XÁC ĐỊNH OCHRATOXIN TRONG THỰC PHẨM

Môn: Phân tích dư lượng và độc tố trong sản phẩm nông nghiệp Chủ đề: XÁC ĐỊNH OCHRATOXIN TRONG THỰC PHẨM... GIỚI THIỆUĐộc tố Ochratoxin là một sản phẩm chuyển hóa thứ cấp của một số loài

Môn: Phân tích dư lượng và độc tố

trong sản phẩm nông nghiệp

Chủ đề: XÁC ĐỊNH OCHRATOXIN TRONG THỰC PHẨM

I GIỚI THIỆU

Độc tố Ochratoxin là một sản phẩm chuyển hóa thứ cấp của một số loài nấm mốc: aspergiluss, penicillium,…

Có mặt trong: ngũ cốc, thảo dược, bia, cà phê, Và cả trong sản phẩm nguồn gốc động vật bị lây nhiễm

Ochratoxin A tìm thấy ở nấm mốc A.ochraceus trên lúa tại Nam Phi Ở Đức tìm thấy thường xuyên trong thịt Ở Anh tìm thấy trong bắp bột, ca cao, đậu nành,

Tại Việt Nam nghiên cứu ở 123 mẫu ngô ở 2 xã Cán Tỷ

và Lùng Cán huyện Quản Bạ tỉnh Hà Giang có 50 mẫu có A.ochratoxin trong đó có 2 mẫu trên 1.6% vượt mức dư

lượng của bộ y tế

Có 3 loại ochratoxin, hai loại phổ biến là: ochratoxin A và ochratoxin B

Hình 1: Cấu trúc các ochratoxin

II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

Ochratoxin là độc tố tác động vào các cơ quan quan tọng của cơ thể: thần kinh , gan , thận và hệ miễn dịch

Ochratoxin A gây hậu quả nghiêm trọng với người và vật nuôi với nồng độ cực thấp

Ochratoxin B có độc tính ít hơn

Nền mẫu phân tích: ngũ cốc, các sản phẩm từ ngũ cốc, các loại rượu lên men

Ảnh hưởng của ochratoxin đến sức khỏe con người:

 Là tác nhân gây ung thư

 Gây ức chế sự vận chuyển của ribonucleic (tARN) và các axitamin (phenylalanine –tARN ở gan), tổn thương tế bào gan

 Thận sưng to làm cho việc đào thải chất độc trở nên khó khăn, bào mòn niêm mạc ống tiêu hóa

 Làm giảm khả năng đề kháng, rối loạn sinh sản

2 Phương pháp nghiên cứu

a Dấu hiệu nhận biết:

Tính chất hóa lý:

 Ochratoxin là độc tố không màu, bền với nhiệt, tan trong dung môi hữu cơ phân cực như chloroform, metanol,…, ít tan trong nước và tan trong đệm carbonat loãng

 Độc tố được sản sinh nhiều nhất ở 20-25oC, phụ thuộc vào chủng nấm mốc, hoạt tính nước trong hạt, cơ chất , nhiệt

độ Ochratoxin dễ bị phân hủy bởi ánh sáng, môi trường kiềm và chất tẩy rửa

 Ochratoxin A phát huỳnh quang và hấp thụ UV cực đại tại

365 nm Điểm nóng chảy ở 169oC

 Phổ hồng ngoại trong chloroform cho các píc có độ dài

3380, 1723, 1678, 1655 cm-1 OTA có tính axit yếu pKa1= 4,2-4,4 và pKa2= 7,0-7,3 ochratoxin phát huỳnh quang

xanh khi dùng thiết bị sắc ký mỏng (TLC) chiếu tia UV ở 366nm

 Ochratoxin B có trọng lượng phân tử 369,37 ochrtoxin có thể phát huỳnh quang màu xanh khi chiếu tia UV bước

sóng 318nm Nhiệt độ nống chảy khoảng 221oC

Giới hạn tồn dư tối đa cho phép:

