báo cáo phân tích thực phẩm

MỤC LỤC Bài 1; Thiết bị, dụng cụ phòng thí nghiệm vả phương pháp tiệt trùng vi sinh vật Bài 2: Phương pháp pha chế môi trường nuôi cấy vi sinh vật Bài 3: Phương pháp nuôi cấy vi sinh vật 10 Bài 4: phương pháp quan sát ví sinh vật kính hiển vi quang học 16 Bài 5: Phương pháp nhuộm màu vi sinh vật 19 Bài 6: Phương pháp phân lập vi sinh vật 20 Bài 10: Khảo sát đặc tính sinh hóa vi sinh vật 23 Bài 13: Định lượng vi sinh vật phương pháp đếm trực tiếp 35 Bài 14: Định lượng tồng vi khuẳn hiếu khí Bài 14: Định lượng tông VI khuẩn hiếu khí phương pháp đếm khuẩn lạc 37 Bài 15: Định lượng Cohíorm phương phápMPN 39 Bài 19: Phương pháp định lượng E.coìi thực phẩm 41 Bài 20: Phương pháp phân tích Salmonella spp thực phẩm 43 Bài 21: Phương pháp phân tích định lượng Baciỉỉus cereus thực phẩm 46 Bài 22: Phương pháp phân tích định lượng Slaphiỉococcus aureus thực phẩm 48 Bài 24: Phưcmg pháp phân tích Cỉostridium perfringens thực phẩm 50 BÀI 1; THIÉT BỊ, DỤNG cụ PHÒNG THÍ NGHIỆM VI SINH VẶT VÀ CÁC PHƯƠNG PHAP TIỆT TRÙNG VI SINH VẶT Báo cáo thực tệp ì Trình bày yêu cầu việc bao gói dụng cụ nuôi vi sink vật? Yêu cầu việc bao gói dụng cụ nuôi cấy vi siỉib vật; - Phần giấy bao bên phải chặt kín - Bao giấy dầu với dụng cụ hấp ướt - Bao giấy báo với dụng cụ sấy khô khử trùng ướt - Với dụng cụ pipet, que trang phải dùng giấy bao kín toàn Có thể dùng hộp nhôm đê đựng dụng cụ đê khử trùng Công dụng cách sử dạng dụng cụ, thiết bị phòng thí nghiệm vi sinh vội? Cồng dụng cách sử dụng dụng cụ, thiết bị phòng thí ngbỉệtn vi sinh vật: a Nồi hấp ướt (autoclave): a Nồi bấp irơt (autoclave); Thiết bị cấp nhiệt nước áp suất cao, sử dụng để hấp khử trùng mò trường, số nguyên liệu dụng cụ thí nghiệm b> Kíììb biển vi: Còng dụng: dùng đề nghiền cửu, quan sát tế bào vi sinh vật đặc điểm hình thái, sinh lý nhờ vào khả đại kính, c> Các dụng cụ tbí Iigbiệui Dụng cụ thúy tinh có nhiều loại với nhiều kích cỡ khác bình tam giác,ống nghiệm, đĩa petri, lam kính, đũa thủy tinh, que trang, ống đong, cốc đong, bìnhđịnh mức - Phiến kính (lame): dùng làm tiêu quan sát hình thái, sinh lý tế bào vi sinhvật - Lá kính (lamelle): dùng để đậỵ lên vết bôi tiêu cố đính vi sinh vật qua trình nghiên cửu - Đĩa petri: dùng để nghiên cứu đặc điểm hình thái, đặc điểm nuôi cấy vàphân lập te bào vi sinh vật - Que trãi: phân lập VI sinh vật theo phương pháp trãi đĩa - Que cấy: + Que cấy đầu tròn: dùng đê thao tác vi sinh đối tượng đơn bào vi khuẩn, nấm men + Que cấy nhón: dùng để cấy sâu môi trường rắn + Que cấy móc: dùng để lấy khuẩn ty hay đoạn tơ nấm - Micro pipette: sứ dụng cần hút lượng xác môi trường Trình bày phương pháp tiệt trùng dụng cụ môi trường nuôi cẩy vi sinh vội ? Phinmg pháp tiệt trùng dụng cụ môi tru-ÒTig nuôi cấy vi sinh vật: a PhưoTig pháp lý học: Nhiệt khô: - Đối với dụng cụ cấy kim loại, thúy tinh, phương pháp