môn độc chất học dành cho sinh viên khoa dược ôn thi hết môn

tài liệu chuẩn gồm 3 phần I .đại cương độc chất học II .ngộ độc kim loại nặng chì ,thủy ngân ,asen... III.Ngộ độc thuốc diệt chuột ,paracetamol,.... vd • Hồi sức tích cực và điều trị triệu chứng Hô hấp: thông khí, thở oxy, thở máy,thuốc kích thích hô hấp (Niketamid, Bemegrit,…); NH3 Tuần hoàn: chống loạn nhịp tim, tụt HA + Chống loạn nhịp tim: + Chống tụt HA: truyền dịch hoặc dùng thuốc kích thích nâng HA (Noradrealin, Dopamin, Isoprenalin…) Thần kinh: chống co giật, hôn mê + Co giật: dùng thuốc chống co giật, tránh kích thích + Hôn mê: shock điện → Hồi sức tích cực nhằm phục hồi các chức năng sống của cơ thể đặc biệt là chức năng

Phần I: Đại cương về độc chất học

1. ĐẠI CƯƠNG

- Toxicology = Toxikon (chất độc) + logos (khoa học)

- Độc chất học (ĐCH) : là ngành khoa học nghiên cứu về các chất

độc, bao gồm việc phát hiện ra các chất độc, đặc tính lý hóa họccủa chúng và những ảnh hưởng sinh học cũng như biện pháp

xử lý hậu quả do chúng gây ra

- ĐCH là 1 ngành khoa học nghiên cứu tác động của các chất gây độc có nguồn gốc khác nhau, mức độ độc khác nhau, sự ảnh hưởng và ý nghĩa ứng dụng rất khác nhau Do vậy ĐCH được chia thành nhiều phân nghành khác nhau

- Các lĩnh vực nghiên cứu : 6 lĩnh vực

+ ĐCH y học : nghiên cứu phương pháp chẩn đoán, xử trí và phòng ngừa ngộ độc và các hậu quả có hại khác do thuốc, độc

tố nghề nghiệp, môi trường và các tác nhân sinh học

+ ĐCH thực nghiệm: nghiên cứu đánh giá độc tính của hóa chất trên hệ sinh học trong thực nghiệm

+ ĐCH lâm sàng: nghiên cứu các bệnh do ngộ độc, nhiễm độc, cách chẩn đoán và điều trị ngộ độc, nhiễm độc

+ ĐCH pháp y: xét nghiệm độc chất và khám lâm sàng các

trường hợp ngộ độc, nhiễm độc mang tính pháp lý

+ ĐCH môi trường: nghiên cứu sự vận chuyển của chất độc và các chất chuyển hóa của chúng trong môi trường, trong chuỗi thực phẩm và tác dụng độc của các chất này trên cá thể và quần thể

+ ĐCH công nghiệp: nghiên cứu những tác động có hại vs con người bởi các hóa chất được sử dụng trong công nghiệp, các sản phẩm và chất thải công nghiệp

- Chất độc: là những chất vô cơ hay hữu cơ có nguồn gốc thiên

nhiên hay do tổng hợp, khi nhiễm vào cơ thể và đạt đến nồng

độ nhất định có thể gây hậu quả độc hại cho cơ thể sống

• Lưu ý:

- Độc tính: tính chất gây độc của chất độc đối vs cơ thể sống,

khác nhau qua cách bị nhiễm độc và theo loài và các yếu tố nguy cơ ( suy gan, thận kết hợp vs các chất #)

- Độc lực: là lượng chất độc trong những điều kiện nhất định

gây ảnh hưởng độc hại cho cơ thể

- Độ an toàn của thuốc : được xác định dựa trên các chỉ số sau + Chỉ số điều trị (TI = Therapeutic Index)

TI = TD50/ED50 đối vs người

TI = LD50/ED50 đối vs súc vật

TD50 : liều gây độc 50% (Toxic dose)

ED50: liều gây tác dụng 50% (Effect dose)

LD50: liều gây chết 50% súc vật (Lethal dose)

+ Tiêu chuẩn an toàn (SSM = Standard Safety Margin)

Là tỷ số giữa LD1 và ED99

SSM = LD1/ED99

2. PHÂN LOẠI CHẤT ĐỘC

- Dựa trên các tiêu chí sau đây:

+ Theo nguồn gốc: tự nhiên, tổng hợp, bán tổng hợp

+ Bản chất lý hóa: khí, lỏng, rắn-vô cơ, hữu cơ

+ Phương pháp phân tích: chất độc hóa tan trong nước, hòa tantrong ether…

+ Tác động trên các hệ cơ quan

+ Tác dụng độc đặc biệt: gây ung thư, gây đột biến, gây quái thai…

+ Các nguồn gây độc: các chất gây ô nhiễm nước, phụ gia thực phẩm, hóa chất công nghiệp, hóa chất bảo vệ thực vật

