Bài dịch các môi trường trong thực hành phân tích vi sinh thực phẩm bao gồm cách dùng, các bước tiến hành, kết quả, hình thái khuẩn lạc, đính kèm với các bài tiếng anh. Mt MKTTn, XLD, PCA, MRVP, NA, LSB, BGBL, BHI, BPA, DG18, LDC.
GVHD: Hoàng Xuân Thế Mục lục GVHD: Hoàng Xuân Thế Bài Các môi trường Phát Salmonella thực phẩm I Dung dịch Buffered Peptone Water (BPW): Mục đích sử dụng: Hardy Diagnostics Buffered Peptone Water sử dụng với mục đích hỗ trợ phục hồi loài Salmonella bị tổn thương từ thực phẩm mẫu khác trước tăng sinh chọn lọc phân lập Sản phẩm không sử dụng để chuẩn đoán bệnh cho người Sơ lược: Salmonella spp có mặt sản phẩm thực phẩm bị thương gần mức gây chết kỹ thuật chế biến thực phẩm Những Salmonella bị thương phục hồi kỹ thuật lựa chọn trực tiếp Buffered Peptone Water canh làm giàu không chọn lọc đẩy mạnh phục hồi vi khuẩn bị thương Peptone môi trường cung cấp chất đạm cần thiết cho tăng trưởng vi khuẩn Các muối photphate cung cấp khả đệm để trì độ pH Duy trì pH quan trọng cố gắng phục hồi vi khuẩn bị thương, độ pH thấp gây bất lợi cho sửa chữa tế bào bị tổn thương Công thức: Thành phần lít nước cất* Peptone 10g Sodium Chloride .5g Disodium Photphate .3,5g Monopotassium Photphate .1,5g pH cuối 7,2 ± 0,2; 250C *Điều chỉnh và/hoặc bổ sung theo yêu cầu để đáp ứng tiêu chuẩn tiêu chất lượng Bảo quản thời gian sử dụng: Bảo quản: Sau nhận bảo quản cửa hàng 2-30 0C tránh ánh sáng trực tiếp Môi trường không nên sử dụng có dấu hiệu tạp nhiễm, hư hỏng, đổi màu hạn sử dụng Sản phẩm nhạy cảm với ánh sáng nhiệt độ Bảo vệ cách đóng băng làm lạnh Ngày hết hạn áp dụng cho sản phẩm nguyên vẹn bảo quản theo dẫn Thận trọng: Sản phẩm sử dụng cho phòng thí nghiệm sử dụng nhân viên phòng thí nghiệm đào tạo đủ khả Tuân theo định phòng ngừa nguy hiểm sinh học phê duyệt kỹ thuật vô trùng Tất mẫu phòng thí nghiệm phải xem xét khả lây nhiễm xử lý theo “đề phòng tiêu chuẩn” “Hướng dẫn phòng ngừa cách ly” có sẵn từ Trung tâm Kiểm soát Phòng ngừa dịch bệnh www.cdc.gov/ncidod/dhqp/gl_isolation.html Để biết thêm thông tin liên quan đến biện pháp phòng ngừa cụ thể cho công tác phòng chống lây nhiễm từ nguyên liệu dụng cụ phòng thí nghiệm, khuyến nghị cho việc quản lý tiếp xúc với bệnh truyền nhiễm, tham khảo tài liệu CLSI M29: Bảo vệ người lao động phòng thí nghiệm từ Nhiễm trùng nghề nghiệp gây nên: Hướng dẫn chấp nhận GVHD: Hoàng Xuân Thế Khử trùng tất chất thải sinh học nguy hiểm trước xử lý Cách tiến hành: Đối với phân lập Salmonella spp : (1,3) Cấy 10g mẫu vào 50ml Buffered Peptone Water Ủ 350C, 18 Chuyển 10ml mẫu ủ vào 100ml canh Tetrathionate ủ 35 0C Làm giàu chọn lọc khác sử dụng (1,3) Sau 24 48 giờ, gieo cấy lên môi trường Brillient Green Agar, XLD Agar và/hoặc HE Agar ủ 35 0C, 18 Không môi trường chọn lọc lý tưởng cho tất trường hợp Điều chứng minh cho việc sử dụng hai nhiều môi trường thạch Kiểm tra đĩa cho khuẩn lạc Salmonella spp điển hình Giải thích kết quả: Sau ủ, kiểm tra đĩa thạch cho hình thái khuẩn lạc phát triển điển hình Kết nuôi cấy môi trường BPW tăng trưởng dựa vào độ đục II Canh Rappaport-Vassiliadis Soya Peptone (RVS): Một canh làm giàu chọn lọc dùng để phân lập Salmonella Công thức tiêu biểu* g/l: Soya peptone 4,5g Natri clorua .7,2g Kali dihydrogen phosphate .1,26g Dipotassium phosphate hydro 0,18g Magie clorua (khan) 13,58g Malachite green 0,0036g pH 5,2 ± 0,2; 250C *Điều chỉnh theo yêu cầu để đáp ứng tiêu chuẩn tiêu chất lượng Chỉ dẫn: Khuấy 26,75g lít nước cất đun nóng nhẹ để hòa tan Phân phối 10ml vào chai ống vít mũ tiệt trùng nồi hấp khử trùng 115 0C, 15 phút Miêu tả: Rappaport Vassiliadis Soya Peptone Broth (RVS broth) khuyến cáo môi trường tăng sinh chọn lọc để phân lập Salmonella từ thực phẩm mẫu môi trường Nó chia sẻ với công thức gốc, khả khai thác đặc tính đầy đủ loài Salmonella so sánh với Enterobacteriaceae khác Điều là: − Khả tồn áp suất thẩm thấu tương đối cao − Để nhân lên giá trị pH tương đối thấp − Để kháng cự tương Malachite green − Để nhu cầu đòi hỏi chất dinh dưỡng tương đối Canh RVS dựa công thức sửa lại miêu tả Van Schothorst et al., khuyến cáo môi trường làm giàu chọn lọc để phân lập Salmonella từ thức ăn mẫu môi trường Nó sử dụng để phân lập Salmonella từ phân người mà không cần phải làm giàu trước Đây biến thể Canh làm giàu GVHD: Hoàng Xuân Thế Rappaport Vassiliadis (RV) mô tả trước Van Schothorst Renauld Các thay đổi công thức trước họ là: Việc bổ sung Dipotassium hydrogen phosphate làm đệm môi trường để trì độ pH thời gian lưu trữ canh chuẩn bị Làm rõ nồng độ tối ưu Magie clorua 6H2O Hai thay đổi cho biết để nâng cao độ tin cậy canh làm giàu Peterz et al nhấn mạnh tầm quan trọng magie clorua môi trường cuối Kỹ thuật: • Thực phẩm mẫu môi trường Chuẩn bị Buffered Peptone Water theo hướng dẫn nhãn với