thường dùng đốt trục tiếp lửa đèn cồn - Đối với dụng cụ thúy tinh gói sấy 160°c -2 I80°c 30 phút 30 phút Nhiệt ám: - Phương pháp luộc: cho vặt khử trùng vảo nước sôi, nhiệt thẳm nhanh vào mẫu vật làm cho proteín đông kết, dẫn đến giết chết VI Sinh vật, Chi diệt tế bào sinh dương, bào tứ - Phương pháp Pasteur: chi diệt vi khuẩn gây bệnh, không diệt bào tứ vi khuẳn hoại sinh Phương pháp thưởng dùng nhiệt độ 70-75 c thời gian 10-15 phút - Phương pháp Tyndall: đun cách thủy nhiều lần nhiệt độ 70-80°C, lằn 3060 phút liền tiếp ba ngày liền, - Phương pháp nước bão hòa áp suất cao: dùng autoclave Thường dùng nhiệt độ 121°c 15-30 phút, Diệt trùng xạ: - Tia tử ngoại haỵ UV: chi sát trung bề mặt, không xuỵên sâu vào mẫu vật - Tia âm cực dùng tiệt trung dụng cụ giải phẫu, thuốc, thực phẳm Vật khử trùng phải bao gói kính Diệt trung bẵng cách ỉọc: - Dụng cụ lọc thường màng xốp sử, araimte, cellulose, cỏ kích thước lồ lọc từ 0,2-0,45thường dùng đê lọc vặtphẳm lòng không khứ trùng nhiệt - Đối với khứ trung không khí thiết bị khử trùng máy lọc khí có trang bị màng lọc hay hấp phụ vi khuẫn b> Phương pháp hóa học - Chi sát khuẳn da: xà phòng, cồn, iode, phẩm màu - Chất diệt khuẳn tẳỵ uế: phenol, formol? hợp chất clor BÀI 2: CÁCH PHA CHÉ CẮC LOẠI MÔI TRƯỜNG I TRẢ LỜI CÂU HỎI Trình bày khái niệm môi trường vả phân loại môi trường nuôi cấy vi sinh vậi • Khái niệm môi trường dinh dưỡng Môi trường đinh dưỡng hỗn hợp chất đinh dưỡng chất có nhiệm vụ trì oxy hóa khứ, áp suất thẩm thấu cúa tế bào ồn định cúapH mồi trường, đỏ chất đinh dưỡng hợp chất tham gia vào trình trao đồi chất nội bào • Phân loại môi trường dinh dưõng o Theo nguồn gốc Môi trường tự nhiên: có thành phần sản phẩm tự nhiên như: trứng, sữa, khoai tây, dịch chiết nấm men, đường, cám Môi trường tồng hợp: chứa chất hóa học mà thành phần cúa chúng Môi trường tồng hợp: chứa chất hóa học mà thành phần cúa chúng xác định định lượng cách cụ thể xác Ví dụ như: Czapeck, Hansen, EMB Môi trường bán tồng hợp: chứa chất hóa học lẫn sản phẩm tự nhiên, ví dụ như: PGA, giá đậu đường o Theo trạng thái vật lý Môi trường lòng: thành phần mồi trường không chứa agar thường sứ dụng để nghiên cứu trình tồng hợp cúa vi sinh vật Môi trường đặc: OOOml mồi trường có 15-20 Agar Môi trường bán lòng: chứa khoảng 0,3 -0,7% agar o Theo công dung Môi trường phân lập Mỏi trường tăng sinh Môi trường nuôi giữ giống: nghèo dinh dưỡng Môi trường thứ nghiệm sinh hóa Trình bày quỉ trình pha chế mỏi trường nuôi Cứy Ví sinh vật Bao gồm bước sau: • Chuẳn bị dụng cụ • Cân hóa chất • Phối chế tạo môi trường nuôi cấỵ • Điều chình độpH môi trường • Phân phối môi trường vào dụng cụ • Khử trùng môi trường • Làm thạch nghiên, thạch đứng, đô thạch vảo đĩa petri • Làm thạch nghiên, thạch đứng, đô thạch vào đĩa petri • Kiên tra độ vô trùng bảo quản Yêu cầu cùa mòi trường đĩa petrì, ống nghiệm thạch nghiêng