nghiên cứu xây dựng kỹ thuật nhân dòng vô tính (mericlone) cho một số giống lan thương mại có giá trị cao thuộc chi hồ điệp phalaenopsis

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM HOÀNG THỊ ÁNH NGUYỆT NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG KỸ THUẬT NHÂN DÒNG VÔ TÍNH (Mericlone) CHO MỘT SỐ GIỐNG LAN THƯƠNG MẠI CÓ GIÁ TRỊ CAO THUỘC CHI HỒ ĐIỆP PHALAENOPSIS LUẬN VĂN THẠC SĨ HÀ NỘI – 2014 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM HOÀNG THỊ ÁNH NGUYỆT NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG KỸ THUẬT NHÂN DÒNG VÔ TÍNH (Mericlone) CHO MỘT SỐ GIỐNG LAN THƯƠNG MẠI CÓ GIÁ TRỊ CAO THUỘC CHI HỒ ĐIỆP PHALAENOPSIS CHUYÊN NGÀNH : CÔNG NGHỆ SINH HỌC MÃ SỐ: 60.42.02.01 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: GS.TS NGUYỄN QUANG THẠCH HÀ NỘI – 2014 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu, kết nghiên cứu luận văn trung thực chưa sử dụng để bảo vệ học vị Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận văn cảm ơn thông tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Tác giả luận văn HOÀNG THỊ ÁNH NGUYỆT Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page i LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn nhận giúp đỡ nhiều mặt cấp lãnh đạo, tập thể cá nhân Trước tiên xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc kính trọng tới GS.TS Nguyễn Quang Thạch, ThS Nguyễn Thị Sơn tận tình bảo, hướng dẫn giúp đỡ hoàn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn ban lãnh đạo cán Viện Sinh học Nông nghiệp giúp đỡ suốt trình làm việc thực đề tài nghiên cứu Tôi xin gửi lời cảm ơn tới ban lãnh đạo Trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội, ban chủ nhiệm khoa Công nghệ sinh học, Ban quản lý đào tạo, thầy cô giáo môn Công nghệ tế bào thực vật tạo điều kiện giúp đỡ kiến thức chuyên môn suốt năm học tập làm luận văn Cuối xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc tới gia đình, người thân bạn bè cổ vũ, động viên, giúp đỡ suốt thời gian thực đề tài Một lần xin trân trọng cảm ơn! Hà Nội, tháng năm 2014 Tác giả luận văn Hoàng Thị Ánh Nguyệt Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page ii MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt vi Danh mục bảng vii Danh mục hình ix MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Mục đích, yêu cầu Ý nghĩa khoa học thực tiễn Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu lan Hồ Điệp 1.1.1 Nguồn gốc, vị trí phân loại hoa lan Hồ Điệp 1.1.2 Một số đặc điểm chi lan Hồ điệp 1.1.3 Yêu cầu ngoại cảnh lan Hồ Điệp 1.1.4 Giá trị kinh tế sử dụng lan Hồ Điệp 1.1.5 Đặc điểm hình thái giá trị sử dụng giống Phalaenopsis Sogo Yukidian 1.2 Tình hình sản xuất hoa lan Hồ Điệp giới Việt Nam 1.2.1 Tình hình sản xuất hoa lan Hồ Điệp giới 1.1.2 Tình hình sản xuất hoa lan Hồ Điệp Việt Nam 10 1.3 Tình hình nghiên cứu hoa lan Hồ Điệp giới Việt Nam 11 1.3.1 Tình hình nghiên cứu hoa lan Hồ Điệp giới 11 1.3.2 Tình hình nghiên cứu hoa lan Hồ Điệp Việt Nam 16 Chương NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.1 Đối tượng, vật liệu, địa điểm thời gian nghiên cứu 19 2.2 Nội dung phương pháp nghiên cứu 19 2.2.1 Nội dung nghiên cứu 19 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page iii 2.2.2 Phương pháp nghiên cứu 21 2.4 Các tiêu theo dõi 27 2.5 Xử lý số liệu 27 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 28 3.1 Nghiên cứu tạo nguồn vật liệu ban đầu 28 3.1.1 Ảnh hưởng phương pháp khử trùng đến tỷ lệ mẫu sống 28 3.2 Nghiên cứu nuôi cấy khởi động thăm dò khả phát sinh hình thái phận soma 3.2.2 31 Thăm dò khả phát sinh hình thái mô soma nuôi cấy từ vật liệu khác 3.2.3 32 Ảnh hưởng môi trường trạng thái môi trường đến phát sinh hình thái ngồng hoa 3.2.3 33 Ảnh hưởng thời gian cấy chuyển mẫu đến phát sinh hình thái ngồng hoa nuôi cấy khởi động 3.3 35 Nghiên cứu tạo vật liệu nhân nhanh từ nguồn mô soma in vitro tạo từ ngồng hoa 3.3.1 35 Ảnh hưởng Kinetine (KIN) đến phát sinh hình thái từ quan soma in vitro 36 3.3.2 Ảnh hưởng BA đến phát sinh hình thái từ quan soma in vitro 38 3.3.3 Ảnh hưởng IBA đến