phân lập vi khuẩn nội sinh trong cây diếp cá (houttuynia cordata t.) ở tỉnh kiên giang

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH VI SINH VẬT HỌC PHÂN LẬP VI KHUẨN NỘI SINH TRONG CÂY DIẾP CÁ (Houttuynia cordata T.) Ở TỈNH KIÊN GIANG CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN PGS TS NGUYỄN HỮU HIỆP NGUYỄN MẠNH MSSV:3113729 LỚP : VI SINH VẬT K37 Cần Thơ, 11/2014 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH VI SINH VẬT HỌC PHÂN LẬP VI KHUẨN NỘI SINH TRONG CÂY DIẾP CÁ (Houttuynia cordata T.) Ở TỈNH KIÊN GIANG CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN PGS TS NGUYỄN HỮU HIỆP NGUYỄN MẠNH MSSV:3113729 LỚP : VI SINH VẬT K37 Cần Thơ, 11/2014 PHẦN KÝ DUYỆT CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN (ký tên) (ký tên) PGS.TS Nguyễn Hữu Hiệp Nguyễn Mạnh DUYỆT CỦA HỘI ĐỒNG BẢO VỆ LUẬN VĂN ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………… Cần Thơ, ngày 20 tháng 12 năm 2014 CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG (ký tên) LỜI CẢM TẠ  Trong trình thực luận văn tốt nghiệp trường Đại học Cần Thơ đến hoàn thành khóa học trình làm luận văn, hỗ trợ mặt tinh thần vật chất từ gia đình, Thầy, Cô bạn bè giúp vượt qua khó khăn hoàn thành tốt luận văn tốt nghiệp Tôi xin chân thành cảm ơn đến: Quý Thầy Cô Viện Nghiên cứu Phát triển Công nghệ Sinh học, Trường Đại học Cần Thơ truyền đạt kiến thức, giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho thực luận văn PGS.TS Nguyễn Hữu Hiệp, Phó Trưởng Bộ môn Công nghệ Sinh học Vi sinh vật, Viện Nghiên cứu Phát triển Công nghệ Sinh học, Trường Đại học Cần Thơ người Thầy nhiệt tâm hướng dẫn, giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho suốt trình học tập, xây dựng đề cương nghiên cứu, thực thí nghiệm hoàn thành luận văn Cán quản lý phòng thí nghiệm vi sinh vật giúp đỡ, động viên chia sẻ khó khăn giúp hoàn thành tốt luận văn Tôi xin bày tỏ biết ơn đến gia đình, bạn bè lớp Vi sinh vật học khóa 37 động viên chia sẻ khó khăn giúp hoàn thành tốt luận văn này! Cần Thơ, ngày 20 tháng 12 năm 2014 Nguyễn Mạnh Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 37 -2014 Trường ĐHCT TÓM LƯỢC Diếp cá loại trồng ứng dụng làm thuốc trị bệnh từ lâu, từ rễ, thân, Diếp cá (Houttuynia cordata T.) phân lập mười lăm dòng vi khuẩn nội sinh môi trường PDA Phần lớn vi khuẩn có dạng hình tròn, bìa nguyên, độ mô, màu trắng sữa, dạng que ngắn, Gram âm có khả chuyển động Kết khảo sát khả cố định đạm tổng hợp IAA vi khuẩn cho thấy, lượng ammonium IAA cao vào ngày thứ hai sau giảm vào ngày thứ tư tăng lên vào ngày sáu sau chủng Dòng ML4 ML7 có khả tổng hợp NH4+ cao so với dòng lại (0,728 µg/ml 0,755 µg/ml ), khác biệt ý nghĩa với lượng IAA cao (5,640 µg/ml ) dòng MR4 tổng hợp vào ngày hai lại giảm vào ngày sáu sau chủng Bên cạnh dòng MR4 có khả hòa tan lân cao vào ngày sáu sau chủng (161 E) so với dòng lại, đồng thời có dòng vi khuẩn có khả kháng lại vi khuẩn Aeromonas hydrophila phân lập từ rễ, thân, có dòng vi khuẩn kháng vi khuẩn gây bệnh E.coli phân lập từ thân Diếp cá Đặc biệt, dòng MT1 có khả kháng lại hai vi khuẩn gây bệnh E.coli Aeromonas hydrophila Ba dòng vi khuẩn nhận diện cấp độ loài phương pháp giải trình tự 16S-rRNA Dòng MT1 nhận diện Enterobacter cloacae (mức độ đồng hình 94%) Dòng MT2 nhận diện Acinetobacter baumannii ( mức độ đồng hình 98%) Dòng MR4 nhận diện Enterobacter cloacae (mức độ đồng hình 97%) Từ khóa: Acinetobacter baumannii, Cây Diếp cá, Enterobacter cloacae, Kháng khuẩn, Vi khuẩn nội sinh Chuyên ngành Vi sinh vật học i Viện NC & PT CNSH Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 37 -2014 Trường ĐHCT MỤC LỤC Trang PHẦN KÝ DUYỆT LỜI CẢM TẠ TÓM LƯỢC i MỤC LỤC ii DANH SÁCH BẢNG vi DANH SÁCH HÌNH vii CÁC TỪ VIẾT TẮT viii CHƯƠNG GIỚITHIỆU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu CHƯƠNG LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 2.1 Điều kiện tự nhiên tỉnh Kiên Giang 2.1.1 Vị trí địa lý 2.1.2 Đặc điểm 2.2 Sơ lược Diếp cá 2.3 Tác dụng Diếp cá 2.4 Giới thiệu vi khuẩn nội sinh 2.4.1 Một số đặc tính vi khuẩn nội sinh : 2.4.1.1 Khả cố định đạm: 2.4.1.2 Khả hòa tan lân khó tan: 2.4.1.3 Khả đối kháng: 2.4.2 Một số vi khuẩn nội sinh thường gặp: 2.4.2.1 Vi khuẩn Enterobacter 10 2.4.2.2 Vi khuẩn Acinetobacter 10 2.4.2.3 Vi khuẩn Bacillus 