thạch đứng • Làm thạch nghiêng: Cần tiến hành sau khứ trùng môi trường môi trường chưa đông đặc - Đặt ống nghiệm có môi trường lèn giá đặt nghiêng không đê môi trường chạm vào nút - Đe yên môi trường đông đặc Yêu cầu mặt thạch phải thẳng, nhẵn liền tục • Làm thạch đứng: - Đặt ống nghiệm có môi trường thạch đứng vào gí á, để yên cho môi trường đông đặc • Đô môi trường vào đĩa petri: - Toàn trình đô thạch vảo đĩa petri thực tủ vô trung gồm thao tác sau: G Mờ bao giấy gỏi đĩa petri G Một tay cầm dụng cụ chứa môi trường G Tay lại mờ nút hơ miệng bình lửa đền cồn o Mờ nắp đĩapetrí Nghiêng bình vảrỏt môi trường vảo đĩapetri o Đậy nắp đĩa lại, xoay tròn đĩa để môi trưởng phân phối bên đĩa o Đê yên cho môi trường đông đặc, G Lật ngược đĩa lại bảo quản, Giâi thích không phân phối tttôĩ trường vào đĩa petri trước khỉ khử trừng Vì làm nhiễm vi sinh vật không mong muốn, nhiẫm số tạp chất sau trình nuôi cấỵ khó xác định kết Có thể tránh nước tiếp xúc vảo môi trường nuôi cấỵ sau cấỵ phải để yên môi trường đê cứng mối trường Đĩa peưi chửa môi truửng trước khỉ cấy Ví* sình vặt nên úp hay ngửa? Tai sao? Nên để ngứa bời làm kín khu vực nuôi cấy, tránh lây nhiễm vi sinh vật khác tránh tiếp xúc với nước Ỷ nghĩa việc pha chế môi ưường? Chúng ta phải pha che môi trưởng cho vi sinh vật môi trường dinh dưỡng hỗn hợp gồm chất dinh dưỡng chất có nhiệm vụ trì oxỵ hóa- khứ, áp suất thẳm thấu cua tế bào ần định độ pH môi trường để vi sinh vật sinh trường phát triền cách tối ưu Làm môi trường đề thực việc phân lập, nhân giống, giữ giống vi sinh vật, đồng thời đê nuôi cấỵ nghiên cứu đặc điêm sinh học chúng Yẻu cầu mội mòi trường đỉnh đưỡiìg nuối Yêu cầu môi trường dinh dưỡng: cỏ đủ chất dinh dưỡng cằn thiết, cỏ độ pH phù hợp cỏ độ nhớt định, không chửa yếu tố độc hại, hoàn toàn vô trùng, đảm bảo phát triên ôn định VI Sinh vặt Nêu ý nghĩa thành phần írong MÔỈ trường nuôi cấy? Peptone chiết xuất cao thịt bò dùng làm nguồn cacbon, nắng lượng vả ni tơ Cao thịt bò chứa axit amin, peptit, nuclềôtit, axit hữu cơ5 vitarain vả số chất khoáng Cao nấm men nguồn phong phủ vítamín nhóm B nguồn ni tơ cacbon Có loaipepíone? Có loại peptone G Từ động vật: chiết xuất từ thịt, cao thịt bò, dịch thuỷ phân phần thịt bò, cazêin, dùng lảm nguồn cacbon, lượng vả Tiítơ Cao thịt bò chửa axứ amin, peptit, nuclêôtit, axứ hữu cơ, vitarain vả số chất khoáng, G Từ thực vặt: chiết xuất từ đậu nành, o Nấm men: cao nấm men, Cao nâm men nguôn phong phũ vitamin nhóm B nguồn nítơ cacbon) lỡ Cơ chế ỉànt nước lòng trắng trứng Cách làm nước lòng trắng trứng: lòng trắng trứng: nước ti lệ 1:1 —► đánh tan nôi bọt —► cho vào lít môi trưởng —* đun sôi khoảng phút —>áê nguội —»■ lắng cặn -^lọc Cơ che: proteìn lòng trắng trứng albumín, ovalburnín tác động cua khuấy trộn gia nhiệt bị biến tính không thuận nghịch, liên kết protein kéo dãn làm lộ nhiều nhóm chức —► hình