phát sinh hình thái từ quan soma in vitro 40 3.3.4 Ảnh hưởng 2,4-D đến phát sinh hình thái từ đầu rễ mảnh in vitro 42 3.4 Nghiên cứu tạo chồi từ protocorm 43 3.4.1 Ảnh hưởng tổ hợp BA α NAA tới khả tạo chồi từ protocorm 43 3.4.2 Ảnh hưởng nước dừa đến tốc độ nuôi lớn chồi lan Hồ Điệp 44 3.4.3 Ảnh hưởng BA đến khả chồi lan Hồ Điệp 45 3.4.4 Ảnh hưởng BA đến khả nhân nhanh chồi 46 3.5 Tạo hoàn chỉnh 47 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page iv KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 49 Kết luận 49 Kiến nghị 49 TÀI LIỆU THAM KHẢO 51 PHỤ LỤC 55 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT CT Công thức CV(%) Hệ số biến động (Correlation of Variants) ĐC Đối chứng ĐK Đường kính HSN Hệ số nhân MS Murashige & Shoog, 1962 LSD Sai khác tối thiểu có ý nghĩa mức tin cậy 95% (Least Significant Difference) ND Nước dừa KC Knudson C, 1965 RE Robert Ernst, 1979 THT Than hoạt tính VW Vacin & Went, 1949 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page vi DANH MỤC BẢNG STT Tên bảng Trang 1.1 Tình hình thị trường tiêu thụ lan Hồ Điệp miền Bắc Việt nam 10 1.2 Phương thức sản xuất hoa lan Hồ Điệp chủ yếu Miền bắc Việt nam 10 3.1 Ảnh hưởng phương pháp khử trùng đến tỷ lệ mẫu sống mắt ngủ ngồng hoa (Sau tuần nuôi cấy) 3.2 29 Ảnh hưởng phương pháp khử trùng đến tỷ lệ mẫu sống in vivo (Sau tuần nuôi cấy) 3.3 30 Ảnh hưởng phương pháp khử trùng đến tỷ lệ mẫu sống đầu rễ in vivo (Sau tuần nuôi cấy) 3.4 30 Sự phát sinh hình thái phận soma khác từ in vivo (sau tuần nuôi cấy) 3.5 32 Thăm dò khả phát sinh hình thái mô soma nuôi cấy từ vật liệu khác (sau tuần nuôi cấy) 3.6 33 Ảnh hưởng môi trường trạng thái môi trường đến phát sinh hình thái ngồng hoa (sau tuần nuôi cấy) 3.7 34 Ảnh hưởng thời gian cấy chuyển mẫu đến phát sinh hình thái ngồng hoa (sau tuần nuôi cấy) nuôi cấy khởi động 3.8 35 Ảnh hưởng Kinetine (KIN) đến phát sinh hình thái từ mảnh in vitro (sau 12 tuần nuôi cấy) 3.9 36 Ảnh hưởng Kinetine (KIN) đến phát sinh hình thái từ đầu rễ in vitro (sau 12 tuần nuôi cấy) 3.10 37 Ảnh hưởng BA đến phát sinh hình thái từ mảnh in vitro (sau 12 tuần nuôi cấy) 3.11 38 Ảnh hưởng BA đến phát sinh hình thái từ đầu rễ in vitro (sau 12 tuần nuôi cấy) Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 39 Page vii 3.12 Ảnh hưởng IBA đến phát sinh hình thái từ mảnh in vitro (sau 12 tuần nuôi cấy) 3.13 41 Ảnh hưởng IBA đến phát sinh hình thái từ đầu rễ in vitro (sau 12 tuần nuôi cấy) 3.14 41 Ảnh hưởng 2,4-D đến phát sinh hình thái từ đầu rễ mảnh in vitro (sau 12 tuần nuôi cấy) 3.15 42 Ảnh hưởng tổ hợp BA α NAA tới khả tạo chồi từ protocorm (sau tuần) 3.16 43 Ảnh hưởng nước dừa đến tốc độ nuôi lớn chồi lan Hồ Điệp 44 (sau tuần) 3.17 Ảnh hưởng BA đến khả chồi lan Hồ Điệp (sau tuần nuôi cấy) 3.18 45 Ảnh hưởng BA đến khả nhân nhanh chồi (sau tuần nuôi cấy) 3.19 46 Ảnh hưởng THT đến khả rễ chồi lan Hồ Điệp (sau tuần nuôi cấy) Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 48 Page viii TÀI LIỆU THAM KHẢO A Tài liệu tiếng Việt Đinh Xuân Dực(2003).Nghiên cứu đặc điểm sinh trưởng phát triển kỹ thuật nhân giống, gây trồng số giống phong lan Hồ điệp Hà Tây, Luận án Thạc sỹ khoa học Nông nghiệp Phạm Hoàng Hộ( 2000) Cây cỏ Việt nam NXB trẻ thành phố Hồ Chí Minh Phạm Thị Liên , Nguyễn Xuân , Lê Đức Thảo (2001), “ Đánh giá khả sinh trưởng , phát triển số giống lan Hồ điệp nhập nội từ Hà Lan”, Kết nghiên cứu khoa học, Viện Di truyền Nông nghiệp, tr 144-147 Hoàng Thị Lan Hương, Nguyễn Xuân Linh, Phạm Thị Liên (2004) , “Nghiên cứu quy trình nhân giống lan Hồ điệp Moscow phương pháp nuôi cấy in vitro”,Tạp chí Nông nghiệp phát triển nông thôn, số tháng 3/2004, tr.355-356 Trịnh Thị Hương, Trịnh Thị Lan Anh, Huỳnh Kim Thùy My, Vũ Quốc Luận, Nguyễn Văn Bình, Vũ Thị Hiền, Nguyễn Bá Nam, Nguyễn Thị Thúy Hằng, Nguyễn Minh Nhật, Đặng Xuân Thành, Dương Tấn Nhựt (2009) Ảnh hưởng số dịch chiết có nguồn gốc thực vật thời gian cấy chuyền tới trình nhân nhanh phôi vô tính lan Hồ điệp (Phalaenopsis sp.), tr340-346 Hội nghị CNSH Toàn quốc khu vực phía phía Nam 2009, NXB KH&KT Đào Thị Khuyến, 1993 Hoa