khảo sát khả năng tạo phôi soma của cây sâm việt nam (panax vietnamensis ha et grushv ) trong nuôi cấy in vitro

BỘ GIÁO DỤC ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH  NGUYỄN THANH HOÀI KHẢO SÁT KHẢ NĂNG TẠO PHÔI SOMA CỦA CÂY SÂM VIỆT NAM (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) TRONG NUÔI CẤY IN VITRO LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – NĂM 2012 BỘ GIÁO DỤC ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH  NGUYỄN THANH HOÀI KHẢO SÁT KHẢ NĂNG TẠO PHÔI SOMA CỦA CÂY SÂM VIỆT NAM (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) TRONG NUÔI CẤY IN VITRO Chuyên ngành : Sinh học thực nghiệm Mã số : 60 42 30 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC PGS.TS NGUYỄN THỊ QUỲNH THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – NĂM 2012 Lời cam đoan Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa công bố công trình khác NGUYỄN THANH HOÀI Lời cảm ơn Em xin chân thành cảm ơn đến Ban giám hiệu, Phòng đào tạo Sau đại học, Khoa Sinh học trường Đại Học Sư phạm Tp.HCM tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ em suốt trình học tập hoàn thành luận văn Em xin gởi lời cảm ơn sâu sắc đến PGS.TS Nguyễn Thị Quỳnh, người cô kính mến hết lòng dạy bảo, động viên tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt trình hoàn thành luận văn tốt nghiệp Em xin bày tỏ lời cảm ơn đến TS Lê Thị Trung, người cô hết lòng giúp đỡ, hướng dẫn tạo điều kiện cho em suốt trình học tập hoàn thành luận văn tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn Ban Giám Hiệu, thầy cô, đặc biệt thầy cô tổ Sinh – Công nghệ trường THPT Võ Thị Sáu, quận Bình Thạnh động viên, giúp đỡ nhiều để em hoàn thành luận văn tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn thầy cô hội đồng chấm luận văn cho em đóng góp quý báu để hoàn chỉnh luận văn Xin chân thành cảm ơn chị Vân, anh Hiến, chị Hạnh, Nhung, Duy, Duyên phòng Công nghệ Tế bào Thực vật, Viện Sinh học Nhiệt đới nhiệt tình giúp đỡ trình thực nghiên cứu luận văn Xin chân thành cảm ơn thầy cô, anh chị, bạn phòng Sinh lý thực vật, Khoa Sinh học trường Đại Học Sư phạm Tp.HCM bạn lớp Cao học chuyên ngành Sinh học thực nghiệm khóa 20, đặc biệt “ột” Thư động viên, giúp đỡ lúc gặp khó khăn Và cuối cùng, xin gởi lời cảm ơn sâu sắc đến ông bà, bố mẹ, em trai “người dưng khác họ” thân thương bên cạnh chia sẻ, động viên hỗ trợ suốt trình học tập, làm việc hoàn thành luận văn Ngày 30 tháng 03 năm 2012 NGUYỄN THANH HOÀI MỤC LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH MỞ ĐẦU .1 CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3 1.1 GIỚI THIỆU VỀ CÂY SÂM VIỆT NAM 1.1.1 Đặc điểm sinh học sâm Việt Nam 1.1.1.1 Phân loại 1.1.1.2 Đặc điểm hình thái 1.1.1.3 Phân bố đặc điểm sinh thái 1.1.1.4 Thành phần hóa học 1.1.2 Nguồn gốc, lịch sử phát triển trồng khai thác sâm Việt Nam 11 1.1.3 Tác dụng dược lý sâm việt Nam .13 1.1.3.1 Bộ phận dùng làm thuốc 13 1.1.3.2 Tính tác dụng dược lý 14 1.1.4 Bảo tồn nhân giống 14 1.1.5 Tình hình nghiên cứu vi nhân giống sâm Việt Nam nước giới .16 1.1.5.1 Tình hình nghiên cứu vi nhân giống sâm Việt Nam nước .16 1.1.5.2 Tình hình nghiên cứu vi nhân giống sâm Việt Nam giới 19 1.2 NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO THỰC VẬT VÀ ỨNG DỤNG 20 1.2.1 Lịch sử nuôi cấy mô tế bào thực vật 20 1.2.2 Sự phát sinh mô sẹo .21 1.2.3 Sự phát sinh quan nuôi cấy in vitro 22 1.2.3.1 Sự phát sinh rễ .22 1.2.3.2 Sự phát sinh chồi .23 1.2.4 Sự phát sinh phôi soma 25 1.2.4.1 Khái niệm phôi soma 25 1.2.4.2 Sự phát sinh phôi soma 27 1.2.4.3 Vai trò chất điều hòa sinh trưởng thực vật