Nghiên cứu xây dựng công thức nhũ tương tra mắt cloramphenicol

Việc tạo ra dạng nhũ tương D/N của cloramphenicol, trong đó dược chất được hoà tan trong pha phân tán dầu sẽ làm giảm sự tiếp xúc của dược chất với nước trong quá trình bảo quản, do đó l

BỘ Y TÊ TRƯỜNG ĐẠI HỌC D ư ợ c HÀ NỘI

NGUYỄN THỊ THU TRANG

NGHIÊN CỨU XÂY DỤNG CÔNG THỨC NHŨ

TƯƠNG TRA MẮT CLORAMPHENICOL

(KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP Dược SỸ KHOÁ 2002- 2007)

Trường đại học Dược Hà Nội

HÀ NỘI, 05- 2007

r ĩ Ôi xin trán tvotiíỊ eảm ổn eáe tỉiầụ ựìáfí, aầ ụiáo, oáo lĩịị tfauqt lỉiên hồ tnâti Oỉào ídtê trnờtKỊ đjạx họe n)iiỢí‘ 7/jờ Qtời đã tọo moi điều UiỀn tliiiân tời í‘ho tồi hoàn thà nh kh o á luân, nà ụ.

QĨm xùi tràti tvúttíỊ t‘ám ổn oáe thầụ í‘ỗ trữfKỊ (Ban (Ậiáttt hiễỉt, mồtt '7ÔOÁ phản, tíeh eùng oáo thíỉụ eẵ íỊÌáo eủa tnểònq ^Đại họe ^Dượe 'Tùà Qlậi đã tận tình dụ tt há ũ tôi tvữna nítữna năm họa tảo tạ i trưòtựi.• • m <w Iw % m w m <7

CỊiiỐi oìíHịỊ sein, eảtn tín ụia đình t)à bạn hè đã ĩtộnự từèn, ụìiíp đà tồi tvútiíị Híốt quá trình, họe tập

Hà Nội, tháng 05 - 2007

Sinh viên Nguyễn Thị Thu Trang

HPLC : Sắc ký lỏng hiệu năng cao

HPMC : Hydroxypropyl methyl celluloseIPM : Isopropyl myristat

M ỤC LỤC

Trang

ĐẶT VẤN ĐỂ 1

PHẦN 1: TỔNG QUAN 2

1.1 ĐẠI CƯƠNG VỂ NHŨ TƯƠNG VÀ NHỮ TƯƠNG TRA MẮT 2

1.1.1 Khái niệm về nhũ tương và nhũ tương tra mắt 2

1.1.2 Các thành phần cơ bản của nhũ tương tra mắt f 1.1.3 Uu điểm và nhược điểm của nhũ tương tra mắt 3

1.1.4 Các đặc tính của nhũ tương 3

1.1.5 Độ ổn định lý học của nhũ tương 4

1.1.6 Một số nghiên cứu về nhũ tương tra mắt 6

1.1.7 Một số dạng nhũ tương đặc biệt 8

1.2.VÀI NÉT VỂ CLORAMPHENICOL 11

1.2.1 Cấu trúc hoá học 11

1.2.2 Tính chất „11

1.2.3 Độ ổn định của cloramphenicol trong một số dạng thuốc 11

1.2.4Sinh khả dụng của một số dạng thuốc dùng tại chỗ chứa cloramphenicol 13

1.2.5 Nghiên cứu vi nhũ tương chứa cloramphenicol 14

1.2.6 Các phương pháp định lượng cloramphenicol trong các chế phẩm 15

1.2.7 Các dạng bào chế chứa cloramphenicol dùng trong nhãn khoa 15

PHẦN 2: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 16

2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU - PHƯƠNG PHÁP THựC NGHIỆM 16

2.1.1Nguyên liệu 16

2.1.2 Phương tiện nghiên cứu 17

2.1.3 Phương pháp thực nghiệm 17

2.2 KẾT QUẢ NGHIÊN c ứ u 25

2.2.1 Các khảo sát ban đầu 25

2.2.2 Bố trí thí nghiệm 27

2.2.3 Kết quả và nhận xét 30

PHẦN III: KẾT LUẬN VÀ ĐỂ XUÂT 44

3.1.KẾT LUẬN 44

3.2 ĐỂ XUẤT 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO

ĐẶT VẤN ĐỂ

Hiện nay, dung dịch thuốc nhỏ mắt là dạng thuốc phân liều được dùng phổ biến nhất trong nhãn khoa Tuy nhiên, do cơ chế bảo vệ sinh lý cua măt và bản chất cấu tạo của lớp biểu mô giác mạc nên sinh khả dụng của dạng thuốc này rất thấp (khoảng 1%) Vì vậy, mục tiêu đặt ra cho các chế phẩm dùng trong nhãn khoa là có các đặc tính: kéo dài thời gian lưu thuốc ở vùng trước giác mạc, tăng hấp thu thuốc qua biểu mô giác mạc, làm giảm các tác dụng toàn thân Việc chuyển dạng bào chế sang dạng nhũ tương là một biện pháp hữu hiệu để đạt được mục tiêu đó [29]