- Phân loại độ độc theo LD50:

chống trầm cảm loại 3 vòng, tricloroethanol

cảm loại 3 vòng, mã tiền (strychnin)Tăng HA và

cholinergic,metamphetamin,các chất ức chế MAO

chế cholinesterase bao gồm cả các chất phosphor hữu

cơ, carbamat,pilocarpinGiãn đồng tử Amphetamin,cocain,LSD,atropin,các thuốc kháng

cholinergic khác, các chất ức chế MAO, dẫn xuất phenothiazin,quinine,kháng Histamin TH1, các thuốc chống giao cảm, chống trầm cảm loại 3 vòng

Phù phổi cấp Aspirin,ethylenglycol,chống trầm cảm loại 3

vòng,paraquat,các opiat,các phosphor hữu cơToan lactic

máu

Cyanid,Co,Ibuprofen,INH,metformin,salicylat,acid valproic, thuốc gây co giật

Hạ K máu Bari,cafein,theophylin,lợi niệu thiazid và lợi niệu quai

- Nguyên tắc điều trị ngộ độc cấp: việc xử trí ngộ độc cấp nói

chung và dùng thuốc nói riêng cần phải thực hiện theo 3 nhóm

nguyên tắc sau đây:

+ Hồi sức tích cực – Điều trị triệu chứng – Chăm sóc toàn diện

+ Loại chất độc ra khỏi cơ thể

+ Trung hòa chất gây độc

• Hồi sức tích cực và điều trị triệu chứng

- Hô hấp: thông khí, thở oxy, thở máy,thuốc kích thích hô hấp

(Niketamid, Bemegrit,…); NH3

- Tuần hoàn: chống loạn nhịp tim, tụt HA

+ Chống loạn nhịp tim:

+ Chống tụt HA: truyền dịch hoặc dùng thuốc kích thích nâng

HA (Noradrealin, Dopamin, Isoprenalin…)

- Thần kinh: chống co giật, hôn mê

+ Co giật: dùng thuốc chống co giật, tránh kích thích

+ Hôn mê: shock điện

→ Hồi sức tích cực nhằm phục hồi các chức năng sống của cơ

thể đặc biệt là chức năng hô hấp, tuần hoàn và thần kinh, điều

trị các triệu chứng xuất hiện như co giật,hạ thân nhiệt,tăng

thân nhiệt… và chăm sóc toàn diện cả tinh thần,vật chất cho

người bệnh

+ Nếu tăng tiết dịch đường hô hấp thì dùng biện pháp hút dịch, dùng thuốc giảm tiết dịch đường hô hấp (Atropin)

+ Nếu sốt cao thì hạ sốt bằng cách chườm mát hoặc dùng thuốc

hạ sốt

• Các biện pháp loại chất độc ra khỏi cơ thể

→ Chỉ gây nôn khi ngộ độc trước 6h và bệnh nhân ko bị hôn

mê không dùng biện pháp gây nôn khi bệnh nhân có hôn mê vàngộ độc các chất ăn mòn như acid và base

Giải thích:

- sau 6h thức ăn đã xuống ruột nên ko gây nôn dc

phận cảm ứng, đường truyền vào, đường truyền ra, trung tâm điều khiển…Hôn mê ức chế thần kinh TW ko gây nôn dc Nếu nôn dc mà mất phản xạ nuốt sẽ làm tắc ruột

dày nên ko gây nôn khi ngộ độc các chất này

→ Rửa dạ dày :

- Trước 6h vì chất độc chưa hấp thụ hoàn toàn vào cơ thể

- Trường hợp có dụng cụ đặt nội khí quản thì có thể rửa dạ dày khi bệnh nhân hôn mê

Khi ngộ độc những thuốc bài tiết qua niêm mạc dạ dày như Morphin thì có thể rửa dạ dày sau ngộ độc 6h

Rửa dạ dày bằng nước muối sinh lý ấm (bệnh nhân sẽ không bị mất nhiệt), dung dịch thuốc tím loãng có tính oxh mạnh làm cácchất độc tan mạnh trong nước → thải trừ chất độc , dung dịch chứa tanin (khi ngộ độc ô đầu phụ tử, strychnine, atropin…)

→ Hạn chế hấp thu chất độc bằng cách dùng than hoạt tính Than hoạt tính kết hợp vs sorbitol và các thuốc tẩy muối để làmtăng thải các chất gây ngộ độc qua phân Than hoạt tính có thể dùng đơn liều hoặc đa liều (chất gây độc có chu kỳ gan-ruột)

Để tránh tăng độ tan làm tăng hấp thu các chất gây độc không nên dùng các thuốc tẩy dầu

+ Loại chất gây độc qua đường tiết niệu:

→ Đối vs các chất gây độc tan mạnh trong nước và thải trừ qua đường tiết niệu trước tiên phải truyền 100ml/cân nặng/24h Đây là biện pháp bài niệu tích cực có tác dụng rất tốt, giúp tăng thải nhanh các chất gây độc ra khỏi đường tiết niệu

→ Thay đổi pH máu và nước tiểu

Đối vs các chất gây độc có tính acid như Phenobarbital

(Gardenal);aspirin; 2,4dicloroacetic, paraquat … cần phải kiềm hóa máu và nước tiểu bằng natribicarbonat hoặc

trihydroxymethylaminmetan (T.H.A.M) nhằm tăng độ tan trong nước, giảm tái hấp thu các chất ở ống thận giúp thải nhanh ra ngoài

Đối vs các chất gây độc có tính kiềm như

amphetamin,phencyclidine, morphin, mã tiền,atropin… cần phải toan hóa máu và nước tiểu để hạn chế sự hấp thu qua ốngthận, giúp thải nhanh chất gây độc ra ngoài Tuy nhiên việc gây toan hóa máu và nước tiểu khó thực hiện trong thực tế vì sự

chịu đựng của bệnh nhân kém hơn nhiễm kiềm và toan hóa sẽ làm nặng thêm tổn thương thận do tiêu cơ vân rất hay gặp trong ngộ độc nên ít dùng biện pháp này.