thể tích 225ml Chuẩn bị canh RVS theo hướng dẫn Thêm 25g 25ml mẫu thử vào 225ml Buffered Peptone Water ủ 37 0C 16-20 Chuyển 0,1ml môi trường làm giàu peptone water vào 10ml Canh RVS ủ 42±10C 24 Cấy chuyền canh làm giàu vạch cấy lên môi trường đĩa thạch MLCB CM0783 Brillient Green Agar (sửa đổi) CM0329 Ủ 35 0C 18-24 Các khuẩn lạc nghi ngờ Salmonella nên khẳng định phương pháp sinh hóa huyết học Tham khảo phương pháp tiêu chuẩn ISO 6579: 2002 + A1: 2007 • Mẫu phân Không cần thiết làm giàu Thêm hai vòng dày 3mm phân lỏng (hoặc nhũ tương phân dung dịch muối) vào 10ml Canh RVS ủ ấm đến 42 0C Ủ 42±10C 24 giờ, sau cấy vệt lên môi trường thạch chọn lọc lựa chọn Điều kiện bảo quản thời hạn sử dụng: Bảo quản môi trường khử nước 10-30 0C sử dụng trước ngày hết hạn ghi nhãn Lưu trữ môi trường chuẩn bị 280C Biểu bên ngoài: Vừa nước: màu rơm/màu xanh cây, bột thô không mịn Vừa chuẩn bị: dung dịch màu xanh Thận trọng: Canh RVS không nên sử dụng Salmonella Typhi bị nghi ngờ Để đạt phục hồi tối ưu canh làm giàu ủ 42±10C III Muller-Kauffmann Tetrathionate Novobiocin Broth Canh Muller Kauffman Tetrathionate Novobiocin sử dụng hỗ trợ làm giàu phân lập Salmonella Thành phần Nguyên liệu Gam/lít Peptic từ mô động vật 4,3 Casein enzym hydrolysate 8,6 Mật bò 4,75 Natri clorua 2,6 Canxi cacbonate 38,7 Natri thiosulfate, pentahydrate 47,8 Brilliant green 0,0095 GVHD: Hoàng Xuân Thế pH cuối 8,2±0,2 250C Các môi trường chuẩn bị thường không ổn định nên sử dụng Nó bảo quản 2-8 0C bóng tối không ngày Lưu trữ bột khử nước, nơi khô ráo, thùng chứa kín 2-25 0C Hướng dẫn: Hòa tan 89,42g môi trường khử vào 1000ml nước cất Đun nóng môi trường vừa sôi Không dùng nồi hấp Làm nguội đến 45-50 0C trước sử dụng thêm 20ml dung dịch iod (20g iod 25g kali iod 100ml nước cất vô trùng) với chất khử nước lọ MKTT bổ sung Novobiocin (79894) Trộn để phân tán canxi carbonate đồng trước phân phối vào ống vô trùng Lưu ý: Vì hiên diện canxi carbonate, môi trường chuẩn bị hình thành dung dịch đục với kết tủa trắng Nguyên tắc giải thích: Do số lượng thấp Salmonella thực phẩm thực tế có nhiều tế bào bị tổn thương trình chế biến thực phẩm quan trọng để giải cứu làm tăng sinh tế bào vi khuẩn canh trường không chọn lọc Salmonella bị tổn thương mức hây chết phục hồi tăng lên nhanh chóng số lượng canh tiền tăng sinh Sau bước tiền tăng sinh thường thay sang nhiều canh chọn lọc Thông thường ml môi trường tiền tăng sinh nuôi cấy với 9ml môi trường tăng sinh chọn lọc, cho phép phát triển vi khuẩn Salmonella ức chế vi sinh vật Salmonella khác Canh Lactose (94792) khuyến cáo BAM tiền tăng sinh Salmonella từ thực phẩm Bước tăng sinh chọn lọc khuyến cáo Canh Tetrathionate môi trường Rappaport Vassiliadis Các biến thể canh Tetrathionate để phát Salmonella Mueller khuyến cáo Canh Tetrathionate môi trường chọn lọc để phân lập Salmonella Kauffman sửa đổi công thức cách bổ sung thêm mật bò brilliant green chất chọn lọc để ngăn chặn vi khuẩn khác loài Proteus Các tiêu chuẩn ISO khuyến cáo canh Brilliant green Tetrathionate để phân lập Salmonella từ thịt, sản phẩm thịt, gia cầm sản phẩm gia cầm Nó khuyến cáo canh chọn lọc để phân lập Salmonella từ phân động vật nước thải ô nhiễm Khả chọn lọc Tetrathionate (từ phản ứng từ thiosulphate iod) Canh Mueller Kauffman Tetrathionate Novobiocin chứa peptic thủy phân từ mô động vật casein thủy phân enzyme nguồn cacbon, nitơ, vitamin khoáng chất Mật bò brilliant green tác nhân chọn lọc ức chế vi sinh vật gram dương số vi sinh vật gram âm khác Loài Proteus bị ức chế bới novobiocin bổ sung Natri clorua trì cân thẩm thấu canxi cacbonate hoạt động chất đệm Natri thiosulphate nguồn lưu huỳnh ion âm tetrathionate (S4O6) tác nhân chọn lọc Cách pha môi trường Thêm khoảng 10g mẫu vào 100ml Canh Mueller-Kauffmann tetrathionate novobiocin Lắc đặt bình bồn nước 15 phút 45 0C Lấy bình ủ 430C Một số nghiên cứu cho thấy tăng khả phục hồi Salmonella tăng sinh chọn lọc nhiệt độ 430C Sau 18-24 48 nuôi cấy môi trường tăng sinh cấy sang môi trường thạch Brilliant Green chỉnh sửa (Cat no.B1801) Những hạn chế GVHD: Hoàng Xuân Thế Môi trường không phù hợp cho tăng trưởng Salmonella Typhi, Salmonella Sendai, Salmonella Pullorum,… Một số vi sinh vật khác Morganella morganii số Enterobacteriaceae tăng trưởng tốt môi trường Do tất khuẩn lạc Salmonella phục hồi xác nhận thử nghiệm Đặc tính môi trường sau 18-48 43 0C (với iod novobiocin), gieo lại môi trường TSA Organisms (ATCC) Dịch cấy Phục hồi Escherichia coli (25922) 50-100 -/+ Proteus vulgaris (13315) 50-100 -/+ Shigella flexneri (12022) >=103 Salmonella Enteritidis 50-100 +++ (13076) Salmonella Paratyphi A 50-100 +++ (9150) Salmonella Paratyphi B 50-100 +++ (8759) Salmonella Typhi (6539) >=103 Salmonella Typhimurium 50-100 +++ (14028) IV Xylose Lysine