Nhũ tương là một dạng thuốc mới được nghiên cứu và áp dụng ngày càng nhiều trong lĩnh vực dược phẩm và mỹ phẩm Trong nhãn khoa, nhiều công trình nghiên cứu đã chứng minh rằng nhũ tương là hệ phân phối thuốc đầy tiềm năng [24]

Cloramphenicol là một kháng sinh được dùng rất phổ biến trong nhãn khoa Dược chất này ít tan và không bền trong nước do sự thuỷ phân nhóm amid Việc tạo ra dạng nhũ tương D/N của cloramphenicol, trong đó dược chất được hoà tan trong pha phân tán (dầu) sẽ làm giảm sự tiếp xúc của dược chất với nước trong quá trình bảo quản, do đó làm tăng độ bền dược chất

Để góp phần tạo ra một chế phẩm tra mắt chứa cloramphenicol có sinh khả dụng cao và tăng độ bền vững của dược chất, chúng tôi thực hiện đề tài

“Nghiên cứu xây dựng công thức nhũ tương tra mắt cloramphenicol ”, với các mục tiêu sau:

- Nghiên cứu ảnh hưởng của một số yếu tố ảnh hưởng tới độ ổn định lý học

và giải phóng dược chất ra khỏi hệ

- Xây dựng công thức nhũ tương tra mắt cloramphenicol 0,4%

- Bước đầu theo dõi độ ổn định của chế phẩm nghiên cứu

PHẨN 1: TỔNG QUAN

1.1 ĐẠI CƯƠNG VỂ NHŨ TƯƠNG VÀ NHŨ TƯƠNG TRA MẮT

1.1.1 Khái niệm về nhũ tương và nhũ tương tra mắt

Nhũ tương là những hệ phân tán cơ học vi dị thể, tạo bởi hai chất lỏng không đổng tan, trong đó một chất lỏng được phân tán đồng đều vào chất lỏng thứ hai (môi trường phân tán) dưới dạng các tiểu phân có đường kính từ 0,1 đến hàng chục micromet [ 1 ]

Nhũ tương tra mắt là các chế phẩm nhũ tương được dùng với mục đích để chẩn đoán hay điều trị tại chỗ các bệnh về mắt

1.1.2 Các thành phần cơ bản của nhũ tương tra mắt

- Ổn định nhũ tương do:

+ Tăng độ nhớt của môi trường phân tán

+ Tăng quá trình hydrat hoá pha phân tán [1]

* Lựa chọn chất nhũ hoá trong nhũ tương tra mắt

Để hình thành nên nhũ tương thì việc sử dụng các chất diện hoạt là cần thiết Tuy nhiên, các chất diện hoạt ion hoá thường rất độc với mắt và gây kích ứng mắt Các chất diện hoạt không ion hoá có độ an toàn với mắt cao hơn các chất diện hoạt ion hoá (cation hoá hoặc anion hoá) Vì vậy, người ta thường sử dụng các chất diện hoạt không ion hoá như tween, span Trong đó tween 80

và span 80 được sử dụng rất rộng rãi trong nhãn khoa vì chúng có khả năng nhũ hoá mạnh và an toàn với mắt [21], [11].

1.1.3 Ưu và nhược điểm của nhũ tương tra mát

- Kéo dài thời gian lưu của thuốc ở trước giác mạc, làm tăng hấp thu thuốc

qua biểu mô giác mạc

- Các chất hoạt động bề mặt trong nhũ tương làm mất tính nguyên vẹn của biểu mô giác mạc và giảm sức căng bề mặt giúp thuốc phân tán nhanh vào màng nước mắt, tiếp xúc tốt với giác mạc và kết mạc Vì vậy, sự hấp thu dược chất tăng lên

- Bảo vệ được các dược chất kém bền

- Dạng nhũ tương đảm bảo sự đồng đều trong phân liều, không gây xước giác mạc và có thể áp dụng nhiều phương pháp tiệt khuẩn hơn dạng hỗn dịch

Có rất nhiều yếu tố ảnh hưởng tới tính lưu biến của nhũ tương chẳng hạn như bản chất của môi trường phân tán, tỉ lệ thể tích giữa các pha và sự phân bố

kích thước các hạt cũng có ảnh hưởng nhưng ở mức độ thấp hơn Thông qua

việc thay đổi thể tích pha phân tán, bản chất và nồng độ của chất diện hoạt có thể tạo ra các sản phẩm từ dạng lỏng đến dạng bán rắn đặc Nhìn chung khi thể tích pha phân tán nhỏ, nhũ tương có độ đặc tương tự như môi trường phân tán; Nhũ tương N/ D thường đặc hơn nhũ tương D/N [4], [14]

b Sự phân bố kích thước hạt

Khi kích thước hạt càng lớn thì xu hướng kết tụ càng tăng và do đó kích thước các giọt tăng lên Các hạt càng nhỏ thì hệ càng bền Nhưng do kích thước các hạt phân tán trong hệ không đều nhau nên ta thường dùng thông số kích thước hạt trung bình Sự phân bố kích thước hạt trong hệ phân tán được biểu thị thông qua đường cong biểu diễn mối tương quan giữa kích thước hạt với số hạt phân tán có kích thước đó [4]

