NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG CÔNG THỨC VIÊN NANG CHỨA CAO DIẾP CÁ

NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG CÔNG THỨC VIÊN NANG CHỨA CAO DIẾP CÁ

TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ

LÊ THANH HUY

NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG CÔNG THỨC VIÊN NANG CHỨA CAO DIẾP CÁ

Houttuynia cordata Thunb.

LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC

Cần Thơ - 2011

TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ

LÊ THANH HUY

NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG CÔNG THỨC VIÊN NANG CHỨA CAO DIẾP CÁ

Houttuynia cordata Thunb.

LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC

NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC Ths NGUYỄN THỊ LINH TUYỀN

Cần Thơ - 2011

Em xin gửi lòng biết ơn sâu sắc nhất đến cô ThS Nguyễn Thị Linh Tuyền đã trực tiếp hướng dẫn, hết lòng truyền đạt kiến thức và giúp đỡ em trong suốt quá trình thực hiện luận văn.

Em xin chân thành cám ơn thầy DS Lâm Thanh Hùng và thầy ThS Đỗ Châu Minh Vĩnh Thọ đã tận tình hướng dẫn và tạo điều kiện cho em thực hiện tốt luận văn

Em xin chân thành cám ơn Quý Thầy Cô và Anh Chị kỹ thuật viên bộ môn Công Nghiệp Dược, bộ môn Dược Liệu, bộ môn Hóa Phân Tích - Kiểm Nghiệm - Độc Chất,

bộ môn Bào Chế đã hỗ trợ dụng cụ, hóa chất, trang thiết bị, giúp đỡ em hết lòng trong quá trình thực hiện luận văn

Em xin chân thành cám ơn Hội đồng chấm khóa luận tốt nghiệp Dược sỹ đại học

đã dành thời gian xem xét, góp ý và sửa chữa để luận văn được hoàn thiện hơn

Em xin chân thành cám ơn Quý Thầy Cô trường Đại Học Y Dược Cần Thơ đã dìu dắt, trang bị kiến thức cho em trong suốt năm năm học vừa qua

Xin cám ơn các bạn Đoan Trang, Hoa Hạ, Diễm Huỳnh, Mạnh Hùng, Trọng Tính, Anh Tuấn,Thanh Sang, các bạn lớp Dược khóa 32, các bạn ở cùng nhà trọ đã luôn động viên, chia sẻ, giúp đỡ trong thời gian qua

Con xin cám ơn gia đình - chỗ dựa vững chắc nhất giúp con vượt qua mọi khó khăn thử thách trong công việc và trong cuộc sống

Cần Thơ, tháng 06 năm 2011

Lê Thanh Huy

Tôi tên Lê Thanh Huy xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi Các số liệu, kết quả nêu trong luận văn là trung thực và chưa từng được ai công bố trong bất kỳ công trình nào khác.