10 2.4.2.4 Vi khuẩn Pseudomonas 13 Chuyên ngành Vi sinh vật học ii Viện NC & PT CNSH Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 37 -2014 Trường ĐHCT 2.4.2.5 Vi khuẩn Azospirillum 13 2.4.2.6 Vi khuẩn Azotobacter 14 2.5 Kỹ thuật PCR (Polymerase Chain Reaction) 14 2.5.1 Nguyên lý chung kỹ thuật PCR 15 2.5.2 Mồi (primer) sử dụng PCR 16 2.6 Điện di gel agarose 17 2.6.1 Nguyên tắc kỹ thuật điện di 17 2.6.2 Các kỹ thuật điện di chủ yếu 18 2.6.2.1 Điện di gel agarose 18 2.6.2.2 Điện di gel polyacrylamide 18 2.7 Phương pháp giải trình tự DNA 18 2.7.1 Giải trình tự gen theo phương pháp dideoxy 18 2.7.2 Giải trình tự gen máy giải trình tự gen tự động 19 2.7.3 Phần mềm phân tích trình tự DNA giải mã 19 2.8 Tình hình nghiên cứu nước 19 2.8.1 Trong nước 19 2.8.2 Ngoài nước 20 CHƯƠNG PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 3.1 Phương tiện nghiên cứu: 22 3.1.1 Thời gian – địa điểm thực 22 3.1.2 Vật liệu: 22 3.1.3 Dụng cụ - thiết bị : 22 3.1.4 Hóa chất 23 3.1.4.1 Môi trường phân lập vi khuẩn nội sinh 23 3.1.4.2 Môi trường khảo sát khả hòa tan lân 23 3.1.4.3 Môi trường khảo sát khả tổng hợp NH4 24 3.1.4.4 Hóa chất nhuộm Gram vi khuẩn 25 3.1.4.5 Hóa chất trích DNA 25 3.1.4.6 Hóa chất đo IAA: 25 Chuyên ngành Vi sinh vật học iii Viện NC & PT CNSH Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 37 -2014 Trường ĐHCT 3.1.4.7 Hóa chất đo lượng đạm vi khuẩn cố định 25 3.1.4.8 Hóa chất thực phản ứng PCR 25 3.2 Phương pháp nghiên cứu 26 3.2.1 Phân lập vi khuẩn nội sinh 26 3.2.2 Quan sát hình dạng khả chuyên động vi khuẩn nội sinh Diếp cá 27 3.2.3 Nhuộm Gram vi khuẩn nội sinh 29 3.2.4 Xác định khả tổng hợp NH4+ 29 3.2.5 Xác định khả hòa tan lân 31 3.2.6 Xác định khả tổng hợp IAA 31 3.2.7 Thử nghiệm khả kháng khuẩn số dòng vi khuẩn phân lập 33 3.2.8 Sử dụng kỹ thuật PCR nhận diện số dòng vi khuẩn nội sinh có triển vọng 33 3.2.9 Phần mềm xử lý số liệu 35 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 36 4.1 Kết phân lập vi khuẩn 36 4.1.1 Phân lập vi khuẩn 36 4.1.2 Đặc điểm khuẩn lạc 37 4.1.3 Đặc điểm tế bào vi khuẩn 39 4.2 Kết khảo sát khả tổng hợp NH4+ dòng vi khuẩn 41 4.2.1 Khả tạo ammonium dòng vi khuẩn nhóm phân lập từ rễ, thân Diếp cá ( MR1 – MR4, MT1, MT2) 41 4.2.2 Khả tạo ammonium dòng vi khuẩn nhóm phân lập từ Diếp cá ( ML1 – ML9) 42 4.2.3 Khả tạo ammonium dòng vi khuẩn triển vọng phân lập từ rễ, thân, Diếp cá 43 4.3 Kết khảo sát khả tổng hợp indole –3– acetic acid (IAA)của dòng vi khuẩn 45 Chuyên ngành Vi sinh vật học iv Viện NC & PT CNSH Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 37 -2014 Trường ĐHCT 4.3.1 Khả tạo IAA dòng vi khuẩn nhóm phân lập từ rễ, thân Diếp cá (MR1 – MR4, MT1, MT2) 45 4.3.2 Khả tạo IAA dòng vi khuẩn nhóm phân lập từ Diếp cá ( ML1 – ML9 ) 46 4.3.3 Khả tạo IAA dòng vi khuẩn triển vọng phân lập từ rễ, thân, Diếp cá 48 4.4 Kết khảo sát khả hòa tan lân khó tan 49 4.5 Kết khảo sát khả kháng khuẩn dòng vi khuẩn 51 4.5.1 Khảo sát khả kháng khuẩn vi khuẩn nội sinh với vi khuẩn gây bệnh E.coli 51 4.5.2 Khả kháng khuẩn vi khuẩn nội sinh với vi khuẩn gây bệnh cá Aeromonas hydrophila 52 4.6 Nhận diện số dòng vi khuẩn nội sinh 56 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 58 5.1 Kết luận 58 5.2 Đề nghị 58 TÀI LIỆU THAM KHẢO 59 PHỤ LỤC Chuyên ngành Vi sinh vật học v Viện NC & PT CNSH Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 37 -2014 Trường ĐHCT DANH SÁCH BẢNG Trang Bảng : Môi trường PDA 23 Bảng : Môi trường NBRIP đặc (Nautiyal, 1999) 23 Bảng : Môi trường NFb (g/l) (Krieg Dobereiner, 1984) 24 Bảng : Thành phần dung dịch vi lượng 24 Bảng : Thành phần dung dịch vitamin 24 Bảng : Thành phần chất phản ứng PCR 26 Bảng : Chu kỳ phản ứng PCR khuếch đại đoạn gen vi khuẩn nội sinh 34 Bảng : Vị trí địa điểm thu mẫu dòng vi khuẩn phân lập từ Diếp cá môi trường PDA 37 Bảng : Đặc tính khuẩn lạc dòng vi khuẩn phân lập môi trường PDA 38 Bảng 10 : Đặc điểm tế bào dòng vi khuẩn phân lập môi trường PDA 40 Bảng 11 : Lượng ammonium dòng vi khuẩn nhóm 1(MR1 – MR4, MT1, MT2) tổng hợp theo thời gian (µg/ml) 42 Bảng 12 : Lượng ammonium dòng vi khuẩn nhóm (ML1 – ML9) tổng hợp theo thời gian (µg/ml) 43 Bảng 13 : Lượng IAA trung bình dòng vi khuẩn nhóm 1(MR1 – MR4, MT1, MT2) tổng hợp theo thời gian (µg/ml) 46 Bảng 14 : Lượng IAA trung bình