cảnh, NXB Văn hóa dân tộc Hà Nội.Hoàng Thị Lan Hương, Nguyễn Xuân Linh, Phạm Thị Liên (2004) , “Nghiên cứu quy trình nhân giống lan Hồ điệp Moscow phương pháp nuôi cấy in vitro”,Tạp chí Nông nghiệp phát triển nông thôn, số tháng 3/2004, tr.355-356 Phạm Thị Liên, Nguyễn Xuân Linh, Lê Đức Thảo (2001), “ Đánh giá khả sinh trưởng, phát triển số giống lan Hồ điệp nhập nội từ Hà Lan”, Kết nghiên cứu khoa học, Viện Di truyền Nông nghiệp, tr 144-147 Nguyễn Công Nghiệp (2004), Trồng hoa lan, Nxb Trẻ thành phố Hồ Chí Minh Nguyễn Cửu Thành Nhân, Nguyễn Thành Hải, Dương Tấn Nhựt (2007), “ Nhân nhanh phôi protocorm- like body lan Hồ điệp Phalaenopsis amabilis hệ thông Bioreactor”, Hội nghị khoa học Công nghệ sinh học thực vật công tác nhân giống chọn tạo giống hoa, NXB Nông nghiệp thành phố Hồ Chí Minh, tr 17-26 Dương Tấn Nhựt cs(2007), “Ảnh hưởng monosaccharide disaccharide lên trình phát sinh phôi vô tính lan Hồ điệp Phalaenopsis amabili” Hội nghị khoa học Công nghệ sinh học thực vật công tác nhân giống chọn tạo giống hoa, NXB Nông nghiệp thành phố Hồ Chí Minh, tr 27-36 10 Cung Hoàng Phi Phượng, Nguyễn Văn Hiếu, Nguyễn Quốc Thiện, Nguyễn Quốc Bình, Dương Hoa Xô(2007), “Bước đầu ứng dụng hệ thống nuôi cấy ngập chìm tạm thời nhân giống Hồ điệp lai”, Hội nghị khoa học Công nghệ sinh học thực vật công tác nhân giống chọn tạo giống hoa, NXB Nông nghiệp thành phố Hồ Chí Minh, tr 7-16 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 51 11 Nguyễn Thị Pha cs (2011), “Nuôi cấy mầm ngủ phát hoa lan Hồ điệp (Phalaenopsis.sp), Tạp chí Khoa học 2011:20b tr 12-20 12 Trần Duy Quý, 2005 Sổ tay người chơi lan, NXB Nông nghiệp 13 Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Thị Lý Anh, Nguyễn Thị Lâm Hải (2005) Lan Hồ điệp (Phalaenopsis) kỹ thuật chọn tạo, nhân giống nuôi trồng NXB Nông nghiệp Hà Nội 14 Nguyễn Quang Thạch, Hoàng Thị Nga (2000) Nghiên cứu ứng dụng phương pháp nuôi cấy lớp mỏng nhân nhanh giống lan Vanda, Catleya, Phalaenopsis Tạp chí Nông nghiệp công nghiệp thực phẩm số 12/2000 15 Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Xuân Trường, Hoàng Thị Nga (2002) Nghiên cứu điều khiển hoa phong lan Phalaenopsis (Hồ điệp) Tạp chí Nông nghiệp phát triển nông thôn, số tháng 11/2002 16 Nguyễn Quang Thạch cs (2003) Nghiên cứu xây dựng quy trình nhân giống nuôi trồng phong lan Phalaenopsis, Báo cáo hội nghị công nghệ sinh học toàn quốc, Nxb Khoa học kỹ thuật 17 Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Thị Lý Anh, Nguyễn Thị Phương Thảo (2005) Công nghệ sinh học nông nghiệp NXB Nông nghiệp 18 Nguyễn Văn Tỉnh, Đặng Văn Đông, Trịnh Khắc Quang (2010) Nghiên cứu hoàn thiện quy trình sản xuất hoa lan Hồ điệp quy mô công nghiệp Tạp chí Khoa học Công nghệ Nông nghiệp Việt Nam số 5; tr 56-63 Tài liệu tiếng Anh 19 Arditti Ernst (1993) Micropropagation of orchid New York Tohn Wiley 20 Aitken-Christie cs (1995) Automation in plant tissue culture General introduction and overview, p.1-8 In: Aitken-Christie J, Kozai T, Smith Mal (eds) Automation and environmental coltrol in plant tissue culture, Kluwer Acd Publ., Dordrecht, The Netherlands 21 Chen Chang (2006) Direct somatic embryogenesis and plant regeneration from leaf explant of Phalaenopsis amabilis Biol Plant 50: p.169-173 22 Chu CY, Tsai WT , quyền sáng chế số 7073289 (2006), Process for producing orchid seedlings by static liquid http://www.patentstorm.us/patents/7073289-fulltext.html culture, 23 Griesbach, R.J ( 2002) Development of Phalaenopsis Orchids for the Mass-Market p 458–465 24 Hass-von Schmude (1983) Klonale Massenvermehrung von Phalaenopsis Die Orchidae 34: p.242-248 25 Hass-von Schmude (1985) Tissue culturing Phalaenopsis using leaves and leaf segment In: Tan K (ed) Proceeding 11th World Orchid Conferrence, Miami, USA, p 311 26 Ichihashi Hiraiwa (1996) Effects of solidifier, coconut water and carbohydrate sourse on groeth of embryogennic callus in Phalaenopsis and allied general J Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 52 Orchid Soc India 10: p 81-88 27 Ichihashi cs (2000) Studies on micropropagation of