Để đánh giá ảnh hưởng của chất nhũ hoá và phương pháp bào chế tới sự phân bố kích thước hạt và kích thước hạt trung bình của nhũ tương, Masazumi Yamaguchi và các cộng sự [29] đã bào chế nhũ tương D/N chứa difluprednat với nồng độ chất diện hoạt khác nhau và lực phân tán khác nhau Khi đồng nhất hoá bằng khuấy từ ở 8000 vòng/phút trong 1 h thì thu được nhũ tương thô trong đó kích thước hạt phân bố trong khoảng rộng từ 30 đến 900 nm Nhưng khi nhũ tương thô đó tiếp tục được đồng nhất hoá dưới áp lực lớn thì kích thước các hạt có khoảng phân bố hẹp lại từ 40 đến 400 nm Như vậy, khi lực phân tán càng lớn thì các hạt phân tán có kích thước càng nhỏ và càng đồng nhất Mặt khác, khi nồng độ chất diện hoạt (tween 80) tăng dần, kích thước hạt trung bình giảm dần và kích thước các hạt phân bố trong khoảng hẹp dần

1.1.5 Độ ổn định ỉý học của nhũ tương tra mắt

Một nhũ tương được coi là bền vững nếu các giọt của pha phân tán giữ được các đặc tính ban đầu và phân phối trong môi trường phân tán một cách đồng

nhất trong suốt vòng đời của chế phẩm Trong quá trình bảo quản phải không

có sự thay đổi về các pha hoặc không có sự nhiễm khuẩn và nhũ tương không

thay đổi về màu sắc, mùi và tính đồng nhất Nếu ở bề mặt nhũ tương đã có

một lớp đặc nổi lên là quá trình biến chất đã bắt đầu còn nhũ tương coi như đã hỏng nếu hai pha dầu và nước đã tách hẳn thành lớp riêng và bằng cách khuấy lắc cũng không khôi phục lại được trạng thái phân tán đồng nhất

Nhũ tương là hệ phân tán không ổn định về nhiệt động học và thường có xu hướng khôi phục lại trạng thái ban đầu của hai pha lỏng riêng biệt Có nhiều quá trình khác nhau diễn ra để dẫn tới sự tách pha hoàn toàn:

* Đảo pha: xảy ra khi một nhũ tương D/N chuyển thành dạng nhũ tương N/D

và ngược lại

* Kết bông:

Kết bông được định nghĩa là hiện tượng các tiểu phân trong nhũ tương tập hợp lại thành những khối lớn, mà dễ dàng phân tán trở lại bằng cách lắc Hiện tượng này thường được coi là dấu hiệu báo trước về một quá trình không thuận nghịch của sự kết tụ

Kết bông có tính thuận nghịch vì từng giọt riêng biệt và bề mặt phân cách các pha không bị thay đổi Tính thuận nghịch này phụ thuộc vào độ mạnh của lực tương tác giữa các giọt và tỉ lệ thể tích giữa các pha

* Tạo váng:

Tạo váng xảy ra khi các giọt hoặc đám các giọt của pha phân tán tách ra khỏi môi trường phân tán do ảnh hưởng của lực hấp dẫn Thông thường, nhũ tương đã tạo váng có thể được khôi phục về trạng thái ban đầu bằng cách khuấy nhẹ Theo định luật Stockes, hướng chuyển động lên hay xuống của các giọt phụ thuộc vào tỉ lệ tương đối giữa tỉ trọng của hai pha Nói cách khác, tuỳ theo tỷ trọng của pha phân tán nhỏ hơn hay lớn hơn tỷ trọng của môi trường pha phân tán, các tiểu phân của pha phân tán sẽ nổi lên trên bề mặt hoặc lắng xuống đáy của bình đựng nhũ tương Và điều này càng xảy ra nhanh khi sự

khác nhau về tỷ trọng hai pha càng lớn Ngoài ra, các giọt lớn tạo váng nhanh hơn các giọt nhỏ Do đó, giảm kích thước các giọt và làm đặc môi trường phân tán có thể làm giảm đến mức tối thiểu tốc độ của sự tạo váng.

* Kết tụ:

Kết tụ là một dạng không ổn định có mức độ nghiêm trọng hơn nhiều so với hai dạng trên Trong quá tình này, lớp màng mỏng giữa các giọt bị đứt gãy làm cho các giọt xát nhập lại Nó xảy ra khi hàng rào cơ điện không đủ để ngăn cản việc các giọt lớn lên không ngừng, và cuối cùng sẽ dẫn tới sự phá vỡ cấu trúc nhũ tương (hiện tượng tách pha hoàn toàn) Có thể tránh được hiện tượng hợp nhất thông qua việc hình thành nên một lớp màng mỏng bao gồm các phân tử cỡ lớn hoặc các tiểu phân rắn xen giữa hai pha,

* Phá vỡ:

