XÁC ĐỊNH OCHRATOXIN TRONG THỰC PHẨM

Mơn: Phân tích dư lượng độc tố sản phẩm nông nghiệp Chủ đề: XÁC ĐỊNH OCHRATOXIN TRONG THỰC PHẨM I GIỚI THIỆU Độc tố Ochratoxin sản phẩm chuyển hóa thứ cấp số lồi nấm mốc: aspergiluss, penicillium,… Có mặt trong: ngũ cốc, thảo dược, bia, cà phê, Và sản phẩm nguồn gốc động vật bị lây nhiễm Ochratoxin A tìm thấy nấm mốc A.ochraceus lúa Nam Phi Ở Đức tìm thấy thường xuyên thịt Ở Anh tìm thấy bắp bột, ca cao, đậu nành, Tại Việt Nam nghiên cứu 123 mẫu ngô xã Cán Tỷ Lùng Cán huyện Quản Bạ tỉnh Hà Giang có 50 mẫu có A.ochratoxin có mẫu 1.6% vượt mức dư lượng y tế Có loại ochratoxin, hai loại phổ biến là: ochratoxin A ochratoxin B Hình 1: Cấu trúc ochratoxin II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tượng Ochratoxin độc tố tác động vào quan quan tọng thể: thần kinh , gan , thận hệ miễn dịch Ochratoxin A gây hậu nghiêm trọng với người vật nuôi với nồng độ cực thấp Ochratoxin B có độc tính Nền mẫu phân tích: ngũ cốc, sản phẩm từ ngũ cốc, loại rượu lên men Ảnh hưởng ochratoxin đến sức khỏe người:  Là tác nhân gây ung thư  Gây ức chế vận chuyển ribonucleic (tARN) axitamin (phenylalanine –tARN gan), tổn thương tế bào gan  Thận sưng to làm cho việc đào thải chất độc trở nên khó khăn, bào mòn niêm mạc ống tiêu hóa  Làm giảm khả đề kháng, rối loạn sinh sản Phương pháp nghiên cứu a Dấu hiệu nhận biết: Tính chất hóa lý:  Ochratoxin độc tố khơng màu, bền với nhiệt, tan dung môi hữu phân cực chloroform, metanol,…, tan nước tan đệm carbonat loãng  Độc tố sản sinh nhiều 20-25oC, phụ thuộc vào chủng nấm mốc, hoạt tính nước hạt, chất , nhiệt độ Ochratoxin dễ bị phân hủy ánh sáng, môi trường kiềm chất tẩy rửa  Ochratoxin A phát huỳnh quang hấp thụ UV cực đại 365 nm Điểm nóng chảy 169oC  Phổ hồng ngoại chloroform cho píc có độ dài 3380, 1723, 1678, 1655 cm-1 OTA có tính axit yếu pKa1= 4,2-4,4 pKa2= 7,0-7,3 ochratoxin phát huỳnh quang xanh dùng thiết bị sắc ký mỏng (TLC) chiếu tia UV 366nm  Ochratoxin B có trọng lượng phân tử 369,37 ochrtoxin phát huỳnh quang màu xanh chiếu tia UV bước sóng 318nm Nhiệt độ nống chảy khoảng 221oC Giới hạn tồn dư tối đa cho phép: Loại μg / g Ngũ cốc chưa qua chế biến Hạt cà phê rang, cà phê bột Cà phê uống liền 10 Rượu vang, nước nho ép Thực phẩm dành cho trẻ 36 tháng tuổi 0,5 Gia vị 30 Sản uất chiết xuất từ cam thảo 80 Ngũ cốc bột ngũ cốc b Phương pháp phân tích sắc ký lỏng khối phổ: Thiết bị:  Hệ thống sắc ký lỏng khói phổ LC-MS/MS Shimadzu  Cộc sắc ký :water- cột C18 (250mm×2,1mm×5μm) tiền cột C18 (4mm×2,1×3μm)       Máy lắc Vortex Cân phân tích (có độ xác 0,1mg 0,01mg) Cân kỹ thuật (có độ xác 0,01g) Máy cất quay chân