+ Loại chất gây độc qua lọc máu:

Khi bệnh nhân bị ngộ độc ở trong tình trạng nặng, các chất gây độc tan mạnh trong nước, có thể tích phân bố thấp, có thể dùng biện pháp lọc máu Tùy theo đặc tính lý,hóa của chất gây độc mà dùng biện pháp lọc máu khác nhau như thẩm phân màng bụng, chạy thận nhân tạo, lọc máu bằng cột lọc hấp phụ (than hoạt hoặc resin), hoặc thay huyết tương hoặc thay máu.Một số chất khi ngộ độc được chỉ định lọc máu có hiệu quả: acid

valproic,carbamazepin,ethylenglycol,lithium,methanol,Phenobarbital,salicylat,theophylin

• Trung hòa chất gây độc bằng thuốc giải độc đặc hiệu

10h,sau khi kiểm tra chức năng gan,nồng độ

Paracetamol trong máu

để quyết định dùng truyền TM và đường uống

acid folic như:methotrexat (viêm khớp)

Có thể tiêm bắp or TM Dùng thuốc càng sớm càng tốt,nêu chậm sau ngộ độc 1h sẽ ít tác dụng

Fansidar(chống sốt rét) ,Biseptol

Khởi đầu truyền TM 75mg, sau đó tiêm bắp cách 6h một lần 12mg

và giảm tiết dịch hô hấpCalcium (ko

tiêm bắp) Fluorid,thuốc chẹn kênh calci Khởi đầu tiêm TM 15mg/kg và có thể tăng

liều khi cần, đặc biệt khi ngộ độc các thuốc chẹn kênh calci

20-30g, trẻ em uống 400mg/kg

thể gắn dc 8,5mg ion sắt Khi ngộ độc nặng tiêm TM15mg/kg/giờ

EthylenglycolEtherglycolAlcoxysistan

25-Flumazenil Dẫn xuất

benzodiazepin

Tiêm TM 0,2mg đối vs người lớn và có thể tiêm nhắc lại khi cần nhưng ko vượt quá 3mg Không dùng khi có co giật hoặc ngộ độc thuốc chống trầm cảm loại 3 vòng và lệthuộc benzodiazepine

ethylenglycol Truyền TM chậm trong 30phút liều 15mg/kg,cách

12h một lần cho đến khi nồng độ methanol hoặc ethylenglycol dưới

20mg/dLGlucagon

(hormone

tuyến tụy)

Các thuốc chẹn thụ thể β-adrenergic như Propranolol (chống tăng HA, loạn nhịp tim)

lớnKháng thể

kháng digoxin

(Fab = KT đơn

dòng)

Digoxin và các glycoside tim (lá trúc đào)

1 lọ kháng thể có thể gắn kết dc 0,5mg digoxin

10-20mg,ngày ko quá 40mg, sau đó uống 5-10mgDimercaprol

(BAL)

Arsen,thủy ngân,chì,muối vàng

Tiêm bắp sâu và cần phải thay đổi vị trí tiêm Khởi đầu 50mg.Đối vs ngộ độc

cấp cách 4h tiêm 4mg/kg trong 2 ngày,sau đó giảm xuống 3mg/kg x 2

lần/ngày liên tục trong 8 ngày

Đối vs ngộ độc mạn tính: khởi đầu cách 4 giờ tiêm 2,5mg/ngày trong 2 ngày, sau đó tiêm 2,5mg/kg mỗi ngày liên tục trong 10-15 ngày

30-50mg/kg/ngày Đợt điều trị không nên quá 5 ngày

PHẦN 2: CÁC PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ĐỘC TÍNH CỦA THUỐC TRÊN THỰC NGHIỆM

- Để 1 thuốc có thể sử dụng được cần phải nghiên cứu độc tính cấp và độc tính bán trường diễn

- Tùy thuộc loại thuốc mà yêu cầu bắt buộc thử các độc tính khácnhau như độc tính trên sinh sản và phát triển, độc tính tại chỗ, độc tính gây đột biến gen và độc tính sinh ung thư Vs thuốc sản xuất từ sinh phẩm nhất là sản xuất bằng phương pháp DNA tái tổ hợp mà dùng đường tiêm thì bắt buộc phải thử độc tính sinh miễn dịch