dòng vi khuẩn nhóm (ML1 – ML9) tổng hợp theo thời gian (µg/ml) 48 Bảng 15 : Hiệu hòa tan lân dòng vi khuẩn phân lập môi trường NBRIP đặc 51 Bảng 16 : Khả kháng khuẩn dòng vi khuẩn phân lập với vi khuẩn E.coli 52 Bảng 17 : Khả kháng khuẩn dòng vi khuẩn phân lập với vi khuẩn Aeromonas hydrophila 54 Bảng 18 : Kết nhận diện dòng vi khuẩn triển vọng 56 Chuyên ngành Vi sinh vật học vi Viện NC & PT CNSH Đề cương tốt nghiệp Đại học khóa 37 -2014 Trường ĐHCT Kết thí nghiệm 1.1 Kết khảo sát hàm lượng ammonium dòng vi khuẩn phân lập môi trường PDA Bảng 19: Giá trị OD lượng đạm sinh dòng vi khuẩn môi trường NFb ngày Dòng vi khuẩn MR1 MR2 MR3 MR4 MT1 MT2 ML1 ML2 ML3 ML4 ML5 ML6 ML7 ML8 ML9 OD1 0,070 0,053 0,050 0,055 0,078 0,035 0,060 0,087 0,063 0,074 0,075 0,063 0,049 0,093 0,058 Đạm (µg/ml) 0,416 0,302 0,281 0,315 0,471 0,180 0,349 0,531 0,369 0,444 0,450 0,369 0,275 0,572 0,335 OD 0,081 0,041 0,057 0,059 0,067 0,034 0,055 0,079 0,074 0,070 0,076 0,076 0,043 0,098 0,057 Đạm (µg/ml) 0,491 0,220 0,329 0,342 0,396 0,173 0,315 0,477 0,444 0,416 0,457 0,457 0,234 0,606 0,329 OD 0,073 0,047 0,042 0,053 0,076 0,036 0,052 0,090 0,073 0,078 0,075 0,089 0,054 0,087 0,055 Đạm (µg/ml) 0,437 0,261 0,227 0,302 0,457 0,187 0,295 0,552 0,437 0,471 0,450 0,545 0,308 0,531 0,315 Bảng 20: Giá trị OD lượng đạm sinh dòng vi khuẩn môi trường NFb ngày Dòng vi khuẩn MR1 MR2 MR3 MR4 MT1 MT2 ML1 ML2 ML3 ML4 ML5 ML6 ML7 ML8 ML9 OD1 Đạm (µg/ml) OD Đạm (µg/ml) OD Đạm (µg/ml) 0,023 0,030 0,057 0,044 0,038 0,034 0,015 0,049 0,025 0,039 0,020 0,018 0,043 0,069 0,041 0,022 0,062 0,213 0,140 0,107 0,084 0,000 0,168 0,034 0,112 0,006 0,000 0,135 0,280 0,123 0,046 0,031 0,055 0,042 0,035 0,031 0,015 0,033 0,024 0,038 0,022 0,021 0,039 0,065 0,036 0,151 0,067 0,202 0,129 0,090 0,067 0,000 0,078 0,028 0,107 0,017 0,011 0,112 0,258 0,095 0,035 0,034 0,060 0,031 0,040 0,033 0,014 0,034 0,025 0,037 0,037 0,020 0,046 0,069 0,039 0,090 0,084 0,230 0,067 0,118 0,078 0,000 0,084 0,034 0,101 0,101 0,006 0,151 0,280 0,112 Bảng 21: Giá trị OD lượng đạm sinh dòng vi khuẩn môi trường NFb ngày Dòng vi khuẩn MR1 MR2 MR3 MR4 MT1 MT2 ML1 OD1 Đạm (µg/ml) OD Đạm (µg/ml) OD Đạm (µg/ml) 0,051 0,068 0,059 0,062 0,051 0,044 0,053 0,519 0,534 0,576 0,598 0,519 0,469 0,534 0,050 0,048 0,064 0,066 0,057 0,044 0,052 0,512 0,498 0,612 0,626 0,562 0,469 0,526 0,049 0,056 0,070 0,058 0,053 0,045 0,040 0,505 0,555 0,655 0,569 0,534 0,476 0,441 Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC & PT CNSH Đề cương tốt nghiệp Đại học khóa 37 -2014 ML2 ML3 ML4 ML5 ML6 ML7 ML8 ML9 0,067 0,051 0,082 0,064 0,053 0,086 0,063 0,067 0,633 0,519 0,740 0,612 0,534 0,769 0,605 0,633 Trường ĐHCT 0,077 0,053 0,079 0,062 0,059 0,080 0,063 0,061 0,705 0,534 0,719 0,598 0,576 0,726 0,605 0,591 0,069 0,057 0,080 0,066 0,056 0,086 0,068 0,065 0,648 0,562 0,726 0,626 0,555 0,769 0,641 0,619 1.2 Kết khảo sát hàm lượng IAA dòng vi khuẩn phân lập môi trường PDA Bảng 22: Giá trị OD lượng IAA sinh dòng vi khuẩn môi trường NFb ngày Dòng vi khuẩn MR1 MR2 MR3 MR4 MT1 MT2 ML1 ML2 ML3 ML4 ML5 ML6 ML7 ML8 ML9 OD1 IAA (µg/ml) OD IAA (µg/ml) OD IAA (µg/ml) 0,064 0,055 0,061 0,075 0,066 0,054 0,065 0,059 0,050 0,069 0,073 0,057 0,050 0,062 0,054 3,841 2,413 3,365 5,587 4,159 2,254 4,000 3,048 1,619 4,635 5,270 2,730 1,619 3,524 2,254 0,055 0,059 0,076 0,072 0,069 0,059 0,066 0,056 0,058 0,060 0,069 0,049 0,053 0,067 0,055 2,413 3,048 5,746 5,111 4,635 3,048 4,159 2,571 2,889 3,206 4,635 1,460 2,095 4,317 2,413 0,060 0,057 0,067 0,079 0,072 0,057 0,068 0,054 0,055 0,077 0,064 0,057 0,051 0,057 0,061 3,206 2,730 4,317 6,222 5,111 2,730 4,476 2,254 2,413 5,905 3,841 2,730 1,778 2,730 3,365 Bảng 23: Giá trị OD lượng IAA sinh dòng vi khuẩn môi trường NFb ngày Dòng vi khuẩn MR1 MR2 MR3 MR4 MT1 MT2 ML1 ML2 ML3 ML4 ML5 ML6 ML7 ML8 ML9 OD1 IAA (µg/ml) OD IAA (µg/ml) OD IAA (µg/ml) 0,082 0,108 0,091 0,085 0,081 0,126 0,089 0,082 0,079 0,091 0,087 0,080 0,082 0,083 0,118 1,278 2,756 1,790 1,449 1,222 3,778 1,676 1,278 1,108 1,790 1,563 1,165 1,278 1,335 3,324 0,085 0,123 0,090 0,091 0,080 0,119 0,090 0,080 0,083 0,092 0,086 0,086 0,076 0,080 0,135 1,449 3,608 1,733 1,790 1,165 3,381 1,733 1,165 1,335 1,847 1,506 1,506 0,938 1,165 4,290 0,086 0,102 0,086 0,094 0,080 0,110 0,081 0,084 0,081 