phát sinh phôi soma .30 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP .39 2.1 VẬT LIỆU .40 2.1.1 Nguồn mẫu nuôi cấy ban đầu 40 2.1.2 Các thiết bị dụng cụ 41 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 42 2.2.1 Thí nghiệm 1: Nuôi cấy tạo mô sẹo từ lớp mỏng phiến đoạn thân khí sinh sâm Việt Nam in vitro vị trí cắt khác môi trường MS có bổ sung NAA, IBA TDZ .42 2.2.2 Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng loại auxin (2,4-D, NAA hay IBA) cytokinin (TDZ, Kin hay BA) lên khả phát sinh phôi soma lớp mỏng phiến đoạn thân khí sinh sâm Việt Nam nuôi cấy in vitro 44 2.2.3 Thí nghiệm 3: Vai trò ánh sáng lên phát sinh phôi soma nuôi cấy lớp mỏng phiến đoạn thân khí sinh sâm Việt Nam nuôi cấy in vitro 48 2.2.4 Thí nghiệm 4: Sự tăng trưởng cụm chồi sâm Việt Nam nuôi cấy in vitro ảnh hưởng nồng độ khoáng đa lượng MS loại vitamin .50 2.2.5 Thí nghiệm 5: Ảnh hưởng thành phần khoáng đa lượng, vi lượng nồng độ đường sucrose lên khả tăng trưởng cụm chồi sâm Việt Nam nuôi cấy in vitro 52 2.3 PHƯƠNG PHÁP TÍNH SỐ LIỆU 53 2.4 PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH THỐNG KÊ 55 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 56 3.1 THÍ NGHIỆM 1: Nuôi cấy tạo mô sẹo từ lớp mỏng phiến đoạn thân khí sinh sâm Việt Nam in vitro vị trí cắt khác môi trường MS có bổ sung NAA, IBA TDZ 57 3.2 THÍ NGHIỆM 2: Ảnh hưởng loại auxin (2,4-D, NAA hay IBA) cytokinin (TDZ, Kin hay BA) lên khả phát sinh phôi soma lớp mỏng phiến đoạn thân khí sinh sâm Việt Nam nuôi cấy in vitro 67 3.3 THÍ NGHIỆM 3: Vai trò ánh sáng lên phát sinh phôi soma nuôi cấy lớp mỏng phiến đoạn thân khí sinh sâm Việt Nam nuôi cấy in vitro .83 3.4 THÍ NGHIỆM 4: Sự tăng trưởng cụm chồi sâm Việt Nam nuôi cấy in vitro ảnh hưởng nồng độ khoáng đa lượng MS loại vitamin 88 3.5 THÍ NGHIỆM 5: Ảnh hưởng thành phần khoáng đa lượng, vi lượng nồng độ đường sucrose lên khả tăng trưởng cụm chồi sâm Việt Nam nuôi cấy in vitro 94 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 99 4.1 KẾT LUẬN 100 4.2 ĐỀ NGHỊ .101 TÀI LIỆU THAM KHẢO 102 PHỤ LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT 2,4-D : Acid 2,4-diclorophenoxyacetic 2iP : N6-[2-isopentenyl] adenosine ABA : Acid abscisic BA : N6-Benzyladenine CĐHSTTV : Chất điều hòa sinh trưởng thực vật CLC : Môi trường khoáng nuôi cấy mô sẹo sinh phôi từ khoai lang Cheé cs đề xuất năm 1992 Môi trường cho tăng trưởng mô sẹo sinh phôi (CP) cs : cộng IAA : Acid indol-3-acetic IBA : Acid indolbutyric GA : Gibberellin Kin : Kinetin (6 – furfurylaminopurin) MS : Môi trường khoáng Murashige & Skoog đề xuất năm 1962 MS1/2 : Môi trường MS có hàm lượng khoáng đa lượng giảm nửa MS2/3 : Môi trường MS có hàm lượng khoáng đa lượng giảm 2/3 NAA : Acid α-naphthalenacetic NT : nghiệm thức SH : Môi trường khoáng Schenk & Hildebrandt đề xuất năm 1972 TDZ : Thidiazuron (N-phenyl-N’-1,2,3-thiadiazol-5-ylurea) TLK : Trọng lượng khô TLT : Trọng lượng tươi DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1 Phân biệt phôi soma với phôi hợp tử 25 Bảng 2.1 Bố trí thí nghiệm 1a .42 Bảng 2.2 Bố trí thí nghiệm 1b 43 Bảng 2.3 Bố trí thí nghiệm 2a .45 Bảng 2.4 Bố trí thí nghiệm 2b 45 Bảng 2.5 Bố trí thí nghiệm 3a .48 Bảng 2.6 Bố trí thí nghiệm 3b 49 Bảng 2.7 Bố trí thí nghiệm 50 Bảng 2.8 Bố trí thí nghiệm 52 Bảng 3.1 Ảnh hưởng nồng độ NAA, IBA TDZ lên tỉ lệ mẫu tạo mô sẹo, vị trí tạo mô sẹo từ phiến sâm Việt Nam in vitro ngày nuôi cấy thứ 56 58 Bảng 3.2 Ảnh hưởng nồng độ NAA, IBA TDZ lên tỉ lệ mẫu tạo mô sẹo, vị trí tạo mô sẹo từ thân khí sinh sâm Việt Nam in vitro ngày nuôi cấy thứ 56 62 Bảng 3.3 Ảnh hưởng loại auxin