I. Nội dung các nghiên cứu tính an toàn trên thực nghiệm

- Nghiên cứu độc tính tại chỗ: độc tính kích ứng da

- Nghiên cứu độc tính sinh miễn dịch

- Nghiên cứu độc tính sinh ung thư

- Nghiên cứu độc tính trên sinh sản và phát triển

- Nghiên cứu độc tính gây đột biến gen( biến chủng)

1. Phương pháp nghiên cứu độc tính cấp của thuốc

- Độc tính cấp của thuốc (acute toxicology) là độc tính xảy ra sau khi dùng thuốc 1 lần or vài ba lần trong ngày

- Nghiên cứu độc tính cấp của thuốc trên động vật thực nghiệm mục đích chính là xác định liều chết trung bình (mean lethal dose) tức là liều làm chết 50% số con vật thí nghiệm trong

những điều kiện nhất định được ký hiệu là LD50 or LC50 (Nồng

độ gây chết 50% súc vật)

- Cách tiến hành như sau:

+ Theo dõi súc vật chết trong vòng 72h

+ Căn cứ LD50 và LC50 để dự kiến liều thử tác dụng Thường liều thử tác dụng bắt đầu bằng 1/10 LD50

Ví dụ: LD50 = 50mg/kg → liều thử là 5mg/kg

+ Trường hợp không xác định được liều gây chết thì phải xác định liều dung nạp tối đa (liều cao nhất mà súc vật dung nạp được nhưng chưa có biểu hiện độc tính cấp)

+ Ngoài theo dõi tỷ lệ sinh vật chết cần theo dõi tình trạng ăn uống, màu sắc da + niêm mạc, tình trạng phân, nước tiểu và cácbiểu hiện bất thường khác….

- Yêu cầu về động vật thí nghiệm

+ Loài động vật thực nghiệm: chọn 2 loài gặm nhấm và không gặm nhấm; chọn cả đực và cái

Tiêm dưới da (ml/kg)

Tiêm bắp (ml/kg)

vịChuột

vị trí tiêm/ngày)Thể tích

chia 2-3

vị trí tiêm khác nhau

0,1ml/vị trítiêm (2 vị trí

tiêm/ngày)

tiêm/ngày)Thể tích

tối đa

nhưng chia 2-3

vị trí tiêm khác nhau

0,2ml/vị trítiêm (2 vị trí

0,5; tối đa 1ml

0,5 ; tối đa 3ml

tối đa

nhưng chia 2-3

vị trí tiêm khác nhau

0,2ml/vị trítiêm (2 vị trí

tiêm/ngày)

+ Bước nhảy liều, thăm dò liều ban đầu

+ Ngoại suy liều LD100 và LD0

+ Quan sát và ghi chép kết quả

- Các trường hợp không xác định LD50

+ Không thể xác định LD50: Có nhiều thuốc cho uống vs liều rấtcao mà con vật ko chết thì có thể kết luận rằng: “Đã cho chuột uống đến liều 500g/kg cân nặng chuột tính theo DL khô, chuột nhắt trắng vẫn ko chết”

+ Không muốn xác định LD50: Đã cho chuột nhắt trắng uống liều gấp 500 lần liều dùng có tác dụng trên người, chuột vẫn không chết, ta kết luận thuốc có độ an toàn cao

- Các cách tính LD50:

+ Giấy kẻ milimet

+ Cách tính dùng số học, có phương pháp tính theo liều dùng như phương pháp Behrens, phương pháp Behrens – Karber, phương pháp Persin Có phương pháp tính theo logarit của liều như phương pháp Spearman – Karber, phương pháp Bliss, phương pháp Thompson

+ Phương pháp sử dụng giấy logarit – probit như Miller-Tainter, phương pháp Lichfield - Wilcoxol, phương pháp Bliss

+ Có phương pháp dùng đồ thị trên giấy logarit – probit và các toán đồ như phương pháp Lichfield-Wilcoxon

+ Có phương pháp lại dùng phép tính số học ko cần đồ thị mà vẫn tính dc cả LD50 và giới hạn tin cậy như phương pháp

Thompson và phương pháp Behrens – Schlosser

2. Phương pháp nghiên cứu độc tính bán trường diễn của thuốc

- Nghiên cứu độc tính ở những liều lặp lại

- Thời gian nghiên cứu độc tính bán trường diễn tùy thuộc vào loại thuốc dc sử dụng trên lâm sàng, phụ thuộc vào thời gian

dự kiến dùng trên người (thường gấp 4 lần thời gian dùng trên người)

Hiện nay đang áp dụng thời gian dùng thuốc là 4 tuần và 2 tuầntheo dõi phục hồi

+ Loài: Thỏ or chuột cống trắng (gặm nhấm và ko gặm nhấm)+ 2 giống khỏe mạnh

+ Ở giai đoạn trưởng thành (ko non, ko già)

+ Số con vật: thường dùng 10 con/lô

ta chọn đường dùng phù hợp cho sinh vật

- Liều dùng (3 liều): chọn 3 mức liều khác nhau

+ Liều 1: liều dưới liều dự kiến trên người Liều này có tác dụng nhưng ko gây độc Chọn liều này dựa vào phương pháp ngoại suy liều để tính từ liều sử dụng trên người hoặc từ các loài vật khác nhau theo hệ số nhất định theo loài

+ Liều 2: liều bằng liều dự kiến trên người Đây là liều nằm giữa

2 liều để biết mức độ độc ít có biểu hiện như thế nào?