Desoxycholate (XLD) Cat No G65 Cat No G245 Cat No J24 Cat No J414 XLD agar, đĩa 15x100mm, 18ml XLD agar với Novobiocin, đĩa 15x100mm, 18ml Xylose Lysine Dextrose (XLD)/Voge and Johnson, đĩa đổ hai lớp 15x100mm, 10ml/10ml Thạch XLD, đổ bốn lớp 15x100mm, 5ml/phần 10 đĩa/ túi 10 đĩa/ túi 10 đĩa/ túi 10 đĩa/ túi Mục đích sử dụng: Hardy Diagnostics XLD Agar khuyến cáo sử dụng môi trường chọn lọc phân biệt cho việc phân lập gram âm gây bệnh đường ruột từ mẫu phân từ thực phẩm mẫu khác Cat No G245 J414 không sử dụng để chuẩn đoán bệnh cho người Sơ lược Xylose Lysine Deoxycholate (XLD) Agar phát triển Taylor để phân biệt, phân lập xác định tác nhân gây bệnh đường ruột, để hỗ trợ phát triển vi sinh vật đường ruột khó tính khác XLD agar thiết kế đặc biệt phép phát triển loài vi khuẩn Shigella, môi trường chứng minh để phân lập vi sinh vật Nó xây dựng để môi trường tuyệt vời để phân lập tốt loài Salmonella GVHD: Hoàng Xuân Thế Tác nhân chọn lọc XLD agar sodium deoxycholate, ức chế phát triển vi sinh vật gram dương Nguồn carbonhydrate xylose lên men hầu hết vi sinh vật đường ruột ngoại trừ loài Shigella, khuẩn lạc xuất màu đỏ môi trường kết Một chế thứ hai khác cho Salmonella sử dụng việc bổ sung lysine Lysine decarboxylation chuyển pH môi trường sang trạng thái kiềm Để tránh đảo ngược đến phản ứng Shigella, lactose sucrose thêm vào trình Việc bổ sung sodium thiosulfate ammonium citrate sắt nguồn lưu huỳnh chất thị, theo thứ tự định sẵn, cho phép hydrogen sulfide tạo thành vi sinh vật cho kết khuẩn lạc tâm đen, điều kiện kiềm Những vi sinh vật lên men xylose, âm tính lysine decarboxylase, không lên men lactose sucrose gây pH acid môi trường, hình thành khuẩn lạc màu vàng Ví dụ vi sinh vật Citrobacter spp., Proteus spp., and Escherichia coli XLD agar với Novobiocin chứa Novobiocin, thường sử dụng để ức chế phát triển Proteus spp., giúp giảm khả dương tính giả từ vi sinh vật Công thức Thành phần cho lít nước cất* Lactose 7,5g Sucrose 7,5g Sodium thiosulfate .6,8g Lysine 5g Sodium Chloride 5g Xylose 3,75g Chiết xuất nấm men 3g Sodium Deoxycholate .2,5g Ferric Ammonium Citrate 0,8g Phenol Red 0,08g Agar 15g pH cuối 7,4±0,2, ủ 250C Ngoài ra, Cat No G245 chứa novobiocin 10mg/ml *Điều chỉnh và/hoặc bổ sung theo yêu cầu để đáp ứng tiêu chuẩn tiêu chất lượng Bảo quản thời gian sử dụng: Bảo quản: Nhận bảo quản 280C tránh ánh sáng trực tiếp Môi trường không nên sử dụng có dấu hiệu hư hỏng (co lại, nứt đổi màu), tạp nhiễm, hạn sử dụng Sản phẩm nhạy cảm với anh sáng nhiệt độ; tránh ánh sáng, nhiệt độ cao, độ ẩm đóng băng Ngày hết hạn áp dụng cho sản phẩm nguyên bao bì lưu trữ theo hướng dẫn Sản phẩm có hạn sử dụng từ ngày sản xuất: 90 ngày G245 XLD với Novobiocin J24 XLD agar/Vogel Johnson Agar J414 XLD agar 100 ngày G65 XLD agar Thận trọng Sản phẩm sử dụng cho chuẩn đoán ống nghiệm (ngoại trừ Cat No G245 J414 sử dụng cho phòng thí nghiệm) sử dụng nhân viên phòng thí GVHD: Hoàng Xuân Thế nghiệm đào tạo đủ khả Tuân theo định phòng ngừa hiểm sinh học phe duyệt kỹ thuật vô trùng Khử trùng tất chất thải sinh học nguy hiểm trước xử lý Tiến trình thực Tập hợp mẫu: Tra cứu tài liệu tham khảo thông tin tập hợp mẫu Nguyên liệu lây nhiễm phải nộp trực tiếp cho phòng thí nghiệm không chậm trễ xử lý, mẫu nên tiêm vào môi trường chuyên chở phù hợp làm lạnh cấy Phương pháp sử dụng: cho phép đĩa làm ấm tới nhiệt độ phòng, bề mặt thạch khô trước cấy Cấy ria liên tục mẫu sớm tốt sau thu thập Nếu mẫu nuôi cấy miếng gạc, cuộn miếng gạc khu vực nhỏ bề mặt thạch Cấy phân lập với que cấy vòng Ủ đĩa hiếu khí 35-37 0C, 18-24h Kiểm tra hình thái, đặc điểm khuẩn lạc phản ứng tan máu Nó khuyến cáo canh làm giàu chọn lọc, canh GN canh Selenite Cystine (Cat no K39, or tương tự K79, với môi trường thạch đĩa chọn lọc khác, thạch HE (Cat no G63) Khuyến cáo thực để tối ưu hóa việc phục hồi vi sinh vật gây bệnh đường ruột Giải thích kết Salmonella spp xuất khuẩn lạc đỏ với tâm đen Những vi sinh vật dương tính Lysine xuất màu đỏ Shigella spp Cũng xuất màu đỏ Những vi sinh vật lên men khác âm tính lysine, E.Coli, Citrobacter Proteus spp xuất màu vàng Tra cứu danh sách tham khảo để nhận diện hình thái khuẩn lạc test sinh hóa yêu cầu để nhận diện Giới hạn: Nó khuyến cáo test sinh hóa và/hoặc huyết học biểu khuẩn lạc từ môi trường tinh khiết để nhận diện hoàn toàn, số loài Salmonella hình thành khuẩn lạc đỏ tâm đen, tương tự khuẩn lạc Shigella Thêm vào đó, vài loài Shigella lên men lactose, Salmonella thất bại với thử nghiệm decarboxylate lysine không nhận môi trường Quá trình chậm trễ 2-3 mẫu phân không bảo quản tốt gây hại cho việc phục hồi nhiều vi sinh vật gây bệnh đường ruột, vi sinh vật dễ bị ảnh hưởng thay đổi tính acid xuất hiên giảm nhiệt độ phân Những khuẩn lạc màu đỏ, dương tính giả xuất