Phalaenopsis alliance Bull Aichi Iniv Education 49: p 51-56 28 Intuwong Sagawa, 1974 Clona propagation of Phalaenopsis by shoot tip culture Amer Orchid Soc Bull (43): p 893-895 29 Ishii cs (1998) Callus introduction and somatic embryogenesis of Phlaenopsis Plant Cell Rep 17: p 446-450 30 Ishii cs (1999) Effects of sucrose, maltose and sorbitol on callus growth and plantlet embryogensis in of Phalaenopsis, Doritaenopsis and Neofinetia J Jpn Soc Hort Sci 68: p.1124-1131 31 Islam cs, (1997) Effects of solidifiers, coconut water and carbohydrate on growth of embryogenic callus of Phalaenopsis, p.43-48 In: Ichihashi S, Inoue H (eds), Proc Nagoya Int Orchid Show 1997 NIOS, Japan 32 Islam cs (2001) Effects of light intensity and quality on the growth of callus derived plantlets in Phalaenopsis, p86-88 In Proc APOC7, Nahoya, Japan 33 Ken Mashahiro (2001) Introduction of callus and cell suspension culture from shoot tips excised from flower stalk bud of Phalaenopsis In vitro Cell Dev Biol – Plant 37: p.457-461 34 Kuo cs (2005) Efficcient plant regeneration through direct somatic embryogenesis from leaf explant of Phalaenopsis ‘Little Steve’ In vitro Cell Dev Biol Plant 41: p.453-456 35 Koch L (1974a) Untersuchungen zur vegetativen Vermehrung bei Phalaenopsis in vitro Diss., Technicla University, Hannover, Germany 36 Lin (1986) In vitro culture of flower stalk internodes of Phalaenopsis and Doritaenopsis Lindleyana 1: p.158-163 37 Lee JS (1999) Micropropagation of Phalaenopsis by flower stalk-derived axillary bud culture MSc thesis, Chungbuk National University, Korea 38 Park cs (2000) Mass multiplication of protocorm-like bodies using bioreactor system and subsequent plant regeneration in Phalaenopsis Plant Cell, Tissue and organ Culture 63: p.67-72 39 Polonca KOŠIR1 cs (2004) Direct shoot regeneration from nodes of Phalaenopsis orchids Acta agriculturae slovenica, 83 - 2, november 2004, p 233 - 242 40 Sagawa Kunasaki (1982) Clonal propagation of orchids by tissue culture In: Proc 5th Cong Plant Tissue and Cell Culture, p 683-684 41 Shekarriz Parisa, Kafi Mohsen, DeilamyShirin Dianati and Mirmasoumi Masoud (2014) 42 Tanaka cs (1974) Studies on the clonal propagation of monopodial orchid by tissue culture I Formation of protocorm –like bodies from leaf tissue in Phalaenopsis and Vanda in vitro J Jpn Soc Hortic Sci (citied in Tanaka cs, 1976) 43 Tanaka (1990) Micropropagation of Phalaenopsis through leaf segment culture, Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 53 p.113-119 In: Proceedings of NIOS 90 Nagoya 44 Tanaka (1992) Micropropagation of Phalaenopsis spp In: Bajaj YPS (ed) Biotechnology in Agriculture and Forestry Spinger-Verlag, Berlin, p.246-248 45 Tokuhara Mii (2001) Induction of embryogenic callus and cell suspension culture from shoot tips excised from flower stalk buds of Phalaenopsis In vitro Cell Dev Biol – Plant 37: p.457-461 46 Tokuhara Mii (2003) Highly-efficient somatic embryogenic from cell suspension cultures of Phalaenopsis orchids by adjusting carbonhydrate sources In vitro Cellular and Development Biology – Plant 39: p.635-639 47 Young cs (2000) Mass multiplication of protocorm-like bodies using bioreactor 7Vol.63 48 Zhang cs (2004) Tissue culture and rapid micropropagation of Phalaenopsis amabilis Journal of Plant Resources and Environment, p.13:38-40 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 54 PHỤ LỤC PHỤ LỤC 1: CÁC MÔI TRƯỜNG SỬ DỤNG TRONG CÁC NGHIÊN CỨU * Môi trường MS (1962) Thành phần Đa lượng Luợng lấy 1l dung dịch mẹ 1l môi truờng sử dụng (g) NH4NO3 33, 00 KNO3 38,00 MgSO4.7H2O 10,00 KH2PO4 3,40 CaCl2 (Pha riêng) 6,60 Vi luợng (mg) H3BO3 620,00 MnSO4.4H2O 2230,00 ZnSO4.4H2O 860,00 KI 83,00 MoNa2.2H2O 25,00 CoCl2.6H2O 2,50 CuSO4.5H2O 2,50 Sắt 5,56 Na2EDTA 7,46 400 Axit Nicotinic (B5) 100 Pyridoxin (B6) 100 Inositol ml/l (mg) Glycine Thyamin HCl (B1) 10 ml/l (g) FeSO4.7H2O Vitamin 50 ml/l ml/l 20 100 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 55 * Môi trường Vacin and Went (1949) Lượng lấy Thành phần Đa lượng 1l dung dịch 