Nghiên cứu phương pháp điện di mao quản sử dụng detector độ dẫn không tiếp xúc xác định một số phụ gia thực phẩm và beta agonist

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - Nguyễn Thị Quỳnh Hoa NGHIÊN CỨU PHƯƠNG PHÁP ĐIỆN DI MAO QUẢN SỬ DỤNG DETECTOR ĐỘ DẪN KHÔNG TIẾP XÚC XÁC ĐỊNH MỘT SỐ PHỤ GIA THỰC PHẨM VÀ BETA-AGONIST LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÓA HỌC Hà Nội - 2017 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - Nguyễn Thị Quỳnh Hoa NGHIÊN CỨU PHƯƠNG PHÁP ĐIỆN DI MAO QUẢN SỬ DỤNG DETECTOR ĐỘ DẪN KHÔNG TIẾP XÚC XÁC ĐỊNH MỘT SỐ PHỤ GIA THỰC PHẨM VÀ BETA-AGONIST Chuyên ngành: Hóa phân tích Mã số: 62440118 LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÓA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS Phạm Thị Ngọc Mai TS Nguyễn Thị Ánh Hường XÁC NHẬN NCS ĐÃ CHỈNH SỬA THEO QUYẾT NGHỊ CỦA HỘI ĐỒNG ĐÁNH GIÁ LUẬN ÁN Người hướng dẫn khoa học Chủ tịch hội đồng đánh giá Luận án Tiến sĩ PGS.TS Phạm Thị Ngọc Mai PGS.TS Trần Chương Huyến Hà Nội - 2017 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết nêu luận án trung thực chưa công bố cơng trình khác Tác giả Nguyễn Thị Quỳnh Hoa i LỜI CẢM ƠN Luận án hoàn thành với hỗ trợ, giúp đỡ, động viên Thầy Cơ, gia đình bạn bè, đồng nghiệp Với tình cảm chân thành, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến PSG.TS Phạm Thị Ngọc Mai TS Nguyễn Thị Ánh Hường nhiệt tình hướng dẫn, tạo điều kiện thuận lợi cho suốt q trình thực luận án Tơi xin chân thành cảm ơn Thầy cô Bộ môn Hóa Phân tích, Khoa Hóa học, trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội tâm huyết truyền dạy kiến thức động viên thời gian học tập, nghiên cứu Tôi xin cảm ơn công ty 3Sanalysis (http://www.3sanalysis.vn/) cung cấp thiết bị CE – C4D để thực nghiên cứu này, cảm ơn bạn nhóm nghiên cứu sử dụng phương pháp điện di mao quản CE – C4D Bộ mơn Hóa Phân tích, Khoa Hóa học, trường Đại học Khoa học Tự nhiên Hà Nội phối hợp hỗ trợ tơi hồn thành nghiên cứu Tôi xin chân thành cảm ơn cộng tác, giúp đỡ PGS.TS Lê Thị Hồng Hảo cán Viện Kiểm nghiệm An toàn Vệ sinh Thực phẩm Quốc gia Cuối tơi xin bày tỏ lịng biết ơn đến gia đình, bạn bè, lãnh đạo đồng nghiệp Khoa Cơng nghệ Hóa học Môi trường, trường Đại học Sư phạm Kỹ thuật Hưng Yên, học viên sinh viên môn Hóa Phân tích, Khoa Hóa học, trường Đại học Khoa học Tự nhiên Hà Nội ủng hộ, giúp đỡ, động viên tơi q trình học tập hoàn thành luận án Tác giả Nguyễn Thị Quỳnh Hoa ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT viii DANH MỤC BẢNG xi DANH MỤC HÌNH xiv MỞ ĐẦU CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 Một số chất phụ gia beta-agonist sản xuất thực phẩm 1.1.1 Khái quát chung số nhóm phụ gia thực phẩm 1.1.1.1 Acid formic, acid acetic, acid propionic, acid butyric điều chỉnh độ acid, bảo quản thực phẩm 1.1.1.2 Chất tạo acesulfam kali, aspartam, cyclamat natri, saccharin 1.1.2 Các chất beta-agonist 11 1.1.2.1 Giới thiệu chung nhóm beta-agonist 11 1.1.2.2 Vai trò tác dụng phụ beta-agonist 12 1.1.2.3 Vấn đề sử dụng beta-agonist giới Việt Nam 14 1.2 Các phƣơng pháp xác định chất