với Proteus Pseudomonas Nuôi cấy 48 dẫn đến kết dương tính giả Vật liệu cần không cung cấp Nguồn cung cấp vi sinh tiêu chuẩn thiết bị que cấy vòng, slide, thuốc nhuộm, môi trường khác, kính hiển vi, lò nung, tủ ấm, … huyết thuốc thử sinh hóa, không cung cấp Hãy tham khảo tài liệu “Những hạn chế phương pháp việc bảo hành” website tài liệu kỹ thuật chuẩn đoán Hardy để nhiều thông tin Kiểm soát chất lượng Những vi sinh vật sau thường dùng để thử nghiệm Hardy Diagnostics: Kiểm tra vi Phương Nuôi cấy Kết sinh vật pháp nuôi Thời gian Nhiệt độ Áp suất cấy* Salmonella A 24h 350C Hiếu khí Những GVHD: Hoàng Xuân Thế enterica ATCC 140228 ® Shigella A flexneri ATCC ® 120222 Enterococcu B s faecalis ATCC ® 29212 24h 350C Hiếu khí 24h 350C Hiếu khí Escherichia B coli ATCC ® 25922 24h 350C Hiếu khí khuẩn lạc phát triển, màu đỏ với tâm đen Khuẩn lạc phát triển từ đỏ đến hồng Một phần việc ức chế hoàn toàn; khuẩn lạc nhỏ, rõ ràng Một phần ức chế hoàn toàn; khuẩn lạc từ vàng đến đỏ vàng *Hãy tham khảo tài liệu “Phương pháp nuôi cấy cho môi trường QC” website Tài liệu kỹ thuật chuẩn đoán Hardy để nhiều thông tin Hình dạng bên Thạch XLD xuất màu đỏ, rõ ràng có kết tủa nhẹ V Hektoen Enteric (HE) Agar Cat no G63 Cat No J139 Cat no.J415 Hektoen Enteric (HE) Agar, 10 đĩa/túi đĩa 15x100mm, 18ml Hektoen Enteric (HE) Agar/ 10 đĩa/túi SS Agar, đĩa đổ kép 15x100mm Hektoen Enteric (HE) Agar, 10 đĩa/túi đĩa lớp 15x100mm, 5ml/lần Mục đích sử dụng: Thạch Hokteon Enteric Hardy Diagnostics môi trường chọn lọc phân biệt sử dụng để phân lập phân biệt vi sinh vật gram dương gây bệnh đường ruột Sơ lược King Metger phát triển Thạch HE hiệu để tăng phục hồi loài Salmonella Shigella công thức Thạch Salmonella-Shigella (SS) trước GVHD: Hoàng Xuân Thế Công thức thạch HE kết hợp lượng lớn peptone để bù đắp cho tác động ức chế muối mật Ngoài ra, natri deoxycholate loại bỏ giảm lượng muối mật Muối mật cho phép Thạch HE chọn lọc tự nhiên ức chế vi khuẩn gram dương Muối mật gây độc cho số chủng gram âm Salicin, sucrose, lactose nguồn carbohydrat để lên men có Họ tạo khác biệt tối ưu vi khuẩn gây bệnh đường ruột Lactose sucrose, tăng tập trung, hỗ trợ cho việc phân biệt khả lên men chậm lactose vi khuẩn gây bệnh đường ruột Bromothymol blue acid fuchsin (Andrade’s) bổ sung chất thị Việc bổ sung sắt amoni citrate natri thiosunfate cho phép phát H 2S, ghi nhận việc tạo khuẩn lạc có tâm đen Natri thiosulfate nguốn nito sắt amoni citrate chất thị Thạch HE khuyến cáo môi trường đĩa cho việc nuôi cấy Enterobacteriaceae từ mẫu phân Điều chất vừa chọn lọc tự nhiên tốt cho thuộc tính khác biệt Công thức Nguyên liệu cho lít nước:* Peptone từ mô tế bào động vật 12g Lactose 12g Sucrose 12g Muối mật 9g Natri clorua 5g Natri thiosulfate 5g Chiết xuất nấm men 3g Sallicin .2g Sắt amoni citrate 1,5g Acid fuchsin .0,1g Bromothymol Blue .0,064g Agar 13,5g Cuối pH 7,7±0,2 250C *Điều chỉnh và/hoặc bổ sung theo yêu cầu tiêu chất lượng Bảo quản hạn sử dụng Bảo quản: Khi nhận bảo quản cửa hàng 2-8 0C Các sản phẩm không nên sử dụng có dấu hiệu tạp nhiễm, suy thoái, hoạc hạn sử dụng Sản phẩm nhạy cảm với ánh sáng nhiệt độ; bảo vệ khỏi ánh sáng, nhiệt, độ ẩm đóng băng Ngày hết hạn áp dụng cho sản phẩm nguyên bao bì bảo quản theo hướng dẫn Sản phẩm có hạn sử dụng sau từ ngày sản xuất: 90 ngày G63 Hektoen Enteric (HE) Agar J139 Hektoen Enteric (HE) Agar/SS Agar J415 Hektoen Enteric (HE) Agar Hãy tham khảo tài liệu “Bảo quản” website Tài liệu Kỹ thuật Chuẩn đoán Hardy để nhiều thông tin Thận trọng 10 GVHD: Hoàng Xuân Thế coli ATCC ® 25922 Pseudomona C s aerugunosa ATCC ® 27853 18-24 350C Hiếu khí Shigella C sonnei ATCC ® 9290 18-24 350C Hiếu khí mặt nghiêng vàng, bề sâu vàng, sinh khí, không sinh H2S Phát triển; mặt nghiêng đỏ, bề sâu đỏ, không sinh khí, không H2S Phát triển; mặt nghiêng đỏ, bề sâu vàng, không sinh khí, không H2S Biểu bên Thạch Triple Sugar Iron (TSI) nên trắng đục nhẹ, với kết tủa nhẹ, màu đỏ 21 GVHD: Hoàng Xuân Thế Bài Phương pháp định lượng Tổng số vi sinh vật hiếu khí I Plate Count Agar (PCA) Plate Count Agar khuyến cáo để xác định số lượng đĩa vi sinh vật từ thức ăn, nước uống, nước thải mẫu bệnh phẩm Thành phần** Nguyên liệu Gam/lít Casein thủy phân enzyme Chất chiết nấm men 2,5 Dextrose Agar 15 pH cuối (tại 250C) 7±0,2 **Công thức điều chỉnh, hiệu chuẩn hóa để phù hợp với thông số hiệu suất Hướng dẫn Hòa tan 23,5 gam 1000ml nước cất Đun sôi để hòa tan hoàn toàn môi trường Vô trùng nồi hấp áp suất 15 lbs (121 0C) 15 phút Trộn rót vào đĩa petri vô trùng Nguyên tắc giải thích Plate Count Agar xây dựng Buchbinder et al, khuyến cáo APHA FDA Casein thủy phân enzyme cung cấp acid amin chất đạm phức tạp Chiết xuất nấm men cung cấp Vitamin B hoàn chỉnh APHA khuyến cáo sử dụng kỹ thuật đổ đĩa Mẫu pha loãng