Cần Thơ, tháng 06 năm 2011

Lê Thanh Huy

MỤC LỤC

Mục lục i

Danh mục các ký hiệu và chữ viết tắt v

Danh mục các bảng vi

Danh mục các hình ảnh vii

Danh mục các sơ đồ viii

ĐẶT VẤN ĐỀ 1

Chương 1 – TỔNG QUAN 3

1.1 TỔNG QUAN VỀ CÂY DIẾP CÁ 3

1.1.1 Đặc điểm thực vật 3

1.1.2 Phân bố sinh thái 3

1.1.3 Thành phần hóa học 4

1.1.3.1 Flavonoid 4

1.1.3.2 Tinh dầu 4

1.1.3.3 Alkaloid 5

1.1.3.4 Các thành phần khác 5

1.1.4 Tác dụng dược lý 5

1.1.5 Công dụng 6

1.2 CÔNG NGHỆ BÀO CHẾ VIÊN NANG CỨNG 7

1.2.1 Khái quát về thuốc viên nang 7

1.2.1.1 Định nghĩa 7

1.2.1.2 Ưu điểm của viên nang cứng 7

1.2.2 Thành phần viên nang 7

1.2.2.1 Vỏ nang 7

1.2.2.2 Thành phần dược chất trong viên nang 8

1.2.3 Quy trình bào chế thuốc viên nang cứng từ dược liệu 9

1.3 SƠ LƯỢC VỀ PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO 10

1.3.1 Các thông số đặc trưng của quá trình sắc ký 11

1.3.1.1 Hệ số dung lượng 11

1.3.1.2 Hệ số chọn lọc 11

1.3.1.3 Hệ số bất đối xứng 11

1.3.1.4 Độ phân giải 11

1.3.1.5 Số đĩa lý thuyết và hiệu lực cột 12

1.3.2 Một số ứng dụng của phương pháp HPLC 12

1.3.2.1 Phân tích định tính 12

1.3.2.2 Phân tích định lượng 12

1.4 GIỚI THIỆU MỘT SỐ CHẾ PHẨM CHỨA CAO DIẾP CÁ 13

1.4.1 An trĩ vương 13

1.4.2 Helaf 13

1.4.3 Cenditan 14

Chương 2 – ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15

2.1 NGUYÊN LIỆU, CHẤT CHUẨN, HÓA CHẤT VÀ TRANG THIẾT BỊ 15

2.1.1 Nguyên liệu và chất chuẩn 15

2.1.2 Hóa chất 15

2.1.3 Trang thiết bị 16

2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16

2.2.1 Xây dựng và thẩm định quy trình định lượng quercetin bằng phương pháp HPLC 16

2.2.1.1 Khảo sát các điều kiện sắc ký tối ưu 16

2.2.1.2 Khảo sát phương pháp xử lý mẫu cao Diếp cá và viên nang chứa cao Diếp cá 17

2.1.1.3 Thẩm định quy trình định lượng 20

2.2.2 Xây dựng công thức viên nang chứa cao Diếp cá 21

2.2.2.1 Thiết kế công thức viên nang chứa cao Diếp cá 21

2.2.2.2 Phương pháp khảo sát đặc tính của khối bột thuốc và đo độ rã của viên nang 23

2.2.2.3 Quy trình điều chế viên nang chứa cao Diếp cá 24

2.2.3 Xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm cho viên nang chứa cao Diếp cá 24

2.2.3.1 Hình thức cảm quan 24

2.2.3.2 Độ đồng đều khối lượng 24

2.2.3.3 Độ tan rã 24

2.2.3.4 Độ ẩm 24

2.2.3.5 Định tính 24

2.2.3.6 Định lượng 25

Chương 3 - KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 27

3.1 XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG QUERCETIN BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC 27

3.1.1 Khảo sát các điều kiện sắc ký tối ưu 27

3.1.2 Khảo sát quy trình xử lý mẫu cao Diếp cá và viên nang chứa cao Diếp cá 28

3.1.3 Thẩm định quy trình định lượng quercetin 30

3.1.3.1 Xác định tính tương thích hệ thống 30

3.1.3.2 Thẩm định phương pháp phân tích 31

3.2 THIẾT KẾ CÔNG THỨC VIÊN NANG CHỨA CAO DIẾP CÁ 35

3.2.1 Lựa chọn hàm lượng cao 35

3.2.2 Lựa chọn hàm lượng tá dược hút 35

3.2.3 Lựa chọn công thức tối ưu cho viên nang chứa cao Diếp cá 36

3.2.3.1 Độ ẩm 37

3.2.3.2 Góc chảy 37

3.2.3.3 Tỷ trọng biểu kiến 37

3.2.3.4 Phân bố cỡ hạt 38

3.2.3.5 Độ tan rã 39

3.3 KIỂM NGHIỆM VIÊN NANG CHỨA CAO DIẾP CÁ 40

3.3.1 Hình thức cảm quan 40

3.3.2 Đồng đều khối lượng 40

3.3.3 Độ tan rã 41

3.3.4 Độ ẩm 41

3.3.5 Định tính 41

3.3.5.1 Bằng phản ứng hóa học 41

3.3.5.2 Bằng SKLM 41

3.3.6 Định lượng 42

3.4 XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN VIÊN NANG CHỨA CAO DIẾP CÁ 42

3.4.1 Tiêu chuẩn kỹ thuật 42

3.4.2 Kết quả kiểm nghiệm 46

Chương 4 - BÀN LUẬN 47

4.1 Về xây dựng và thẩm định quy trình định lượng quercetin trong cao Diếp cá và viên nang chứa cao Diếp cá 47

4.2 Về nghiên cứu xây dựng công thức cho viên nang chứa cao Diếp cá 47

4.3 Về xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm cho viên nang chứa cao Diếp cá 48

Chươg 5 - KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 49

5.1 Kết luận 49

5.2 Kiến nghị 49

TÀI LIỆU THAM KHẢO 51

DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT

AOAC Hiệp hội các nhà hoá học phân tích quốc tế

(Association of Official Analytical Chemists)