phụ gia beta-agonist thực phẩm mẫu sinh học 16 1.2.1 Tình hình nghiên cứu giới 16 1.2.1.1 Các phương pháp sắc ký 16 1.2.1.2 Phương pháp phổ hấp thụ phân tử UV – Vis xác định chất tạo 21 1.2.1.3 Phương pháp điện hóa xác định beta-agonist 21 1.2.1.4 Phương pháp sinh học xác định beta-agonist 22 1.2.1.5 Phương pháp điện di mao quản xác định phụ gia thực phẩm beta-agonist 23 1.2.2 Tình hình nghiên cứu nước 31 1.3 Phƣơng pháp điện di mao quản 32 1.3.1 Giới thiệu chung phương pháp điện di mao quản 32 1.3.2 Nguyên tắc cấu tạo hệ điện di mao quản 33 1.3.3 Cơ sở lý thuyết điện di mao quản 34 iii 1.3.4 Dòng điện di thẩm thấu di chuyển ion chất phân tích mao quản 35 1.3.5 Các detector thông dụng phương pháp điện di mao quản 37 1.3.5.1 Detector quang học 37 1.3.5.2 Detector khối phổ 38 1.3.5.3 Detector điện hóa 39 1.3.5.4 Detector độ dẫn không tiếp xúc (C4D) 40 1.3.6 Ứng dụng phương pháp điện di mao quản CE –C4D 43 CHƢƠNG THỰC NGHIỆM VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 44 2.1 Thiết bị hóa chất 44 2.1.1 Thiết bị 44 2.1.1.1 Thiết bị CE – C4D 44 2.1.1.2 Các thiết bị khác dụng cụ 45 2.1.2 Hóa chất 46 2.1.2.1 Chất chuẩn 46 2.1.2.2 Hóa chất dung môi 46 2.1.3 Chuẩn bị dung dịch hóa chất 47 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 48 2.2.1 Phương pháp CE – C4D 48 2.2.2 Phương pháp khảo sát xác định điều kiện thích hợp 48 2.2.2.1 Khảo sát dung dịch đệm điện di 49 2.2.2.2 Khảo sát tách 50 2.2.2.3 Khảo sát thời gian bơm mẫu 50 2.2.3 Phương pháp lấy mẫu xử lý mẫu thực phẩm 51 2.2.4 Phương pháp lấy mẫu, xử lý, làm giàu mẫu nước tiểu mẫu thịt lợn 51 2.2.4.1 Phương pháp lấy mẫu xử lý sơ mẫu nước tiểu, mẫu thịt lợn 51 2.2.4.2 Phương pháp chiết pha rắn salbutamol mẫu nước tiểu lợn mẫu thịt lợn 52 2.2.5 Phương pháp đánh giá độ tin cậy phương pháp phân tích 56 2.2.5.1 Giới hạn phát giới hạn định lượng 56 2.2.5.2 Độ lặp lại hiệu suất thu hồi phương pháp 57 iv CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 60 3.1 Xác định đồng thời acid formic, acid acetic, acid propionic, acid butyric phƣơng pháp CE–C4D 60 3.1.1 Khảo sát điều kiện thích hợp 61 3.1.1.1 Khảo sát dung dịch đệm điện di 61 3.1.1.2 Khảo sát ảnh hưởng tách 63 3.1.1.3 Khảo sát ảnh hưởng chiều cao thời gian bơm mẫu 65 3.1.2 Xây dựng đường chuẩn cho chất phân tích đánh giá phương pháp 68 3.1.2.1 Xây dựng đường chuẩn 68 3.1.2.2 Giới hạn phát giới hạn định lượng thiết bị 70 3.1.2.3 Đánh giá độ lặp lại độ thu hồi phương pháp 71 3.1.3 Phân tích đồng thời acid formic, acid acetic, acid propionic, acid butyric mẫu thực phẩm 72 3.1.3.1 Xác định đồng thời acid formic, acid acetic, acid propionic, acid butyric thực phẩm phương pháp CE – C4D 72 3.1.3.2 Kết phân tích đối chứng acid formic, acid acetic, acid propionic, acid butyric thực phẩm phương pháp tiêu chuẩn HPLC 73 3.2 Xác định đồng thời chất tạo acesulfam kali, aspartam, cyclamat natri, saccharin thực phẩm phƣơng pháp CE–C4D 74 3.2.1 Khảo sát điều kiện thích hợp 75 3.2.1.1 Khảo sát dung dịch đệm điện di 75 3.2.1.2 Khảo sát ảnh hưởng tách 78 3.2.1.3 Khảo sát thời gian bơm mẫu 79 3.2.2 Đường chuẩn