độ pha loãng thích hợp thêm vào đĩa petri Thạch vô trùng nóng chảy thêm vào đĩa đĩa di chuyển nhẹ nhàng để đảm bảo trộn đồng mẫu với môi trường thạch Phương pháp đếm đĩa ưu thích với phương pháp cấy bề mặt, cho kết cao Plate Count Agar thích hợp cho đếm số vi khuẩn phòng vô trùng Kiểm soát chất lượng Bột mịn nhão đồng chảy tự màu vàng Sự đông Cứng, tương đương với 1,5% gel agar Màu sắc môi trường chuẩn bị Màu vàng sáng rõ đến gel trắng đục hình thành đĩa petri Phản ứng Phản ứng 2,35% w/v dung dịch nước 250C, pH 7±0,2 pH 6,8-7,2 Độ nhạy môi trường Đặc điểm môi trường quan sát sau nuôi cấy 35-37 0C 18-48 Bảo quản thời gian bảo hành Bảo quản 30 0C thùng kín bảo quản môi trường chuẩn bị 2-8 0C Sử dụng trước hạn sử dụng ghi nhãn 22 GVHD: Hoàng Xuân Thế 23 GVHD: Hoàng Xuân Thế Bài Phương pháp định lượng tổng số Nấm menNấm mốc I Dichloran Rose Bengal Chloramphenical (DRBC) Agar Cat.no.G389 Cat.no.W89 Dichloran Rose Bengal Chloramphenicol (DRBC) Agar, đĩa 15x100mm, 18ml Dichloran Rose Bengal Chloramphenicol (DRBC) Agar, đĩa 15x100mm, 26ml 10 đĩa/ túi 10 đĩa/ túi Mục đích sử dụng Dichloran Rose Bengal Chloramphenicol (DRBC) Agar Hardy Diagnostics khuyến cáo để xác định số lượng nấm men nấm mốc thực phẩm thực phẩm bổ sung Sản phẩm không sử dụng chuẩn đoán bệnh cho người Sơ lược Nấm phục hồi không khí, đất, hồ, ao, sông, nước thải, nước Do khả dị dưỡng tự nhiên chúng khả thích nghi chúng với nhiều điều kiện môi trường, nấm thường xuyên chất gây ô nhiễm nhiều sản phẩm khác nhau, bao gồm thực phẩm, thiết bị chế biến thực phẩm sạch, thiết bị lưu trữ thực phẩm Khi nấm men nấm mốc phát triển phạm vi pH nhiệt độ rộng, tăng trưởng xảy hầu hết loại thực phẩm, bao gồm thực phẩm chế biến nguyên liệu thực phẩm Smith Dawson thấy thêm Rose bengal tạo môi trường trung tính (pH 6,8) cho phép nhiều khuẩn lạc phát triển so với môi trường acid hóa Sabouraud Dextrose Agar Theo truyền thống, môi trường pH thấp sử dụng để tính số nấm men nấm mốc từ nước, đất thực phẩm Môi trường cho so với môi trường chọn lọc với kháng sinh Việc sử dụng kháng sinh để trấn áp vi khuẩn, acid, kết cải thiện tổn thương tế bào nấm (nhạy cảm acid), kiểm soát tốt vi khuẩn, can thiệp suốt thời gian đếm phần thực phẩm kết tủa DRBC Agar Hardy Diagnostics chứa peptone nguồn cacbon nitơ, dextrose nguồn lượng, magie sulfate cung cấp nguyên tố vi lượng Môi trường chứa Chloramphenicol, thêm để ức chế hầu hết phát triển vi khuẩn Ngoài chloramphenicol, rose bengal thêm vào để tăng tính chọn lọc giúp kiểm soát dự phát triển mức nấm mốc loài Neurospora Rhizopus Dichran thêm vào môi trường để ngăn chặn lây lan nấm mốc cách giảm đường kính khuẩn lạc DRBC Agar tuân thủ theo hướng dẫn APHA kiểm tra nấm thực phẩm Công thức Nguyên liệu cho lít nước cất:* Dextrose 10g Peptone 5g 24 GVHD: Hoàng Xuân Thế Monopotassium Phosphate Magie Sulfate Chloramphenicol Rose bengal Dichloran Agar 1g 0,5g 0,1g 0,025g 0,02g 15g pH cuối 5,6±0,2 250C Bảo quản hạn sử dụng Bảo quản: Nhận cửa hàng bảo quản 2-80C, tránh xa ánh sáng trực tiếp Môi trường không nên sử dụng có dấu hiệu hư hỏng (co lại, nứt vỡ biến màu), môi trường tan huyết, nhiễm tạp, hạn sử dụng Sản phẩm nhạy cảm với ánh sáng nhiệt độ; tránh ánh sáng, nhiệt độ ẩm cao, lạnh đông Hạn sử dụng áp dụng cho sản phẩm nguyên bao bì bảo quản theo hướng dẫn Sản phẩm sau có hạn sử dụng kể từ ngày sản xuất: 90 ngày W89 Dichloran Rose Bengal Chloramphenicol (DRBC) Agar Cẩn trọng Sản phẩm dùng cho chuẩn đoán ống nghiệm dùng nhân viên phòng thí nghiệm huấn luyện đầy đủ khả Tuân theo định phòng ngừa nguy hiểm sinh học phê duyệt kỹ thuật vô trùng Tất mẫu phòng thí nghiệm phải xem xét khả lây nhiễm xử lý theo “đề phòng tiêu chuẩn” “Hướng dẫn phòng ngừa cách ly” có sẵn từ Trung tâm Kiểm soát Phòng ngừa dịch bệnh www.cdc.gov/ncidod/dhqp/gl_isolation.html Để biết thêm thông tin liên quan đến biện pháp phòng ngừa cụ thể cho công tác phòng chống lây nhiễm từ nguyên liệu dụng cụ phòng thí nghiệm, khuyến nghị cho việc quản lý tiếp xúc với bệnh truyền nhiễm, tham khảo tài liệu CLSI M29:Bảo vệ người lao động phòng thí nghiệm từ Nhiễm trùng nghề nghiệp gây nên: Hướng dẫn chấp nhận Khử trùng tất chất thải sinh học nguy hiểm trước xử lý Cách tiến hành Nếu sử dụng phương pháp pha loãng, thêm 40ml mẫu thực phẩm vào 200ml Peptone water 0,1% (Cat.no.U201) đồng máy dập mẫu phút Nuôi cấy 0,1ml mẫu bề mặt thạch Dàn dịch cấy toàn bề mặt sử dụng que cấy que trải vô trùng (Cat.no.174CS200) Ủ đĩa 22-250C kiểm tra đĩa sua 3,4 ngày nuôi cấy Ghi lại kết đơn vị hình thành khuẩn lạc gram thực phẩm Giải thích kết Khuẩn lạc nên xuất rõ ràng sau nhày nuôi cấy Khuẩn lạc nấm men xuất màu hồng hấp thu rose bengal Báo cáo tính đơn vị hình thành khuẩn lạc (CFU) gam hay ml mẫu Những hạn chế 25 GVHD: Hoàng Xuân Thế Được