HPLC Sắc ký lỏng hiệu năng cao

(High Performance Liquid Chromatography)

RSD Độ lệch chuẩn tương đối (Relative Standard Deviation)

SD Độ lệch chuẩn (Standard Deviation)

Bảng 2.4 Các công thức thiết kế tối ưu công thức viên nang 22

Bảng 2.5 Định tính viên nang chứa cao Diếp cá bằng phản ứng hóa học 25

Bảng 3.1 Kết quả khảo sát tính tương thích hệ thống trên 6 lần tiêm mẫu chuẩn 30

Bảng 3.2 Kết quả khảo sát tính tương thích hệ thống trên 6 lần tiêm mẫu thử 30

Bảng 3.3 Kết quả khảo sát tính tuyến tính phương pháp định lượng bằng HPLC 33

Bảng 3.4 Kết quả khảo sát độ chính xác phương pháp định lượng bằng HPLC 34

Bảng 3.5 Kết quả khảo sát độ đúng của phương pháp định lượng bằng HPLC 34

Bảng 3.6 Các công thức thiết kế để xác định hàm lượng cao thích hợp 35

Bảng 3.7 Độ ẩm các công thức C1, C2, C3, C4 35

Bảng 3.8 Các công thức thiết kế để xác định hàm lượng tá dược hút 35

Bảng 3.9 Độ ẩm các công thức H1, H2, H3, H4 36

Bảng 3.10 Các công thức thiết kế tối ưu hóa công thức viên nang 36

Bảng 3.11 Độ ẩm các công thức khảo sát (T1 – T10) 37

Bảng 3.12 Góc chảy các công thức khảo sát (T1 – T10) 37

Bảng 3.13 Tỷ trọng biểu kiến của các công thức khảo sát (T1 – T10) 37

Bảng 3.14 Phân bố cỡ hạt của các công thức khảo sát (T1 – T10) 38

Bảng 3.15 Độ rã các công thức khảo sát (T1 – T10) 39

Bảng 3.16 Kết quả kiểm nghiệm độ đồng đều về khối lượng 40

Bảng 3.17 Kết quả đo độ rã 41

Bảng 3.18 Kết quả đo độ ẩm 41

Bảng 3.19 Kết quả định tính viên nang chứa cao Diếp cá 41

Bảng 3.20 Kết quả kiểm nghiệm viên nang Diếp cá 46

DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH Trang Hình 1.1 Cây Diếp cá 3

Hình 1.2 Công thức cấu tạo của quercitrin và isoquercitrin 4

Hình 1.3 Sơ đồ cấu tạo chung của một hệ thống HPLC 10

Hình 1.4 Cách xác định thời gian chết (t0) và thời gian lưu (tR) 11

Hình 1.5 Cách xác định số đĩa lý thuyết 12

Hình 1.6 Chế phẩm An Trĩ Vương 13

Hình 1.7 Chế phẩm Helaf 13

Hình 1.8 Chế phẩm Cenditan 14

Hình 2.1 Phương pháp xác định góc nghỉ của bột, hạt thuốc 24

Hình 3.1 Sắc ký đồ 3D mẫu thử ở bước sóng từ 250nm – 450nm 27

Hình 3.2 Sắc ký đồ contour mẫu thử 27

Hình 3.3 Sắc ký đồ các dịch thủy phân quercetin sau 1h, 2h và 3h 28

Hình 3.4 Sắc ký đồ mẫu thử trước và sau khi loại tạp bằng SPE tự chế 29

Hình 3.5 Sắc ký đồ mẫu chuẩn 31

Hình 3.6 Sắc ký đồ mẫu thử 31

Hình 3.7 Sắc ký đồ mẫu trắng 31

Hình 3.8 Sắc ký đồ mẫu dung môi 32

Hình 3.9 Sắc ký đồ mẫu dung dịch nước acid phosphoric 0,2% 32

Hình 3.10 Kết quả chồng phổ mẫu chuẩn, mẫu dung môi, mẫu tá dược và mẫu dung dịch nước acid phosphoric 0,2% 32