phân tích đánh giá phương pháp nghiên cứu 81 3.2.2.1 Xây dựng đường chuẩn 81 3.2.2.2 Giới hạn phát giới hạn định lượng 83 3.2.2.3 Đánh giá độ lặp lại độ thu hồi phương pháp 84 3.2.3 Phân tích chất tạo acesulfam kali, aspartam, cyclamat natri, saccharin thực phẩm 85 3.2.3.1 Phân tích chất tạo acesulfam kali, aspartam, cyclamat natri, saccharin thực phẩm phương pháp CE – C4D 85 3.2.3.2 Phân tích đối chứng hàm lượng chất tạo phương pháp CE – C4D phương pháp HPLC 87 v 3.3 Khảo sát điều kiện thích hợp phân tích salbutamol, metoprolol ractopamin mẫu thức ăn chăn nuôi, nƣớc tiểu lợn thịt lợn phƣơng pháp CE–C4D 88 3.3.1 Khảo sát điều kiện thích hợp 89 3.3.1.1 Khảo sát dung dịch đệm điện di 89 3.3.1.2 Khảo sát ảnh hưởng tách 93 3.3.1.3 Khảo sát thời gian bơm mẫu 95 3.3.2 Đường chuẩn phân tích đánh giá phương pháp phân tích 97 3.3.2.1 Đường chuẩn phân tích 97 3.3.2.2 Giới hạn phát giới hạn định lượng thiết bị 98 3.3.2.3 Đánh giá độ lặp lại độ thu hồi phương pháp 99 3.3.3 Xác định đồng thời salbutamol, metoprolol ractopamin mẫu thức ăn chăn nuôi 101 3.3.3.1 Khảo sát ảnh hưởng cation kim loại việc xác định đồng thời salbutamol, metoprolol ractopamin mẫu thức ăn chăn nuôi 101 3.3.3.2 Xác định đồng thời salbutamol, metoprolol ractopamin mẫu thức ăn chăn nuôi 102 3.3.4 Xây dựng quy trình chiết pha rắn salbutamol mẫu nước tiểu lợn nhằm xác định phương pháp CE – C4D 104 3.3.4.1 Khảo sát lựa chọn cột chiết 104 3.3.4.2 Ảnh hưởng pH dung dịch mẫu đến khả chiết salbutamol 106 3.3.4.3 Khảo sát dung môi rửa tạp chất 107 3.3.4.4 Khảo sát dung môi rửa giải 110 3.3.4.5 Đánh giá phương pháp phân tích salbutamol mẫu nước tiểu lợn phương pháp CE – C4D kết hợp chiết pha rắn xử lý mẫu phân tích 111 3.3.4.6 Phân tích mẫu nước tiểu thực tế 114 3.3.5 Nghiên cứu phương pháp chiết pha rắn (SPE) làm giàu salbutamol mẫu thịt lợn 115 3.3.5.1 Khảo sát lựa chọn cột chiết 115 3.3.5.2 Khảo sát dung môi rửa tạp chất 116 vi 3.3.5.3 Đánh giá phương pháp phân tích salbutamol mẫu thịt phương pháp CE – C4D sử dụng chiết pha rắn xử lý mẫu phân tích 120 3.3.5.4 Kết phân tích mẫu thịt lợn 122 3.3.6 Kết phân tích đối chứng với phương pháp LC/MS/MS 123 KẾT LUẬN 124 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH KHOA HỌC CỦA TÁC GIẢ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN 126 TÀI LIỆU THAM KHẢO 127 PHỤ LỤC 139 vii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu Thuật ngữ tiếng Anh Thuật ngữ tiếng Việt Ace Acetic acid Acid acetic Ace – K Acesulfame potassium Acesulfam kali (Kali 6– methyl– (potassium 6– methyl– 2,2– 2,2– dioxo– oxathiazin– 4– olat) dioxo– 2H– 1,2λ6,3– oxathiazin– 4– olate) AOAC Association of Official Analytical Hiệp hội nhà hố học phân tích Chemists Arg Arginine (2– amino– 5– Arginin (Acid 2– amino– 5– guanidinopentanoic acid) guanidinopentanoic) Asc Ascobic acid Acid ascobic Asp Aspartame (N– (L– α– Aspartyl)– Aspartam (este N– (L– α– L– phenylalanin, 1– methyl este) Aspartyl)– L– phenylalanin, 1– methyl) CAPS N– cyclohexyl– 3– Acid N– cyclohexyl– 3– aminopropanesulfonic acid aminopropanesulfonic Capacitively coupled