khuyến cáo thử nghiệm hóa sinh và/hoặc huyết học thực khuẩn lạc từ môi trường để nhận biết hoàn toàn Điều quan trọng bảo vệ môi trường tránh ánh sáng từ thoái quan rose bengal làm sinh hợp chất gây độc cho nấm Do tính chọn lọc tự nhiên, số chủng phát triển không phát triển môi trường Chloramphenicol không ức chế tất hệ vi khuẩn Vẻ bên Dichloran Rose Bengal Chloramphenicol (DRBC) Agar nên xuất màu hồng sáng, dục nhẹ II DG-18 (Dichloran Glycerol) Agar Cat.no.W85 DG-18 Agar, đĩa 15x100mm, 26ml 10 đĩa/ túi Mục đích sử dụng Agar khuyến cáo môi trường chọn lọc phân lập nuôi cấy nấm mốc Sản phẩm không sử dụng cho chuẩn đoán bệnh người Sơ lược DG18 Dichloran Glycerol Agar Hardy Diagnostics công thức Hocking Pitt khuyến cáo cho tính số nấm men nấm mốc từ thực phẩm khô chứa dầu Ví dụ trái loại gia vị, sản phẩm bánh kẹo, ngũ cốc loại hạt, thịt khô cá Môi trường chọn lọc cao, có áp suất thẩm thấu cao, cho phép đếm số lượng phát triển nấm Một nghiên cưu song song sử dụng DG18 Agar DRBC, Dichloran Rose Bengal Chloramphenicol Agar cho thấy DG18 Agar có khả phục hồi lớn tăng trưởng mạnh mẽ hai loài nấm mốc, Aspergillus Penicilloides Wallemia sebi, thường tìm thấy thực phẩm khô DG18 Agar Hardy Diagnostics chứa peptone cung cấp nitơ, vitamins acid amin đòi hỏi cho phát triển vi khuẩn Glucose cung cấp nguồn lượng Phosphat đóng vai trò chất đệm Các muối vô cơ, magie sulfate, kích thích tăng trưởng nấm tăng cường hình thành bào tử Dichloran ức chế lây lan nấm mucoraceous hạn chế kích thước khuẩn lạc chi khác thường có mẫu thực phẩm Chloramphenicol ức chế khuẩn lạc vi khuẩn điển hình hiên diện môi trường mẫu thực phẩm Agar đóng vai trò làm đông Glycerol làm giảm hoạt độ nước (aW) môi trường vào khoảng 0,999-0,95 cung cấp thêm nguồn cacbon Công thức Nguyên liệu cho lít nước khử ion:* Glucose 10g Peptone 5g Potassium Dihydrogen Phosphate 1g Magie Sulfate 0,5g Chloramphenicol 0,1g Dichloran 0,002g Glycerol 220ml 26 GVHD: Hoàng Xuân Thế Agar 15g pH cuối 5,6±0,2 250C *Điều chỉnh và/ bổ sung theo yêu cầu tiêu chuẩn hiệu suất Bảo quản thời hạn sử dụng Bảo quản: Bảo quản từ 2-80C, tránh xa ánh sáng trực tiếp Môi trường không nên sử dụng có dấu hiệu hư hỏng (co lại, vỡ, biến màu), tạp nhiễm, hạn sử dụng Sản phẩm nhạy cảm với ánh sáng nhiệt độ; tránh xa ánh sáng, nhiệt độ, độ ẩm cao lạnh đông Hạn sử dụng áp dụng cho sản phẩm nguyên bao bì bảo quản theo dẫn Sản phẩm có hạn sử dụng kể từ ngày sản xuất: 90 ngày W85 DG-18 Agar Cẩn trọng: tương tự DRBC Agar Cách tiến hành: Hãy tham khảo tài liệu tham khảo phù hợp cho việc sử dụng DG-18Agar cho thử nghiệm nấm men nấm mốc Tiến hành cho mẫu vào túi dập mẫu, thêm 40g mẫu vào 200ml peptone water 0,1%.(Cat.no.U201) Lưu ý: sản phẩm bột, lắc theo định kỳ 30 phút sử dụng pepton water 0,1% Pha loãng mẫu 1:10 peptone water 0.1% 0,1ml mẫu chuẩn bị cho đĩa Nuôi cấy 15-300C kiểm tra phát triển ngày Giải thích kết Quan sát ghi lại số nấm men và/ nấm mốc diện báo cáo số khuẩn lạc gam thực phẩm Những hạn chế Phân loại nấm men nấm mốc dựa hoàn toàn vào kính hiển vi kiểm tra trực tiếp chuẩn bị môi trường, việc phân tích hóa sinh huyết học Do thay đổi dinh dưỡng, số chủng phát triển hoàn toàn không phát triển môi trường 27 GVHD: Hoàng Xuân Thế Bài Phương pháp định lượng Coliforms thực phẩm (Phương pháp MPN) I 17349 Lauryl Sulfate Tryptone Broth (LSB) Môi trường chọn lọc Mallmann Darby (1941) thử nghiệm giả định cho Coliforms tăng sinh chọn lọc chúng việc kiểm tra nước, sản phẩm sữa thực phẩm Sự khác biệt với Cat no 61749 tryptose sử dụng thay Casein Thành phần Nguyên liệu Gam/lít Tryptose 20 Lactose Dikali hydrogen phosphate 2,75 Kali dihydrogen phosphate 2,75 Natri lauryl sulfate 0,1 Natri clorua pH cuối 6,8±0,2 250C Canh chuẩn bị trở nên đục bảo quản 2-8 0C, nên làm nhiệt độ phòng Bảo quản bột khử nước, nơi khô ráo, thùng chứa kín 2-25 0C Hướng dẫn: Hòa tan 35,6g lít nước cất Phân phối vào bình máy 10ml ống thử nghiệm chứa ống Durham lật ngược Vô trùng nồi hấp 121 0C 15 phút Làm nguội chậm để ngăn chặn bong bóng ống Durham Sản phẩm khí từ trình lên men lactose biểu thị cách dùng ống Durham Ủ nhiệt độ mong muốn vòng 18-24 Trong trường hợp hình thành khí ống Durham tăng hoặc/ hiển thị bong bóng Môi trường đục kèm theo hình thành khí vòng 48 thử nghiệm giả định dương tính cho diện E.coli và/ vi sinh vật Coliforms khác Nguyên tắc giải thích: Tryptose cung cấp nitơ, hợp chất carbon, vitamin acid amin Lactose đường để lên men Natri sodium sulphate ức chế vi sinh vật khác Coliforms Muối mật ức chế vi khuẩn gram dương đặc biệt trực khuẩn Faecal Streptococci Natri clorua trì áp suất thẩm thấu cho môi trường Kali phosphate kiểm soát pH suốt trình lên men lactose Vi khuẩn dương tính lactose chuyển hóa tạo thành khí, vòng 24 chứng cho hiên diện Coliforms