Hình 3.11 Biểu đồ tính tuyến tính của phương pháp định lượng bằng HPLC 33

Hình 3.12 Biểu đồ phân bố cỡ hạt của các công thức từ T1 đến T5 38

Hình 3.13 Biểu đồ phân bố cỡ hạt của các công thức từ T6 đến T10 39

Hình 3.14 Kết quả định tính bằng SKLM viên nang chứa cao Diếp cá 41

DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ Sơ đồ 1.1 Tóm tắt quy trình sản xuất viên nang cứng 9

Sơ đồ 2.1 Tóm tắt quy trình xử lý mẫu thử 19

ĐẶT VẤN ĐỀ

Quay về với thiên nhiên là xu hướng của thế kỷ XXI Trong lĩnh vực Dược, các thuốc có nguồn gốc từ dược liệu ngày càng được quan tâm nhiều hơn Trước đây, người ta thường hiểu chỉ có một số nước phương Đông như Trung Quốc, Việt Nam,

…mới có nhiều sản phẩm từ thiên nhiên Thực tế, theo Tổ Chức Y Tế Thế Giới (WHO) hiện có tới 60% dân số sử dụng các sản phẩm này từ các nước châu Á như

Ấn Độ, Thái Lan đến các nước Châu Phi và Mỹ La Tinh Trong đó có nhiều nhóm, loại thuốc chiếm tỷ trọng cao: chẳng hạn chiết xuất thực vật chữa phì đại tiền liệt tuyến lành tính có tới 100 biệt dược, chiếm tới 25 – 36% (Pháp, Đức) 3,5 – 10,5% (Italia, Tây Ban Nha) so với tổng số dược phẩm chữa bệnh này [32]

Việt Nam là nước nhiệt đới gió mùa, động thực vật phong phú là tiền đề tốt để phát triển các sản phẩm từ dược liệu Nguồn dược liệu dồi dào là nền tảng cho việc hình thành các cơ sở sản xuất thuốc từ dược liệu Theo thống kê của Bộ Y tế, cả nước hiện có hơn 300 cơ sở sản xuất thuốc từ dược liệu trong nước, trong đó có 10 cơ sở đông dược đạt chuẩn thực hành tốt sản xuất thuốc của WHO Nhiều công ty dược cũng có thương hiệu riêng từ thế mạnh của cây dược liệu [31]

Trong các loại dược liệu phổ biến, Diếp cá là loại rau ăn quen thuộc hằng ngày được nhân dân ta sử dụng làm thuốc với nhiều tác dụng: trị táo bón, trĩ, mụn nhọt, lở ngứa,….Tuy nhiên có một số bất tiện trong việc sử dụng dược liệu này như khó ăn và không thể ăn với lượng lớn Mặt khác, việc sử dụng dược liệu như thực phẩm hay các sản phẩm không được chuẩn hóa và kiểm soát chặt chẽ sẽ ảnh hưởng lớn đến tính an toàn và hiệu quả trị liệu Vì vậy, đề tài nghiên cứu xây dựng công thức viên nang chứa cao Diếp cá được thực hiện với những mục tiêu cụ thể như sau:

1 Xây dựng và thẩm định quy trình định lượng quercetin trong cao Diếp cá và viên nang chứa cao Diếp cá

2 Xây dựng công thức viên nang chứa cao Diếp cá

3 Xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm cho viên nang bào chế được

Ý nghĩa của đề tài:

1 Góp phần nghiên cứu và cung cấp cơ sở lý luận bào chế các chế phẩm từ cao dược liệu

2 Là cơ sở cho các nghiên cứu sau này trên quy mô pilot và công nghiệp

Hình 1.1 Cây Diếp cá.

Chương 1 – TỔNG QUAN

1.1 TỔNG QUAN VỀ CÂY DIẾP CÁ:

Tên khác: Lá giấp, rau giấp cá, tạp thái, ngư tinh thảo, rau vẹn

Tên khoa học: Houttuynia cordata Thunb

Họ lá giấp: Saururaceae

1.1.1 Đặc điểm thực vật: [6], [13], [16]

