TÌM HIỂU QUÁ TRÌNH PHÂN LẬP GIỐNG VI SINH VẬT THUẦN CHỦNG

Tìm hiểu quá trình phân lập giống vi sinh vật thuần chủng bao gồm khái niểm phân lập vi sinh vật và vi sinh vật thuần chủng, vì sao phải phân lập vi sinh vật, nguyên liệu thiết bị và cách phân lập, nấm mốc Aspergillus oryzae, Aspergillus niger và Mucor, kiểm tra vết cấy, kiểm tra độ thuần chủng.

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA CƠNG NGHỆ THỰC PHẨM KĨ THUẬT THỰC PHẨM TÌM HIỂU QUÁ TRÌNH PHÂN LẬP GIỐNG VI SINH VẬT THUẦN CHỦNG NHÓM 14 GVHD: TRẦN THỊ MINH HÀ DANH SÁCH NHÓM STT HỌ VÀ TÊN MSSV NGUYỄN THANH PHÚ 2005130108 TRẦN THỊ MINH NHUNG 2005130127 NGUYỄN THÙY TRANG 2005130101 LA THỊ HIỀN 2005130112 LÊ THỊ NHƯ NGỌC 2006130136 I Tổng quan Phân lập vi sinh vật gì???? Vi sinh vật chủng gì??? Khái niệm Phân lập vi sinh vật q trình tách riêng lồi vi sinh vật từ quần thể ban đầu đưa dạng khiết Đây khâu có ý nghĩa quan trọng việc nghiên cứu ứng dụng vi sinh vật Vi sinh vật dạng khiết giống vi sinh vật tạo từ tế bào ban đầu Vì phải đưa vsv dạng khiết?  Trong thiên nhiên vật phẩm nghiên cứu, vi sinh vật thường tồn dạng hỗn hợp gồm nhiều loài khác Muốn nghiên cứu hình thái, sinh lý, lý hố sử dụng vào thực tiễn lồi cần phải đưa chúng dạng khiết.  Để chọn giống vsv chủng, bước phải phân lập chúng từ nguồn tự nhiên: nước, đất, khơng khí,… L.Pauteur R.Koch đề nhiều phương pháp đặc biệt chủng khiết dùng công nghiệp phát triển, tìm chất sản xuất chất kháng sinh Việc phân lập chủng khiết nhiều thời gian công sứcNgày người ta dùng “sàng lọc” vừa nhanh vừa hiệu II.1 NGUYÊN LIỆU, MẪU VẬT Nguồn tự nhiên: nước, khơng khí, đất, mơ động thực vật, vật liệu hữu vô bị phân hủy Môi trường thạch để nuôi cấy vi sinh vật, nước cất vơ trùng để hịa tan mẫu II.2 DỤNG CỤ, THIẾT BỊ Các loại que cấy Đĩa petri Ống nghiệm, nút bông, giá để ống nghiệm Đèn cồn Bình tam giác Tủ ấm Kính hiển vi Máy lắc ống nghiệm Nồi chưng cách thủy (vi sinh vật kị khí)… Phân lập vi khuẩn Bacillus subtilis Cỏ khơ cắt nhỏ, phân, nước Bình tam giác, nút bơng, bếp đun (hay nồi viba), tủ ấm, kính hiển vi III Nguyên tắc phân lập Kiểm tra giống vsv từ mẫu tự nhiên làm huyền phù pha loãng, gieo mặt hộp petri đựng môi trường thạch dinh dưỡng Gieo cấy vi khuẩn pha loãng mơi trường dinh dưỡng đặc trưng (2% thạch cịn gọi agar) Ni dưỡng điều kiện thích hợp cho mọc khuẩn lạc tách biệt III Nguyên tắc phân lập Cấy tách từ khuẩn lạc mọc tách biệt sang ống môi trường dinh dưỡng thạch nghiêng để thu nhận chủng vi khuẩn khiết (do Robert Koch đề ra) Để phân lập chủng có tính chất đặc biệt (như chuyển hóa steroit), người ta dùng hỗn hợp nhiều chủng vi sinh vật đem nuôi cấy môi trường ta muốn thực biến