1l môi truờng sử mẹ dụng (g) KNO3 10,50 KH2PO4 5,00 MgSO4 2,44 (NH4)2SO4 10,00 Ca3(PO4)2 (Pha riêng) Vi lượng 4,00 (mg) MnSO4.H2O Sắt FeSO4.7H2O 50 ml/l 568,00 (g) 4,63 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 10 ml/l ml/l Page 56 PHỤ LỤC 2: BẢNG XỬ LÝ SÔ LIỆU THÍ NGHIỆM BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE 22/ 7/** 21:48 PAGE Ah cua BA den su phat sinh hinh thai tu dau re cua cay in vitro VARIATE V003 HSN ESTIMATES OF MISSING VALUES AFTER ITERATIONS TOT ABS DEV= 0.0000E+00 TOLERANCE= 0.4597E-01 STD.REC.NO CT1 CT1 CT1 CT2 CT2 CT2 LN CT$ LL$ L1 L2 L3 L1 L2 L3 SOURCE OF VARIATION ESTIMATE 3.189 3.189 3.189 3.189 3.189 3.189 DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 6.97049 1.39410 114.27 0.000 * RESIDUAL 6.732004E-01.122001E-01 * TOTAL (CORRECTED) 17 7.04369.414335 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 22/ 7/** 21:48 PAGE Ah cua BA den su phat sinh hinh thai tu dau re cua cay in vitro MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ CT1 CT2 CT3 CT4 CT5 CT6 NOS 3 3 3 HSN 3.18917 3.18917 1.98667 3.28333 4.10000 3.38667 SE(N= 3) 0.637706E-01 5%LSD 6DF 0.220593 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 22/ 7/** 21:48 PAGE Ah cua BA den su phat sinh hinh thai tu dau re cua cay in vitro F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSN GRAND MEAN (N= 18) NO OBS 12 3.1892 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ | SD/MEAN | | BASED ON BASED ON % | | TOTAL SS RESID SS | | 0.80021 0.11045 3.5 0.0001 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 57 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE 22/ 7/** 22: PAGE Ah cua IBA den su phat sinh hinh thai tu dau re cua cay in vitro VARIATE V003 HSN ESTIMATES OF MISSING VALUES AFTER ITERATIONS TOT ABS DEV= 0.3576E-06 TOLERANCE= 0.2389E-01 STD.REC.NO CT1 CT1 CT1 CT2 CT2 CT2 CT3 CT3 CT3 LN CT$ LL$ L1 L2 L3 L1 L2 L3 L1 L2 L3 SOURCE OF VARIATION ESTIMATE 1.259 1.259 1.259 1.259 1.259 1.259 1.259 1.259 1.259 DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 4.419761.104940 36.19 0.130 * RESIDUAL 1.289934E-02.289934E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14.422661.301901E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 22/ 7/** 22: PAGE Ah cua IBA den su phat sinh hinh thai tu dau re cua cay in vitro MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ CT1 CT2 CT3 CT4 CT5 NOS 3 3 HSN 1.25883 1.25883 1.25883 1.52333 0.994333 SE(N= 3) 0.310877E-01 5%LSD 1DF 0.516213 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 22/ 7/** 22: PAGE Ah cua IBA den su phat sinh hinh thai tu dau re cua cay in vitro F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSN GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 1.2588 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.29074 0.53846E-01 4.3 0.1300 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp | | | | Page 58 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE 22/ 7/** 22:20 PAGE Ah cua BA den su phat sinh hinh thai tu manh la cua cay in vitro VARIATE V003 HSN ESTIMATES OF MISSING VALUES AFTER ITERATIONS TOT ABS DEV= 0.9537E-06 TOLERANCE= 0.8953E-01 STD.REC.NO CT1 CT1 CT1 CT2 CT2 CT2 LN CT$ LL$ L1 L2 L3 L1 L2 L3 SOURCE OF VARIATION ESTIMATE 3.327 3.327 3.327 3.327 3.327 3.327 DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 26.6467 5.32935 459.88 0.000 * RESIDUAL 6.695310E-01.115885E-01 * TOTAL (CORRECTED) 17 26.7163 1.57155 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 22/ 7/** 22:20 PAGE MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ CT1 CT2 CT3 CT4 CT5 CT6 NOS 3 3 3 HSN 3.32667 3.32667 1.09333 3.12333 5.21000 3.88000 SE(N= 3) 0.621517E-01 5%LSD 6DF 0.214993 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 22/ 7/** 22:20 PAGE Ah cua BA den su phat sinh hinh thai tu manh la cua cay in vitro F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSN GRAND MEAN (N= 18) NO OBS 12 3.3267 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 1.5584 0.10765 3.2 0.0000 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp | | | | Page 