Cây thảo, sống lâu năm, cao 20 – 40cm, thân

ngầm mọc bò ngang trong đất, màu trắng, hơi có

lông, bén rễ ở các mấu Thân đứng nhẵn, màu lục

hoặc tím đỏ Lá mọc so le, hình tim, đầu nhọn, mặt

trên màu lục sẫm, mặt dưới màu tím, hơi có lông

mọc theo gân lá của cả hai mặt, gân chính 7; cuốn

lá dài, có bẹ, lá kèm có lông ở mép

Cụm hoa mọc ở ngọn thân thành bông dài 2 –

2,5cm, mang nhiều hoa nhỏ màu vàng nhạt; tổng

bao gồm 4 lá bắc màu trắng nom như một chiếc

hoa riêng lẻ; hoa không có bao hoa; nhị 3 Quả

nang mở ở đỉnh; hạt hình trái xoan nhẵn Toàn thân vò ra có mùi tanh như mùi cá.Mùa hoa quả: tháng 5 – 7

1.1.2 Phân bố sinh thái: [13], [16]

Diếp cá phân bố chủ yếu ở vùng nhiệt đới và cận nhiệt đới châu Á, từ Nhật Bản, Trung Quốc đến Việt Nam, Lào, Ấn Độ và các nước Đông Nam Á khác Ở Việt Nam, cây mọc hoang dại ở các tỉnh miền núi, trung du và đồng bằng Cây còn được trồng ở nhiều nơi để làm rau và làm thuốc Diếp cá thuộc cây ưu ẩm và hơi chịu bóng, thường mọc ở đất ẩm, nhiều mùn dọc theo các bờ khe suối, mương nước trong thung lũng và ở vùng đồng bằng Cây sinh trưởng gần như quang năm, mạnh nhất trong mùa xuân hè, có hoa quả hàng năm trên những cây không bị ngắt ngọn và hái lá thường xuyên, có khả năng tái sinh chồi mạnh từ thân rễ

Hình 1.2 Công thức cấu tạo của quercitrin và isoquercitrin.

Các flavonoid khác là dạng glycosid của quercetin như: [12], [18], [19], [27]

Ngoài ra tinh dầu Diếp cá còn chứa acid hữu cơ: acid caprinic, laurinaldehyde, benzamid, acid hexadecanoic, acid decanoid, acid palmitic, acid linoleic, acid oleic, acid stearic,…lipid và vitamin K [6], [30]

1.1.3.3 Alkaloid:

Từ Diếp cá đã phân lập được β-sitosterol [14], sáu alkaloid có hoạt tính sinh học

là aristolactam B(1), piperolactam A(2), aristolactam A(3), norcepharadione B(4), cepharadione B(5) và splendidine(6) cũng được tìm thấy trong dịch chiết methanol phần trên mặt đất của cây Diếp cá [23]

Tác dụng chống ung thư máu: [17]

Công trình nghiên cứu của Chang Jung-San và cộng sự, mục đích để đánh giá tác

dụng chống ung thư máu của H.cordata và Bidens pilosa Năm dòng tế bào ung thư

máu, theo thứ tự là L1210, U937, K562, Raji và P3HR1 được nuôi cấy với chất chiết

xuất của H cordata và Bidens pilosa Kết quả cho thấy chiết xuất từ các dược liệu

trên có tác dụng ngăn chặn 5 dòng tế bào này

Tác dụng chống viêm tuyến vú: [29]

Công trình nghiên cứu được thực hiện tại Trường đại học Thú y, thuộc Viện đại

học Nông nghiệp Zbejiang, Hangzbou, Trung Quốc Từ Houttuynia cordata, các nhà

nghiên cứu đã chiết xuất được chất Houttuynia, sau đó cho Houttuynia phản ứng với

bisulphat natri để có được chất Houttuynin bisulphat natri Từ chất này, họ đã chế biến được một dung dịch tiêm vào vú để điều trị bệnh viêm tuyến vú ở bò

Thử nghiệm trên 52 trường hợp viêm tuyến vú ở bò được chia làm 2 nhóm: nhóm 1 tiêm 80mg dung dịch H bisulphat Na và nhóm 2 tiêm 800.000 đơn vị Penicillin kết hợp với 1g Streptomycin Kết quả cho thấy 88,2% viêm tuyến vú đã điều trị khỏi với H.bisulphat Na, so với 90% được chữa lành với Penicillin + Streptomycin Như vậy, không có sự khác biệt đáng kể trong điều trị viêm tuyến vú cấp tính giữa 2 nhóm trên

Các tác dụng khác:

Diếp cá còn có tác dụng kháng khuẩn [26], kháng viêm [22], chống oxy hóa [28] Dịch chiết nước Diếp cá dùng điều trị cho bệnh nhân viêm xoang mãn tính và polyp mũi [25]