contactless Detector độ dẫn không tiếp xúc kết conductivity detector nối kiểu tụ điện CE Capillary Electrophoresis Phương pháp điện di mao quản CHES N– Cyclohexyl– 2– Acid N– Cyclohexyl– 2– aminoetanesulfonic acid aminoetanesulfonic Cetyl trimethylammonium Cetyl trimethylammonium bromide C4D CTAB bromide Cyc Cyclamat natri Cyclamat natri (N– (N– cyclohexylsulfamat natri) cyclohexylsulfamat natri) CZE Capillary zone electrophoresis Phương pháp điện di mao quản vùng EIA Enzyme immunoassay Phương pháp miễn dịch enzym viii Đƣờng chuẩn phân tích 3.1 Đường chuẩn phân tích acid formic từ 023 – 4,6 ppm, acid acetic từ 0,36 – 4,8 ppm, acid propionic từ 0,44 – 7,40 ppm acid btyric từ 0,53 – 8,80 ppm Điều kiện CE: Dung dịch đệm His/Mes (30 mM/40 mM), pH = 5,8; bơm mẫu kiểu xi phông 15 cm, 20 s; mao quản 60 cm, l/L = 50/60 cm; ID = 50 µm; U = – 18 kV 148 3.2 Đường chuẩn phân tích salbutamol từ 2,5 – 150 ppm Điều kiện CE: Dung dịch đệm Arg/Ace (10 mM), pH = 4,9; bơm mẫu kiểu xi phông 10 cm, 20 s; mao quản 60 cm, l/L = 53/60 cm; ID = 50 µm; U = 18 kV 3.3 Đường chuẩn phân tích từ 2,5 – 80 ppm Ace – K, Asp, Cyc, Sac Điều kiện CE: Dung dịch đệm Tris/His (100 mM/10 mM), pH = 9,2; bơm mẫu kiểu xi phông 10 cm, 15 s; mao quản 60 cm, l/L = 50/60 cm; ID = 75 µm; U = 15 kV 149 Đánh giá đƣờng chuẩn phân tích Regression Analysis: Diện tích píc (mV.s) Sal versus Nồng độ Sal The regression equation is Diện tích píc (mV.s) Sal = – 18,4 + 1,51 Nồng độ Sal Predictor Constant Coef SE Coef – 18,41 T P 15,76 – 1,17 0,281 Nồng độ Sal 1,5149 0,1272 11,91 0,000 S = 33,4481 R– Sq = 95,3% R– Sq(adj) = 94,6% Analysis of Variance Source Regression DF SS F P 158634 158634 141,79 0,000 Residual Error Total MS 7831 1119 166465 Regression Analysis: Diện tích píc Met (mV.s) versus Nồng độ Met (ppm) The regression equation is Diện tích píc Met (mV.s) = – 13,6 + 1,22 Nồng độ Met (ppm) Predictor Constant Coef SE Coef – 13,63 T P 12,48 – 1,09 0,311 Nồng độ Met (ppm) 1,2155 0,1008 12,06 0,000 S = 26,5029 R– Sq = 95,4% R– Sq(adj) = 94,8% Analysis of Variance Source Regression DF SS F P 102120 102120 145,39 0,000 Residual Error Total MS 4917 702 107037 Regression Analysis: Diện tích píc Rac(mV.s) versus Nồng độ Rac (ppm) The regression equation is Diện tích píc Rac(mV.s) = – 22,1 + 1,55 Nồng độ Rac (ppm) Predictor Coef SE Coef T P 150 Constant – 22,15 18,79 – 1,18 0,277 Nồng độ Rac (ppm) 1,5518 0,1518 10,23 0,000 S = 39,8994 R– Sq = 93,7% R– Sq(adj) = 92,8% Analysis of Variance Source Regression DF SS MS P 166460 166460 104,56 0,000 Residual Error 11144 Total F 1592 177604 Results for: Worksheet Regression Analysis: Diện tích píc Ac versus Nồng độ Acesulfa The regression equation is Diện tích píc Acesulfam kali (m = 6399 + 5,76 Nồng độ Acesulfam K (ppm) Predictor Coef SE Coef Constant 6399 T P 6359 1,01 0,348 Nồng độ Acesulfam K (ppm) 5,765 3,813 1,51 0,174 S = 17783,4 R– Sq = 24,6% R– Sq(adj) = 13,9% Analysis of Variance Source Regression DF SS MS F P 723108550 723108550 2,29 0,174 Residual Error 2213754020 316250574 Total 2936862570 Regression Analysis: Diện tích píc As versus Nồng độ Aspartam The regression equation is Diện tích píc Aspartam (mV.s) = – 4,50 + 0,484 Nồng độ Aspartam (ppm) Predictor Constant Coef SE Coef – 4,500 T P 1,270 – 3,54 0,092 Nồng độ Aspartam (ppm) 0,48380 0,01128 42,88 0,000 S = 1,74787 R– Sq = 99,6% R– Sq(adj) = 99,6% Analysis of Variance 151 Source Regression DF MS F P 5617,5 5617,5 1838,75 0,000 Residual Error Total SS 21,4 3,1 5638,9 Regression Analysis: Diện tích píc Cy versus Nồng độ Cyclamat natri The regression equation is Diện tích píc Cyclamat natri (mV.s) = 4,44 + 3,35 Nồng độ Cyclamat natri (ppm) Predictor Coef SE Coef Constant 4,442 T P 3,730 1,19 0,279 Nồng độ Cyclamat natri (ppm) 3,34689 0,05520 60,63 0,000 S = 6,26293 R– Sq = 99,8% R– Sq(adj) = 99,8% Analysis of Variance Source Regression DF MS F P 144186 144186 3675,94 0,000 Residual Error Total SS 235 39 144422 Regression Analysis: Diện tích píc Sa versus Nồng độ Sacchari The regression equation is Diện tích píc Saccharin (mV.s) = 9,77 + 4,60 Nồng độ Saccharin (ppm) Predictor Coef SE Coef Constant 9,768 T P 4,865 2,01 0,091 Nồng độ Saccharin (ppm) 4,60358 0,07200 63,94 0,000 S = 8,16876 R– Sq = 99,9% R– Sq(adj) = 99,8% Analysis of Variance Source Regression DF MS F P 272793 272793 4088,10 0,000 Residual Error Total SS 400 67 273194 152 Results for: Worksheet Regression Analysis: Diện tích píc formic versus Nồng độ formic The regression equation is Diện tích píc formic = 10,2 + 61,8 Nồng độ formic Predictor Constant Coef SE Coef 10,165 T P 6,532 1,56 0,180 Nồng độ formic 61,792 1,162 53,18 0,000 S = 10,3596 R– Sq = 99,8% R– Sq(adj) = 99,8% Analysis of Variance Source Regression DF SS F P 303549 303549 2828,40 0,000 Residual Error Total MS 537 107 304086 Regression Analysis: Diện tích píc acetic versus Nồng độ acetic The regression equation is Diện tích píc acetic = 1,65 + 31,1 Nồng độ acetic Predictor Coef SE Coef Constant 1,650 T P 1,867 0,88 0,427 Nồng độ acetic 31,1472 0,4211 73,97 0,000 S = 2,93688 R– Sq = 99,9% R– Sq(adj) = 99,9% Analysis of Variance Source Regression DF SS F P 47188 47188 5470,91 0,000 Residual Error Total MS 35 47223 Regression Analysis: Diện tích píc propionic versus Nồng độ propionic The regression equation is Diện tích píc propionic = – 4,88 + 61,6 Nồng độ propionic Predictor Coef SE Coef T P 153 Constant – 4,881 6,148 – 0,79 0,463 Nồng độ propionic 61,607 1,102 55,92 0,000 S = 10,2149 R– Sq = 99,8% R– Sq(adj) = 99,8% Analysis of Variance Source Regression DF MS F P 326324 326324 3127,40 0,000 Residual Error Total SS 522 104 326846 Regression Analysis: Diện tích píc butyric versus Nồng độ butyric The regression equation is Diện tích píc butyric = 6,71 + 57,9 Nồng độ butyric Predictor Coef SE Coef Constant 6,705 T P 5,528 1,21 0,279 Nồng độ butyric 57,9034 0,9906 58,45 0,000 S = 9,18549 R– Sq = 99,9% R– Sq(adj) = 99,8% Analysis of Variance Source Regression DF MS F P 288264 288264 3416,54 0,000 Residual Error Total SS 422 84 288686 154 Một số sắc đồ phân tích đối chứng phƣơng pháp HPLC Viện kiểm nghiệm An toàn Vệ sinh Thực phẩm Quốc gia