cytokinin lên phát sinh hình thái từ lớp mỏng phiến sâm Việt Nam nuôi cấy in vitro ngày thứ 84 68 Bảng 3.4 Ảnh hưởng loại auxin cytokinin lên phát sinh hình thái từ đoạn thân khí sinh sâm Việt Nam nuôi cấy in vitro ngày thứ 84 .75 Bảng 3.5 Ảnh hưởng CĐHSTTV ánh sáng lên phát sinh hình thái từ đoạn thân khí sinh sâm Việt Nam nuôi cấy in vitro ngày thứ 35 .85 Bảng 3.6 Ảnh hưởng nồng độ khoáng đa lượng MS loại vitamin lên khả tăng trưởng cụm chồi sâm Việt Nam nuôi cấy in vitro ngày thứ 42 90 Bảng 3.7 Ảnh hưởng thành phần khoáng đa lượng, vi lượng nồng độ đường sucrose lên khả tăng trưởng cụm chồi sâm Việt Nam nuôi cấy in vitro ngày thứ 49 95 * 0.075 0.225 A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob -2 Factor A 0.023 0.012 1.1790 0.3248 Factor B 0.032 0.011 1.0566 0.3859 AB 0.048 0.008 0.8036 -7 Error 24 0.239 0.010 -Total 35 0.342 -Coefficient of Variation: 310.34% Trọng lượng tươi mẫu T A B L E O F M E A N S Total * 1 31.340 94.020 * 52.521 157.562 * 35.000 105.000 * 35.698 107.093 * 9.458 28.375 * 2 6.307 18.921 * 32.340 97.021 * 13.122 39.366 * 7.009 21.028 * 13.887 41.662 * 3 26.213 78.638 * 16.201 48.603 A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob -2 Factor A 4260.287 2130.144 2571.7111 0.0000 Factor B 1079.204 359.735 434.3059 0.0000 AB 1523.299 253.883 306.5117 0.0000 -7 Error 24 19.879 0.828 -Total 35 6882.669 -Coefficient of Variation: 3.91% Trọng lượng khô mẫu T A B L E O F M E A N S 10 Total * 1 3.757 11.271 * 6.735 20.204 * 4.623 13.868 * 4.812 14.437 * 1.253 3.758 * 2 0.939 2.817 * 3.478 10.433 * 1.707 5.121 * 1.085 3.254 * 2.015 6.045 * 3 3.153 9.458 * 2.101 6.302 A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob -2 Factor A 73.104 36.552 230.3255 0.0000 Factor B 14.108 4.703 29.6331 0.0000 AB 18.089 3.015 18.9977 0.0000 -7 Error 24 3.809 0.159 -Total 35 109.110 -Coefficient of Variation: 13.41% Phần trăm chất khô (%) T A B L E O F M E A N S 11 Total * 1 12.127 36.380 * 12.405 37.214 * 13.454 40.362 * 13.656 40.968 * 14.104 42.311 * 2 15.630 46.889 * 10.761 32.284 * 13.828 41.483 * 16.772 50.317 * 14.721 44.164 * 3 12.698 38.094 * 13.183 39.550 A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob -2 Factor A 12.345 6.173 1.9198 0.1685 Factor B 23.795 7.932 2.4669 0.0866 AB 49.101 8.183 2.5452 0.0474 -7 Error 24 77.167 3.215 -Total 35 162.408 -Coefficient of Variation: 13.17% Thí nghiệm 2b Bảng ANOVA số liệu bảng 3.4 Tỉ lệ mẫu tạo mô sẹo T A B L E O F M E A N S Total * 1 1.000 3.000 * 1.000 3.000 * 1.000 3.000 * 0.067 0.200 * 1.000 3.000 * 2 1.000 3.000 * 1.000 3.000 * 0.167 0.500 * 0.229 0.688 * 0.067 0.200 * 3 1.000 3.000 * 0.000 0.000 A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob -2 Factor A 1.661 0.831 482.5145 0.0000 Factor B 4.123 1.374 798.3542 0.0000 AB 1.311 0.219 126.9475 0.0000 -7 Error 24 0.041 0.002 -Total 35 7.136 -Coefficient of Variation: 6.61% Số rễ T A B L E O F M E A N S Total * 1 0.375 1.126 * 0.230 0.689 * 0.000 0.000 * 0.083 0.250 * 0.000 0.000 * 2 0.083 0.250 * 0.021 0.063 * 0.104 0.313 * 3.208 9.625 * 1.392 4.175 * 3 0.021 0.063 * 0.675 2.026 A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob -2 Factor A 11.837 5.919 25.6469 0.0000 Factor B 6.906 2.302 9.9750 0.0002 AB 10.384 1.731 7.4998 0.0001 -7 Error 24 5.538 0.231 -Total 35 34.666 -Coefficient of Variation: 93.08% Chiều dài rễ T A B L E O F M E A N S Total * 1 1.167 3.501 * 0.542 1.625 * 0.000 0.000 * 0.567 1.700 * 0.000 0.000 * 2 0.271 0.813 * 0.125 0.375 * 0.354 1.063 * 8.834 26.501 * 5.329 15.988 * 3 0.021 0.063 * 1.217 3.651 A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob -2 Factor A 97.313 48.656 39.9079 0.0000 Factor B 57.444 19.148 15.7053 0.0000 AB 90.681 15.114 12.3962 0.0000 -7 Error 24 29.261 1.219 -Total 35 274.700 -Coefficient of Variation: 71.91% Trọng lượng tươi mẫu T A B L E O F M E A N S Total * 1 53.715 161.144 * 48.748 146.244 * 59.044 177.131 * 52.452 157.355 * 19.042 57.125 * 2 23.592 70.775 * 59.269 177.807 * 36.059 108.176 * 24.725 74.176 * 27.213 81.638 * 3 56.667 170.000 * 28.453 85.359 A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob -2 Factor A 2922.505 1461.253 1063.6799 0.0000 Factor B 3936.986 1312.329 955.2746 0.0000 AB 1177.106 196.184 142.8072 0.0000 -7 Error 24 32.971 1.374 -Total 35 8069.568 -Coefficient of Variation: 2.88% Trọng lượng khô mẫu T A B L E O F M E A N S 10 Total * 1 5.515 16.544 * 5.142 15.425 * 6.458 19.375 * 6.410 19.230 * 2.296 6.888 * 2 2.811 8.432 * 6.119 18.356 * 3.544 10.632 * 3.252 9.757 * 3.215 9.645 * 3 6.683 20.050 * 3.476 10.428 A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob -2 Factor A 31.922 15.961 59.0591 0.0000 Factor B 44.355 14.785 54.7073 0.0000 AB 11.091 1.849 6.8401 0.0003 -7 Error 24 6.486 0.270 -Total 35 93.854 -Coefficient of Variation: 11.36% Phần trăm chất khô (%) T A B L E O F M E A N S 11 Total * 1 12.127 36.380 * 12.405 37.214 * 13.454 40.362 * 13.656 40.968 * 14.104 42.311 * 2 15.630 46.889 * 10.761 32.284 * 13.828 41.483 * 16.772 50.317 * 14.721 44.164 * 3 12.698 38.094 * 13.191 39.573 A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob -2 Factor A 12.379 6.190 1.9275 0.1674 Factor B 23.793 7.931 2.4698 0.0863 AB 49.050 8.175 2.5457 0.0474 -7 Error 24 77.070 3.211 -Total 35 162.292 -Coefficient of Variation: 13.16% Thí nghiệm 3a Bảng ANOVA số liệu hình 3.18 Tỉ lệ mẫu tạo mô sẹo từ phiến K Value T A B L E O F M E A N S Total * 1 0.000 0.000 * 0.303 0.909 * 0.000 0.000 * 2 0.536 1.609 A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean F Source Freedom Squares Square Value Prob -2 Factor A 0.041 0.041 3.0610 0.1183 Factor B 0.528 0.528 39.6077 0.0002 AB 0.041 0.041 3.0610 0.1183 -7 Error 0.107 0.013 -Total 11 0.717 -Coefficient of Variation: 55.04% Thí nghiệm 3b Bảng ANOVA số liệu bảng 3.5 Tỉ lệ mẫu tạo mô sẹo từ thân khí sinh T A B L E O F M E A N S Total * 1 0.000 0.000 * 0.017 0.050 * 0.000 0.000 * 2 0.000 0.000 A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob -2 Factor A 0.000 0.000 1.0000 0.3466 Factor B 0.000 0.000 1.0000 0.3466 AB 0.000 0.000 1.0000 -7 Error 0.002 0.000 -Total 11 0.002 -Coefficient of Variation: 346.41% Thí nghiệm Bảng ANOVA số liệu bảng 3.6 Gia tăng số chồi T A B L E O F M E A N S Total * 1 4.750 14.250 * 9.583 28.750 * 7.267 21.800 * 2 7.133 21.400 * 5.067 15.200 * 7.000 21.000 A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob -2 Factor A 5.293 2.647 23.4969 0.0001 Factor B 22.001 22.001 195.3194 0.0000 AB 18.674 9.337 82.8952 0.0000 -7 Error 12 1.352 0.113 -Total 17 47.320 -Coefficient of Variation: 4.94% Chiều cao chồi T A B L E O F M E A N S Total * 1 20.000 60.000 * 17.417 52.250 * 19.333 58.000 * 2 16.000 48.000 * 15.467 46.400 * 13.583 40.750 -A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob -2 Factor A 56.911 28.455 2.0469 0.1718 Factor B 30.420 30.420 2.1882 0.1648 AB 1.578 0.789 0.0567 -7 Error 12 166.822 13.902 -Total 17 255.730 -Coefficient of Variation: 21.98% Trọng lượng tươi mẫu T A B L E O F M E A N S Total * 1 211.813 635.440 * 332.287 996.860 * 234.087 702.260 * 2 303.787 911.360 * 207.633 622.900 * 215.070 645.210 A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob -2 Factor A 14020.025 