Thực phẩm dành cho trẻ dưới 36

b Phương pháp phân tích sắc ký lỏng khối phổ:

Thiết bị:

 Cộc sắc ký :water- cột C18 (250mm×2,1mm×5μm) và tiền cột C18 (4mm×2,1×3μm)

 Máy lắc Vortex

 Cân phân tích (có độ chính xác 0,1mg và 0,01mg)

 Cân kỹ thuật (có độ chính xác 0,01g)

 Máy cất quay chân không (Eyla)

 Bộ chiết pha rắn (supelco) và máy hút chân không

 Bộ thổi khô (OA- Sys)

Dụng cụ và hóa chất:

 Bình định mức: 5, 10, 50, 100ml.

 Bình cô quay 50, 100ml.

 Vial loại 1,8 ml.

 Ống đong, phễu, giấy lọc.

 Autopipet 200, 1000, 5000μl và đầu côn tương ứng.

 Chất chuẩn supelco.

 Axit acetic (Merk), acetonitril (Merk).

Chuẩn bị dung dịch chuẩn:

 Dung dịch chuẩn trung gian 500μg/l: lấy 10μl lần lượt từng chuẩn gốc 50000μg/l vào 1 vial màu nâu đậy kín, thổi khô, hòa tan cặn trong 1ml MeOH

 Dung dịch chuẩn hỗn hợp làm việc: pha trong khoảng từ 2,5 μg/l -50 μg/l

Lấy mẫu:

 Đối tượng mẫu: các loại ngũ cốc, các loại rượu

 Phương pháp lấy mẫu: ngẫu nhiên

 Địa điểm: Hà Nội, Bắc Giang, Thanh Hóa, Nghệ An

 Khối lượng lấy mẫu: 100 - 500g/mẫu

 Bảo quản: nhiệt độ thường

KẾT LUẬN VỀ PHƯƠNG PHÁP

• Tối ưu hóa các điều kiện MS/MS để xác định Ochratoxin A, B

• Tối ưu hóa điều kiện chạy sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC)

• Đưa ra được quy trình xử lý mẫu tối ưu áp dụng chung cho cả 2 loại nền mẫu

rắn:nhiệu suất thu hồi của phương pháp đạt trên 70%, độ chụm dưới 15% đạt yêu cầu của AOAC

• Tính đặc hiệu / chọn lọc: cao

• Giới hạn phát hiện (LOD) của ochratoxin A, B là 0,1ppb , giới hạn định lượng (LOQ) là 0,3ppb

• Giới hạn tuyến tính (LOL): 500 ng/ml và khoảng tuyến tính 1 ppb – 500 ppb

• Độ chính xác của phương pháp nghiên cứu: phương pháp nghiên cứu có độ chính xác cao, có thể đem áp dụng để phân tích đồng thời Ochratoxin A và B

• Ứng dụng phương pháp để phân tích một số mẫu thực tế: ngũ cốc và các sản phẩm ngũ cốc, các loại rượu lên men Kết quả phân tích cho thấy 2 mẫu có nhiễm

ochratoxins nhưng ở mức hàm lượng dưới mức tồn dư tối đa cho phép (MRL)

Tài liệu tham khảo

 QUY CHUẨN QUỐC GIA VỀ GIỚI HẠN AN TOÀN CHO

PHÉP ĐỐI VỚI Ô NHIỄM ĐỘC TỐ VI NẤM TRONG THỰC PHẨM

 http://

yhth.vn/danh-gia-tinh-trang-o-nhiem-doc-to-vi-nam-ochratoxin-a -trong-ngo-tai-xa-can-ty-va-xa-lung-tam-huyen-quan-ba-tinh-ha-giang_t2761.aspx

 Luận văn thạc sỹ Xác định Ochratoxin trong thực phẩm bằng

phương pháp sắc ký lỏng khối phổ( LC-MSMS) – Nguyễn Thị Hà Bình

THE END