháng khuẩn Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nguyễn Vũ Anh sâu chât trênđối tượng vi khuẩnS mutans biofilmvà bước đầu tạo đươc chế phẩm nước súc miệng mơi co tac dung phong ch ống bệnh sâu Đề tài khoá luận tập trung nghiên cứu nội dung sau: i ii Xây dưng qui trinh tach chiêt α-mangostinđơn gian , đạt hiệu suất cao Nghiên cứu tác dụng α-mangostinlên vi khuẩn S mutans biofilm thông qua việc nghiên cứu ảnh hưởng chât lênqua tri nh sinh acid tạo biofilm c vi khuân cung cac enzyme liên quan đên cac qua trình iii iv Nghiên cưu kha n ăng tich luy cua α-mangostin biofilm Tạo dung dịch nước súc miệng có chứa xanthone số chất hoạt động khác đánh giá khả chống sâu chế phẩm thu mơ hình biofilm nhân tạo cóso sánh tác dụng với chế phẩm nước súc miệng thương mại thông qua tiêu: i) Ảnh hưởng chúng lên trình sinh acid vi khuẩn; ii) Khả hạn chế tạo mảng bám (dental plaque) 150 M -mangostin 29206 ± 3612,628 4,536 ± 0,01 3.4.1 Bƣơc đâu đánh giá tac dung ch ống sâu dung dịch nƣớc súc miệng có chứa α-mangostin Dưa kêt qua nghiên cưu thu đươc ,chúng tiến hành thử nghiệm chê tao nươc suc miêng co chưa -mangostin nông đô 150 M kêt hơp môt sô chât hoat đông bê măt khac , gồm methol,tinh dầu bạc hà, NaF nhăm đanh giá khả ứng dụng chất làm nước súc miệng phòng chống sâu (Hình 3.14) Tác dụng dung dịch nước súc miệng đượ c đanh gia mơ hình biofilm so sánh với tác dụng nước súc miệng Listerin thương mại tiêu : i) Khả ức chế sinh acid ; ii) khả ức chế hình thành biofilm S mutans Hình 3.14 Chê phâm nƣơc suc miêng chƣa α-mangostin tƣ vo qua măng cụt 3.4.1.1 Khả ức chế sư sinh acid Khả ức chế sinh a cid vi khuẩn S mutans đươc đanh gia thông qua viêc xac đinh kha ưc chê sư giam pH môi trương cua cac tê bao S mutans biofilm đa xư ly vơi cac dung dich nươc suc miêng (NSM) Kêt qua trình bày bảng cho thây dung dich NSM tao đươc ưc chê ro rêt sư sinh a cid vi khuẩn S mutans biofilm Giá trị pH cuối thu với NSM chưa -mangostin va Listerin lân lươt la 5,31 5,60, mâu đôi chưng (không xư ly NSM ) 3,99 Như vây, khả ức chế sinh a cid S mutans gần tương đương với tác dụng dung dịch NSM thương mại Listerin Bảng 5.Khả ức chế sinh a cidcủa S mutans biofilm cua cac dung dich nƣơc suc miêng Mâu nghiên cƣu Giá trị pH môi trƣờng (sau 240 phút) Đối chưng 3,99 NSM 5,31 Listerin 5,60 3.4.1.2 Khả ức chế sư hinh biofilm (mảng bám răng) Nhăm tim hiêu kha h ạn chế tạo mảng bám cua dung dich NSM chưa mangostintạo mơ hình biofilm nhân t ạo, chúng tơi tiến hành xử lý biofilm S mutans vơi cac dung dich NSM , sau đo đo sinh khôi cac biofilm thu đươc sau ngày nuôi cấy Kêt qua thu đươc bang cho thây sinh khôi biofi lm trung binh cua cac mâu đươc xư ly vơi NSM chưa - mangostin va NSM Listerin giam tơi 50% so vơi đôi chưng Trọng lượng sinh khôi khô cua môi biofilm lân lươt la 7,1 8,5 mg/biofilm so vơi đôi chưng 19,5 mg/biofilm NSM chưa -mangostin dương co tac dung ưc chê sư hình thành sinh khối biofim rõ rệt Listerin Như vây , NSM chưa - mangostin chê tao đươc co tiêm ưc chê sư hinh mang bam Bảng Ảnh hƣơng cua NSM chứaα-mangostin lên sƣ tich luy sinh khôi biofilm cua vi khuân S mutans.Số liệu sau dấu ± giá trị lêc̣ h chuẩn SD với n=3 Biofilm hình thành lam kính thủy tinh (3 x 12 cm) Mẫu xử lý Trọng lƣợng khô biofilm (mg/biofilm) Đối chưng NSM - 19,5  2,80 mangostin NSM 7,1  1,10 Listerin 8,5  0,81 Chƣơng KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Đã đưa qui trình tinh sạchα-mangostin đơn gian t vỏ măng cụt (Garcinia mangostanaL.) gôm bươc chinh la : i) chiêt phân đoan vơi n - hexane va ii) săc ký cột silica gel vơi dung môi n-hexane : accetone theo ti lê 3:1) Chất thu có tương đương vơi chât chuân đat >83% 2.