0,090 0,089 0,073 0,079 0,080 0,100 1,506 2,415 1,506 1,960 1,165 2,869 1,222 1,392 1,222 1,733 1,676 0,767 1,108 1,165 2,301 Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC & PT CNSH Đề cương tốt nghiệp Đại học khóa 37 -2014 Trường ĐHCT Bảng 24: Giá trị OD lượng IAA sinh dòng vi khuẩn môi trường NFb ngày Dòng vi khuẩn MR1 MR2 MR3 MR4 MT1 MT2 ML1 ML2 ML3 ML4 ML5 ML6 ML7 ML8 ML9 OD1 IAA (µg/ml) OD IAA (µg/ml) OD IAA (µg/ml) 0,072 0,074 0,077 0,083 0,067 0,094 0,085 0,069 0,065 0,094 0,064 0,068 0,059 0,069 0,060 1,649 1,753 1,907 2,216 1,392 2,784 2,320 1,495 1,289 2,784 1,237 1,443 0,979 1,495 1,031 0,073 0,069 0,075 0,083 0,064 0,092 0,082 0,060 0,068 0,084 0,065 0,076 0,061 0,075 0,062 1,701 1,495 1,804 2,216 1,237 2,680 2,165 1,031 1,443 2,268 1,289 1,856 1,082 1,804 1,134 0,072 0,066 0,077 0,078 0,066 0,096 0,082 0,065 0,066 0,103 0,071 0,079 0,068 0,069 0,069 1,649 1,340 1,907 1,959 1,340 2,887 2,165 1,289 1,340 3,247 1,598 2,010 1,443 1,495 1,495 1.3 Kết khảo sát khả hòa tan lân dòng vi khuẩn phân lập môi trường PDA Bảng 25: Đường kính khuẩn lạc, đường kính vòng halo hiệu hòa tan lân dòng vi khuẩn ngày Dòng vi khuẩn MR1 MR1 MR1 MR2 MR2 MR2 MR4 MR4 MR4 MT1 MT1 MT1 Khuẩn lạc (cm) 0,8 0,9 0,8 0,9 0,8 0,85 0,9 0,8 0,95 0,9 0,8 0,95 Halo (cm) 0,9 0,95 1,0 0,9 0,95 1,0 0,9 1,1 1,1 1,0 1,3 Hiệu hòa tan (E) 112,5 111,1 118,8 111,1 112,5 111,8 111,1 112,5 115,8 122,2 125,0 136,8 Bảng 26: Đường kính khuẩn lạc, đường kính vòng halo hiệu hòa tan lân dòng vi khuẩn ngày Dòng vi khuẩn MR1 MR1 MR1 MR2 MR2 MR2 MR4 MR4 MR4 MT1 MT1 MT1 Chuyên ngành Vi sinh vật học Khuẩn lạc (cm) 0,9 0,85 0,9 0,75 1,0 1,0 0,85 0,9 0,9 1,1 0,9 1,2 Halo (cm) 1,0 0,95 1,0 1,0 1,2 1,3 1,3 1,4 1,45 1,3 1,2 1,4 Hiệu hòa tan (E) 111,1 111,8 111,1 133,3 120,0 130,0 152,9 155,6 161,1 118,2 133,3 116,7 Viện NC & PT CNSH Đề cương tốt nghiệp Đại học khóa 37 -2014 Trường ĐHCT Bảng 27: Đường kính khuẩn lạc, đường kính vòng halo hiệu hòa tan lân dòng vi khuẩn ngày Dòng vi khuẩn MR1 MR1 MR1 MR2 MR2 MR2 MR4 MR4 MR4 MT1 MT1 MT1 Khuẩn lạc (cm) 1,1 1,0 1,1 0,75 1,15 1,15 0,95 1,0 1,0 1,25 1,1 1,3 Halo (cm) 1,45 1,3 1,35 1,5 1,5 1,6 1,7 1,65 1,6 1,5 1,3 1,5 Hiệu hòa tan (E) 131,8 130,0 122,7 200,0 130,4 139,1 157,9 165,0 160,0 120,0 109,1 115,4 1.4 Khả kháng E.Coli dòng vi khuẩn phân lập môi trường PDA Bảng 28: Đường kính khuẩn lạc, đường kính vòng sáng đường kính vòng vô khuẩn dòng vi khuẩn ngày Dòng vi khuẩn MT1 MT1 Khuẩn lạc (mm) Vòng sáng (mm) 12 12 Vòng vô khuẩn (mm) Bảng 29: Đường kính khuẩn lạc, đường kính vòng sáng đường kính vòng vô khuẩn dòng vi khuẩn ngày Dòng vi khuẩn MT1 MT1 Khuẩn lạc (mm) 8 Vòng sáng (mm) 13 13 Vòng vô khuẩn (mm) 5 Bảng 30: Đường kính khuẩn lạc, đường kính vòng sáng đường kính vòng vô khuẩn dòng vi khuẩn ngày Dòng vi khuẩn MT1 MT1 Khuẩn lạc (mm) Vòng sáng (mm) 18 14 Vòng vô khuẩn (mm) 1.5 Khả kháng Aeromonas hydrophila dòng vi khuẩn phân lập môi trường PDA Bảng 31: Đường kính khuẩn lạc, đường kính vòng sáng đường kính vòng vô khuẩn dòng vi khuẩn ngày Dòng vi khuẩn MR2 MR2 MR4 MR4 MT1 MT1 MT2 MT2 ML1 ML1 ML2 ML2 Chuyên ngành Vi sinh vật học Khuẩn lạc (mm) 8 9 8 10 8 Vòng sáng (mm) 28 25 28 33 16 16 15 14 14 14 13 14 Vòng vô khuẩn (mm) 19 17 20 24 8 6 5 Viện NC & PT CNSH Đề cương tốt nghiệp Đại học khóa 37 -2014 Trường ĐHCT Bảng 32: Đường kính khuẩn lạc, đường kính vòng sáng đường kính vòng vô khuẩn dòng vi khuẩn ngày Dòng vi khuẩn MR2 MR2 MR4 MR4 MT1 MT1 MT2 MT2 ML1 ML1 ML2 ML2 Khuẩn lạc (mm) 9 10 11 10 12 9 11 Vòng sáng (mm) 28 26 26 2,2 21 21 15 17 18 16 14 20 Vòng vô khuẩn (mm) 19 18 17 12 10 11 Bảng 33: Đường kính khuẩn lạc, đường kính vòng sáng đường kính vòng vô khuẩn dòng vi khuẩn ngày Dòng vi khuẩn MR2 MR2 MR4 MR4 MT1 MT1 MT2 MT2 ML1 ML1 ML2 ML2 Khuẩn lạc (cm) 10 11 11 11 13 11 10 Vòng sáng (cm) 27 28 20 23 16 18 16 20 20 18 15 15 Vòng vô khuẩn (mm) 19 18 12 11 Bảng 34: Lượng NH4+ (µg/ml) trung bình dòng vi khuẩn triển vọng tạo phân lập từ rễ, thân, Diếp cá Dòng vi khuẩn MR3 MR4 ML4 ML7 CV (%) Chuyên ngành Vi sinh vật học Đạm ngày2 Đạm ngày Đạm ngày (µg/ml) (µg/ml) (µg/ml) 0,279b 0,215a 0,614b 0,320b 0,112b 0,598b 0,444a 0,107b 0,728a 0,272b 0,133b 0,755a 10,92 16,42 4,14 Viện NC & PT CNSH Đề cương tốt nghiệp Đại học khóa 37 -2014 Trường ĐHCT Bảng 35 : Lượng IAA (µg/ml) trung