không (Eyla) Bộ chiết pha rắn (supelco) máy hút chân không Bộ thổi khô (OA- Sys) Dụng cụ hóa chất:  Bình định mức: 5, 10, 50, 100ml  Ống ly tâm 50ml  Bình quay 50, 100ml  Vial loại 1,8 ml  Ống đong, phễu, giấy lọc  Autopipet 200, 1000, 5000μl đầu côn tương ứng  Chất chuẩn supelco  Methanol (Merk)  N-hexan (Merk)  Amoniacetat (Merk)  Axit acetic (Merk), acetonitril (Merk)  Nước cất Chuẩn bị dung dịch chuẩn:  Dung dịch chuẩn trung gian 500μg/l: lấy 10μl chuẩn gốc 50000μg/l vào vial màu nâu đậy kín, thổi khơ, hòa tan cặn 1ml MeOH  Dung dịch chuẩn hỗn hợp làm việc: pha khoảng từ 2,5 μg/l -50 μg/l Lấy mẫu:  Đối tượng mẫu: loại ngũ cốc, loại rượu  Phương pháp lấy mẫu: ngẫu nhiên  Địa điểm: Hà Nội, Bắc Giang, Thanh Hóa, Nghệ An  Khối lượng lấy mẫu: 100 - 500g/mẫu  Bảo quản: nhiệt độ thường KẾT LUẬN VỀ PHƯƠNG PHÁP • Tối ưu hóa điều kiện MS/MS để xác định Ochratoxin A, B • Tối ưu hóa điều kiện chạy sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) • Đưa quy trình xử lý mẫu tối ưu áp dụng chung cho loại mẫu rắn:nhiệu suất thu hồi phương pháp đạt 70%, độ chụm 15% đạt u cầu AOAC • Tính đặc hiệu / chọn lọc: cao • Giới hạn phát (LOD) ochratoxin A, B 0,1ppb , giới hạn định lượng (LOQ) 0,3ppb • Giới hạn tuyến tính (LOL): 500 ng/ml khoảng tuyến tính ppb – 500 ppb • Độ xác phương pháp nghiên cứu: phương pháp nghiên cứu có độ xác cao, đem áp dụng để phân tích đồng thời Ochratoxin A B • Ứng dụng phương pháp để phân tích số mẫu thực tế: ngũ cốc sản phẩm ngũ cốc, loại rượu lên men Kết phân tích cho thấy mẫu có nhiễm ochratoxins mức hàm lượng mức tồn dư tối đa cho phép (MRL) Tài liệu tham khảo  QUY CHUẨN QUỐC GIA VỀ GIỚI HẠN AN TOÀN CHO PHÉP ĐỐI VỚI Ô NHIỄM ĐỘC TỐ VI NẤM TRONG THỰC PHẨM  http:// yhth.vn/danh-gia-tinh-trang-o-nhiem-doc-to-vi-nam-ochratoxin-a -trong-ngo-tai-xa-can-ty-va-xa-lung-tam-huyen-quan-ba-tinh-hagiang_t2761.aspx Luận văn thạc sỹ Xác định Ochratoxin thực phẩm phương pháp sắc ký lỏng khối phổ( LC-MSMS) – Nguyễn Thị Hà Bình  THE END ... yhth.vn/danh-gia-tinh-trang-o-nhiem-doc-to-vi-nam -ochratoxin- a -trong- ngo-tai-xa-can-ty-va-xa-lung-tam-huyen-quan-ba-tinh-hagiang_t2761.aspx Luận văn thạc sỹ Xác định Ochratoxin thực phẩm phương pháp sắc ký lỏng... tỉnh Hà Giang có 50 mẫu có A .ochratoxin có mẫu 1.6% vượt mức dư lượng y tế Có loại ochratoxin, hai loại phổ biến là: ochratoxin A ochratoxin B Hình 1: Cấu trúc ochratoxin II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG... THIỆU Độc tố Ochratoxin sản phẩm chuyển hóa thứ cấp số lồi nấm mốc: aspergiluss, penicillium,… Có mặt trong: ngũ cốc, thảo dược, bia, cà phê, Và sản phẩm nguồn gốc động vật bị lây nhiễm Ochratoxin