7010.012 28.8699 0.0000 Factor B 19524.855 19524.855 80.4108 0.0000 AB 9615.971 4807.986 19.8011 0.0002 -7 Error 12 2913.765 242.814 -Total 17 46074.616 -Coefficient of Variation: 6.21% Trọng lượng khô mẫu T A B L E O F M E A N S 11 Total * 1 23.777 71.330 * 32.810 98.430 * 25.720 77.160 * 2 28.940 86.820 * 22.853 68.560 * 22.477 67.430 A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob -2 Factor A 108.737 54.368 5.7727 0.0175 Factor B 70.528 70.528 7.4885 0.0180 AB 67.639 33.820 3.5909 0.0599 -7 Error 12 113.018 9.418 -Total 17 359.922 -Coefficient of Variation: 11.76% Phần trăm chất khô (%) T A B L E O F M E A N S 12 Total * 1 11.200 33.600 * 9.823 29.470 * 11.000 33.000 * 2 9.527 28.580 * 11.003 33.010 * 10.433 31.300 A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob -2 Factor A 0.623 0.311 0.7422 Factor B 5.848 5.848 13.9385 0.0029 AB 0.738 0.369 0.8795 -7 Error 12 5.035 0.420 -Total 17 12.244 -Coefficient of Variation: 6.17% Thí nghiệm Bảng ANOVA số liệu bảng 3.7 Gia tăng số chồi T A B L E O F M E A N S Total * 1 0.875 2.625 * 0.750 2.250 * 0.792 2.375 * 2 0.917 2.750 * 1.375 4.125 * 2.208 6.625 * 2.833 8.500 * 3.583 10.750 A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob -2 Factor A 22.693 7.564 92.9493 0.0000 Factor B 0.940 0.940 11.5520 0.0037 AB 0.992 0.331 4.0640 0.0253 -7 Error 16 1.302 0.081 -Total 23 25.927 -Coefficient of Variation: 17.12% Chiều cao chồi T A B L E O F M E A N S Total * 1 11.917 35.750 * 8.583 25.750 * 13.750 41.250 * 2 12.625 37.875 * 10.417 31.250 * 7.958 23.875 * 15.917 47.750 * 12.875 38.625 A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob -2 Factor A 107.299 35.766 22.4508 0.0000 Factor B 37.188 37.188 23.3433 0.0002 AB 4.320 1.440 0.9038 -7 Error 16 25.490 1.593 -Total 23 174.296 -Coefficient of Variation: 10.74% Số rễ T A B L E O F M E A N S Total * 1 0.208 0.625 * 0.167 0.500 * 0.375 1.125 * 2 0.292 0.875 * 1.708 5.125 * 1.293 3.880 * 1.417 4.250 * 0.458 1.375 A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob -2 Factor A 6.531 2.177 23.5749 0.0000 Factor B 0.842 0.842 9.1167 0.0081 AB 0.807 0.269 2.9133 0.0664 -7 Error 16 1.478 0.092 -Total 23 9.658 -Coefficient of Variation: 41.08% Chiều dài rễ T A B L E O F M E A N S Total * 1 0.917 2.750 * 0.542 1.625 * 1.708 5.125 * 2 1.042 3.125 * 4.333 13.000 * 3.333 10.000 * 3.417 10.250 * 1.667 5.000 A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob -2 Factor A 33.617 11.206 14.7994 0.0001 Factor B 5.391 5.391 7.1204 0.0168 AB 1.580 0.527 0.6956 -7 Error 16 12.115 0.757 -Total 23 52.702 -Coefficient of Variation: 41.05% Trọng lượng tươi mẫu T A B L E O F M E A N S Total * 1 65.721 197.163 * 52.650 157.951 * 64.279 192.838 * 2 63.675 191.026 * 82.854 248.563 * 82.971 248.914 * 154.771 464.314 * 180.079 540.238 A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob -2 Factor A 45756.256 15252.085 114.8691 0.0000 Factor B 51.776 51.776 0.3899 AB 1165.797 388.599 2.9267 0.0657 -7 Error 16 2124.448 132.778 -Total 23 49098.277 -Coefficient of Variation: 12.34% Phụ lục Bảng trắc nghiệm phân hạng cho số liệu thí nghiệm Thí nghiệm 1a Bảng trắc nghiệm phân hạng kết bảng 3.1 Tỉ lệ vị trí tạo mô sẹo Duncan's MultipleRange Test LSD value = 0.7256 s_ = 0.1887 at alpha = 0.010 x Original Order Ranked Order Mean = 0.4000 AB Mean = 1.000 Mean = 0.4000 AB Mean = 1.000 Mean = 0.2000 AB Mean = 0.4000 Mean = 1.000 A Mean = 0.4000 Mean = 0.4000 AB Mean = 0.4000 Mean = 0.4000 AB Mean = 0.4000 Mean = 0.2000 AB Mean = 0.2000 Mean = 0.0000 B Mean = 0.2000 Mean = 1.000 A Mean = 0.0000 A A AB AB AB AB AB AB B Thí nghiệm 