bình dòng vi khuẩn triển vọng tạo phân lập từ rễ, thân, Diếp cá Dòng vi khuẩn MR4 MT2 ML1 ML4 ML5 CV (%) IAA ngày2 IAA ngày IAA ngày (µg/ml) (µg/ml) (µg/ml) 5,640a 1,733b 2,130b 2,677c 3,343a 2,784a 4,212b 1,544b 2,217b 4,582ab 1,790b 2,766a 4,582ab 1,582b 1,375c 10,92 16,42 4,14 Kết thống kê 3.1 Kết thống kê khảo sát lượng ammonium dòng vi khuẩn tạo 3.1.1 Kết khảo sát lượng ammonium dòng vi khuẩn nhóm tạo Ngày ANOVA Table for ngày by dòng Source Dòng Error Total DF 12 17 SS 0.16756 0.01568 0.18324 MS 0.03351 0.00131 F 25.66 P 0.000 CV= 11,24% Multiple Range Tests for đạm ngày by dòng vi khuẩn Method: 95.0 percent LSD Dòng N Mean Grouping MR1 0.44800 A MT1 0.44133 A MR4 0.31967 B MR3 0.27900 B MR2 0.26100 B MT2 0.18000 C Ngày ANOVA Table for ngày by dòng Source Dòng Error Total DF 12 17 SS 0.04260 0.01264 0.05523 MS 0.00852 0.00105 F 8.09 P 0.002 CV= 29,19% Multiple Range Tests for đạm ngày by dòng vi khuẩn Method: 95.0 percent LSD Dòng N Mean Grouping MR3 0.21500 A MR4 0.11200 B MT1 0.10500 B MR1 0.08767 B MT2 0.07633 B MR2 0.07100 B Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC & PT CNSH Đề cương tốt nghiệp Đại học khóa 37 -2014 Trường ĐHCT Ngày ANOVA Table for ngày by dòng Source Dòng Error Total DF 12 17 SS 0.043164 0.007499 0.050663 MS 0.008633 0.000625 F 13.82 P 0.000 CV= 4,6% Multiple Range Tests for đạm ngày by dòng vi khuẩn Method: 95.0 percent LSD Dòng N Mean Grouping MR3 0.61433 A MR4 0.59767 A MT1 0.53833 B MR2 0.52900 B MR1 0.51200 B C MT2 0.47133 C 3.1.2 Kết khảo sát lượng ammonium dòng vi khuẩn nhóm tạo Ngày ANOVA Table for ngày by dòng Source Dòng Error Total DF 18 26 SS 0.22809 0.03073 0.25882 MS 0.02851 0.00171 F 16.70 P 0.000 CV= 9,84% Multiple Range Tests for đạm ngày by dòng vi khuẩn Method: 95.0 percent LSD Dòng N Mean Grouping ML8 0.56967 A ML2 0.52000 A B ML6 0.45700 B C ML5 0.45233 B C ML4 0.44367 C ML3 0.41667 C ML9 0.32633 D ML1 0.31967 D ML7 0.27233 D Ngày ANOVA Table for ngày by dòng Source Dòng Error Total DF 18 26 SS 0.171629 0.012099 0.183729 MS 0.021454 0.000672 F 31.92 P 0.000 CV= 28,76% Multiple Range Tests for đạm ngày by dòng vi khuẩn Method: 95.0 percent LSD Dòng N Mean ML8 0.27267 ML7 0.13267 ML9 0.11000 ML2 0.11000 ML4 0.10667 ML5 0.04133 ML3 0.03200 ML6 0.00567 ML1 0.00000 Grouping A B B B B C C C C Ngày Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC & PT CNSH Đề cương tốt nghiệp Đại học khóa 37 -2014 Trường ĐHCT ANOVA Table for ngày by dòng Source Dòng Error Total DF 18 26 SS 0.170863 0.013665 0.184529 MS 0.021358 0.000759 F 28.13 P 0.000 CV= 4,44% Multiple Range Tests for đạm ngày by dòng vi khuẩn Method: 95.0 percent LSD Dòng N Mean Grouping ML7 0.75467 A ML4 0.72833 A ML2 0.66200 B ML8 0.61700 B C ML9 0.61433 C ML5 0.61200 C ML6 0.55500 D ML3 0.53833 D E ML1 0.50033 E 3.1.3 Kết khảo sát lượng ammonium dòng vi khuẩn triển vọng tạo Ngày ANOVA Table for ngày by dòng Source Dòng Error Total DF 11 SS 0.05684 0.01030 0.06714 MS 0.01895 0.00129 F 14.71 P 0.001 CV= 10,92% Multiple Range Tests for đạm ngày by dòng vi khuẩn Method: 95.0 percent LSD Dòng N Mean Grouping ML4 0.44367 A MR4 0.31967 B MR3 0.27900 B ML7 0.27233 B Ngày ANOVA Table for ngày by dòng Source Dòng Error Total DF 11 SS 0.022692 0.004325 0.027017 MS 0.007564 0.000541 F 13.99 P 0.002 CV= 16,42% Multiple Range Tests for đạm ngày by dòng vi khuẩn Method: 95.0 percent LSD Dòng N Mean Grouping MR3 0.21500 A ML7 0.13267 B MR4 0.11200 B ML4 0.10667 B Ngày ANOVA Table for ngày by dòng Source Dòng Error Total DF 11 SS MS 0.0565x`38 0.018846 0.006215 0.000777 0.062752 F 24.26 P 0.000 CV= 4,14% Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC & PT CNSH Đề cương tốt nghiệp Đại học khóa 37 -2014 Trường ĐHCT Multiple Range Tests for đạm ngày by dòng vi khuẩn Method: 95.0 percent LSD Dòng N Mean Grouping ML7 0.75467 A ML4 0.72833 A MR3 0.61433 B MR4 0.59767 B 3.2 Kết thống kê khảo sát lượng IAA dòng vi khuẩn tạo 3.2.1 Kết khảo sát lượng IAA dòng vi khuẩn nhóm tạo Ngày ANOVA Table for ngày by dòng Source Dòng Error Total DF 12 17 SS 21.957 5.492 27.448 MS 4.391 0.458 F 9.60 P 0.001 CV= 17,41% Multiple Range Tests for IAA ngày by dòng vi khuẩn Method: 95.0 percent LSD Dòng N Mean Grouping MR4 5.6400 A MT1 4.6350 A MR3 4.4760 A MR1 3.1533 B MR2 2.7303 B MT2 2.6773 