Đây là hiện tượng tách pha hoàn toàn và bằng cách khuấy lắc cũng không khôi phục lại trạng thái phân tán đồng nhất của nhũ tương [14], [11]

1.1.6 Một số nghiên cứu vê nhũ tương tra mắt

a Nghiên cứu về độ ổn định của nhũ tương tra mắt

Latanoprost là một chất không bền với nhiệt do bị thuỷ phân trong môi trường nước Nghiên cứu của Sakai và cộng sự [26] cho thấy pH trong khoảng5,0 đến 7,0 không ảnh đến độ ổn định của latanoprost trong nhũ tương tra mắt

loại D/N Mặt khác, sau khi bảo quản ở nhiệt độ 6 0°c trong 4 tuần, hàm lượng latanoprost còn lại trong dung dịch là 76,4%, hàm lượng Latanoprost trong các nhũ tương (pH 5,0, 6,0, 7,0) > 99,2% Như vậy, độ bền với nhiệt của dược chất tăng lên đáng kể và chế phẩm nhũ tương có thể bảo quản ở điều kiện thường trong khi phải bảo quản dạng dung dịch ở nhiệt độ thấp (2- 8°C)

b Nghiên cứu đánh giá ảnh hưởng của sự chuyển pha tới giải phóng dược chất

và hiệu quả điều trị của các chế phẩm nhũ tương tra mắt

Judy Chan và cộng sự [10] tiến hành thí nghiệm giải phóng in vitro và in vivo trên 5 hệ chứa pilorcarpin hydroclorid với nồng độ của pha nước khác

nhau, ở các dạng vi nhũ tương D/N (ME 5%, ME 10%), hệ lỏng trong suốt (liquid crystalline- LC), nhũ tương D/N (EM 85%) và dạng dung dịch nước (Sol 100%).

* Đánh giá in vitro;

Sự giải phóng dược chất từ các hệ ME 5%, 10% và LC tuân theo động học giải phóng của hệ cốt Đối với hệ vi nhũ tương N/D, pha dầu có vai trò là pha ngoại và các giọt nước là các kho dự trữ thuốc với kích thước nano nên các hệ này có cấu trúc của hệ cốt Khi xảy ra sự chuyển pha hình thành nên nhũ tương D/N, dược chất nằm trong pha ngoại và sự giải phóng dược chất ra khỏi

hệ tương tự như trong dung dịch Mức độ giải phóng dược chất ra khỏi hệ tăng

dần theo thứ tự: LC < ME 10% < ME 5% < EM 85% < Sol 100% Độ nhớt

tăng theo thứ tự ME 5% < ME 10% < LC Trong thí nghiệm in vitro, quá trình khuấy trộn ở bình khuếch tán Frank đủ mạnh để dẫn tới sự chuyển pha của

ME 5%, 10% sang thành hệ LC, độ nhớt tăng lên làm tăng thời gian lưu trên

màng khuếch tán và do đó mức độ giải phóng pilorcarpin hydroclorid tăng lên

* Đánh giá in vivo:

Khi nhỏ các hệ trên vào mắt thỏ, diện tích dưới đường cong (AUC0_180) tăng theo thứ tự: Sol 100% < EM 85% < LC < ME 5% < ME 10% Như vậy, hiệu quả điều trị của dạng nhũ tương cao hơn hẳn so với dạng dung dịch Tuy

nhiên, ME 5%, 10% có độ nhớt thấp hơn rất nhiều so với hệ LC, thời gian lưu ngắn hơn nhưng lại có sinh khả dụng cao hơn nên thời gian lưu ở mắt không

phải là yếu tố duy nhất quyết định tới sinh khả dụng của chế phẩm Điều kiện tiên quyết ảnh hưởng tới sinh khả dụng của các chế phẩm trong nhãn khoa là

phải có sự tương đồng và trộn lẫn được với lớp màng nước mắt ở trước giác

mạc Đặc tính thân dầu của các vi nhũ tương làm tăng tính tương đồng và khả

năng trộn lẫn với lớp màng mỏng thân dầu của lớp màng nước mắt ở trước

giác mạc, sau đó giải phóng dược chất và có thời gian lưu lâu trên giác mạc nên hiệu quả điều trị cao

1.1.7 Một số dạng nhũ tương đặc biệt

* NHŨ TƯƠNG

Trong nhũ tương thô, tiểu phân có kích thước từ vài micromet trở lên Dựa vào bản chất của môi trường phân tán và pha phân tán, người ta có thể phân biệt được hai dạng của nhũ tương Nếu môi trường phân tán là dung dịch nước

và pha phân tán là dầu thì hệ này được gọi là nhũ tương D/N Nhũ tương D/N thường được hình thành nếu pha nước chiếm trên 45% tổng khối lượng của hệ

và sử dụng chất nhũ hoá thân nước và ngược lại Trong ngành dược, đặc biệt là khi sử dụng theo đường uống nhũ tương D/N thường được sử dụng nhiều hơn nhũ tương N/D [1], [11]