α-mangostinở nồng độ 150 M ưc chê qua trinh sinh acid va sinh tông hơp polysaccharide ngoai bao cua S mutans biofilm α-mangostin nồng độ 150 M ưc chê hoat đô enzyme liên quan trực tiếp đến trình sinh chịu acid vi khuẩn S mutans màng tế bào làF-ATPase phospho transferase system (PTS) với tỉ lệ ức chế đạt >70% 50% theo thứ tự, enzyme liên quan đến trình sinh tổng hợp biofilm GTFB (>83% ức chế) GTFC (>72% ức chế) 4.α-mangostin co kha tich luy biofilm với hàm lượng đạt 4,5 µg/biofilm Bươc đâu đa chê tao va chưng minh đươc nươc suc miêng co chưa co tac dung khang vi khuân sâu - mangostin S mutans mô hinh biofilm nhân tao ĐỀ NGHỊ Cải tiến công thức để nâng cao hiệu NSM chứa Đanh gia đô an toan cua san phâm α- mangostin TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Trƣơng Văn Châu, Trần Hồng Quang, Đỗ Ngọc Liên, (2004), Đặc tính kháng khuẩn chất phenolic từ số loài thực vật thuộc chi Garcini str., Những vấn đề nghiên cứu khoa học sư sống, định hướng Y, Dược học, tr 50-53, Nhà xuất khoa học kỹ thuật Hà Nội Trịnh Đình Hải, (2004), Giáo trình dư phòng sâu răng, Nhà xuất Y học Trịnh Đình Hải, (2004), Giáo trình sử dụng flour chăm sóc miệng, Nhà xuất Y học Đỗ Văn Hòa, Lại Văn Hòa, Lê Hƣng, Bạch Vọng Hải, (2003), Về hàm lượng canxi, phospho magie hàm lớn bình thường sâu người trưởng thành, Thông báo khoa học trường Đại học Y – Dược, tr 63-65 Trần Văn Trƣờng, Trịnh Đình Hải, Spencer J A., Thomson R K., (2002), “Điều tra sức khoẻ miệng toàn quốc Việt Nam 1999 2000”, Tạp chí Y học Việt Nam, 8, tr – 10 Mai Đình Hƣng, (1998), Sâu răng, Bài giảng Răng Hàm Mặt, Nhà xuất Y học Đỗ Tất Lợi, (2000), “Những thuốc và vị thuốc Việt Nam”, NXB Y học Hà Nội, tr.567-568 Nguyễn Thị Mai Phƣơng, Phan Tuấn Nghĩa, Nguyễn Thị Ngọc Dao, Đặng Minh Phƣơng, (2003), “ Tác dụng dịch chiết vo măng cụt (Garcinia mangostana L.) lên vi khuẩn sâu Streptococcus mutans”, Hôi nghị Khoa học Sư sống lần thứ 2, Huế, tr 983-986 Nguyễn Thị Mai Phƣơng, Phan Tuấn Nghĩa, Đỗ Ngọc Liên, Nguyễn Thị Ngọc Dao, (2004), “Thành phần polyphenol vo măng cụt (Garcinia mangostana L.) và tác dụng ức chê sư sinh acid vi khuẩn sâu Streptococcus mutans”, Tạp chí Dược học, (44), tr 18-21 10.Nguyễn Thị Mai Phƣơng, (2005), “Nghiên cứu ảnh hưởng môt số chất kháng khuẩn lên q trình sinh lý và hóa sinh vi khuẩn gây sâu Streptococcus mutans”, Luân án tến sỹ 11.Nguyên Thi Mai Phƣơng va Marquis R E, (2011) Hoạt tính kháng vi khuẩn Streptococcus xoang miệng -mangostin tinh từ vỏ măng cụt (Garcinia mangostana L.) Tạp chí Dươc liêu 16(5): tr.298303 Tài liệu tiếng Anh 12.Abdelal, T.T., (1979), Arginine catabolism by microorganisms, Ann Rev Microbiol 8, tr 139-168 13.Almeida L.S., Murata R.M., Yatsuda R., Dos Santos M.H., Nagem T.J., Alencar S.M., Koo H., Rosalen P.L., (2008), Antimicrobial activity of Rheedia brasiliensis and 7epiclusiannone