Tối ưu hóa các điều kiện để tạo vỏ vi khuẩn rỗng Bacterial ghost sử dụng tác nhân hóa học (Khóa luận tốt nghiệp)

Tối ưu hóa các điều kiện để tạo vỏ vi khuẩn rỗng Bacterial ghost sử dụng tác nhân hóa học (Khóa luận tốt nghiệp)Tối ưu hóa các điều kiện để tạo vỏ vi khuẩn rỗng Bacterial ghost sử dụng tác nhân hóa học (Khóa luận tốt nghiệp)Tối ưu hóa các điều kiện để tạo vỏ vi khuẩn rỗng Bacterial ghost sử dụng tác nhân hóa học (Khóa luận tốt nghiệp)Tối ưu hóa các điều kiện để tạo vỏ vi khuẩn rỗng Bacterial ghost sử dụng tác nhân hóa học (Khóa luận tốt nghiệp)Tối ưu hóa các điều kiện để tạo vỏ vi khuẩn rỗng Bacterial ghost sử dụng tác nhân hóa học (Khóa luận tốt nghiệp)Tối ưu hóa các điều kiện để tạo vỏ vi khuẩn rỗng Bacterial ghost sử dụng tác nhân hóa học (Khóa luận tốt nghiệp)Tối ưu hóa các điều kiện để tạo vỏ vi khuẩn rỗng Bacterial ghost sử dụng tác nhân hóa học (Khóa luận tốt nghiệp)Tối ưu hóa các điều kiện để tạo vỏ vi khuẩn rỗng Bacterial ghost sử dụng tác nhân hóa học (Khóa luận tốt nghiệp)Tối ưu hóa các điều kiện để tạo vỏ vi khuẩn rỗng Bacterial ghost sử dụng tác nhân hóa học (Khóa luận tốt nghiệp)

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM ĐỖ VĂN TÙNG Tên đề tài: TỐI ƢU HÓA CÁC ĐIỀU KIỆN TẠO VỎ VI KHUẨN RỖNG (Bacterial ghost) SỬ DỤNG TÁC NHÂN HÓA HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chun ngành : Cơng nghệ Sinh học Lớp :K 44 - CNSH Khoa : CNSH-CNTP Khóa học : 2012-2016 Thái Nguyên, năm 2016 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM ĐỖ VĂN TÙNG Tên đề tài: TỐI ƢU HÓA CÁC ĐIỀU KIỆN TẠO VỎ VI KHUẨN RỖNG (Bacterial ghost) SỬ DỤNG TÁC NHÂN HÓA HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chun ngành : Cơng nghệ Sinh học Khoa : CNSH-CNTP Khóa học : 2012-2016 Giảng viên hƣớng dẫn : PGS.TS Đồng Văn Quyền Viện Công nghệ Sinh học -Viện Hàn lâm Khoa học cơng nghệ Việt Nam 2.ThS Bùi Đình Lãm Khoa CNSH-CNTP, Trƣờng ĐH Nông Lâm Thái Nguyên Thái Nguyên, năm 2016 i LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian thực nghiên cứu phòng thí nghiệm Vi sinh Phân tử, Viện Công Nghệ Sinh Học-Viện Hàn Lâm Khoa Học Cơng Nghệ Việt Nam, ngồi nỗ lực nhóm, em nhận đƣợc giúp đỡ nhiệt tình từ quý Thầy Cô Viện Công Nghệ Sinh Học-Viện Hàn Lâm Khoa Học Cơng Nghệ Việt Nam Để hồn thành tốt đề tài tốt nghiệp này, em xin chân thành cảm ơn PGS.TS Đồng Văn Quyền Phó viện trƣởng Viện Cơng Nghệ Sinh Học, Trƣởng phòng Vi sinh vật Phân tử tạo điều kiện cho em có đƣợc môi trƣờng tốt để phát huy khả thân suốt trình nghiên cứu, học tập trao đổi kiến thức phòng, giúp đỡ em tận tình để hồn thành tốt đề tài tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn TS Nguyễn Minh Hƣờng anh chị làm việc nghiên cứu phòng Vi sinh vật Phân tử tận tình truyền đạt kiến thức, kĩ thao tác suốt trình nghiên cứu phòng Để từ em có tảng kiến thức kĩ thao tác hoàn thiện, vững giúp em hoàn thành tốt đề tài tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn ThS Bùi Đình Lãm hƣớng dẫn tạo điều kiện tốt cho em hoàn thành đề tài Qua đây, em xin gửi lời cảm ơn đến Cha Mẹ, Anh Chị Em gia đình họ hàng, bạn bè động viên giúp cho em có tinh thần để hồn thành tốt qua trình nghiên cứu vừa qua, Xin Chân Thành Cảm Ơn! Thái Nguyên, ngày 20 tháng năm 2016 SINH VIÊN THỰC HIỆN Đỗ Văn Tùng ii DANH MỤC BẢNG Trang