1.1.5 Công dụng: [6], [13], [16]

Diếp cá được dùng trị táo bón, trĩ, mụn nhọt, lở ngứa, trẻ con lên sởi, viêm phổi hoặc phổi có mủ, đau mắt đỏ hoặc đau mắt do nhiễm trực khuẩn mủ xanh, viêm ruột, kiết lỵ, bí tiểu tiện, kinh nguyệt không đều

Ở Trung Quốc, một hợp chất có hoạt tính kháng khuẩn đã được phân lập từ cây diếp cá và bào chế thành thuốc viên và thuốc tiêm để trị bệnh nhiễm khuẩn

Ở Nhật Bản, thân rễ Diếp cá có trong thành phần của một số chế phẩm thuốc dùng chữa một số bệnh của phụ nữ

1.2 CÔNG NGHỆ BÀO CHẾ VIÊN NANG CỨNG:

1.2.1 Khái quát về thuốc viên nang:[2]

1.2.1.1 Định nghĩa:

Thuốc nang là dạng thuốc uống chứa một hay nhiều hoạt chất trong vỏ nang cứng hay mềm với nhiều kiểu dáng và kích thước khác nhau Vỏ nang được làm từ gelatin và có thể được thêm các chất phụ gia không gây độc hại cho cơ thể người Thuốc nang cứng có vỏ nang gồm hai phần hình trụ lồng khích vào nhau, mỗi phần

có một đầu kín, đầu kia hở Thuốc đóng trong nang thường ở dạng rắn (bột hay cốm)

1.2.1.2 Ưu điểm của viên nang cứng:

Viên nang là dạng viên dễ uống, dễ nuốt và có màu sắc phong phú hơn dạng viên nén

Dược chất đóng vào viên nang có thể ở nhiều dạng: bột, cốm, vi hạt, vi nang, viên nang nhỏ, viên nén hoặc phối hợp các dạng trên trong cùng một vỏ nang

Sự phối hợp này có thể giúp cách ly các thành phần tương kỵ hoặc điều chế viên nang phóng thích kéo dài bằng cách phối hợp các vi hạt hoặc vi nang phóng thích dược chất tại nhiều thời điểm và vị trí khác nhau trong đường tiêu hóa dễ dàng

So với viên nén, viên nang là dạng thuốc tương đối dễ nghiên cứu để xây dựng công thức Dễ triển khai sản xuất ở các quy mô khác nhau, có thể sử dụng các máy đóng nang thủ công trong quy mô nhỏ hoặc các máy đóng nang bán tự động và tự động trong quy mô sản xuất lớn

Viên nang là dạng viên ít gặp phải các vấn đề về sinh khả dụng do khối thuốc trong nang không bị nén chặt nên viên dễ rã hơn viên nén

Xây dựng công thức cho viên nang

Khối thuốc (hạt, bột) để đóng vào nang phải có 2 tính chất cơ bản là độ trơn chảy, tính chịu nén Các thuộc tính này có thể thay đổi nhất định tùy thuộc vào thiết

bị đóng thuốc vào nang

Cần lưu ý là các dược chất có tính hút ẩm cao có khả năng làm mềm vỏ nang, các dược chất có tính kiềm cao hoặc acid cao cũng có thể làm hỏng vỏ nang

Để tăng lưu tính và khả năng chịu nén của khối thuốc, có thể áp dụng phương pháp xát hạt khô hoặc xát hạt ướt

Kích thước của hạt nên phù hợp để có thể đảm bảo hạt chảy đều vào nang đồng thời hạn chế được sai số khối lượng thuốc trong nang

Các tá dược thông thường dùng để điều chế khối bột gồm:

Tá dược độn: Các loại tá dược độn dùng trong viên nén như tinh bột, lactose,

dicalci phosphat đều có thể được dùng trong viên nang Các loại tinh bột dập thẳng như tinh bột tiền gelatin hóa, tinh bột phun sấy có thể được dùng để gia tăng lưu tính

và tính chịu nén của khối hạt

Tá dược trơn: tá dược trơn giúp cho hạt chảy đều Sự trơn chảy của khối hạt

hoặc bột cần thiết cho tất cả các máy đóng nang khác nhau Độ trơn chảy đặc biệt cần thiết trong trường hợp đóng thuốc theo nguyên tắc đĩa phân liều Các tá dược trơn thường dùng là Mg stearate, talc, tinh bột bắp,…