against Streptococcus mutans Phytomedicine., 15(10), tr 886-891 14.Arikado E., Ishihara H., Ehara T., (1999), Enzyme level of enterococcal F1F0 ATPase is regulated by pH at the step of assembly Eur J Biochem., 259, tr 262-268 15.Bearon S., Bearson B., Foster J.W., (1997), Acid stress reponses in enterobacteria FEMS Microbiol Lett., 147, tr 173-180 16.Belli W.A., Marquis R.E., (1991), Adaptation of Streptococcus mutans and Enterococcus hirae to acid stress in continuous culture Appl Environ Microbiol., 57, tr 1134-1138 17.Bender G.R., and Marquis R.E., (1995), Membrane ATPases and acid tolerance of Actinomyces viscosus and Lactobacillus casei Appl Environ Microbiol , 53, tr 21242128 18.Bender G.R., Suton S.V., and Marquis R.E., (1986), Acid tolerance, proton permeabilities, and membrane ATPases of oral steptococci Infect Immum., 53, tr 331-338 19.Badria, F.A., and Zidan, O.A., ( 2004) Natural products for dental caries prevention J Med Food7(3), tr.381–384 20.Bowen WH, Koo H.,(2011)Biology of Streptococcus mutans-derived glucosyltransferases: role in extracellular matrix formation of cariogeneic biofilms Caries Res; 45, tr 69-86 21.Burne RA, Ahn SJ, Wen ZT, Zeng L, Lemos JA, Abranches J, Nascimento M.,(2009) Opportunities for disrupting cariogenic biofilms Adv Dent Res; 21(1), tr 17-20 22.Burne R.A., Marquis R.E, (2001), Biofilm acid /base physiology and gene expression in oral bacteria Methods Enzymol., 337, tr 403-415 23.Burne R.A., Marquis R.E, (2000), Alkali production by oral bacteria and protection against dental caries, FEMS Microbiol Lett., 193, tr 1-6 24.Casiano-Colon A And Marquis R.E., (1988), Role of arginine deiminase system in protecing oral bacteria and an enzymatic basic for acid tolerance, Appl Environ Microbiol., 54, tr 1318-1324 25.Chang Y-Y and Cronan J.E., (1999), Membrane cyclopropane fatty acid content is a major factor in acid resistance os Escherichia coli, Mol Microbiol., 33, tr 249-249 26.Chen Y-Y., Clancy K.A., and Burne R.A., (1996), Streptococcus salivarius urease: genetic biochemical charaterization and expression in a dental plaque streptococcus, Infect, Immun., 64,tr 585-592 27.Costerton J.W., Lewandowski Z., Caldwell D.E., Korber D.R and Lappin-Scoott H.M., (1995), Microbial biofilms, Ann Rev Microbiol., 49, tr 711-745 28.Coter P.D and Hill C., (2003), surviving the acid test: responses of gram-positive bacteria to low pH, Microbiol Mol Bio Rev., 67, tr 429453 29.Cunin R., Glansdorff N., Peirad A And slaton V., (1986), Biosynthesis and metabolism of arginin in bacteria, Microbiol Rev., 50, tr 314-352 30.Curran T.M., Lieou J and Marquis R.E., (1995), Arginine deimiase system and acid adaptation of oral streptococci, Appl Environ Microbiol., 61, tr 4494-4496 31.Curan T.M., Ma Y., Rutherford G.C and Marquis R.E., (1998), Turning on and turning off the arginine system in oral streptococci, Can J Microbiol., 44, tr 10781085 32.Dong Y., Chan M.Y.Y and Burne R.A., (2004) Control expression of the arginine deimiase operon os Streptococcus gordonii by CcpA and, J Bacteriol., 186 (8), tr 2511-2514 33.Ho CH, Huang YL, Chen CC, (2002) Garcininne E, a xanthone derivatives, has potent cytotoxic efect against hepatocellular carcinoma cell