Sau nuôi cấy, ủ ống 37 0C 24-48 Đối với ống có trình lên men (lên men sơ cấp), cấy hai ống Lauryl Tryptose Broth từ hai ống lên men sơ cấp ủ ống tương ứng 370C 440C Nếu có lên men ống cấy 440C sau đến 24 giờ, thực kiểm tra indole cách thêm thuốc thử Kovac’s (Cat no 60983) Một thử nghiệm indole dương tính ống cho thấy sản phẩm khí 440C cho thấy diện Escherichia coli Nếu trình lên men không xuất ống ủ 37 0C sau 24 giờ, lên men thứ cấp cho vi sinh vật khác Coliforms 28 GVHD: Hoàng Xuân Thế Đặc điểm môi trường sau Vi sinh vật (ATCC) Enterobacter aerogenes (13048) Escherichia coli (25922 11775) Salmonella typhimurium (14028) Staphylococcus aureus (25923) Enterococcus faecalis (29212) II Phát triển +++ Hình thành khí Thử nghiệm Indole (440C) + - +++ + + +++ - - - - - - - - Brilliant Green Bile Broth (BGBB) hay Brilliant Green Lactose Bile Broth (BGBL) Mục đích sử dụng Brilliant Green Bile Broth sử dụng để nhận biết đếm số Coliforms, vi khuẩn Coliform chịu nhiệt Escherichia coli (thử nghiệm Mackenzie) sữa, sản phẩm từ sữa thực phẩm khác, nước uống nước thải Lịch sử Nghiên cứu phát triển môi trường nuôi cấy ức chế vi sinh vật khác Coliforms mà nhà vi khuẩn học quan tâm lâu Năm 1926, Durham Schoenlein nghiên cứu tỉ lệ mật brilliant green để có kết tốt Jordan cho thấy môi trường tốt Broth Lactose để phát vi khuẩn Coliforms nước Đối với việc kiểm soát sữa khử trùng, MacCrady Langevin thỏa thuẫn dùng brilliant green để phát vi khuẩn Coliforms Mackenzie xác định nồng độ brilliant green đủ ức chế vi khuẩn yếm khí lên men lactose, đặc biệt Clostridium perfringens Nguyên tắc Sự diện đồng thời mật bò brilliant green ức chế hầu hết vi khuẩn gram dương vi khuẩn gram âm khác Coliforms Nồng độ brilliant green xác định rõ ràng để ngăn chặn phát triển vi khuẩn yếm khí lên men lactose 440C, tránh gây dương tính giả Sự phát triển vi khuẩn Coliforms thể việc tạo độ đục sinh khí ống Durham, kết trình lên men lactose Chuẩn bị môi trường • Môi trường nồng độ đơn: Hòa tan 40g môi trường khử nước (BK002) lít nước cất khử ion Khuấy từ từ đến tan hoàn toàn Phân phối vào ống có kích thước thích hợp chứa ống Durham Vô trùng nồi hấp 1210C 15 phút Sau làm mát, ống Durham không nên chứa không khí mắc kẹt Lưu ý: M.U.G (4-methylumbelliferyl-β-D-glucuronide) thêm vào môi trường để phát Escherichia coli (tham khảo chuyên khảo MUG 50 mg Supplement, BS024) 29 GVHD: Hoàng Xuân Thế • Môi trường nồng độ kép: Hòa tan 80g môi trường nước (BK002) vào lít nước cất nước khử ion Khấy từ từ hòa tan hoàn toàn Phân phối 10ml vào ống có kích thước thích hợp (không có ống Durham) 10ml ống Tiệt trùng nồi hấp 1210C 15 phút Hướng dẫn sử dụng • Môi trường nồng độ đơn Làm lạnh môi trường đến 250C Ủ ống chuẩn bị mô tả sử dụng môi trường pha sẵn (BM011) với ml dịch cấy pha loãng thập phân • Môi trường nồng độ kép Làm lạnh đến 250C Cấy ống với 10ml dịch cấy Che đậy nút thạch vô trùng (thạch vi khuẩn loại E), trước trì 44-47 0C Nuôi cấy Đối với vi khuẩn Coliforms, ủ 24 48 30 37 0C, phụ thuộc vào việc phân tích sau Đối với vi khuẩn Coliforms chịu nhiệt, ủ 24 48 440C Chuyển vòng cấy môi trường nồng độ kép đến nồng độ đơn ủ thêm 24 đến 48 đến đọc kết Kết Lên men lactose, kết sinh khí ống Durham (số lượng 1/10 số lượng ống) vòng chưa đầy 48 giờ, cho thấy diện vi khuẩn Coliforms Vi khuẩn xác định cách cấy chuyền từ ống sinh khí sang môi trường thạch thích hợp: − BCP lactose agar (BK023) − EMB agar (BK056) Sự diện Escherichia coli khẳng định cách thực thử nghiệm Mackenzie sau: − Cấy vòng từ ống sinh khí vào ống chứa BGBB với ống Durham ống Peptone Water (BK084) − Ủ (44±0,50C) bồn nước kiểm soát 24 48 Dưới điều kiện này, Escherichia coli đồng thời thể đặc điểm sau: − Phát triển BGBB: dương tính sinh khí − Sản phẩm indole (thuốc thử Ehrlich-Kovac’s): dương tính Chú ý: Trong nội dung miêu tả tron NF ISO 4832, co thể cần thiết xác định kiểu khuẩn lạc thạch VRBL thông tính chất sinh khí quan sát canh Brilliant Green Bile (BGBB) Thành phần tiêu biểu môi trường nồng độ đơn (có thể điều chỉnh để có hiệu suất tối ưu) Cho lít môi trường: 30 GVHD: Hoàng Xuân Thế Tryptone .10g Mật bò 20g Lactose 10g Brilliant green .13,3mg pH môi trường sử dụng sẵn 250C:7,2±0,2 Kiểm soát chất lượng Môi trường khử nước: bột màu xanh, chảy tự đồng Môi trường vừa chuẩn bị: dung dịch màu xanh cây, Môi trường phản ứng điển hình sau 48 ủ 30 0C Vi sinh vật Phát triển Sinh khí (1) Escherichia coli ATCC® Ưu tú, vết >=5mm (ống Durham) 25922 (1) Citrobacter freundii ATCC Ưu tú, vết >=5mm (ống Durham) 43864 Enterococcus faecalis ức chế phần, 0-1 vết Âm tính ATCC 29212 Staphylococcus aureus ức chế, vết Âm tính ATCC 25923 (2) Escherichia coli RIVM ức chế hoàn toàn >=5mm (ống Durham) WR1 (2) Enterococcus faecalis ức chế hoàn toàn Âm tính CCM 2541 (1) dịch cấy [...]