+ Liều 3: cao gấp 3 lần liều dự kiến trên người Đây là liều gây độc rõ rệt

→ Một liều nằm giữa 2 liều trên để biết mức độ độc ít có biểu hiện như

+ Tình trạng chung, thể trọng của chuột

+ Đánh giá chức phận tạo máu thông qua số lượng hống cầu, hàm lượng hemoglobin,hematocrit,thể tích TB hồng cầu, số lượng bạch cầu và số lượng tiểu cầu

+ Đánh giá chức năng gan thông qua định lượng 1 số enzym và các chỉ số sinh hóa máu: AST;ALT;GGT;bilirubin toàn

phần,albumin,cholesterol,glucose máu,ure,ɣ - GT (chỉ số đườngmật)

+ Đánh giá chức năng thận thông qua định lượng creatinin huyết thanh

+ Mô bệnh học: Giai đoạn kết thúc nghiên cứu giết súc vật để kiểm tra đại thể và vi thể các cơ quan đặc biệt là gan, thận, tinh hoàn,buồng trứng,tủy xương,não và những cơ quan là những đích tác dụng của thuốc

- Các thời điểm xác định các thông số:

+ Các thông số theo dõi dc kiểm tra tại 4 thời điểm: trước khi uống thuốc, sau 2 tuần và 4 tuần uống thuốc, sau ngừng thuốc

2 tuần

+ Mô bệnh học: Sau 4 tuần uống thuốc, 30% số chuột ở mỗi lô

dc mổ để quan sát đại thể toàn bộ các cơ quan và kiểm tra cấu

trúc vi thể gan,thận Số chuột còn lại được nuôi tiếp trong 2

tuần (ngừng uống thuốc), sau đó chuột dc mổ để quan sát đại

thể toàn bộ các cq và kiểm tra cấu trúc vi thể gan,thận của 30%

số chuột ở mỗi lô

Sang

chuyển từ

Chuột nhắt

Chuột cống

Bảng 5: Chuyển đổi liều hiệu quả tương đương giữa 1 số loài

và người theo diện tích bề mặt (BSA)

• Công thức tính hiệu quả tương đương vs người (HED)

HED (mg/kg) = liều của động vật x (hệ số Km của động vật/hệ

Bảng 6: Quy đổi thời gian dùng trên người sang thời gian thử

độc tính bán trường diễn trên động vật

+ PP tối đa hóa

+ PP tối ưu hóa

+ PP da hở

+ PP chất bổ trợ phân rã

+ Chuẩn bị động vật thí nghiệm Dùng 3 con thỏ, cân nặng 3kg Cho nhịn đói qua đêm

2,5-+ Cố định thỏ, cạo lông vùng bụng or lưng

+ Dùng bút chì khoanh các vùng thí nghiệm có đường kính

2-2,5cm Lau sạch

+ Nhỏ vào giữa mỗi vùng 0,1ml formaldehyde 20%, dàn đều, đểkhô (3 lần)

+ Lấy thuốc nghiên cứu or thuốc tham chiếu phết lên gạc

đường kính 2 cm; 0,2g thuốc/miếng Đắp gạc vào vùng nghiên cứu

+ Tiêm dd Trypan 0,5% vào dưới da nách chân trước của con

vật vs liều 1ml/kg

- Đánh giá kết quả: sau 4h từ khi đặt thuốc, gỡ miếng dán, làm sạch thuốc Quan sát mức độ xanh của vết da dán thuốc ngay sau đó, sau 2h, sau 6h

+ Nguyên lý: Thử nghiệm tác dụng kích ứng tại chỗ trên da thỏ của 1 thuốc nghiên cứu

+ Quy trình nghiên cứu:

Thỏ (3 con) dc nuôi trong lồng riêng trước nghiên cứu 1 tuầnCạo lông phần lưng và hông trước nghiên cứu 1 ngày

Chia phần da cạo lông làm 2 phần Chọn mỗi phần 1 diện tích

da 2,5x2,5cm Một phần bôi 0,5ml thuốc nghiên cứu, 1 phần bôi 0,5ml nước muối sinh lý Đắp gạc

Sau 4h tháo gạc, rửa sạch

Số điểm tại mỗi thời điểm dc tính bằng cách chia TB và xếp loại theo mức độ kích ứng trong bảng sau:

4. Nghiên cứu độc tính sinh miễn dịch

- Các thuốc nói chung đều cần thử độc tính sinh miễn dịch Tuy nhiên, những thuốc có bản chất protein khi dùng đường tiêm thì bắt buộc phải thử độc tính sinh miễn dịch

- Độc tính SMD thường được thử trên chuột lang vì chuột lang thường nhạy hơn vs tác dụng kích thích miễn dịch

- Về phương pháp đánh giá kết quả, có thể lấy máu để xác định các yếu tố đặc trưng cho hệ MD dịch thể or MD tế bào Tuy nhiên cũng có thể chỉ cần xác định các biểu hiện bên ngoài của phản ứng miễn dịch