thực /12.233/5010574 mAU 225nm,4nm (1.00) 75 50 25 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 Hình 15: Sắc đồ chuẩn acesulfam kali 114,7ppm 60 mAU 225nm,4nm (1.00) 40 30 20 /14.205/243389 /12.158/809478 50 10 -10 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 Hình 16: Sắc đồ phân tích acesulfam kali mẫu nước mắm Ơng Tây pha lỗng 10 lần /7.177/5241064 Acesufalm-K/12.368/3672620 mAU 225nm4nm (1.00) 250 200 150 100 50 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 Hình 17: Sắc đồ phân tích acesulfam kali mẫu nước giải khát 155 Acesufalm-K/21.124/1381547 mAU 225nm4nm (1.00) 75 50 25 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 22.5 Hình 18: Sắc đồ phân tích acesulfam kali mẫu thạch số mAU 225nm,4nm (1.00) 50 Acesufalm-K/21.117/1458418 /10.219/4333717 75 25 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 22.5 25.0 27.5 Hình 19: Sắc đồ phân tích acesulfam kali mẫu thạch số 125 100 75 50 /21.105/1145951 /2.610/443471 Aspartame/3.261/798650 mAU 150 210nm4nm (1.00) 25 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 22.5 25.0 27.5 27.5 Hình 20: Sắc đồ phân tích aspartam mẫu thạch số 100 75 50 25 /20.998/665048 125 /2.617/451776 Aspartame/3.276/535596 mAU 210nm4nm (1.00) 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 22.5 25.0 Hình 21: Sắc đồ phân tích aspartam mẫu thạch số 156 p c p , i t y 2.0e4 s 1.8e4 n 1.6e4 t e 1.4e4 I n 1.2e4 1.0e4 8000.0 6000.0 4000.0 2000.0 0.0 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0 8.5 9.0 9.5 Time, s 3.66 p c , i t y s n t e I n Int Type: Base To Base Retention Time: 4.94 Area: 2.02e+005 counts Height: 5.52e+004 cps Start Time: 4.86 End Time: 5.22 1.0e4 5000.0 0.0 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0 8.5 9.0 9.5 Time, , i t y s t e n 9.45 4.94 s Sample Name: "Std Mix2-20ppb" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "268.000 / 103.000" Mass(es): "268.000/103.000 Da" Comment: "" Annotation: "" Sample Index: Sample Type: Unknown Concentration: N/A 7.0e4 Calculated Conc: 0.00 ng/mL Acq Date: 1/24/2014 Acq Time: 12:46:43 PM 6.0e4 p 4.94 s Sample Name: "Std Mix2-20ppb" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "meto2" Mass(es): "268.000/116.000 Da" Comment: "" Annotation: "" Sample Index: Sample Type: Unknown Concentration: N/A Calculated Conc: 0.00 ng/mL 5.0e4 Acq Date: 1/24/2014 Acq Time: 12:46:43 PM 4.5e4 Modified: No Proc Algorithm: Specify Parameters - MQ III 4.0e4 Noise Percentage: 50 Base Sub Window: 1.00 3.5e4 Peak-Split Factor: Report Largest Peak: Yes 3.0e4 Min Peak Height: 0.00 cps Min Peak Width: 0.00 sec 2.5e4 Smoothing Width: points RT Window: 30.0 sec 2.0e4 Expected RT: 4.94 Use Relative RT: No 1.5e4 6.10 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0 8.5 9.0 9.5 Time, c 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0 8.5 9.0 9.5 Time, 500 Modified: No Proc Algorithm: Specify Parameters - MQ III Noise Percentage: 50 Base Sub Window: 1.00 Peak-Split Factor: Report Largest Peak: Yes Min Peak Height: 0.00 cps Min Peak Width: 0.00 sec Smoothing Width: points RT Window: 