59 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE 22/ 7/** 22:30 PAGE Ah cua KIN den su phat sinh hinh thai tu manh la cua cay in vitro VARIATE V003 HSN ESTIMATES OF MISSING VALUES AFTER ITERATIONS TOT ABS DEV= 0.0000E+00 TOLERANCE= 0.7364E-01 STD.REC.NO CT1 CT1 CT1 CT2 CT2 CT2 CT3 CT3 CT3 LN CT$ LL$ L1 L2 L3 L1 L2 L3 L1 L2 L3 SOURCE OF VARIATION ESTIMATE 2.367 2.367 2.367 2.367 2.367 2.367 2.367 2.367 2.367 DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 6.00647 1.20129 188.35 0.001 * RESIDUAL 3.191335E-01.637784E-02 * TOTAL (CORRECTED) 17 6.02560.354447 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 22/ 7/** 22:30 PAGE Ah cua KIN den su phat sinh hinh thai tu manh la cua cay in vitro MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ CT1 CT2 CT3 CT4 CT5 CT6 NOS 3 3 3 HSN 2.36667 2.36667 2.36667 2.44333 3.32667 1.33000 SE(N= 3) 0.461080E-01 5%LSD 3DF 0.206627 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 22/ 7/** 22:30 PAGE Ah cua KIN den su phat sinh hinh thai tu manh la cua cay in vitro F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSN GRAND MEAN (N= 18) NO OBS 2.3667 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.86787 0.79861E-01 3.4 0.0006 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE 22 22/ 7/** 22:50 PAGE Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 60 Ah cua KIN den su phat sinh hinh thai tu dau re cua cay in vitro VARIATE V003 HSN ESTIMATES OF MISSING VALUES AFTER ITERATIONS TOT ABS DEV= 0.7153E-06 TOLERANCE= 0.5639E-01 STD.REC.NO CT1 CT1 CT1 CT2 CT2 CT2 CT3 CT3 CT3 LN CT$ LL$ ESTIMATE 1.837 1.837 1.837 1.837 1.837 1.837 1.837 1.837 1.837 L1 L2 L3 L1 L2 L3 L1 L2 L3 SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 3.52007.704013 163.30 0.001 * RESIDUAL 3.129338E-01.431126E-02 * TOTAL (CORRECTED) 17 3.53300.207824 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 22 22/ 7/** 22:50 PAGE Ah cua KIN den su phat sinh hinh thai tu dau re cua cay in vitro MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 3 CT1 CT2 CT3 CT4 CT5 CT6 HSN 1.83667 1.83667 1.83667 2.00667 2.50333 1.00000 SE(N= 3) 0.379089E-01 5%LSD 3DF 0.169884 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 22 22/ 7/** 22:50 PAGE Ah cua KIN den su phat sinh hinh thai tu dau re cua cay in vitro F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSN GRAND MEAN (N= 18) NO OBS 1.8367 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.66455 0.65660E-01 3.6 0.0007 | | | | Ah cua BA va NAA toi kha nang tao choi tu protocorm VARIATE V003 MTC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES MEAN F RATIO PROB SQUARES Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp ER LN Page 61 ============================================================================= CT$ 1232.87 136.985 887.82 0.000 * RESIDUAL 20 3.08588.154294 * TOTAL (CORRECTED) 29 1235.95 42.6190 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE 22/ 7/** 21: PAGE Ah cua BA va NAA toi kha nang tao choi tu protocorm VARIATE V004 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 231.236 25.6929 754.99 0.000 * RESIDUAL 20.680612.340306E-01 * TOTAL (CORRECTED) 29 231.916 7.99712 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 22/ 7/** 21: PAGE Ah cua BA va NAA toi kha nang tao choi tu protocorm MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS MTC HSN CT1 8.02000 3.76000 CT2 8.99000 3.99333 CT3 11.9200 4.55667 CT4 19.0333 7.53667 CT5 16.0100 5.57333 CT6 24.0633 12.5333 CT7 11.0267 5.29333 CT8 6.01000 3.32333 CT9 4.01667 3.76667 CT10 3.02000 2.33333 SE(N= 3) 0.226785 0.106506 5%LSD 20DF 0.669008 0.314189 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 22/ 7/** 21: PAGE Ah cua BA va NAA toi kha nang tao choi tu protocorm F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE MTC HSN GRAND MEAN (N= 30) NO OBS 30 11.211 30 5.2670 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ | SD/MEAN | | BASED ON BASED ON % | | TOTAL SS RESID SS | | 6.5283 0.39280 3.5 0.0000 2.8279 0.18447 3.5 0.0000 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TSL