1b Bảng trắc nghiệm phân hạng kết bảng 3.2 Tỉ lệ vị trí tạo mô sẹo Duncan's MultipleRange Test LSD value = 0.5576 s_ = 0.1944 at alpha = 0.050 x Original Order Ranked Order Mean = 1.000 A Mean = 1.000 Mean = 0.4000 AB Mean = 0.8000 Mean = 0.8000 A Mean = 0.8000 Mean = 0.0000 B Mean = 0.8000 Mean = 0.8000 A Mean = 0.8000 Mean = 0.8000 A Mean = 0.6000 Mean = 0.6000 AB Mean = 0.6000 Mean = 0.8000 A Mean = 0.4000 Mean = 0.6000 AB Mean = 0.0000 Thí nghiệm 2a Bảng trắc nghiệm phân hạng kết bảng 3.3 Tỉ lệ mẫu tạo mô sẹo Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.2604 s_ = 0.06583 at alpha = 0.010 x A A A A A AB AB AB B Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Original Order = 0.9700 = 1.000 = 0.7900 = 0.8900 = 0.2800 = 0.1700 = 0.2800 = 0.1900 = 0.2300 10 = 0.1800 11 = 0.5280 12 = 0.04000 A A A A BC C BC C C C B C Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Ranked Order = 1.000 = 0.9700 = 0.8900 = 0.7900 11 = 0.5280 = 0.2800 = 0.2800 = 0.2300 = 0.1900 10 = 0.1800 = 0.1700 12 = 0.04000 A A A A B BC BC C C C C C Trọng lượng tươi mẫu Duncan's MultipleRange Test LSD value = 2.078 s_ = 0.5254 at alpha = 0.010 x Original Order Mean = 31.34 C Mean = 52.52 A Mean = 35.00 B Mean = 35.70 B Mean = 9.458 G Mean = 6.307 H Mean = 32.34 C Mean = 13.12 F Mean = 7.010 H Mean 10 = 13.89 F Mean 11 = 26.21 D Mean 12 = 16.20 E Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Ranked Order = 52.52 = 35.70 = 35.00 = 32.34 = 31.34 11 = 26.21 12 = 16.20 10 = 13.89 = 13.12 = 9.458 = 7.010 = 6.307 A B B C C D E F F G H H Trọng lượng khô mẫu Duncan's MultipleRange Test LSD value = 0.9106 s_ = 0.2302 at alpha = 0.010 x Original Order Ranked Order Mean = 3.757 CD Mean = 6.735 Mean = 6.735 A Mean = 4.812 Mean = 4.622 BC Mean = 4.622 Mean = 4.812 B Mean = 3.757 Mean = 1.253 EFG Mean = 3.478 Mean = 0.939 G Mean 11 = 3.153 Mean = 3.478 D Mean 12 = 2.101 Mean = 1.707 EFG Mean 10 = 2.015 Mean = 1.085 FG Mean = 1.707 Mean 10 = 2.015 EF Mean = 1.253 Mean 11 = 3.153 D Mean = 1.085 Mean 12 = 2.101 E Mean = 0.9390 A B BC CD D D E EF EFG EFG FG G Phần trăm chất khô Duncan's MultipleRange Test LSD value = 3.022 s_ = 1.035 at alpha = 0.050 x Original Order Mean = 12.13 BC Mean Mean = 12.41 BC Mean Mean = 13.45 ABC Mean Mean = 13.66 ABC Mean Mean = 14.10 ABC Mean Mean = 15.63 AB Mean Mean = 10.76 C Mean Mean = 13.83 ABC Mean Mean = 16.77 A Mean Mean 10 = 14.72 AB Mean Mean 11 = 12.70 BC Mean Mean 12 = 13.19 BC Mean Ranked Order = 16.77 = 15.63 10 = 14.72 = 14.10 = 13.83 = 13.66 = 13.45 12 = 13.19 11 = 12.70 = 12.41 = 12.13 = 10.76 A AB AB ABC ABC ABC ABC BC BC BC BC C Thí nghiệm 2b Bảng trắc nghiệm phân hạng kết bảng 3.4 Tỉ lệ mẫu tạo mô sẹo Duncan's MultipleRange Test LSD value = 0.1021 s_ = 0.02582 at alpha = 0.010 x Original Order Ranked Order Mean = 1.000 A Mean = 1.000 Mean = 1.000 A Mean = 1.000 Mean = 1.000 A Mean = 1.000 Mean = 0.06700 CD Mean = 1.000 Mean = 1.000 A Mean = 1.000 Mean = 1.000 A Mean = 1.000 Mean = 1.000 A Mean 11 = 1.000 Mean = 0.1670 BC Mean = 0.2290 Mean = 0.2290 B Mean = 0.1670 Mean 10 = 0.06700 CD Mean = 0.06700 Mean 11 = 1.000 A Mean 10 = 0.06700 Mean 12 = 0.0000 D Mean 12 = 0.0000 A A A A A A A B BC CD CD D Trọng lượng tươi mẫu Duncan's MultipleRange Test LSD value = 2.677 s_ = 0.6768 at alpha = 0.010 x Original Order Mean = 53.71 B Mean = 48.75 C Mean = 59.04 A Mean = 52.45 B Mean = 19.04 H Mean = 23.59 G Mean Mean Mean Mean Mean Mean Ranked Order = 59.27 = 59.04 11 = 56.67 = 53.71 = 52.45 = 48.75 A A A B B C Mean Mean Mean Mean Mean Mean 10 11 12 = = = = = = 59.27 36.06 24.73 27.21 56.67 28.45 A