B Ngày ANOVA Table for ngày by dòng Source Dòng Error Total DF 12 17 SS 11.512 1.381 12.893 MS 2.302 0.115 F 20.00 P 0.000 CV= 16,59% Multiple Range Tests for IAA ngày by dòng vi khuẩn Method: 95.0 percent LSD Dòng N Mean Grouping MT2 3.3427 A MR2 2.9263 A MR4 1.7330 B MR3 1.6763 B MR1 1.4110 B MT1 1.1840 B Ngày ANOVA Table for ngày by dòng Source Dòng Error Total DF 12 17 SS 4.0743 0.1738 4.2481 MS 0.8149 0.0145 F 56.25 P 0.000 CV= 6,40% Multiple Range Tests for IAA ngày by dòng vi khuẩn Method: 95.0 percent LSD Dòng N Mean Grouping MT2 2.7837 A MR4 2.1303 B MR3 1.8727 C MR1 1.6663 C D MR2 1.5293 D E MT1 1.3230 E Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC & PT CNSH Đề cương tốt nghiệp Đại học khóa 37 -2014 Trường ĐHCT 3.2.2 Kết khảo sát lượng IAA dòng vi khuẩn nhóm tạo Ngày ANOVA Table for ngày by dòng Source Dòng Error Total DF 18 26 SS 27.062 9.106 36.168 MS 3.383 0.506 F 6.69 P 0.000 CV= 22,35% Multiple Range Tests for IAA ngày by dòng vi khuẩn Method: 95.0 percent LSD DÒng N Mean Grouping ML5 4.5820 A ML4 4.5820 A ML1 4.2117 A ML8 3.5237 A B ML9 2.6773 B C ML2 2.6243 B C ML3 2.3070 B C ML6 2.3067 B C ML7 1.8307 C Ngày ANOVA Table for ngày by dòng Source Dòng Error Total DF 18 26 SS 11.340 2.559 13.899 MS 1.417 0.142 F 9.97 P 0.000 CV= 23,91% Multiple Range Tests for IAA ngày by dòng vi khuẩn Method: 95.0 percent LSD Dòng N Mean Grouping ML9 3.3050 A ML4 1.7900 B ML5 1.5817 B C ML1 1.5437 B C ML2 1.2783 B C ML8 1.2217 B C ML3 1.2217 B C ML6 1.1460 B C ML7 1.1080 C Ngày ANOVA Table for ngày by dòng Source Dòng Error Total DF 18 26 SS 6.9146 1.1653 8.0800 MS 0.8643 0.0647 F 13.35 P 0.000 CV= 15,53% Multiple Range Tests for IAA ngày by dòng vi khuẩn Method: 95.0 percent LSD Dòng N Mean Grouping ML4 2.7663 A ML1 2.2167 B ML6 1.7697 C ML8 1.5980 C D ML5 1.3747 C D ML3 1.3573 C D ML2 1.2717 D ML9 1.2200 D ML7 1.1680 D Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC & PT CNSH Đề cương tốt nghiệp Đại học khóa 37 -2014 Trường ĐHCT 3.2.3 Kết khảo sát lượng IAA dòng vi khuẩn triển vọng tạo Ngày ANOVA Table for ngày by dòng Source Dòng Error Total DF 10 14 SS 13.764 5.730 19.494 MS 3.441 0.573 F 6.01 P 0.010 CV= 17,45% Multiple Range Tests for IAA ngày by dòng vi khuẩn Method: 95.0 percent LSD Dòng N Mean Grouping MR4 5.6400 A ML5 4.5820 A B ML4 4.5820 A B ML1 4.2117 B MT2 2.6773 C Ngày ANOVA Table for ngày by dòng Source Dòng Error Total DF 10 14 SS 6.9041 0.7291 7.6332 MS 1.7260 0.0729 F 23.67 P 0.000 CV= 13,5% Multiple Range Tests for IAA ngày by dòng vi khuẩn Method: 95.0 percent LSD Dòng N Mean Grouping MT2 3.3427 A ML4 1.7900 B MR4 1.7330 B ML5 1.5817 B ML1 1.5437 B Ngày ANOVA Table for ngày by dòng Source Dòng Error Total DF 10 14 SS 3.9988 0.6373 4.6362 MS 0.9997 0.0637 F 15.69 P 0.000 CV= 11,2% Multiple Range Tests for IAA ngày by dòng vi khuẩn Method: 95.0 percent LSD Dòng N Mean Grouping MT2 2.7837 A ML4 2.7663 A ML1 2.2167 B MR4 2.1303 B ML5 1.3747 C Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC & PT CNSH Đề cương tốt nghiệp Đại học khóa 37 -2014 Trường ĐHCT Kết khảo sát khả hòa tan lân dòng vi khuẩn 3.3 Ngày ANOVA Table for ngày by dòng Source Dòng Error Total DF 11 SS 513.0 166.4 679.3 MS 171.0 20.8 F 8.22 P 0.008 CV= 3,9% Multiple Range Tests for ngày by dòng vi khuẩn Method: 95.0 percent LSD Dòng N Mean Grouping MT1 128.000 A MR1 114.133 B MR4 113.133 B MR2 111.800 B Ngày ANOVA Table for ngày by dòng Source Dòng Error Total DF 11 SS 3328.8 299.8 3628.5 MS 1109.6 37.5 F 29.61 P 0.000 CV= 4,7% Multiple Range Tests for ngày by dòng vi khuẩn Method: 95.0 percent LSD Dòng N Mean Grouping MR4 156.533 A MR2 127.767 B MT1 122.733 B C MR1 111.333 C Ngày ANOVA Table for ngày by dòng Source Dòng Error Total DF 11 SS 4975 3123 8098 MS 1658 390 F 4.25 P 0.045 CV= 13,8% Multiple Range Tests for ngày by dòng vi khuẩn Method: 95.0 percent LSD Dòng N Mean Grouping MR4 167.98 A MR2 156.52 A B MR1 128.18 B C MT1 117.86 C Kết khảo sát khả kháng Aeromonas hydrophila 3.4 Ngày ANOVA Table for ngày by dòng Source Dòng Error Total DF 11 SS 539.75 14.50 554.25 MS 107.95 2.42 F 44.67 P 0.000 CV= 14,5% Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC & PT CNSH Đề cương tốt nghiệp Đại học khóa 37 -2014 Trường ĐHCT Multiple Range Tests for ngày by dòng vi khuẩn