FILE 11/ 9/** 3:25 PAGE Ah cua BA den kha nang la cua choi Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 62 VARIATE V003 TSL LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 183138 45784.6 491.26 0.000 * RESIDUAL 10 931.988 93.1988 * TOTAL (CORRECTED) 14 184070 13147.9 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SLTB FILE 11/ 9/** 3:25 PAGE Ah cua BA den kha nang la cua choi VARIATE V004 SLTB LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 32.7470 8.18674 581.71 0.000 * RESIDUAL 10.140735.140735E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 32.8877 2.34912 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 11/ 9/** 3:25 PAGE Ah cua BA den kha nang la cua choi MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS TSL SLTB CT1 160.000 2.12667 CT2 195.000 2.60333 CT3 455.333 6.08333 CT4 375.333 5.00333 CT5 325.333 4.33667 SE(N= 3) 5.57371 0.684921E-01 5%LSD 10DF 17.5630 0.215821 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 11/ 9/** 3:25 PAGE Ah cua BA den kha nang la cua choi F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE TSL SLTB GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 302.20 15 4.0307 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 114.66 9.6540 3.2 0.0000 1.5327 0.11863 2.9 0.0000 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE TSC FILE 11/ 9/** 3:40 PAGE Ah cua BA den kha nang nhan nhanh VARIATE V003 TSC Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 63 LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 127332 25466.4 570.13 0.000 * RESIDUAL 12 536.017 44.6680 * TOTAL (CORRECTED) 17 127868 7521.65 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE 11/ 9/** 3:40 PAGE Ah cua BA den kha nang nhan nhanh VARIATE V004 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 22.6632 4.53264 639.37 0.000 * RESIDUAL 12.850700E-01.708917E-02 * TOTAL (CORRECTED) 17 22.7482 1.33813 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 11/ 9/** 3:40 PAGE Ah cua BA den kha nang nhan nhanh MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS TSC HSN CT1 75.0000 1.00000 CT2 135.333 1.80667 CT3 168.000 2.24000 CT4 315.333 4.20667 CT5 280.000 3.73333 CT6 244.333 3.26333 SE(N= 3) 3.85867 0.486113E-01 5%LSD 12DF 11.8899 0.149788 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 11/ 9/** 3:40 PAGE Ah cua BA den kha nang nhan nhanh F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 18) SD/MEAN | NO BASED ON BASED ON % | OBS TOTAL SS RESID SS | TSC 18 203.00 86.727 6.6834 3.3 0.0000 HSN 18 2.7083 1.1568 0.84197E-01 3.1 0.0000 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE SR FILE 26/ 8/** 21:35 PAGE Ah cua THT den su re cua choi lan HD VARIATE V003 SR LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 6.97313 1.74328 541.39 0.000 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 64 * RESIDUAL 10.322002E-01.322002E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 7.00533.500381 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CDR FILE 26/ 8/** 21:35 PAGE Ah cua THT den su re cua choi lan HD VARIATE V004 CDR LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 5.03797 1.25949 321.30 0.000 * RESIDUAL 10.392005E-01.392005E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 5.07717.362655 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 26/ 8/** 21:35 PAGE Ah cua THT den su re cua choi lan HD MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS SR CDR CT1 0.896667 1.36667 CT2 1.38333 1.65000 CT3 2.92000 2.87000 CT4 2.08667 2.65667 CT5 1.83000 2.36333 SE(N= 3) 0.327619E-01 0.361481E-01 5%LSD 10DF 0.103234 0.113904 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 26/ 8/** 21:35 PAGE Ah cua THT den su re cua choi lan HD F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SR CDR GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 1.8233 15 2.1813 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.70738 0.56745E-01 3.1 0.0000 0.60221 0.62610E-01 2.9 0.0000 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp | | | | Page 65 [...]