thảnh lực hút tĩnh điện với ion, bụi bẳn cỏ nước —► sau lắng, lọc nước BÀI 3: PHƯƠNG PHÁP NUÔI CÁY VI SINH VẶT PHÂN LẶP SINH VẶT I Nguyên tắc Mục đích việcnuôi cấy - Phát có mặt vi sinh vật nguyên liệu vật phẩm cằn nghiên cửu - Tiến hành việc phân giống vi sinh vật cách nhanh chóng - Bảo tồn giống vi sinh vật khiết - Nghiền cứu đặc tính sinh học phát triên loại vi sinh vật 2> Nguyên tắc nuôi cắy vi sinh vật Mọi thao tác nuôi cấy phải thực điều kiện vô trùng để tránh tạp nhiềm vi sinh vật không mong muốn từ môi trường Môi trướng dụng cụ nuôi cấy phải khứ trùng triệt để Duy trì tốt điều kiện nuôi đê VI sinh vật phát triên thuận lợi n Dụng cụ, môi triròng hóa chất m Tiến bànb tbíiigbỉệm Phưong pháp cấy truyền tbạch (môi trường thạch) ỉ ỉ Cấy truyền thạch đĩa Có thể cấy đĩa pêtrí theo cách sau: * Dùng que cấy đẩu tròn thực theo trình tự sau: - Đê đĩa pêtri lên bàn - Dùng que cấy lấy canh trường vi sinh vật theo thứ tự yêu cầu phương pháp chung - Tay trái mờ nắp đĩa pêtri vừa đú que cấy vào - Nhẹ nhàng nhanh chỏng lướt que cấy lên mặt thạch theo kiêu sau: + Theo hình chữ chi toàn mặt thạch (hình 3.3a) + Theo đường song song (hình 3.3b) Hình 3.2: Cách dằn vi sinh vật iền bê mật môi (rường A — que gạt B — dằn que gạt; C: Sự sinh (rường vsv sau dàn đêu que gạt; D : Sự sinh trưởng vsv sau dàn que cấy 1.2 Phương pháp cấy thạch nghiêng - Phương pháp đùng để cấy truyền vi sinh vật hiếu khí Sứ dụng que cấy đầu tròn tiến hành thao tác theo trình tự nói - Thực việc cấy giống vào ống thạch nghiêng thao tác tiếp theo: + Hoà giống đầu que cấy vào giọt nước đáy ống nghiệm + Nhẹ nhàng lướt que cấy mặt thạch theo kiểu (hình 3.1) - Hình chữ chi - Hình vòng xoắn - Hình vạch ngang song song 1.3 Phương pháp thạch đứng: sinh vật kị khí • Sứ dụng que cấy hình kim • Sau lấy giống vi sinh vật, dùng que cấy đâm sâu vào phần khối thạch hình trụ • Đâm sát đáy ống nghiệm đâm thành đường: đường giữa, đường sát thành ống tuỳ yèu cầu • Đường cấy phải thẳng, nhẹ nhàng để không gây nứt, vỡ môi trường rv Trả lòi câu b ỏi Ý nghĩa: định danh loại VI khuẳn có khả năng: sử dụng nguồn cacbon khác có khả sinh H2S, khả sinh Thường dùng đê định danh vi khuẳn gram (-), vi sinh đường ruột Phản ứng LDC Mục đích: dùng đề định danh loài vi khuẩn có khả sinh enzyrae Lỵsine decarboxylase, thường dùng đê định danh salmonella., Cơ chế: Trong môi trưởng có NH2-CHr(CH2)a-CH2-NH2-COOH, môi trường có vi sinh vật có khả nàng tiết enzỵme Lysine decarboxỵlase, enzỵme Lỵsine decarboxylase cắt đứt gốc -COOH khòi hợp chất NH2-CH2-(CH2)]-CH2-NH2COOH, tạo thành CO2 gốc NH2-CH2-(CH2)3-CH2-NH2? gấc làm cho PH môi trường tăng lên, Glucose bị phân giải thành acid làm PH môi trường giảm cho môi trường có màu vàng, sau 3-4 tiếng, glucose cạn kiệt PH tăng lên theo lysíne Kết hợp hai trình tạo môi trường có pH lớn Chất chi thị: - Bromocresd purple có màu vàng với pH