Tá dược chống dính: các tá dược chống dính vừa có tác dụng làm tăng lưu tính

của khối bột (hoặc hạt) vừa tránh sự kết dính của bột thuốc lên các bề mặt kim loại

Tá dược rã: tá dược rã có thể không cần thiết trong trường hợp đóng bột không

nén vào nang Trong trường hợp có xát hạt hoặc trong trường hợp có nén ép (máy có đĩa phân liều hoặc vít phân liều) thì nên có tá dược rã để giúp thuốc phóng thích nhanh Nên sử dụng các tá dược siêu rã để có thể chọn được kiểu nang nhỏ

1.2.3 Quy trình bào chế thuốc viên nang cứng từ dược liệu: [1],[2]

Sơ đồ 1.1 Tóm tắt quy trình sản xuất viên nang cứng.

Điều chế khối thuốc: thông thường điều chế khối thuốc bằng phương pháp xát

hạt khô hoặc xát hạt ướt Đối với dược liệu thường tiến hành như sau:

+ Chiết kiệt hoạt chất từ dược liệu bằng phương pháp và dung môi thích hợp.+ Xử lý dịch chiết để thu được cao đặc hoặc cao khô

+ Do bột thuốc làm từ dược liệu hút ẩm rất mạnh nên phải khảo sát và phối hợp cao dược liệu với tá dược hút ẩm, tá dược độn theo tỷ lệ phù hợp nhằm giữ ổn định và bảo quản khối bột thuốc

+ Ép cốm, phối hợp tá dược trơn chảy thích hợp

+ Sửa hạt và kiểm tra chất lượng hạt

Đóng nang: Trong trường hợp điều chế một lượng nhỏ viên nang để dùng cho

một số bệnh nhân hoặc thử nghiệm lâm sàng các thuốc mới, khối thuốc có thể được đóng vào nang bằng tay (không dùng thiết bị) Trong sản xuất có thể sử dụng các máy đóng nang thủ công, bán tự động và máy đóng nang tự động tùy theo quy mô sản xuất khác nhau

Lau nang – đánh bóng: sau khi đóng thuốc vào nang, các viên nang cần được

loại bụi và đánh bóng trước khi đóng gói Tùy theo điều kiện trang thiết bị có sẵn, có

Điều chế khối thuốc

thể áp dụng các phương pháp: loại bụi bằng phương pháp thủ công, loại bụi và đánh bóng trong nồi bao, loại bụi bằng hệ thống lau và đánh bóng viên.

1.3 SƠ LƯỢC VỀ PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO: [9]

Sắc ký lỏng hiệu năng cao đôi khi còn được gọi là sắc ký lỏng áp suất cao Pressure) là kỹ thuật phân tích dựa trên cơ sở của sự phân tách các chất trên một pha tĩnh chứa trong cột, nhờ dòng di chuyển của pha động lỏng dưới áp suất cao Sắc ký lỏng dựa trên cơ chế hấp phụ, phân bố, trao đổi ion hay loại cỡ là tùy thuộc vào loại pha tĩnh đã sử dụng

(High-Ngày nay, HPLC đã và đang được sử dụng trong nhiều lĩnh vực phân tích hóa học nói chung cũng như trong kiểm tra chất lượng thuốc và phân tích sinh dược học nói riêng Trong phân tích thuốc bằng phương pháp sắc ký, phần lớn các dược điển đều sử dụng sắc ký phân bố

Hình 1.3 Sơ đồ cấu tạo chung của một hệ thống HPLC.

1.3.1 Các thông số đặc trưng của quá trình sắc kí:

1.3.1.1 Hệ số dung lượng k’ (Capacity factor):

0 0

' '

t

t t t

t

k = R = R −

Trong đó:

k': hệ số dung lượng

tR: thời gian lưu

t’R: thời gian lưu hiệu chỉnh

B

t

t k

=

A B

RA RB A

B

RA RB s

W W

t t W

W

t t R

2 / 1 2 / 1

18,1)(

2

+

−

=+

−

=

Trong đó: TRB, tRA: thời gian lưu của 2 pic liền kề nhau (B và A).