lines Planta Med 68(11), tr 975-979 34.Hamada S., Kontani M., Hosono H., Ono H., Tanaka, T., Ooshima T., Mitsunaga T and Abe S.,(1996), Catechin inhibits glucosyltransferase from Streptococcus mutans,FEMS Microbiol Lett., 143, tr 35-40 35.Koo H, Duarte S, Muarata RM, Scott-Anne K, Gregoire S, Warson GE, Singh AP, Vorsa N., (2010) Influence of cranberry proanthocyanidins on formation of biofilms by Streptocoocus mutans on saliva-coated apatitic surface and on dental caries development in vivo Caries Res 44(2), tr 116-126 36.Jeon JG, Klein MI, Xiao J, Gregoire S, Rosalen PL, Koo H, (2009), Influences of naturally occurring agents in combination with fluoride on gene expression and structural organization of Streptococcus mutans in biofilms,BMC Microbiol., 9, tr 228-232 37.Koo H, Xiao J, Klein MI, (2009), Extracellular polysaccharides matrix an often forgotten virulence factor in oral biofilm research, Int J Oral Sci., 1(4), tr 229-234 38.Loesche W.J., (1986), Role of Streptococcus mutans in human dental decay, Microbiol Rev., 50, tr 353-380 39.Ma Y., Rutherford G.C., Curran T.M., Reimiller J.S., Marquis R.E., (1999), Menbrane locus and pH sensitivity of paraben inhibition of alkali production by oral streptococci, Oral Microbiol Immunol., 14, tr 244249 40.Mahabusarakam W., Proudfoot J., Taylor W., Croft K., (2000), "Inhibition of lipoprotein oxidation by prenylated xanthones derived from mangostin", Free Rad Res., 33(5), tr 643-659 41.Makimura M, Hirasawa M, Kobayashi K, Indo J, Sakanaka S, Taguchi T, Otake S, ( 1993), Inhibitory effect of tea catechins on collagenease activity,J Periodontol., 64(7), tr 630-636 42.Matsumoto K., Akao Y., Kobayashi E., Ohguchi K., Ito T., Tanaka T., Iinuma M., Nozawa Y., (2003), "Induction of apoptosis by xanthones from mangosteen in human leukemia cell lines", J Nat Prod., 66(8), tr.l124-1127 43.Marsh P., Martin M.V., (2000), Oral microbiology, 4lh edition, Reed Educational and Professional Publishing Ltd USA 44.Murata RM, Branco-de-Almeida LS, Franco EM, Yatsuda R, dos Santos MH, de Alencar SM, Koo H, Rosalen PL, (2010), Inhibition of Streptococcus mutans biofilm accumulation and development of dental caries in vivo by 7-epiclusianone and fluoride,Biofouling, 26(7), tr 865872 45.Nakatani K., Yamakuni T., Kondo N., Arakawa T., Oosawa K., Shimura S., Inoue H., Ohizumi Y., (2004), "Gamma-mangostin inhibits inhibitor-kappaB kinase activity and decreases lipopolysaccharide- induced cyclooxygenase-2 gene expression in C6 rat glioma cells", Mol Pharmacol., 66(3), tr.667-747 46.Nguyen P.T.M and Marquis R.E.,(2011) Antmicrobial actions mangostin against oral Streptococci, Can J Microbiol., 57(3), tr 217-25 of alpha- 47.Peres V., Nagem T.J and Oliveira F.F., (2000), Tetraoxygenated naturally occurring xanthones, Phytochem., 55(7), tr 28-33 48.Quivey R.G., Faustoferri R.C., Monahan K and Marquis R.E., (2000), Shifts in membrane fatty acid profiles associated with acid adaptation of Streptococcus mutans, FEMS Microbiol Lett., 189, tr 8992 49.Quivey R.G., Kuhnert W.L and Hahn K., (2000), Adaptation of oral streptococci to low pH, Adv Microbiol Physiol., 42, tr 239-274 50.Quivey R.G., Kuhnert W.L and Hahn K., (2001), Genetics of acid adaptation of