Method: 95.0 percent LSD Dòng N Mean Grouping MR4 22.000 A MR2 18.000 B MT1 7.500 C MT2 7.000 C ML2 5.000 C ML1 5.000 C Ngày ANOVA Table for ngày by dòng Source Dòng Error Total DF 11 SS 233.75 22.50 256.25 MS 46.75 3.75 F 12.47 P 0.004 CV= 18,0% Multiple Range Tests for ngày by dòng vi khuẩn Method: 95.0 percent LSD Dòng N Mean Grouping MR2 18.500 A MR4 14.500 A B MT1 10.500 B C MT2 7.500 C ML2 7.000 C ML1 6.500 C Ngày ANOVA Table for ngày by dòng Source Dòng Error Total DF 11 SS 225.67 10.00 235.67 MS 45.13 1.67 F 27.08 P 0.000 CV= 13,1% Multiple Range Tests for ngày by dòng vi khuẩn Method: 95.0 percent LSD Dòng N Mean Grouping MR2 18.500 A MR4 10.500 B MT2 10.000 B ML1 8.000 B MT1 7.500 B C ML2 4.500 C 3.5 Kết nhận diện dòng vi khuẩn triển vọng 3.5.1 Trình tự gen mã hóa 16S-rRNA dòng MT1 CCGTTACACGCAGGGCCATACCAAATGCAAGGTCGAAACGGGTGCACAAC AGAGCTTGCTCTCGGGTGACGAGTGGCGGACGGGTGAGTAATGTCTGGGA AACTGCCTGATGGAGGGGGATAACTACTGGAAACGGTAGCTAATACCGCA GAATGTCGCAAGACCAAAGAGGGGGACCTTCGGGCCTCTTGCCATCAGAT GTGCCCAGATGGGATTAGCTAGTAGGTGGGGTAACGGCTCACCTAGGCGA CGATCCCTAGCTGGTCTGAGAGGATGACCAGCCACACTGGAACTGAGACA CGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGC Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC & PT CNSH Đề cương tốt nghiệp Đại học khóa 37 -2014 Trường ĐHCT GCAAGCCTGATGCAGCCATGCCGCGTGTATGAAGAAGGCCTTCGGGTTGT AAAGTACTTTCAGCGGGGAGGAAGGTGTTGTGGTTAATAACCACAGCAAT TGACGTTACCCGCAGAAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCG GTAATACGGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCA CGCAGGCGGTCTGTCAAGTCGGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGA ACTGCCATTCGAAACTGGCAGGCTAGGAGTCTTGTTAGAGGGGGGGTAAG AATTCCAGGTGTAGCGGGTGAAATGGCGTAGAGATCTGGGAGGGAATACC GGTGGGCGAAGGCGGCCCCCCTGGGACAAAGACTGACGCTCAGGTGCGAA AAGCGGGGGGGGAGCAAAACAGGGATTAGATACCCCTGGGTAGTCCCACG CCCGTAAACGATTGTCGATTTTGGAAGGTTTGTTGCCCCTTGAGGCGTGGT CTTCCCGGGATCTAACGCGGTTTAATTCGACCCGCTCTTGGGGAAGGTACC GTGCCCGCATAGGGTTTAACAACACTTCCAAAATTGAATTTAGACGGGGTG ACTCCCGCTCATTTCACTATGTCGTTCGATGGAGAGATGC 3.5.2 Trình tự gen mã hóa 16S-rRNA dòng MR4 CGTTCCAACAAGCCCCAAACCATGCAAAGTCGAACGGTAGCACAGAGAGC TTGCTCTCGGGTGACGAGTGGCGGACGGGTGAGTAATGTCTGGGAAACTG CCTGATGGAGGGGGATAACTACTGGAAACGGTAGCTAATACCGCATAACG TCGCAAGACCAAAGAGGGGGACCTTCGGGCCTCTTGCCATCAGATGTGCC CAGATGGGATTAGCTAGTAGGTGGGGTAACGGCTCACCTAGGCGACGATC CCTAGCTGGTCTGAGAGGATGACCAGCCACACTGGAACTGAGACACGGTC CAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGCAAG CCTGATGCAGCCATGCCGCGTGTATGAAGAAGGCCTTCGGGTTGTAAAGTA CTTTCAGCGGGGAGGAAGGTGTTGTGGTTAATAACCACAGCAATTGACGTT ACCCGCAGAAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATAC GGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCACGCAGGC GGTCTGTCAAGTCGGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGCATT CGAAACTGGCAGGCTGGAGTCTTGTAGAGGGGGGTAGAATTCCAGGTGTA GCGGTGAAATGCGTAGAGATCTGGAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGGCCC CCTGGACAAAGACTGACGCTCAGGTGCGAAAGCGTGGGGGAGCAAACAG GATTAGATACCCTGGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGATTTGGAGGTT GTTGCCCTTGGAGCGTGGCCTTCCGGAGCTAACGCGTTAAATCGGACCGCC Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC & PT CNSH Đề cương tốt nghiệp Đại học khóa 37 -2014 Trường ĐHCT TGGGGAAGTACCGGCGCAATGATTAAAACTTCAGATGAATTGAACGGTGG GGTGGTCCCGGCTGCATCGAT 3.5.3 Trình tự gen mã hóa 16S-rRNA dòng MT2 CTGTGTCTGGAGGCTAACCCATGCAGGTCGAGCGGGGGGAAGGGTAGCTT GCTACTGGACCTAGCGGCGGACGGGTGAGTAATGCTTAGGAATCTGCCTAT TAGTGGGGGACAACATCTCGAAAGGGATGCTAATACCGCATACGTCCTAC GGGAGAAAGCAGGGGATCTTCGGACCTTGCGCTAATAGATGAGCCTAAGT CGGATTAGCTAGTTGGTGGGGTAAAGGCCTACCAAGGCGACGATCTGTAG CGGGTCTGAGAGGATGATCCGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGAC TCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGGACAATGGGGGGAACCCTGA TCCAGCCATGCCGCGTGTGTGAAGAAGGCCTTATGGTTGTAAAGCACTTTA AGCGAGGAGGAGGCTACTTTAGTTAATACCTAGAGATAGTGGACGTTACT CGCAGAATAAGCACCGGCTAACTCTGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACAGA GGGTGCGAGCGTTAATCGGATTTACTGGGCGTAAAGCGTGCGTAGGCGGC TTATTAAGTCGGATGTGAAATCCCCGAGCTTAACTTGGGAATTGCATTCGA TACTGGTGAGCTAGAGTATGGGAGAGGATGGTAGAATTCCAGGTGTAGCG GTGAAATGCGTAGAGATCTGGAGGAATACCGATGGCGAAGGCAGCCATCT GGCCTAATACTGACGCTGAGGTACGAAAGCATGGGGAGCAAACAGGATTA GATACCCTGGGTAGGTCCATGCCGTAAACGATGTCTACTAGCCCGTTGGGG GCCCTTTTGAAGGCTTTTAGTGGGCGCAGCTAAACGCGATAAAGTAAGACC GCCCTGGGGGAGGTACGGGTCCGCAAGACTTAAAACTTCAAAATGAAATT GACGTGTCCCCGCACCAAGGCCGTGTGTGGACAGACTCACAGTACTGTGAT G Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC & PT CNSH [...]