* VI NHŨ TƯƠNG

Vi nhũ tương là hệ phân tán vi dị thể, gồm pha dầu và pha nước phân tán đồng nhất vào nhau và được ổn định bởi phân tử các chất diện hoạt trên bề mặt phân cách hai pha, có tính đẳng hướng về mặt quang học, ổn định về mặt nhiệt động học giống như một dung dịch lỏng [19]

*NHŨ TƯƠNG NANO

Nhũ tương nano là một loại nhũ tương với kích thước giọt rất nhỏ và đồng nhất, trong khoảng 20-200 nm Do đặc điểm về kích thước giọt nên các nhũ tương nano trong suốt Nhờ các đặc tính của chúng như: độ nhớt thấp, độ bền động học cao chống lại sự tạo váng hoặc sự lắng cặn và bề mặt phân cách pha rất rộng nên các nhũ tương nano được sử dụng rất nhiều trong các dạng chế phẩm khác nhau Cơ chế chủ yếu làm giảm độ ổn định của nhũ tương nano là Ostwald ripening Dạng phân tán hai pha lỏng này cũng được cho là một dạng nhũ tương siêu vi, nhũ tương siêu mịn, vi nhũ tương không ổn định

Phương pháp phân tán hay nhũ hoá năng lượng cao được sử dụng rộng rãi trong công nghiệp nhằm tạo ra nhũ tương có kích thước nhỏ và đồng nhất Trong phương pháp nhũ hoá năng lượng thấp hay tự nhũ hoá, nhũ tương nano

được hình thành là kết quả của sự chuyển pha xảy ra trong quá trình nhũ hoá, quá trình thường xảy ra ở nhiệt độ không đổi nhưng thay đổi thành phần hoặc với thành phần không đổi nhưng thay đổi nhiệt độ Trong thực tiễn, sự kết hợp của phương pháp năng lượng cao và năng lượng thấp đã được chứng minh là một cách hiệu quả để hình thành nên nhũ tương nano với kích thước các giọt nhỏ và đồng nhất [26].

Núria Sadumit và cộng sự [26] đã nghiên cứu sự hình thành của nhũ tương nano D/N của lidocain với hệ gồm nước/chất diện hoạt không ion hoá/dầu Nhũ tương nano của hệ nước/Cremophor EL/Miglyol 812 được tạo thành có

độ bền về động học rất cao: trong vòng 7 ngày tiến hành thí nghiệm, không xảy ra sự tách lớp, với tỉ lệ D/CDH là 10/90 thì kích thước các giọt không thay đổi và khi tỉ lệ D/CDH tăng lên thì kích thước các giọt cũng tăng lên nhưng không quá 67 nm Bào chế dưới dạng nhũ tương nano làm tăng đáng kể độ tan của lidocain, một chất gần như không tan trong nước Độ tan của dược chất này tăng khi tăng tỉ lệ D/CDH nhưng giảm đi khi tăng tỉ lệ của pha nước

*NHŨ TƯƠNG KHÔ

Nhũ tương khô là một trong những cách rất hiệu quả trong việc loại bỏ được những nhược điểm về độ ổn định của nhũ tương truyền thống Nó được áp dụng rất hiệu quả với vai trò là hệ phân phối thuốc qua đường uống cho các dược chất thân dầu, ít tan trong nước cũng như các dược chất cần được bảo vệ khỏi ánh sáng và sự oxy hoá Các chất mang rắn như: đường, trehalose, mannitol, HPMC, maltodextrin thường được sử dụng với vai trò là các

tạo khuôn để chuyển các nhũ tương truyền thống sang dạng bột

C ' \

-Jang và cộng sứ [16] đỗ nghiên cứu tạo ra nhũ tương khô của amlodipine Tốc độ phân huỷ amlodipine dưới tác dụng của tia tử ngoại là 0,3%/h trong khi đó đối với dạng dung dịch trong ethanol là 27%/h, dạng bột

là 1,2%/h Mặt khác, đường kính trung bình của các giọt nhũ tương khô không

thay đổi đáng kể trong vòng 6 tháng bảo quản ở nhiệt độ phòng (đường kính trung bình tăng từ 0,24 ± 0,30 fim lên 0,24 ± 0,32 jum) Trong khi đó, kích thước giọt trung bình của nhũ tương được đồng nhất hoá thay đổi đáng kể sau

8 tuần bảo quản Như vậy, nhũ tương khô làm tăng độ bền với ánh sáng của dược chất đồng thời tăng độ bền lý học của nhũ tương

* NHŨ TƯƠNG KÉP

Nhũ tương kép là hệ phân tán phức tạp trong đó một nhũ tương đơn được phân tán trong một môi trường phân tán khác Nhũ tương D/N/D và N/D/N là hai dạng cơ bản của nhũ tương kép Trong đó, nhũ tương đa pha D/N/D có số lượng chế phẩm ngày càng tăng do khả năng dính và lưu lại lâu trên da của nó

cao hơn so với nhũ tương N/D Nhũ tương kép có các ưu điểm là:

+ Có khả năng bắt, giữ hoạt chất cao hơn các hệ khác

+ Bảo vệ được các hoạt chất dễ hỏng

+ Có thể kết hợp các hoạt chất không tương hợp trong cùng một chế phẩm

+ Kéo dài thời gian giải phóng dược chất [15], [11]