oral streptococci, Crit Rev Oral Biol Med., 12, tr 301314 51.Rogers A.H., Zilm P.S., Gully N.J and Pfenning A.L., (1988), Response of a Streptococcus sanguis strain to arginine-containing peptides Infect Iniinun., 56, tr 687-692 52.Sato A., Fujiwara H., Oku H., Ishiguro K., Ohizumi Y., (2004), Alpha- mangostin induces Ca(2+)-ATPase-dependent apoptosis via mitochondrial pathway in PC 12 cells J Pharmacol Sci., 95(1), tr 33- 40 53.Scheie A.A., (1989), Modes of action of currently known chemical anti- plaque agents other than chlorohexidine, J Dent Res., 68, tr 1609-1616 54.Schilling K.M., Bowen W.H., (1992) Glucans synthesized in situ in experimental salivary pellicle function as specific binding sites for Streptococcus mutans, Infect Immun 60, tr 284-295 55.Stur M.G and Marquis R.E., (1992), Comparative acid tolerances and inhibitor sensitivities of isolated F-ATPases of oral lactic acid bacteria, Appl Environ Microbiol., 58, tr 2287-2291 56.Venkitaraman A.R., Vacca-Smith A.M., and Kopec L.K., (1995), Characterizaton of glucosyltransferase B, GtfC, and GtfD in soluton and on the surface of hydroxyapatte, J Dental Res., 74, tr 1695-1701 57.Wilson M., (1996), Susceptibility of oral bacterial biofilms to antmicrobial agents, J Med Microbiol., 44, tr 79-87 58.Williams P., Ongsakul M., Proudfoot J., Croft K., Beilin L., (1995), Mangostin inhibits the oxidative modification of human low density lipoprotein, Free Rad Res., 23(2), tr 175-841 Tài liệu khác 59 http://nld.com vn/hoi-nhap/song-chung-voi-sau-rang20150322170059182.htm 60 http://news.zing vn/Can-benh-khien- moi-nguoi-Viet-Nam- mat-hon-6- chiecrang-post546699.html DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH CƠNG BƠ CỦA TÁC GIẢ Nguyên Thi Mai Phương ,Bạch Như Quỳnh , Trân Thi Nhung , Nguyên Công Thành, Quách Thị Liên , Nguyên Vu Anh , Phạm Văn Liệu (2015) Dịch chiết sim (Rhodomyrtus tomentosa (Aliton) Hassk) ức chế sinh acid hình thành biofilm vi khuẩn Streptcocccus mutans Tạp chí Y hoc Viêt Nam 433: tr 177-183 PHỤ LỤC Phổ Proton 13 C chất -mangostin Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nguyễn Vũ Anh Chem.shif- H (ppm) Pos Group C 156.57 C 102.72 C=O 183.02 C 125.03 C 138.34 CH C-OH 156.05 C 144.67 10 C 112.12 11 CH 12 C-OH 161.43 13 C 111.35 14 C-OH 163.49 18 O-CH3 19 CH2 6.63, 1H, s 6.19, 1H, s Chem.shif(ppm) 13 C 103.67 93.14 3.72, 3H, s 61.26 4.01, 2H, d(J=5.6 27.04 Hz) 20 CH 5.19,1H, d(J=5.6 125.04 Hz) 21 C 131.70 22 CH3 1.62, 3H, s 25.89 24 CH2 3.23, 2H, d(J=5.6 22.14 Hz) 25 CH 5.19,1H, d(J=5.6 123.81 Hz) 26 C 131.61 27 CH3 1.63, 3H, s 25.91 29 CH3 1.74, 3H, s 17.86 30 CH3 1.78, 3H, s 18.26 68 ... chiêt α- mangostin ơn gian , đạt hiệu suất cao Nghiên cứu tác dụng α- mangostinlên vi khuẩn S mutans biofilm thông qua vi c nghiên cứu ảnh hưởng chât l nqua tri nh sinh acid tạo biofilm c vi khuân... qua măng cụt ứng dụng chúng vi c san xuât môt loai san phâm vê sinh miêng mơi , tiến hành thưc hiên đê tai Nghiên cứu anh hương cua α- mangostn tư vỏ măng cụt (Garcinia mangostana L. ) l n vi khuân... PTS củaS mutans biofilm 46 Hình 3.11 Ảnh hưởng  -mangostin l n sinh khôi biofilm cua vi khn S mutans 49 Hình 3.12  -mangostin 150 µM l m thay đổi cấu trúc biofilm S mutans 50 Hình 3.13 -mangostin