30.0 sec Expected RT: 4.94 Use Relative RT: No Int Type: Base To Base Retention Time: 4.94 Area: 2.66e+005 counts Height: 7.17e+004 cps Start Time: 4.83 End Time: 5.22 , 9.35 500 1500 1000 Int Type: Base To Base Retention Time: 3.65 Area: 4.12e+004 counts Height: 3.27e+003 cps Start Time: 3.41 End Time: 4.03 i t y counts cps min 2000 5.0e4 s 1000 n Int Type: Manual Retention Time: 3.66 Area: 6.59e+004 Height: 4.83e+003 Start Time: 3.46 End Time: 4.06 2500 4.0e4 t e 3.88 I n t e n s i t y , Modified: No Proc Algorithm: Specify Parameters - MQ III Noise Percentage: 50 Base Sub Window: 1.00 Peak-Split Factor: Report Largest Peak: Yes Min Peak Height: 0.00 cps Min Peak Width: 0.00 sec Smoothing Width: points RT Window: 30.0 sec Expected RT: 3.65 Use Relative RT: No I n c c p p s Sample Name: "Std Mix2-20ppb" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "Racto1" Mass(es): "302.000/164.000 Da" Comment: "" Annotation: "" Sample Index: Sample Type: Unknown Concentration: N/A Calculated Conc: 0.00 ng/mL 4500 Acq Date: 1/24/2014 Acq Time: 12:46:43 PM 4000 Modified: Yes Proc Algorithm: Specify Parameters - MQ III 3500 Noise Percentage: 50 Base Sub Window: 1.00 3000 Peak-Split Factor: Report Largest Peak: Yes 2500 Min Peak Height: 0.00 cps Min Peak Width: 0.00 sec Smoothing Width: points 2000 RT Window: 30.0 sec Expected RT: 3.66 1500 Use Relative RT: No I n t e n s i t y , c Int Type: Base To Base Retention Time: 2.17 Area: 1.89e+005 counts Height: 2.64e+004 cps Start Time: 2.07 End Time: 2.71 I n Modified: No Proc Algorithm: Specify Parameters - MQ III Noise Percentage: 50 Base Sub Window: 1.00 Peak-Split Factor: Report Largest Peak: Yes Min Peak Height: 0.00 cps Min Peak Width: 0.00 sec Smoothing Width: points RT Window: 30.0 sec Expected RT: 2.17 Use Relative RT: No Sample Name: "Std Mix2-20ppb" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "Sal2" Mass(es): "240.000/166.000 Da" Comment: "" Annotation: "" Sample Index: Sample Type: Unknown 2.17 Concentration: N/A Calculated Conc: 0.00 ng/mL 8000 Acq Date: 1/24/2014 Acq Time: 12:46:43 PM 7000 Modified: No Proc Algorithm: Specify Parameters - MQ III 6000 Noise Percentage: 50 Base Sub Window: 1.00 Peak-Split Factor: 5000 Report Largest Peak: Yes Min Peak Height: 0.00 cps 4000 Min Peak Width: 0.00 sec Smoothing Width: points RT Window: 30.0 sec 3000 Expected RT: 2.17 Use Relative RT: No 2000 Int Type: Base To Base Retention Time: 2.17 1000 Area: 6.24e+004 counts Height: 8.39e+003 cps Start Time: 2.04 End Time: 2.56 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0 8.5 9.0 9.5 Time, Sample Name: "Std Mix2-20ppb" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "Racto2" Mass(es): "302.000/107.000 Da" Comment: "" Annotation: "" Sample Index: Sample Type: Unknown 3.65 Concentration: N/A Calculated Conc: 0.00 ng/mL 3000 Acq Date: 1/24/2014 Acq Time: 12:46:43 PM s 2.17 s Sample Name: "Std Mix2-20ppb" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "Sal1" Mass(es): "240.000/148.000 Da" Comment: "" Annotation: "" Sample Index: Sample Type: Unknown