... của các chất kháng khuẩn có trong mẫu Ngoài ra, thuốc kháng sinh có thể thay đổi đặc trưng của vi sinh vật trên môi trường Nó được khuyến cáo là canh tăng sinh chọn lọc (GN và Selenite Cystein) được sử dụng cùng với môi trường đĩa thạch chọn lọc để phân lập tối ưu những vi khuẩn gây bệnh đường ruột Muối mật trong môi trường có thể kết tinh theo thời gian Chúng xuất hiện như những mạng nhện nhỏ trong môi. .. Diagnostics được khuyến cáo sử dụng như một môi trường tăng trưởng chung cho vi c phân lập và nuôi cấy vi sinh vật Môi trường này cũng được khuyến cáo sử dụng trong nuôi cấy, bảo quản, duy trì và vận chuyển các môi trường thuần của các vi sinh vật Sơ lược Thạch Tryptic Soy chứa bột đậu nành và casein đã được đồng hóa, làm nó thích hợp cho sự phát triển của nhiều loài vi sinh vật khó tính và không khó tính... truyền thống, môi trường pH thấp được sử dụng để tính số nấm men và nấm mốc từ nước, đất và thực phẩm Môi trường hiện nay được cho là kém hơn so với môi trường chọn lọc với kháng sinh Vi c sử dụng kháng sinh để trấn áp vi khuẩn, chứ không phải là acid, kết quả cải thiện tổn thương tế bào nấm (nhạy cảm acid), kiểm soát tốt hơn các vi khuẩn, và ít can thiệp trong suốt thời gian đếm một phần thực phẩm kết... chế biến thực phẩm sạch, và các thiết bị lưu trữ thực phẩm Khi nấm men và nấm mốc có thể phát triển trong phạm vi pH và nhiệt độ rộng, tăng trưởng có thể xảy ra trên hầu hết các loại thực phẩm, bao gồm thực phẩm chế biến và nguyên liệu thực phẩm Smith và Dawson thấy rằng thêm Rose bengal tạo môi trường trung tính (pH 6,8) cho phép nhiều khuẩn lạc phát triển hơn so với môi trường acid hóa Sabouraud Dextrose... nghiệm, và các khuyến nghị cho vi c quản lý tiếp xúc với bệnh truyền nhiễm, hãy tham khảo tài liệu CLSI M29 Khử trùng tất cả các chất thải sinh học nguy hiểm trước khi xử lý Cách tiến hành Thu thập mẫu: Sản phẩm không nhằm mục đích phân lập sơ cấp cho mẫu bệnh phẩm Nó chỉ nên được sử dụng với môi trường vi sinh vật phân lập Sản phẩm này được kết 19 GVHD: Hoàng Xuân Thế hợp với những thử nghiệm sinh hóa... sát được nếu đọc trễ hơn 24 giờ Một số vi sinh vật sản xuất H2S có thể sản xuất acid trong mặt thạch sâu môi trường Tuy nhiên, H2S yêu cầu môi trường acid, vì vậy phần thạch sâu được xem là có tính acid TSI không nhạy trong nhận biết H 2S nên cần so sánh với môi trường chứa sắt khác, ví dụ như môi trường Sulfide Indole Motility (SIM) (Cat no.Q30) Do đó, các vi sinh vật có sản xuất H2S yếu có thể chỉ... Coliforms, vi khuẩn Coliform chịu nhiệt và Escherichia coli (thử nghiệm Mackenzie) trong sữa, các sản phẩm từ sữa và các thực phẩm khác, nước uống và nước thải Lịch sử Nghiên cứu và phát triển môi trường nuôi cấy ức chế vi sinh vật khác Coliforms mà các nhà vi khuẩn học quan tâm rất lâu Năm 1926, Durham và Schoenlein nghiên cứu tỉ lệ giữa mật và brilliant green để có kết quả tốt Jordan cho thấy rằng môi trường. .. Staphylococcus aureus trong thực phẩm, các sản phẩm từ sữa, và nguyên liệu khác Staphylococci dương tính coagulase có thể phát triển và sinh sản trong các sản phẩm mỹ phẩm Những sản phẩm này được kiểm tra có sự hiện diện của Staphylococci dương tính coagulase bằng phương pháp vi sinh tiêu chuẩn Nguyên tắc của phương pháp Casein thủy phân enzyme và cao thịt là nguồn cacbon và nitơ trong Baird Packer Agar... mốc trong thực phẩm và thực phẩm bổ sung Sản phẩm này không sử dụng chuẩn đoán bệnh cho người Sơ lược Nấm được phục hồi trong không khí, đất, hồ, ao, sông, nước thải, và nước sạch Do đó khả năng dị dưỡng tự nhiên của chúng và khả năng thích nghi của chúng với nhiều điều kiện môi trường, nấm cũng thường xuyên là chất gây ô nhiễm của nhiều sản phẩm khác nhau, bao gồm thực phẩm, thiết bị chế biến thực phẩm. .. khi hòa tan hoàn toàn Phân phối 10ml vào ống có kích thước thích hợp (không có ống Durham) tại 10ml mỗi ống Tiệt trùng trong nồi hấp ở 1210C trong 15 phút Hướng dẫn sử dụng • Môi trường nồng độ đơn Làm lạnh môi trường đến 250C Ủ các ống chuẩn bị như mô tả hoặc sử dụng môi trường pha sẵn (BM011) với 1 ml dịch cấy và pha loãng thập phân • Môi trường nồng độ kép Làm lạnh đến 250C Cấy các ống với 10ml dịch ... Diagnostics khuyến cáo sử dụng môi trường tăng trưởng chung cho vi c phân lập nuôi cấy vi sinh vật Môi trường khuyến cáo sử dụng nuôi cấy, bảo quản, trì vận chuyển môi trường vi sinh vật Sơ lược Thạch... truyền thống, môi trường pH thấp sử dụng để tính số nấm men nấm mốc từ nước, đất thực phẩm Môi trường cho so với môi trường chọn lọc với kháng sinh Vi c sử dụng kháng sinh để trấn áp vi khuẩn, acid,... cấp cho mẫu bệnh phẩm Nó nên sử dụng với môi trường vi sinh vật phân lập Sản phẩm kết 19 GVHD: Hoàng Xuân Thế hợp với thử nghiệm sinh hóa khác để nhận biết giống phân lập từ môi trường Phương pháp