- Test áp (patch test) là phương pháp thường được các nhà

nghiên cứu sử dụng đánh giá tính sinh miễn dịch

- Chuột lang sau khi được cạo lông tại vùng nghiên cứu và chia thành các lô, lô chứng ko bôi thuốc, lô trị bôi thuốc nghiên cứu trên da trong 28 ngày, mỗi ngày 1 lần Sau khi ngừng bôi thuốc

14 ngày, chuột dc bôi thuốc 1 lần vào đúng vị trí cũ

- Phát hiện kháng thể kháng thuốc trong huyết thanh lô trị bằng phản ứng phá vỡ tế bào mastocyt theo phương pháp Ishimova Nguyên lý của phản ứng này là dựa vào sự thay đổi hình thái học của tế bào mastocyt của chuột dưới tác động của phản ứngKN-KT xảy ra trên bề mặt tế bào mastocyt Nếu trong huyết thanh chuột lang có KT kháng thuốc nghiên cứu thì tế bào

mastocyt sẽ bị phá vỡ nhiều

Tế bào mastocyt phản ứng rất mạnh vs các dị nguyên:

Dị nguyên ủ vs tế bào này → đếm và kiểm tra số lương tb lành

- Mục đích: tạo ra các mô hình nghiên cứu ung thư để chống ungthư

Dùng cả đực và cái, khỏe mạnh như nhau

Mỗi lô dùng 50 con đực và 50 con cái

- Các chỉ số nghiên cứu độc tính sinh ung thư bao gồm:

+ Hành vi, lông và cơ quan (mắt,mũi), ăn uống, cân nặng…

+ Xét nghiệm mô bệnh học: đại thể, vi thể, đặc biệt là u ở các

cq và mô

- Khi hết thí nghiệm, xét nghiệm lô chứng và lô dùng liều cao nhất

+ Nếu ko khác biệt về số lượng u và tổng khối lượng u

+ Nếu có khác biệt về số lượng u và tổng khối lượng u : xét nghiệm lô dùng liều thấp Kết quả dc đánh giá thông qua số lượng, kích thước khối u, loại tế bào u

6. Nghiên cứu độc tính trên sinh sản và phát triển

biểu hiện và tần xuất các tác động của các chất ngoại lai lên quá trình sinh sản,

- Nguyên tắc chung: chọn ĐV có khả năng sinh sản, tỷ lệ dị dạng

tự nhiên ít, nhạy cảm vs chất có ảnh hưởng đến sinh sản và phát triển Hay dùng chuột cống trắng và chuột nhắt trắng

+ Dùng thuốc trước và trong giai đoạn sớm của thai kỳ

+ Dùng thuốc trong giai đoạn hình thành các cq của thai

+ Dùng thuốc trong thời kỳ chu sinh và cho con bú

7. Nghiên cứu độc tính gây đột biến gen

(AMES TEST)

Ngộ độc kim loại nặng chì, thủy ngân, cadmium, arsen.

I, Giới thiệu.

*Bệnh “Itai-Itai” “móc khóa”

- Suy dinh dưỡng, khiếm khuyết phát triển bộ xương

=> Mức cadmium (Cd) tích lũy cao

=> Nhiễm độc Cadmium trên nhánh sông từ quá trình chế biến chì từ rất nhiều năm đổ ra môi trường

*Bệnh Minamata

- Nhiễm độc thủy ngân

- Nền công nghiệp phân bón, hóa dầu mỏ, chất dẻo…

=> Đổ xuống vịnh Minamata: 27 tấn thủy ngân (1932-1968)

=> 10,000 dân chịu ảnh hưởng do ăn hải sản.

* Làng nghề Đông Mai-Hưng Yên

- Từ 1970: tái chế bình ắc qui hỏng

- Ô nhiễm môi trường nghiêm trọng

- 50% người dân bị bệnh đường ruột

- 30% bị bênh tiêu hóa,

- 100% người nấu chì trực tiếp bị nhiễm độc

- Ô nhiễm chì không khí vượt mức 3,5 lần

- Hấp thu: qua da, hô hấp, tiêu hóa 10-15% (TE 50%)

- Phân bố: gan, thận, xương, hàng rào máu não, rau thai

- t/2: 1-2 tháng

- Tích lũy: gan, thận, mô mỡ, xương (t/2: 20 năm)

 Tích lũy tăng theo lứa tuổi => ngộ độc chì.

- Ức chế quá trình tạo glucose tạo năng lượng

+ Giảm tổng hợp Hb do ức chế một số enzym như δ-aminolevulinicdehydrase, decarboxylase dẫn đến tăng delta aminolevulinic acid trong

máu và nước tiểu Khi chất này tăng trên 10µg/dL có thể có dấu hiệuđộc.

Ngoài ra chì còn ức chế dehydrogenase và ferroclelatase(hemsynthetase) trong quá trình tổng hợp Hem

Vị trí tác động của chì lên quá trình tổng hợp Hem như sau:

Succinyl CoA + glycin

+ Do ức chế Na+ K+ ATPase và pyrimidin- 5’- nucleotidase ở mànghồng cầu, gắn vào nhóm SH, PO4; COOH ở màng hồng cầu -> giảmtính vững bền màng nên hồng cầu dễ phân giải.