Bảng 1: Các tác nhân hóa học sử dụng đề tài 27 Bảng 2: Các cơng thức thí nghiệm nghiên cứu tối ƣu quy trình tạo vỏ rỗng 32 Bảng 3: Ảnh hƣởng nồng độ tế bào đƣợc pha lỗng sử dụng thí nghiệm đến kết quy trình tạo vỏ rỗng tế bào vi khuẩn 33 Bảng 4: Hình ảnh tế bào vỏ rỗng vi khuẩn tạo dƣới điều kiện nhiệt độ khác soi dƣới kinh hiển vi quang học độ phóng đại 100X 35 Bảng 5: Ảnh hƣởng thời gian ủ tới bất hoạt vỏ tế bào vi khuẩn rỗng 37 Bảng 6: Ảnh hƣởng nồng độ tác nhân NaOH đến hình thái 38 iii DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1: Hình thái loại vi khuẩn [3] Hình 2: Cấu tạo tế bào vi khuẩn [3] Hình 3: Vi khuẩn Salmonella 12 Hình 4: Quá trình phân giải tế bào vi khuẩn tạo vỏ tế bào rỗng 20 Hình 5: Kết kính hiển vi điện tử quét cho thấy cấu trúc vỏ tế bào vi khuẩn rỗng tạo phƣơng pháp “Sponge-like” 23 Hình 6: Hình ảnh tế bào vỏ rỗng vi khuẩn biểu đồ thể trình gây đáp ứng miễn dịch vỏ tế bào rỗng vi khuẩn theo cách tác động khác Vinod cs năm 2014 24 Hình 7: Ảnh hiển vi quang học 36 iv DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT VSV : Vi sinh vật DNA : Deoxyribonucleic acid RNA : Ribonucleic acid Cs : Cộng PBS : Dung dịch đệm SDS : Sodium dodecyl sulfate LPS : Lipopolysaccharide BGs : Bacterial ghost đvC : Đơn vị cacbon v MỤC LỤC PHẦN 1: MỞ ĐẦU .1 1.1 Đặt vấn đề .1 1.2 Mục tiêu yêu cầu đề tài 1.2.1 Mục tiêu đề tài .2 1.2.2 Yêu cầu đề tài 1.3 Ý nghĩa đề tài PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu chung vi khuẩn 2.1.1 Đặc điểm hình thái cấu tạo 2.1.1.1 Hình thái vi khuẩn .4 2.1.1.2 Cấu tạo tế bào vi khuẩn .7 2.1.2 Phân loại vi khuẩn 10 2.2 Giới thiệu chung chi Salmonella 11 2.2.1 Nguồn gốc vi khuẩn Salmonella .11 2.2.2 Đặc điểm hình thái phân loại 12 2.2.2.1 Hình thái cấu trúc vi khuẩn Salmonella .12 2.2.2.2 Phân loại vi khuẩn Salmonella 14 2.3 Khả chế gây bệnh 16 2.4 Tình trạng kháng kháng sinh chủng Salmonella gây bệnh .18 2.5 Giới thiệu vỏ vi khuẩn rỗng (bacterial ghost) 19 2.6 Vai trò vi khuẩn rỗng 21 2.6.1 Giá trị y học 21 2.6.2 Giá trị kinh tế 22 2.7 Tình hình nghiên cứu nƣớc giới 22 2.7.1 Tình hình nghiên cứu giới .22 2.7.2 Tình hình nghiên cứu nƣớc .25 PHẦN 3: ĐỐI TƢỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 3.1 Đối tƣợng phạm vi nghiên cứu 26 vi 3.1.1 Đối tƣớng nghiên cứu 26 3.1.2 Phạm vi nghiên cứu 26 3.2 Địa điểm thời gian tiến hành nghiên cứu 26 3.3 Thiết bị, dụng cụ hóa chất 26 3.4 Nội dung nghiên cứu .27 3.5 Phƣơng pháp nghiên cứu 27 3.5.1 chuẩn bị môi trƣờng nuôi cấy vi khuẩn .27 3.5.2 Phƣơng pháp nghiên cứu .27 PHẦN 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 31 4.1 Kết .31 4.1.1 Xác định nồng độ tế bào thích hợp quy trình tạo vỏ rỗng tế bào vi khuẩn 32 4.1.2 Xác định ảnh hƣởng nhiệt độ thời gian ủ đến quy trình tạo vỏ tế bào vi khuẩn rỗng 35 4.1.3 Đánh giá ảnh hƣởng nồng độ tác nhân NaOH đến hình thái hiệu suất tạo vỏ rỗng tế bào vi khuẩn 37 PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 40 5.1 Kết luận 40 5.2 Kiến nghị .40 TÀI LIỆU THAM KHẢO 41 I.Tài liệu tiếng việt .41 II Tài liệu tiếng anh .41 III Tài liệu internet 44 PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Ở Việt Nam thời kì phát triển kinh tế, hoạt động kinh tế sản xuất làm thay đổi mơi trƣờng cách nhanh chóng, với điều kiện khí hậu nóng ẩm nhiệt đới