D FG EF A E Mean Mean Mean Mean Mean Mean 12 10 = = = = = = 36.06 28.45 27.21 24.73 23.59 19.04 Trọng lượng khô mẫu Duncan's MultipleRange Test LSD value = 1.187 s_ = 0.3000 at alpha = 0.010 x Original Order Mean = 5.515 AB Mean Mean = 5.142 B Mean Mean = 6.458 A Mean Mean = 6.410 AB Mean Mean = 2.296 C Mean Mean = 2.810 C Mean Mean = 6.119 AB Mean Mean = 3.544 C Mean Mean = 3.252 C Mean Mean 10 = 3.215 C Mean Mean 11 = 6.683 A Mean Mean 12 = 3.476 C Mean Ranked Order 11 = 6.683 = 6.458 = 6.410 = 6.119 = 5.515 = 5.142 = 3.544 12 = 3.476 = 3.252 10 = 3.215 = 2.810 = 2.296 Phần trăm chất khô Duncan's MultipleRange Test LSD value = 1.658 s_ = 0.5680 at alpha = 0.050 x Original Order Ranked Order Mean = 10.27 D Mean = 13.22 Mean = 10.40 CD Mean 12 = 12.79 Mean = 11.32 ABCD Mean = 12.71 Mean = 12.71 A Mean 10 = 12.45 Mean = 12.16 ABC Mean 11 = 12.35 Mean = 11.47 ABCD Mean = 12.16 Mean = 10.82 BCD Mean = 11.47 Mean = 10.13 D Mean = 11.32 Mean = 13.22 A Mean = 10.82 Mean 10 = 12.45 AB Mean = 10.40 Mean 11 = 12.35 AB Mean = 10.27 Mean 12 = 12.79 A Mean = 10.13 Thí nghiệm 3b Bảng trắc nghiệm phân hạng kết bảng 3.5 Chiều dài rễ Least Significant Difference Test LSD value = 0.8077 at alpha = 0.050 Original Order Ranked Order A A AB AB AB B C C C C C C A A A AB AB ABC ABCD ABCD BCD CD D D D E EF FG G H Mean Mean Mean Mean = = = = 2.380 1.180 0.0000 0.1400 A B C C Mean Mean Mean Mean = = = = 2.380 1.180 0.1400 0.0000 A B C C Thí nghiệm Bảng trắc nghiệm phân hạng kết bảng 3.6 Gia tăng số chồi Duncan's MultipleRange Test LSD value = 0.8384 s_ = 0.1941 at alpha = 0.010 x Original Order Mean = 4.750 C Mean Mean = 9.580 A Mean Mean = 7.270 B Mean Mean = 7.130 B Mean Mean = 5.070 C Mean Mean = 7.000 B Mean Ranked Order = 9.580 = 7.270 = 7.130 = 7.000 = 5.070 = 4.750 A B B B C C Trọng lượng tươi mẫu Duncan's MultipleRange Test LSD value = 38.86 s_ = 8.997 at alpha = 0.010 x Original Order Ranked Order Mean = 211.8 B Mean = 332.3 Mean = 332.3 A Mean = 303.8 Mean = 234.1 B Mean = 234.1 Mean = 303.8 A Mean = 215.1 Mean = 207.6 B Mean = 211.8 Mean = 215.1 B Mean = 207.6 A A B B B B Thí nghiệm Bảng trắc nghiệm phân hạng kết bảng 3.7 Gia tăng số chồi Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.4926 s_ = 0.1643 at alpha = 0.050 x Original Order Mean = 0.8750 DE Mean Mean = 0.7500 E Mean Mean = 0.7920 E Mean Mean = 0.9170 DE Mean Mean = 1.375 D Mean Mean = 2.208 C Mean Mean = 2.833 B Mean Mean = 3.583 A Mean Ranked Order = 3.583 = 2.833 = 2.208 = 1.375 = 0.9170 = 0.8750 = 0.7920 = 0.7500 A B C D DE DE E E [...]... khí sinh của cây sâm Việt Nam in vitro ở các nghiệm thức khác nhau theo thời gian nuôi cấy 86 Hình 3.22 Gia tăng số chồi/mẫu theo thời gian nuôi cấy của cụm chồi cây sâm Việt Nam in vitro ở các nghiệm thức khác nhau .89 Hình 3.23 Số rễ hình thành từ cụm chồi cây sâm Việt Nam in vitro ở các nghiệm thức khác nhau theo thời gian nuôi cấy 91 Hình 3.24 Cụm chồi cây sâm Việt Nam nuôi cấy in vitro. .. Hình 2.1 Cây sâm Việt Nam nuôi cấy in vitro tại Phòng Công nghệ Tế bào Thực vật, Viện Sinh học Nhiệt đới 40 Hình 2.2 Cây sâm Việt Nam nuôi cấy trong tủ điều khiển khí hậu Percival .40 Hình 2.3 Thân khí sinh và phiến lá của cây sâm Việt Nam nuôi cấy in vitro 43 Hình 2.4 Mẫu cấy lớp mỏng phiến lá và đoạn thân khí sinh của cây sâm Việt Nam in vitro 47 Hình 2.5 Cách bố trí mẫu cấy phiến... hình thành từ vị trí thứ 4 của thân khí sinh cây sâm Việt Nam in vitro ở ngày thứ 84 82 Hình 3.18 Tỉ lệ mẫu tạo mô sẹo từ phiến lá của cây sâm Việt Nam in vitro vào ngày thứ 35 .84 Hình 3.19 Mẫu cấy từ vị trí thứ 5 của phiến lá cây sâm Việt Nam in