- Nam: thoái hóa tinh hoàn, giảm tinh trùng

- Nữ: rối loạn kinh nguyệt, sảy thai, đẻ non, tổn thương thần kinh ở trẻ sau sinh

*Tiết niệu: rối loạn chức năng ống thận, viêm thận, xơ hóa tế bào kẽ, tiểu ít, bí tiểu, tăng ure huyết

*Tiêu hóa: rối loạn, đau thượng vị từng cơn (đau bụng chì), buồn nôn, tiêu chảy ra phân màu đen sau đó táo bón

*Thể chất: mệt mỏi, khó chịu, kích ứng, biếng ăn, mất ngủ, sụt cân

+ hơi thở thối, sưng lợi răng, da vàng, thường đau bụng, táo bón, đau khớp xương, bại liệt chi.

+ thiếu máu

+ mạch yếu, nước tiểu ít, trong nước tiểu có porphyrin

+ phụ nữ dễ bị xẩy thai

6, Điều trị ngộ độc chì.

*Loại chất độc ra khỏi cơ thể

- gây nôn, rửa dạ dày dd Na2SO4, MgSO4

- uống than hoạt

chia 2-3 lần x 5 ngày

sâu 4-5mg/kg chia 4-6 lần x 3-5 ngày

- Sau 4h: kết hợp EDTA

DMSA (succimer) - Ngộ độc chì chưa

có tổn thương não

III, Ngộ độc Thủy Ngân.

1, Tính chất, nguồn gốc.

*Thủy ngân kim loại

- thủy ngân nguyên tố

- dạng lỏng, M=200.61

- dễ bốc hơi ở nhiệt độ thường

- kỹ nghệ khai thác đá, làm bóng đèn, nhiệt kế, thiết bị điện tử, chế tạo sơn, sắc tố, khai thác mỏ vàng

*Muối thủy ngân vô cơ: rất độc

- HgCl2 (thuốc diệt khuẩn) rất độc vì dễ tan trong nước

- HgNO3 trước kia dùng trong y dược để đốt cháy chỗ viêm

*Thủy ngân hữu cơ:

- Metyl thủy ngân: vi sinh vật trong nước đổi muối thủy ngân vô cơ thành metyl thủy ngân tích lũy sinh học trong các loài các lớn ăn thịt

- Dietyl thủy ngân, dimetyl thủy ngân: làm thuốc trừ sâu, diệt nấm (shinmen)

- trước kia một số hợp chất thủy ngân điều trị giang mai, thuốc sát trùng…

- hấp thu mọi đường: hô hấp, da, tiêu hóa (phổ biến)

Sự chuyển hóa dinh học thủy ngân

- vỡ dụng cụ chứa thủy ngân

- dùng thuốc có chứa thủy ngân: chu sa (thuốc an thần), thuốc mỡ, thuốc đỏ

Con người sống lâu sẽ là sinh vật tích lũy thủy ngân nhiều nhất.

Metyl-Hg vào con

người

- run tay, run đầu chi.

- rối loạn tâm thần (nhức đầu, mệt mỏi, mất ngủ, biếng ăn, bồn chồn, mất trí nhớ, dễ kích thích)

- viêm nướu miệng, tiết nước bọt nhiều do thủy ngân đào thải ra nước bọt, tiết nước bọt nhiều

4.2.Ngộ độc muối thủy ngân qua đường tiêu hóa.

- ngộ độc cấp:

+ rối loạn tiêu hóa: cảm giác cháy rát ở miệng, thực quản, dạ dày, có vị kim loại khó chịu.

+ viêm xuất huyết hoại tử tiêu hóa, đau bụng, tiêu chảy

- Viêm nướu hơi thở hôi, răng bị lung lay (thường xuất hiện ngày 3)

- Tổn thương thận: suy thận, hoại tử ống thận, viêm thận, bí tiểu, tiểu

ít (xẩy ra sau vài ngày) => ure huyết tăng => tử vong

=> nếu qua khỏi bệnh nhân khó hồi phục vì phủ tạng bị hư hại nặng do thủy ngân đào thải rất chậm

- Ngộ độc mạn tính

+ có một số triệu chứng như ngộ độc cấp tính nhưng mức độ nhẹ hơn.+ viền đen thủy ngân ở nướu

+ triệu chứng thần kinh: hàm run, chân tay run, rối loạn tâm thần

4.3 Ngộ độc thủy ngân hữu cơ.

*Methyl thủy ngân

- hệ TKTW: rối loạn vận động, vận ngôn, giảm thính lực

- gây quái thai mạnh, chậm phát triển tâm thần (bệnh Minamata)

*Ethyl thủy ngân: viêm dạ dày, ruột

5 Điều trị ngộ độc thủy ngân.

* Ngộ độc thủy ngân đường tiêu hóa

- loại chất độc ra khỏi cơ thể

+ rửa dạ dày

+ uống than hoạt.