... chất lượng của cây mẹ, lâu ra hoa, thương mại hóa kém Trước bối cảnh ấy việc thực hiện đề tài Nghiên cứu xây dựng kỹ thuật nhân dòng vô tính (Mericlone) cho một số giống lan thương mại có giá trị kinh tế cao thuộc chi Hồ Điệp- Phalaenopsis sẽ đáp ứng yêu cầu bức xúc của thực tiễn sản xuất cũng như sẽ có nhiều đóng góp mới về mặt khoa học của lĩnh vực nhân dòng vô tính thực vật in vitro Học viện Nông... con được tạo ra giữ nguyên được các đặc tính của cây mẹ, sản phẩm hoàn toàn đáp ứng yêu cầu của thị trường Xuất phát từ những yêu cầu thực tiễn trên chúng tôi thực hiện nghiên cứu đề tài: Nghiên cứu xây dựng kỹ thuật nhân dòng vô tính (Mericlone) cho một số giống lan thương mại có giá trị kinh tế cao thuộc chi Hồ Điệp- Phalaenopsis góp phần tạo ra được giống lan có chất lượng tốt và đồng đều, đáp ứng... cây lan Hồ Điệp 1.1.1 Nguồn gốc, vị trí phân loại của cây hoa lan Hồ Điệp Lan Hồ Điệp có tên từ chữ Gree phalaina là bướm và Opis là sự giống nhau, còn tên khoa học là Phalaenopsis Blullle, 1825 Là loại lan có hoa lớn, bền, đẹp Chi lan Phalaenopsis có màu sắc phong phú, không thua kém giống lan nào khác từ trắng, hồng, đỏ, vàng, tím đến các loại lan Hồ Điệp có sọc ngang hay đứng, có đốm hay không có. .. thống sản xuất lan Hồ điệp của Việt nam Đây là điều hạn chế, ảnh hưởng quyết định đến việc chủ động nguồn giống trong sản xuất cả về số lượng cũng như chủng loại 1.3 Tình hình nghiên cứu hoa lan Hồ Điệp trên thế giới và ở Việt Nam 1.3.1 Tình hình nghiên cứu hoa lan Hồ Điệp trên thế giới Vì có giá trị kinh tế cao nên nhiều nước đã tập trung vào việc nghiên cứu hoa lan Hồ Điệp chất lượng cao để phục vụ... cây lan Hồ điệp được tiêu thụ tương đương 102 triệu USD Trong các giống lan bán trên thị trường lan Hồ Điệp chi m 80% (Rod Santa Ana (2001) Đài Loan là nơi sản xuất và tiêu thụ lan Lan Hồ Điệp chủ yếu trên toàn thế giới Giá trị xuất khẩu lan Hồ Điệp của Đài Loan đạt 23,9 triệu USD năm 2004; 27,05 triệu USD năm 2006 và tăng lên 35,38 triệu USD năm 2006 Pan -Chi Liou (2006) Vì có giá trị kinh tế cao nên... tài liệu khoa học phục vụ cho công tác giảng dạy, nghiên cứu khoa học về kỹ thuật nhân dòng somaclone của giống lan Phalaenopsis Sogo Yukidian 3.2 Ý nghĩa thực tiễn - Đề xuất được các khâu chính để xây dựng quy trình nhân giống in vitro lan Phalaenopsis Sogo Yukidian từ cơ quan soma - Góp phần thúc đẩy sản xuất giống lan thương mại Phalaenopsis Sogo Yukidian mang lại giá trị kinh tế tại Hà Nội và các... tóp, có màu trắng xám 1.1.4 Giá trị kinh tế và sử dụng cây lan Hồ Điệp Lan Hồ Điệp (Phalaenopsis) là một trong những loại cây cảnh phổ biến có giá trị kinh tế cao và được ưa chuộng bậc nhất trên thế giới Trong những năm gần đây thị trường lan Hồ điệp có sức tiêu thụ lớn hơn bất kỳ một loài hoa nào khác bởi vừa có sự đa dạng về màu sắc, kiểu dáng và vừa có vẻ đẹp quyến rũ hương thơn kín đáo Theo số liệu... rút ra một số nhận xét: Hoa lan Hồ Điệp (Phalaeaopsis) đang được người tiêu dùng rất ưa chuộng Việc phát triển sản xuất hoa lan Hồ Điệp đang được quan tâm phát triển Tuy nhiên nguồn cây giống lan Hồ Điệp có giá trị thương mại hầu như phải nhập nội (trên 90%) Việc nhân giống lan Hồ Điệp ở Việt nam chủ yếu bằng phương pháp gieo hạt nên các cây con không đồng nhất, không giữ được những đặc tính, hình... hoặc somaclone Các nghiên cứu mới được thống kê các công bố về nhân chồi từ PLB(thể tiền chồi) qua nuôi cấy các bộ phận và nuôi cấy tạo mô sẹo, dịch huyền phù tế bào và phôi vô tính của lan Hồ Điệp nhưng quy trình công nghệ nhân giống phổ biến cho sản xuất thì gần như bí quyết công nghệ không công bố Nhân chồi từ PLB qua nuôi cấy các bộ phận của Hồ Điệp: Nhân giống Hồ Điệp qua nuôi cấy chồi đỉnh thực hiện... lỏng NDM có bổ sung NAA (5,5 µM) và đường (58,4mM) Dịch huyền phù được trải trên môi trường có đường được giảm nồng độ xuống 29,2mM cho tái sinh phôi vô tính cao Kết quả nghiên cứu cho thấy công nghệ nuôi cấy dịch huyền phù tế bào trong môi trường lỏng Bioreator thích hợp cho nhân nhanh công nghiệp hoa lan Hồ Điệp bằng con đường phát sinh phôi vô tính 1.3.2 Tình hình nghiên cứu hoa lan Hồ Điệp ở Việt