vitro ở ngày thứ 35 84 Hình 3.20 Mẫu cấy từ vị trí thứ 3 của thân khí sinh cây sâm Việt Nam in vitro ở ngày thứ 35 ... sinh trên đĩa petri 47 Hình 2.6 Cụm chồi cây sâm Việt Nam nuôi cấy in vitro 51 Hình 3.1 Tỉ lệ mẫu tạo mô sẹo theo thời gian nuôi cấy của lớp mỏng phiến lá cây sâm Việt Nam in vitro 57 Hình 3.2 Hình thái mô sẹo hình thành từ vị trí thứ 5 của lớp mỏng phiến lá cây sâm Việt Nam in vitro ở ngày thứ 56 59 Hình 3.3 Tỉ lệ mẫu tạo mô sẹo theo thời gian nuôi cấy của đoạn thân khí sinh cây. .. trồng (Ammirato và cs., 198 3) Ứng dụng con đường phát sinh phôi soma ở thực vật không chỉ phục vụ công tác vi nhân giống mà còn được phát huy trong lĩnh vực nghiên cứu cơ bản về di truyền học, sinh học phân tử và chuyển gen ở thực vật (Nguyễn Hữu Hổ, 200 9) Vì vậy, đề tài “KHẢO SÁT KHẢ NĂNG TẠO PHÔI SOMA CỦA CÂY SÂM VIỆT NAM (Panax vietnamensis Ha et Grushv. ) TRONG NUÔI CẤY IN VITRO được thực hiện tại... nhiều lông tơ ở hai mặt, mặt dưới ít hơn Cây sâm Việt Nam từ 1 – 3 năm tuổi chỉ có một lá kép duy nhất, từ năm tuổi thứ 4 trở đi mới có 2 đến 3 lá Hình 1.1 Đặc điểm hình thái của cây sâm Việt Nam (a) Cây sâm Việt Nam Panax vietnamensis Ha et Grushv. ; (b) Lá cây sâm Việt Nam ở Tu Mơ Rông (Kon Tum); (c) Hoa; (d) Quả (Nguồn: Sách đỏ Việt Nam; http://www.tienphong.vn/VungsamNgocLinhlonnhatthe-gioi.html;... những cây sâm khác trong chi Panax (Hình 1. 2) Hình 1.2 Đặc điểm hình thái của một số loài sâm trong chi Panax a Sâm Việt Nam (Panax vietnamensis Ha et Grushv. ), b Sâm Triều Tiên (Panax ginseng C.A Meyer), c Sâm Mỹ (Panax quinquefolius), d Sâm Nhật (Panax japonicus C.A Meyer) (Nguồn: http://mobi.vietbao.vn/vi/Khoa-hoc/Di-thuc-thanh-cong-sam-Ngoc-Linhtai-vung-dat-moi;http://www.gfmer.ch/Atlas_medicinal_plants/Panax_ginseng.htm;... hình thái của cây sâm Việt Nam 5 Hình 1.2 Đặc điểm hình thái của một số loài sâm trong chi Panax 7 Hình 1.3 Vị trí địa lý của núi Ngọc Linh 8 Hình 1.4 Cấu trúc hóa học của Majonoside-R 2 10 Hình 1.5 Rễ củ khô của cây sâm Việt Nam 13 Hình 1.6 Viên ngậm sâm Việt Nam (Vinaginseng pastilles) 13 Hình 1.7 Sắc kí đồ của sinh khối cây sâm Việt Nam in vitro nuôi cấy tại Phòng... bào Thực vật, Viện Sinh học Nhiệt đới nhằm mục đích tìm hiểu và xây dựng nên quy trình tạo phôi soma của cây sâm Việt Nam nuôi cấy in vitro, từ đó có thể nhân giống vô tính loài sâm quý hiếm này và góp phần bảo tồn loài sâm đặc hữu của Việt Nam GIỚI HẠN CỦA ĐỀ TÀI Đề tài chỉ tập trung khảo sát hai nguồn vật liệu từ cây sâm Việt Nam in vitro là phiến lá và thân khí sinh, ảnh hưởng của một số CĐHSTTV... Huy Bích và cs (200 4), cây sâm Việt Nam được phân loại như sau: Giới : Plantae Ngành : Magnoliophyta (Ngọc Lan) Lớp : Magnoliopsida (Ngọc Lan) Bộ : Araliales (Nhân sâm) Họ : Araliaceae (Nhân sâm) Chi : Panax (Sâm) Loài : Panax vietnamensis Ha et Grushv (Thực vật) Tên nước ngoài: Vietnamese ginseng Tên khác: Sâm Việt, Sâm Ngọc Linh, Sâm Khu Năm, Sâm trúc, Sâm đốt trúc, Trúc tiết nhân sâm, Củ ngải rọm con, ... DỤC ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH  NGUYỄN THANH HOÀI KHẢO SÁT KHẢ NĂNG TẠO PHÔI SOMA CỦA CÂY SÂM VIỆT NAM (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) TRONG NUÔI CẤY IN VITRO. .. học, sinh học phân tử chuyển gen thực vật (Nguyễn Hữu Hổ, 2009) Vì vậy, đề tài “KHẢO SÁT KHẢ NĂNG TẠO PHÔI SOMA CỦA CÂY SÂM VIỆT NAM (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) TRONG NUÔI CẤY IN VITRO ... NAA hay IBA) cytokinin (TDZ, Kin hay BA) lên khả phát sinh phôi soma lớp mỏng phiến đoạn thân khí sinh sâm Việt Nam nuôi cấy in vitro 67 3.3 THÍ NGHIỆM 3: Vai trò ánh sáng lên phát sinh phôi soma