S Farmand và cộng sự [15] đã tạo ra nhũ tương kép D/N/D của vitamin c Nghiên cứu về sự giải phóng dược chất ra khỏi nhũ tương cho thấy cơ chế của

sự giải phóng không ảnh hưởng tới động học của quá trình này Sự giải phóng dược chất chậm và tuân theo động học bậc 0 Bên cạnh đó, độ ổn định của vitamin c tăng lên đáng kể do dược chất được bảo vệ trong các các micel, việc

sử dụng môi trường phân tán là pha dầu đã ngăn cản được sự ion hoá, các phân tử oxy bị nhốt trong pha dầu nên vitamin c không bị oxy hoá

* HỆ T ự NHŨ HOÁ

Hệ tự nhũ hoá là một loại nhũ tương có vai trò tăng độ hoà tan và tăng sinh khả dụng theo đường uống của các dược chất ít hấp thu Các dược chất được hoà tan trong hệ gồm dầu, chất diện hoạt và đôi khi có cả chất đồng diện hoạt Khi hệ tự nhũ hoá vào dịch ruột, dưới tác động của nhu động ruột, nhũ tương

mịn được hình thành Do đó, dược chất vẫn tồn tại ở dạng dung dịch và tránh

được giai đoạn hoà tan vào dịch ruột từ dạng kết tinh của dược chất sơ nước, kết quả là tăng mức độ hấp thu dược chất tại ruột và làm tăng sinh khả dụng của thuốc [16].

- ít tan trong nước (1/400), chloroform; tan nhiều trong ethanol (1/2,5) [3]

1.2.3 Độ ổn định của cloramphenicol trong một số dạng thuốc

nhưng ở pH từ 2 đến 7, tốc độ phản ứng không phụ thuộc vào pH Tại môi trường có pH<2 hoặc pH>7, pH có ảnh hưởng rất lớn đến sự thuỷ phân cloramphenicol Các chất xúc tác phản ứng thuỷ phân là acid hoặc base trong môi trường đệm chẳng hạn như: HP042", CH3COOH, hydro citrat và dihydro citrat Loại hệ đệm và dung lượng của từng hệ đệm ảnh hưởng tới độ bền của CLP: không bền trong dung dịch đệm phosphat và citrat nhưng bền trong hệ đệm borat [20] Nghiên cứu ảnh hưởng của hệ đệm borat với pH trong khoảng6,0 - 7,5 và nồng độ đệm trong khoảng 0,05 - 0,2M đến độ ổn định của dung dich CLP 0,4% một số tác giả nhận thấy dung dich này bền nhất ở đệm borat0,2M và pH 7,0-7,5 [8].

Hình 1.1: Sơ đồ phản ứng thuỷ phân của cloramphenicol

Ngoài ra, dược chất này còn bị phân huỷ bởi ánh sáng mặt trời tạo ra chất có màu vàng p.nitrobenzaldehyd (quá trình oxy hoá), arylamin (khử hóa) và phản ứng phân ly [20]

b Thuốc mỡ tra mắt

Nghiên cứu độ ổn định của CLP 1% sau 12 tháng trong một số tá dược thuốc mỡ tra mắt (tá dược hút, nhũ tương N/D và D/N) ở 25°c và 35°c, cho thấy:

- Đối với các tá dược hút: CLP bền trong mỡ cừu hơn trong alcol cetylic

- Độ bền CLP ở 25 °c giảm theo thứ tự: tá dược hút > nhũ tương D/N > nhũ tương N/D

- Độ Ổn định của CLP ở 35°c tăng lên khi thêm natri metabisulfit và Na

EDTA [20].

c Hỗn dịch

Hỗn dịch cloramphenicol palmitat pH 6,7 gồm cồn thuốc cloroform, methyl

và propyl hydroxy benzoat, acid sorbic, tween 80, dung dịch keo nhôm magnesi silicat (Veegum) và carmelose bị vón lại và biến màu sau 2 năm bảo quản trong lọ polyvinyl clorid rắn và trong suốt Nhưng hỗn dịch này bền khi được bảo quản trong lọ thuỷ tinh màu hổ phách sau 2 năm [20]

1.2.4 Sinh khả dụng của một số dạng thuốc dùng tại chỗ chứa cloramphenicol

a Thuốc mỡ tra mắt

Khi tá dược hút chứa mỡ cừu, sự giải phóng CLP cao hơn khi chứa alcol cetylic Và sự giải phóng CLP ra khỏi thuốc mỡ tăng lên khi thêm natri metabisulfit và Na EDTA Các thông số về tính lưu biến cho thấy “độ nhớt dẻo” có vai trò chính trong việc giải phóng CLP ra khỏi tá dược thuốc mỡ Sự giải phóng CLP ra khỏi tá dược thuốc mỡ (trong giai đoạn đầu tuân theo động học bậc nhất) giảm theo thứ tự: nhũ tương N/D > nhũ tương D/N > tá dược hút

[20].