... này bao gồm các loài thuộc chi Azosprillum, Herbaspirillum, Gluconacetobacter, Klebsiella Đến nay có rất ít nghiên cứu về nhóm vi khuẩn nội sinh trong cây Diếp cá vì vậy vi c phân lập vi khuẩn nội sinh trong cây Diếp cá ở tỉnh Kiên Giang được thực hiện 1.2 Mục tiêu Phân lập và tuyển chọn đựợc các dòng vi khuẩn nội sinh trong cây Diếp cá (Houttuynia cordata T.) có những đặc tính: kháng khuẩn tốt, khả... Lá cây Diếp cá (Houttuynia cordata T.) (Hình tự chụp ngày 25/7/2014) 2.3 Tác dụng của cây Diếp cá Theo đông y, Diếp cá có vị cay chua, mùi tanh giống mùi cá, tính mát, có tác dụng thanh nhiệt, giải độc, lợi tiểu, sát trùng, chữa vi m phổi, vi m khớp, lở loét cổ tử cung, táo bón do thói quen, kiết lỵ do vi khuẩn cấp tính, vi m gan vàng mật cấp tính,… Tinh dầu Diếp cá có tác dụng kháng vi m, khánh khuẩn. .. số đặc tính của vi khuẩn nội sinh : Vi khuẩn nội sinh là nhóm sinh vật tiền nhân được liên kết với thực vật, chúng hình thành sự liên hợp với cây chủ của chúng bằng cách hình thành tập đoàn ở các mô bên trong Đối với nông nghiệp, phần lớn vi khuẩn nội sinh không gây hại cho sinh vật chủ, mà ngược lại chúng còn được xem là công cụ để cải tiến năng suất cây trồng nhờ vào các đặc tính sinh học của chúng... kháng sinh đã được tìm thấy trên vi khuẩn nội sinh phân lập từ khoai tây chống lại nấm Fusarium sambucinum, F avenaceum, F oxysporum, Rhizotonia solani và từ bắp chống lai nấm Fusarium miniliformis (Hinton và Bacon, 1995) 2.4.2 Một số vi khuẩn nội sinh thường gặp: Theo nghiên cứu khoa học của các nhà khoa học Trung Quốc, hiện nay người ta đã phân lập được trên dưới 200 dòng vi khuẩn nội sinh trong cây Diếp. .. số bệnh cho cây trồng hoặc Chuyên ngành Vi sinh vật học 1 Vi n NC & PT CNSH Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 37 -2014 Trường ĐHCT kích thích cây trồng sản xuất các hợp chất biến dưỡng thứ cấp giúp cây chống lại các tác nhân gây bệnh Đặc biệt là có những chủng vi sinh vật nội sinh với cây dược liệu có thể sản xuất các hợp chất kháng khuẩn khi chúng sống bên trong cây dược liệu Các nhóm vi sinh vật có... bệnh của cây Diếp Cá mà trong dân gian từ lâu đã sử dụng Phan Văn Cư và Nguyễn Thị Thu Hường (2012), đã chiết tách và định lượng sterols từ lá của cây Diếp Cá (Houttuynia cordata T ) ở Tỉnh Thừa Thiên Huế bằng phương pháp sắc ký lỏng cao áp Cây Diếp Cá chứa beta-caroten và lutein (Hà Thị Bích Ngọc, 2007) 2.8.2 Ngoài nước Hiện nay, trên thế giới có nhiều nghiên cứu về vi khuẩn nội sinh trong cây dựợc... Sedum sp Pseudomonas alni trong lá cây Hoa môi (Callicarpa longifolia) cũng có khả năng kháng khuẩn Gon et al , (2008) khi nghiên cứu công dụng của cây Diếp cá (Houttuynia cordata T.) cho biết dịch chiết của cây này có khả năng diệt khuẩn Salmonella Choi Jee Young et al., (2010) cũng cho biết cây diếp cá có khả năng kháng khuẩn cũng như kháng vi m Ngoài ra, các dịch chiết cây Diếp cá còn có thể giúp gia... (Busarawan et al., 2007) Chuyên ngành Vi sinh vật học 20 Vi n NC & PT CNSH Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 37 -2014 Trường ĐHCT Tập đoàn vi sinh vật nội sinh hoặc sống ở vùng rễ cây trong đó có cây dựợc liệu có khả năng giúp cây tăng trưởng và đồng hóa tốt Từ kết quả mới đây của nhóm nghiên cứu do Giáo sư Renato Fani phụ trách cho thấy, các vi khuẩn nội sinh với các cây trồng như Lavandula officinalis,... thí nghiệm Sinh học Phân tử - Vi n Nghiên cứu và Phát triển Công nghệ Sinh học, Trường Đại học Cần Thơ 3.1.2 Vật liệu: Toàn bộ rễ, thân và lá của cây Diếp Cá được thu thập ở một số xã thuộc huyện Hòn Đất tỉnh Kiên Giang Chủng vi khuẩn E Coli được cung cấp từ PTN Sinh học phân tử - Vi n nghiên cứu và phát triển Công nghệ Sinh học Chủng vi khuẩn Aeromonas hydrophila được cung cấp từ bộ môn bệnh cá, Khoa... 39 Hình 7 : Vi khuẩn Gram âm (A) và vi khuẩn Gram dương (B) được chụp dưới kính hiển vi quang học 40 Hình 8 : Lượng NH4+ (µg/ml) trung bình do các dòng vi khuẩn triển vọng tạo ra được phân lập từ rễ, thân, lá cây Diếp cá 44 Hình 9 : Lượng IAA (µg/ml) trung bình do các dòng vi khuẩn triển vọng tạo ra được phân lập từ rễ, thân, lá cây Diếp cá 49 Hình 10 : Vòng halo do