- Điều trị triệu chứng

+ chống viêm thận: uống nhiều nước, tiêm truyền glucose

+ thuốc trợ tim

+ thẩm phân máu trong 1-2 tuần

*Thủy ngân kim loại

Uống DMSA để tăng đào thải qua nước tiểu

*Muối thủy ngân vô cơ

- tiêm bắp BAL sau khi ngộ độc vài phút để làm giảm tổn thương thận

- không dùng BAL cho ngộ độc thủy ngân kim loại thể hơi và thủy ngân hữu cơ vì có thể tái phân bố thủy ngân đến não từ các mô khác (não là

cơ quan đích chủ yếu cảu các chất này)

- kết hợp DMSA

*Thủy ngân hữu cơ

Uống DMSA làm giảm nông độ thủy ngân trong mô, nhất là mô não

IV, Ngộ độc Cadmium.

1, Tính chất.

- Friedrich Strohmeyer (Đức) 1817 phát hiện trong tạp chất của cacbonat kẽm (calamine)

- M=48

- Kim loại mềm, dẻo, màu trắng ánh xanh, hóa trị II

- Độc tính cao, không có giá trị sinh học

- Dễ dàng hấp thu và tích lũy trong thực vật

- Tích lũy trong cơ thể 20-30 năm.

+ hóa chất trong kỹ thuật nhiếp ảnh

- Hút thuốc lá (mỗi điếu thuốc chứa 1-2 µg Cd)

- Tai biến

+ Hút thuốc lá (mỗi điếu thuốc chứa 1-2 µg Cd)

+ hít khói bụi nhiễm Cd từ môi trường

+ ăn thức ăn nhiễm Cd

3 cơ chế gây độc của cadmium

Cadmium ức chế streess oxy hóa dẫn quá trình tự sửa chữa ADN làmtổn thương ADN, làm tăng sự chết theo chương trình gây hoại tử tế bào

4, Ngộ độc Cadmium.

- Độc tính trên thận

+ Cd tự do gắn vào tiểu cầu thận

+ làm mất chức năng của ống lượn gần trong thận

- Độc tính trên phổi

+ viêm phù và khí thủng phổi bởi Cadmium giết chết đại bạch cầu phổi.

- Sinh sản: dị tật thai nhi

- Gây ung thư: ung thư tuyến tiền liệt, phổi, vú…

- Độc tính trên xương: gây loãng xương, nhuyễn xương (bệnh Itai)

Itai- Cd giải phóng khỏi xương trong vòng vài giờ sau phơi nhiễm, ngay cả ở mức thấp dưới tiêu chuẩn hiện hành do OSHA công bố

5, Điều trị ngộ độc Cd.

*Ngộ độc đường tiêu hóa

- loại chất độc ra khỏi cơ thể

+ rửa dạ dày

+ uống than hoạt

- Điều trị triệu chứng: chống viêm thận: uống nhiều nước, tiêm truyền glucose…

- Antidote: các thuốc tạo chelat

+ acid dimethyl arsenic: 500mg/kg

kẽm

- ứng dụng trong nhiều lĩnh vực:

+ nông nghiệp: diệt chuột, côn trùng, nấm

+ công nghiệp: bảo quản gỗ, sản xuất thuốc nhuộm, chíp điện tử, sản xuất thủy tinh, thuộc da

+ đi qua rau thai: C máu dây rốn=C máu mẹ

+ đau, yếu cơ.

+ tăng sắc tố, sừng hóa, viêm các vùng da

+ tăng tiết mồ hôi, nước bọt, hơi thở mùi tỏi

+ rối loạn tiêu hóa

+ gan to, vàng da, xơ gan, tổn thương thần kinh trung ương và ngoại vi

+ suy giảm chức năng thận

4, Cơ chế gây độc của arsen.

- Khác nhau As3+ hoặc As5+

- As3+:

+ ức chế pyruvatdehydrogenase, ketoglutaratdehydrogenase -> giảm acetyl-CoA, giảm hoạt động chu trình kreps, giảm tân tạo glucose

+ gắn vào các enzyme chứa nhóm SH -> giảm glucose nội bào.+ ức chế glutathionsynthetase -> giảm glutathione nội sinh

- Rửa dạ dày, uống than hoạt.

- Thực vật: sắn, măng tươi, hạt quả đào, mơ, mận, hạnh nhân

đắng…chứa glycoside amygdalin không độc

Amygdalin và prunasin hyddrolase

Ở ruột: glycoside amygdalin -> glucose Aldehyd và HCN gây độc

- Trong công nghiệp: khí acid hydrocyanic (HCN), muối NaCN, KCN, CaCN, MgCN), hợp chất có chứa cyanid (cyanogens bromide, cyanogens chloride, cyanogens iodide), các cyanid kim loại, hoặc trong khói cháy nhựa, gỗ, các polymer, tơ lụa

+ hấp thu nhanh qua niêm mạc tiêu hóa, hô hấp

+ gắn vào protein :60%, gắn vào Hb phụ thuộc nồng độ

+ Vd 1,5 l/kg

+ ½=2-3

Rhodanese