b.Thuốc đạn

Một số tác giả nghiên cứu sự giải phóng CLP ra khỏi nhiều loại tá dược

thuốc đạn ở 38°c (5% dược chất) và nhận xét tá dược thân nước giải phóng dược chất tốt hơn tá dược béo rắn

Trong các tá dược béo rắn được nghiên cứu, Witepsol H I5 có mức độ giải phóng DC tốt nhất Khả năng giải phóng CLP ra khỏi thuốc đạn chứa các chất diện hoạt sắp xếp theo thứ tự: Brij > Myrj > Tween > Arlacel Mức độ giải phóng phụ thuộc vào độ tan của cloramphenicol trong tá dược, mức độ hoà tan của tá dược tron^mo^ìr^ờng đánh giá cũng như thành phần và điểm chảy của

tá dược thuốc đạn [20]

1.2.5 Nghiên cứu vi nhũ tương chứa cloramphenicol

Feng- Feng và cộng sự [21], [22] đã tiến hành nghiên cứu vi nhũ tương tra

mắt chứa CLP có các thành phần: span 20, tween 20, n- butanol, nước và isopropyl palmitat (IPP)/isopropyl myristat (IPM) CLP được hoà tan trong n-

butanol với nồng độ 5,0% (kl/kl) Giản đồ pha được xây dựng theo phương pháp chuẩn độ đơn giản để xác định vùng tạo vi nhũ tương Trước tiên, tạo ra hỗn hợp của các chất diện hoạt, chất đồng diện hoạt và dầu sau đó nhỏ từng giọt nước từ buret chuẩn độ vào hỗn hợp, các mẫu được khuấy từ nhẹ để nhanh chóng đạt tới sự đồng đều Ranh giới giữa các vùng trong giản đồ pha được xác định bằng cách quan sát sự thay đổi của các mẫu từ trong suốt sang đục hoặc ngược lại

Tiến hành thí nghiệm lão hoá cấp tốc trong 3 tháng trong tủ vi khí hậu có nhiệt độ 40 ± 2°c, độ ẩm 75 ± 5°c, đánh giá độ ổn định của CLP trong vi nhũ tương và so sánh với với dung dịch nhỏ mắt trên thị trường Thí nghiệm được tiến hành với 3 mẫu chứa CLP 0,27%:

1, ME-1: Span 80+ Tween 80 (1:1) + /ĩ-Butanol+ nước + IPP

2, ME-2: Span 20+ Tween 20 (1:1) + M-Butanol+ nước + IPP

3, Dung dịch nhỏ mắt trên thị trường

Tạp chất phân huỷ của CLP là các glycol Vì vậy, thông qua việc xác định nồng độ của glycol bằng phương pháp HPLC để đánh giá độ ổn định của dược chất trong các mẫu Nồng độ các glycol trong 2 hệ ME-1 và ME-2 thấp hơn rất nhiều so với trong dung dịch Như vậy, dạng vi nhũ tương làm tăng đáng

kể độ ổn định của CLP so với dạng dung dịch Độ bền của CLP trong 2 hệ ME-1 và ME-2 như nhau do 2 hệ có thành phần tương tự, vị trí của CLP trong

hệ giống nhau

Kích thước các giọt vi nhũ tương tăng lên khi tăng nồng độ của CLP tuy nhiên, không có mối tương quan giữa kích thước các giọt vi nhũ tương và nồng độ của dược chất Như vậy, CLP không hoà tan trong pha nước mà được

hoà tan trong các giọt dầu của vi nhũ tương và sự phân tán của CLP trong các giọt vi nhũ tương không đồng đều, một số giọt có lượng lớn phân tử CLP trong khi đó một số giọt chứa lượng nhỏ.

1.2.6 Các phương pháp định lượng cloramphenicol trong các chế phẩm

- Phương pháp đo quang phổ uv

- Phương pháp đo nitrit

- Phương pháp xác định clorid [2]

- Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao [28]

- Phương pháp đo màu [13]

1.2.7 Một số dạng bào chê chứa cloramphenicol dùng trong nhãn khoa

- Dung dịch thuốc nhỏ mắt cloramphenicol 0,4%, 0,5%

- Thuốc mỡ tra mắt cloramphenicol và polymycin B

- Thuốc mỡ tra mắt cloramphenicol

- Hỗn dịch nhỏ mắt cloramphenicol và hydrocortison acetat [4]

- Bột đông khô để pha dung dịch thuốc nhỏ mắt [6]

Bảng 2.1: Bảng nguyên liệu sử dụng trong quá trình thực nghiệm

Natri dihydrophosphat Trung Quốc Tinh khiết hoá học

Màng Tuffryn Membrane

Filter 25 mm 0,45 jum

Pall Corporation TCCS

2.1.2 Phương tiện nghiên cứu

- Máy khuấy từ IKA-WERKE (Đức)

- Hệ thống giải phóng thuốc qua màng Hanson Research

- Nhớt kế Brookfield (Mỹ)

- Cân phân tích Sartorius BP121S (Mỹ)

- Máy đo pH INOLAB

- Máy ly tâm Hermle (Đức)