Concentration: N/A 2.6e4 Calculated Conc: 0.00 ng/mL 2.4e4 Acq Date: 1/24/2014 Acq Time: 12:46:43 PM 2.2e4 3.0e4 2.0e4 1.0e4 0.0 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0 8.5 9.0 9.5 Time, Hình 22: Sắc đồ chuẩn salbutamol, metoprolol ractopamin 157 Đánh giá độ phù hợp phƣơng pháp CE – C4D phƣơng pháp phân tích đối chứng HPLC phần mềm Minitab Acid formic Paired T–Test and CI: CE–C4D, HPLC Paired T for CE – C4D – HPLC N CE – C4D Mean StDev 7495 HPLC 8150 Difference – 655 SE Mean 78 55 622 440 700 495 95% CI for mean difference: (– 6945, 5635) T– Test of mean difference = (vs not = 0): T– Value = – 1.32 P– Value = 0.412 Acid acetic Paired T–Test and CI: CE–C4D, HPLC Paired T for CE – C4D – HPLC N CE – C4D Mean StDev 2144 HPLC 2265 Difference – 121 SE Mean 2102 2264 858 254 924 104 95% CI for mean difference: (– 387, 145) T– Test of mean difference = (vs not = 0): T– Value = – 1.17 P– Value = 0.296 Acid propionic Paired T–Test and CI: CE–C4D, HPLC Paired T for CE – C4D – HPLC N CE – C4D Mean 2593 StDev 3669 SE Mean HPLC 2683 3833 Difference – 90.0 169.1 1498 1565 69.0 95% CI for mean difference: (– 267.5, 87.5) T– Test of mean difference = (vs not = 0): T– Value = – 1.30 Aspartam Paired T–Test and CI: CE–C4D, HPLC Paired T for CE – C4D – HPLC N CE – C4D Mean 272.0 StDev 41.0 SE Mean 29.0 HPLC 246.5 33.2 23.5 Difference 25.50 7.78 5.50 158 P– Value = 0.249 95% CI for mean difference: (– 44.38, 95.38) T– Test of mean difference = (vs not = 0): T– Value = 4.64 P– Value = 0.135 Acesulfam K Paired T–Test and CI: CE–C4D, HPLC Paired T for CE – C4D – HPLC N CE – C4D Mean 329.8 StDev SE Mean 178.5 79.8 HPLC 312.0 180.7 80.8 Difference 17.8 22.9 10.3 95% CI for mean difference: (– 10.7, 46.3) T– Test of mean difference = (vs not = 0): T– Value = 1.74 P– Value = 0.158 Beta-agonist thức ăn chăn nuôi Paired T–Test and CI: CE–C4D, HPLC–MS Paired T for CE–C4D – HPLC–MS CE–C4D HPLC–MS Difference N 3 Mean 134.7 131.3 3.33 StDev 141.7 132.1 13.58 SE Mean 81.8 76.3 7.84 95% CI for mean difference: (–30.39, 37.06) T–Test of mean difference = (vs not = 0): T–Value = 0.43 P–Value = 0.712 Salbutamol nước tiểu lợn Paired T–Test and CI: CE–C4D, LC/MS/MS Paired T for CE – C4D – LC/MS/MS N CE – C4D Mean LC/MS/MS Difference 895 StDev 906 – 11.1 1161 SE Mean 1141 45.1 670 658 26.0 95% CI for mean difference: (– 123.1, 100.9) T– Test of mean difference = (vs not = 0): T– Value = – 0.43 159 P– Value = 0.712 Kết phân tích đối chứng 160 161 162 ... ? ?Nghiên cứu phƣơng pháp điện di mao quản sử dụng detector độ dẫn không tiếp xúc xác định số phụ gia thực phẩm beta- agonist? ??, mục tiêu luận án nghiên cứu phát triển ứng dụng phương pháp điện di. .. c) Phương pháp điện di mao quản xác định beta- agonist Việc xác định beta- agonist phương pháp điện di mao quản chủ yếu sử dụng detector điện hóa đo dịng, đo điện hay đo độ dẫn Bảng 1.8 tóm tắt số. .. GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - Nguyễn Thị Quỳnh Hoa NGHIÊN CỨU PHƯƠNG PHÁP ĐIỆN DI MAO QUẢN SỬ DỤNG DETECTOR ĐỘ DẪN KHÔNG TIẾP XÚC XÁC ĐỊNH MỘT SỐ PHỤ GIA THỰC PHẨM