Điều dẫn đến xuất nhiều loài vi khuẩn gây bệnh nguy hiểm gây thiệt hại kinh tế nhƣ sức khỏe ngƣời nhƣ : vi khuẩn tả lợn (Vibrio cholera), vi khuẩn gây bệnh viêm phổi lợn, vi khuẩn gây bệnh đƣờng tiêu hóa(Salmonella, E coli)… Trong đó, việc sử dụng lạm dụng chất kháng sinh dẫn đến tình trạng gia tăng chủng kháng thuốc quần thể Các nghiên cứu gần cho thấy tỷ lệ cao chủng E coli Salmonella đa kháng đƣợc phát nguồn thức ăn Việt Nam [13] [21] [19] Đây nguyên nhân dẫn đến việc bùng phát dịch bệnh ngộ độc thức phẩm năm nƣớc ta Trƣớc tình hình trên, nhu cầu sử dụng vaccine nƣớc ta lớn Tuy nhiên, số lƣợng vaccine đƣợc sản xuất nƣớc ta hạn chế Vaccine sản xuất Việt Nam chủ yếu vaccine vi sinh vật bất hoạt Tuy nhiên số lƣợng sản xuất không đủ để đáp ứng dịch bệnh bùng phát Các nghiên cứu cần đƣợc thực để tìm phƣơng pháp chế tạo vaccine với thời gian sản xuất ngắn độ an toàn cao, nhằm giải tình trạng dịch bệnh nƣớc ta Vỏ tế bào vi khuẩn rỗng bƣớc tiến khoa học, nhƣ y học động vật Vỏ tế bào khuẩn rỗng đƣợc dùng để chế tạo loại vaccine với nhiều ƣu điểm hơn, việc tạo vỏ vi khuẩn rỗng đóng gói tƣơng đối đơn giản [26] Đặc biệt loại vaccine đƣợc chế tạo từ vỏ vi khuẩn rỗng không cần bảo quản kho lạnh nên giảm đƣợc chi phí vận chuyển sử dụng, chúng tiến hành đơng bảo quản nhiệt độ bình thƣờng [11] Giúp tiết kiệm chi phí thời gian cho ngƣời sử dụng Cách thức tạo vi khuẩn rỗng chủ yếu sử dụng kĩ thuật chuyển gen kĩ thuật di truyền Phƣơng pháp hiệu nhƣng chứa nhiều nguy tạo chủng siêu vi khuẩn hay loại vi khuẩn khó kiểm sốt Do đó, dƣới phát triển khoa học kĩ thuật nhƣ kinh nghiệm từ nghiên cứu số tác giả, nghiên cứu phƣơng pháp hóa học để sản xuất vỏ tế bào vi khuẩn rỗng Nguyên lý phƣơng pháp dựa khả phá vỡ thành tế bào vi khuẩn số chất hóa học nồng độ xác định Năm 2003, Amara cs thành công sản xuất vỏ tế bào vi khuẩn rỗng từ vi khuẩn E coli pha cân [6] qua ta “Tối ƣu hóa điều kiện để tạo vỏ vi khuẩn rỗng (Bacterial ghost) sử dụng tác nhân hóa học” phƣơng pháp hƣớng phát triển đắn tránh đƣợc nguy rủi ro Việc hoàn thiện quy trình nắm bắt đƣợc phƣơng pháp tái tạo này, mở bƣớc tiến lớn sinh học nhƣ y học động vật, y học ngƣời 1.2 Mục tiêu yêu cầu đề tài 1.2.1 Mục tiêu đề tài Lựa chọn tác nhân hóa học cho hiệu suất tạo vỏ tế bào vi khuẩn rỗng cao tối ƣu hóa quy trình tạo vỏ tế bào vi khuẩn rỗng Đối tƣợng vi khuẩn đƣợc lựa chọn đề tài chủng Salmonella spp thuộc nhóm vi khuẩn Gram âm, nhóm vi khuẩn gây bệnh chủ yếu nƣớc ta 1.2.2 Yêu cầu đề tài - Tìm nồng độ vi khuẩn cho số lƣợng vỏ tốt nhiều - Độ sống sót vi khuẩn rỗng sau trình tạo thành bị bất hoạt 100% - Hình thái vỏ rỗng khơng bị vỡ nát, nguyên vẹn có độ rỗng cao ...ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM ĐỖ VĂN TÙNG Tên đề tài: TỐI ƢU HÓA CÁC ĐIỀU KIỆN TẠO VỎ VI KHUẨN RỖNG (Bacterial ghost) SỬ DỤNG TÁC NHÂN HÓA HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo. .. hóa học nồng độ xác định Năm 2003, Amara cs thành công sản xuất vỏ tế bào vi khuẩn rỗng từ vi khuẩn E coli pha cân [6] qua ta Tối ƣu hóa điều kiện để tạo vỏ vi khuẩn rỗng (Bacterial ghost) sử dụng. .. chọn tác nhân hóa học cho hiệu suất tạo vỏ tế bào vi khuẩn rỗng cao tối ƣu hóa quy trình tạo vỏ tế bào vi khuẩn rỗng Đối tƣợng vi khuẩn đƣợc lựa chọn đề tài chủng Salmonella spp thuộc nhóm vi khuẩn