- Hệ thống sắc ký lỏng hiệu năng cao THERMO FINNIGAN (Mỹ)

- Máy siêu âm cầm tay Sartorius

- Máy siêu âm Ultrasonic LC 60 H

- Máy lọc nén

2.1.3 Phương pháp thực nghiệm

2.13.1 Bào chế nhũ tương tra mắt CLP 0,4%

Qua tham khảo tài liệu, khảo sát sơ bộ và căn cứ vào mục tiêu nghiên cứu, chúng tôi lựa chọn thành phần và phương pháp bào chế nhũ tường tra mắt CLP

- Thành phần:

+ Pha dầu: dầu vừng

+ Pha nước: đệm borat 0,2M

+ Chất diện hoạt: tween 80, span 80

+ Chất đồng diện hoạt: isobutanol

+ Chất bảo quản: thimerosal

+ Dược chất: cloramphenicol

- Phương pháp bào chế:

Nhũ tương tra mắt cloramphenicol 0,4% được bào chế theo phương pháp keo ướt và kết hợp với các biện pháp tiệt khuẩn để đảm bảo tiêu chuẩn vổkhuẩn của thuốc tra mắt [1]

Tiến hành pha chế nhũ tương theo sơ đồ sau:

Hình 2.2: Sơ đồ các giai đoạn bào chế nhũ tương tra mắt CLP

Cụ thể:

❖ Bước 1: Đun nóng dầu vừng ở 160°c trong 60 phút, sau đó để nguội

❖ Bước 2: Hoà tan CLP trong isobutanol, thêm dầu vừng và span 80 vào dung dịch thu được, khuấy đều và lọc qua màng silicon 0,45 |Lim Sau đó, đun nóng pha dầu đến khoảng 60- 65 °c.

❖ Pha đệm borat 0,2 M Sau đó, hoà tan thimerosal, tween 80 vào hệ đệm bằng cách đun nóng nhẹ, lọc qua màng cellulose acetat 0,20 Jim Đun nóng pha nước thu được đến khoảng 65- 70 °c.

❖ Nhỏ từ từ từng giọt pha dầu vào pha nước đồng thời thực hiện quá trình siêu âm để phân tán pha dầu vào trong pha nước và đồng nhất hoá nhũ tương

2.1.3.2 Đánh giá một sô' đặc tính của nhũ tương

* Điều kiện tiến hành:

+ Đầu đo SI

+ Tốc độ quay: trong khoảng 10 - 100 vòng/phút

* Tiến hành:

- Mẫu chuẩn: Cân khoảng 200 mg CLP cho vào bình định mức 100 ml, thêm isopropanol đến vạch, lắc đều Lấy 4,0 ml dung dịch thu được cho vào bình định mức 100 ml, thêm isopropanol vào đến vạch và lắc Lọc dung dịch qua màng 0,45 Ịim

- Mẫu thử: Cân khoảng 1 g nhũ tương cho vào bình định mức 50 ml, thêm isopropanol, rồi siêu âm trong 15 phút Để yên 10 phút, sau đó thêm isopropanol đến vạch Lọc dung dịch thu được qua màng lọc 0,45 |_im

* Khảo sát độ lặp lại của phương pháp:

Tiến hành tiêm lặp lại 5 lần một mẫu chuẩn theo các điều kiện sắc ký đã chọn Sai số tương đối (RSD%) của 5 phép thử song song đối với thời gian lưu, diện tích pic phải nhỏ hơn 2%

* Khảo sát độ tuyến tính của phương pháp:

Pha một loạt các dung dịch chuẩn trong isopropanol có nồng độ CLP biến

thiên trong khoảng từ 0,065 |Lig/ml đến 0,108 ụ.g/ml Lọc qua màng lọc 0,45 jum và tiến hành sắc ký theo điều kiện đã chọn để xác định sự phụ thuộc giữa nồng độ và diện tích pic của CLP

* Công thức tính:

c , = — xCc

sc

Trong đó:

Ct: Nồng độ của CLP trong mẫu thử (jug/ml)

Cc: Nồng độ mẫu chuẩn (|Lig/ml).

St : Diện tích pic của mẫu thử (mAU)

Sc: Diện tích pic của mẫu chuẩn (mAU)

2.1.3.3 Đánh giá giải phóng CLP ra khỏi nhũ tương

* Phương tiện: hệ thống giải phóng thuốc qua màng

Hình 2.3: Hệ thống giải phóng thuốc qua màng

* Điều kiện tiến hành:

- Môi trường khuếch tán: dung dịch đệm phosphat pH 7,4 (lọc qua màng 0,45 JJ.ni)

- Thể tích môi trường thử: 7,0 ml

- Nhiệt độ môi trường khuyếch tán: 3 2 °c ± 0,5°c.

- Màng thử: màng nhân tạo polysulĩon 0,45 Ịim và màng da lợn

- Diện tích màng mà dược chất khuếch tán qua: 1,76 cm2

- Lượng mẫu hút: 0,5 ml

- Thời gian thử: 3 h

- Tốc độ của máy khuấy từ: 400 vòng/ phút