Đang tải... (xem toàn văn)
ELISA Enzymelinked immunosorbent assay hay còn gọi là EIAenzyme immunoassay là một kĩ thuật y sinh dùng để phát hiện kháng nguyên hay kháng thể có trong một mẫu.Đối với thực phẩm biến đổi gen, ELISA là kĩ thuật để xác định xem gen chuyển vào cây trồng có sinh ra protein hay không, và protein có đúng hay không.
ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay) Nguyễn Thị Kim Anh - 20140161 Dương Quang Hoàng - 20141742 Nguyễn Thị Ngọc Anh - 20140168 Nội dung Giới thiệu phương pháp Phương pháp ELISA ? M ục đích phương pháp • ELISA- Enzyme-linked immunosorbent assay hay gọi EIA-enzyme immunoassay là m ột kĩ thu ật y sinh dùng đ ể phát kháng nguyên hay kháng thể có mẫu • Đối với thực phẩm biến đổi gen, ELISA kĩ thuật để xác định xem gen chuy ển vào trồng có sinh protein hay khơng, protein có hay khơng Các bước tạo GMO Cơ chế phương pháp Elisa • Để thực ELISA cần có bắt cặp đặc hiệu kháng thể m ột kháng nguyên c ụ thể Các thiết bị cần có Đĩa ELISA pha rắn Đĩa ELISA 96 giếng sử dụng nhiều ELISA th ường polystyrene ho ặc d ẫn xuất polystyrene Phổ biến đĩa 96 giếng t ổ chức thành hàng 12 c ột M ỗi gi ếng gi ữ kho ảng 350 µl thể tích với khu vực bên kho ảng 2,5 cm ELISA Pipet - Có loại pipet thường đ ược s d ụng pipet đa kênh và pipet đ ơn kênh Pipet đơn kênh chia làm d ạng: c ố đ ịnh th ể tích điều ch ỉnh thể tích (1- 20 ml, 10- 100 ml, 20- 200 ml ), pipet đa kênh th ường dùng lo ại đầu tip 12 đầu tip đ ể phù hợp v ới s ố l ượng hàng cột đĩa ELISA - Về thao tác chia thành pipet phân phối bán t ự đ ộng và pipet phân phối hoàn toàn tự động Hệ thống máy rửa • Hệ thống máy rửa ELISA chia thành lo ại nh sau: rửa hàng c ột t ại thời ểm, rửa lúc đĩa rửa lần nhiều đĩa Tùy thuộc vào mục đích cơng việc mà ta l ựa chọn lo ại máy phù hợp Máy đọc kết ELISA Tương tự máy rửa ELISA, máy đọc ELISA chia thành nhóm: đọc một hàng c ột l ần, có th ể đọc kết đĩa l ần ho ặc đ ọc k ết nhiều đĩa lúc. Phân loại phương pháp elisa Kháng thể kháng nguyên Kháng thể là các phân tử immunoglobulin (có ch ất glycoprotein), t ế bào lympho B nh t ương bào ti ết đ ể h ệ mi ễn d ịch nh ận biết vơ hiệu hóa tác nhân lạ, chẳng hạn vi khuẩn virus M ỗi kháng thể chỉ có thể nhận diện epitope kháng nguyên Kháng nguyên là phân tử kích thích đáp ứng miễn d ịch c c thể, đ ặc biệt s ản xu ất kháng th ể Thông th ường kháng nguyên một protein hay một polysaccharide, loại phân tử Phân loại ELISA trực tiếp Phương pháp ELISA trực tiếp coi loại đơn giản các phương pháp ELISA Quy trình thực elisa Mơ hình sandwich kháng thể - kháng nguyên (pr) – kháng thể => Quan sát tượng đọc kết đưa kết luận Quy trình thực elisa Mơ hình sandwich kháng thể - kháng ngun (pr) – kháng thể Bước 1: Chuẩn bị đĩa elisa cố định kháng thể sơ cấp liên kết với kháng thể (pr) theo nguyên tắc kị nước tăng khả dính đĩa kháng thể Đĩa elisa phá vỡ vòng benzene lộ nhóm OHvà COOH- tương tác với kháng thể theo tương tác ưu nước Kĩ thuật phủ giếng • Cho thể tích định kháng thể vào đĩa polysityren v ới n ồng đ ộ phù h ợp + Với đĩa elisa hệ cũ : 100 – 200 ng IgG/cm2 + Với đĩa elisa hệ mới: 400 -500 ng IgG/cm2 • Ủ qua đêm độ C khoảng + pH= 7- phù hợp với pr Yếu tố ảnh hưởng q trình phủ giếng • • • • Thời gian Độ tinh khiết Nhiệt độ Nồng độ kháng thể Kĩ thuật khóa giếng Khóa giếng = (BSA) bò , sửa gầy hay huy ết c thỏ, gelatin c cá đ ể che nh ững ch ỗ mà không liên k ết v ới kháng thể, tránh kháng thể tương tác với thành ph ần khác sau s d ụng Bước 2: Bổ sung kháng ngun Mẫu pha lỗng nước rửa đặc trưng + 2% BSA Cho huyết pha loãng vào giếng ủ 1H, nhi ệt đ ộ phòng Rửa giếng Bước 3: Bổ sung kháng thể thứ cấp (chứa biotin) Có nhât nhiết cần biotin không ? Bước 4: Bổ sung phức hợp strepvidin -enzyme Bước 5: Bổ sung chất đọc kết Ứng dụng • • Kiểm tra có mặt kháng nguyên kháng thể Xét nghiệm chẩn đoán bệnh y học nhờ việc phát kháng nguyên b ệnh ho ặc kháng thể mà th ể sinh để chống lại bệnh Ví dụ: • • • • • Sàng lọc tác nhân bệnh truyền nhiễm Đo nồng độ hoormon máu Kí sinh trùng Phát kháng sinh thủy sản Kiểm soát dịch bệnh thú y Tài liệu tham khảo • https://en.wikipedia.org/wiki/ELISA • http://www.biomedia.vn/review/nhung-dieu-co-ban-ve-ky-thuat-elisa.html Thanks for listening !!!! ... sinh dùng đ ể phát kháng nguyên hay kháng thể có mẫu • Đối với thực phẩm biến đổi gen, ELISA kĩ thuật để xác định xem gen chuy ển vào trồng có sinh protein hay khơng, protein có hay khơng Các... rắn Đĩa ELISA 96 giếng sử dụng nhiều ELISA th ường polystyrene ho ặc d ẫn xuất polystyrene Phổ biến đĩa 96 giếng t ổ chức thành hàng 12 c ột M ỗi gi ếng gi ữ kho ảng 350 µl thể tích với khu vực... th ứ c ấp liên kết với Enzym Phân loại ELISA sandwich Phương pháp ELISA sandwich là loại ph ổ biến kỹ thu ật ELISA, nh ưng r ất hi ệu qu ả vi ệc phát hi ện kháng nguyên mẫu Hơn nữa, nhiều kit