đổi Sau nuôi ta chiết xuất vào sản phẩm, phân tích theo phương pháp sắc ký IV Quá trình phân lập giống VSV chủng Tạo khuẩn lạc riêng rẽ từ quần thể VSV ban đầu Phân lập VSV khiết Kiểm tra độ tinh khiết khuẩn lạc 1.TẠO RA CÁC KHUẨN LẠC RIÊNG RẼ TỪ QUẦN THỂ VSV BAN ĐẦU Nếu mẫu ban đầu dạng rắn phải chuyển dạng lỏng cách: Nghiền mẫu Hịa tan mẫu vào nước cất vơ trùng pha lỗng Sau thực mẫu dạng lỏng: Tiếp tục pha loãng nồng độ cần thiết Cấy mẫu môi trường đặc trưng PHÂN LẬP VSV THUẦN KHIẾT Phân lập vi sinh vật hiếu khí: Hút 0,1 ml dịch mẫu pha lỗng cho vào đĩa petri có mơi trường thích hợp Dùng que trải mẫu khắp mặt thạch Tiếp tục đĩa thứ 2, thứ 3… Ủ đĩa nhiệt độ thích hợp khoảng thời gian định ta thu khuẩn lạc riêng rẽ Cấy thạch nghiêng A B C A: hình chữ chi B: hình vịng xoắn C: hình vạch ngang song song PHÂN LẬP VSV THUẦN KHIẾT Phân lập vi sinh vật kỵ khí: Dùng mơi trường đặc ống nghiệm đem chưng cách thủy để loại bỏ khơng khí mơi trường Để nguội mơi trường 4550oC Hút 0,1 ml dịch cho vào ống mơi trường, đậy nút lại, lắc trịn quanh trục ống nghiệm Rót nhanh mơi trường ống nghiệm vào nắp đĩa petri, đậy thật nhanh nắp lại, cho nắp vào mơi trrường khơng cịn khơng khí PHÂN LẬP VSV THUẦN KHIẾT Phân lập vi sinh vật kỵ khí: Dùng parafin hàn kín phần tiếp xúc hai nắp đĩa petri ủ nhiệt độ thích hợp Sau vi sinh vật phát triển, chọn khuẩn lac riêng rẽ khối môi trường, dùng que cấy cắt khối môi trường cấy vào mơi trường lỏng thích hợp KIỂM TRA ĐỘ TINH KHIẾT CỦA KHUẨN LẠC Kiểm tra vết cấy Kiểm tra độ chủng khuẩn lạc Kiểm tra vết cấy Nếu vết cấy có bề mặt màu sắc đồng đều, chứng tỏ giống phân lập tinh khiết giữ lại Nếu vết cấy khơng nhauts loại bỏ Kiểm tra độ khuẩn lạc Chọn khuẩn lạc Tách khuẩn lạc, hịa tan, pha lỗng Nhỏ giọt dịch lên đĩa petri có mơi trường Dùng que trang trải khắp mặt đĩa Ủ đĩa petri Quan sát Tài liệu tham khảo Bài 4: Phân lập- Nuôi cấy- Bảo quản vi sinh vật, http:// tailieu.vn/doc/bai-so-4-phan-lap-nu oi-cay-bao-quan-vi-sinh-vat-972155 html Thí nghiệm vi sinh vật học, ThS Lê Xuân Phương, https:// www.lhu.edu.vn ... quan Phân lập vi sinh vật gì???? Vi sinh vật chủng gì??? Khái niệm Phân lập vi sinh vật q trình tách riêng lồi vi sinh vật từ quần thể ban đầu đưa dạng khiết Đây khâu có ý nghĩa quan trọng vi? ??c... nghiên cứu ứng dụng vi sinh vật Vi sinh vật dạng khiết giống vi sinh vật tạo từ tế bào ban đầu Vì phải đưa vsv dạng khiết?  Trong thiên nhiên vật phẩm nghiên cứu, vi sinh vật thường tồn dạng... hỗn hợp nhiều chủng vi sinh vật đem nuôi cấy môi trường ta muốn thực biến đổi Sau nuôi ta chiết xuất vào sản phẩm, phân tích theo phương pháp sắc ký IV Quá trình phân lập giống VSV chủng Tạo khuẩn