WB, WA: độ rộng pic đo ở đáy các pic

W1/2B, W1/2A: độ rộng pic đo ở nữa chiều cao pic

1.3.1.5 Số đĩa lý thuyết và hiệu lực cột:

Hiệu lực cột được đo bằng thông số: số đĩa lý thuyết N của cột

2 2 / 1

2 2

2

54,516

W

t W

t

N = R = R

Trong đó:

W: chiều rộng đo ở đáy pic

W1/2: chiều rộng pic đo ở nữa chiều cao pic

1.3.2 Một số ứng dụng của phương pháp HPLC:

1.3.2.1 Phân tích định tính:

Định tính các hợp chất là một phần cốt lõi của bất cứ một phương pháp HPLC nào Phân tích định tính bằng HPLC chủ yếu thục hiện bằng 3 cách sau đây:

• Dựa vào các dữ liệu về sự lưu

• Phân tích định tính các chất thu được từ HPLC quy mô phân tích

Hình 1.5 Cách xác định số đĩa lý thuyết.

• Phân tích phổ nghiệm online các đỉnh HPLC.

1.3.2.2 Phân tích định lượng:

Nguyên tắc: việc định lượng các chất bằng HPLC có thể dựa vào sự so sánh chiều cao của đỉnh hay so sánh diện tích đỉnh của chất cần xác định với một hay nhiều mẫu chuẩn đã biết trước nồng độ

Các phương pháp định lượng:

• Phương pháp quy về 100% diện tích

• Phương pháp dùng chuẩn ngoại

• Phương pháp dùng chuẩn nội

• Phương pháp thêm chất chuẩn

1.4 GIỚI THIỆU MỘT SỐ CHẾ PHẨM CHỨA CAO DIẾP CÁ:

1.4.1 An trĩ vương: Công ty Cổ phần sản xuất và Thương mại Hồng Bàng

CÔNG DỤNG:

Hỗ trợ điều trị và giúp phòng ngừa bệnh trĩ, cải thiện các triệu chứng của bệnh trĩ (chảy máu, sa búi trĩ, đau rát, ngứa ) và các biến chứng xuất huyết của bệnh trĩ (sa trực tràng, viêm nứt hậu môn )

Hỗ trợ điều trị và phòng ngừa táo bón

Giúp bảo vệ và tăng sức bền của tĩnh mạch, tăng cường sức khỏe tĩnh mạch và đường tiêu hóa

1.4.2 Helaf: Công ty cổ phần dược Hậu Giang.

CÔNG THỨC:

Hàm lượng trong một viên:

Cao khô Diếp cá 210 mg

Cao khô Rau má 45 mg

Kollidon CL - M, sáp ong trắng,

dầu nành, vỏ nang gelatin

CÔNG DỤNG:

Helaf có tác dụng hỗ trợ điều trị trĩ, táo bón và kiết lỵ

Helaf giúp giải nhiệt, thông tiểu, mát gan, giải độc, kháng viêm, giúp vết thương chóng lành và mau lên da non, tăng cường hệ miễn dịch của cơ thể

1.4.3 Cenditan: Công ty cổ phầm dược phẩm 3/2.

Chương 2 – ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 NGUYÊN LIỆU, CHẤT CHUẨN, HÓA CHẤT VÀ TRANG THIẾT BỊ: 2.1.1 Nguyên liệu và chất chuẩn:

Cao Diếp cá được cung cấp bởi công ty TNHH ADC tại Ô Môn, KV Thới Hưng, phường Long Hưng, quận Ô Môn, Thành phố Cần Thơ Số lô: SE-HCO1-0210

Quercetin chuẩn do Bộ Y Tế – Viện kiểm nghiệm TP.HCM cung cấp, số lô

104050609, hàm lượng 91,34% C15H10O7, nước 8,51%

2.1.2 Hóa chất:

Bảng 2.1 Các hóa chất, tá dược sử dụng trong nghiên cứu.

STT Tên nguyên liệu, hóa chất Nguồn gốc Tiêu chuẩn

2 Acid chlohyric Trung Quốc Tinh khiết PA

3 Acid formic Trung Quốc Tinh khiết PA

4 Acid phosphoric Merck Phân tích HPLC

5 Chloroform Trung Quốc Tinh khiết PA

7 Ethyl acetat Trung Quốc Tinh khiết PA

9 Magnesi carbonate Việt Nam TCCS

11 Natri hydroxyd Trung Quốc Tinh khiết PA

12 Natri sulfat Trung Quốc Tinh khiết PA

13 Sắt (III) clorid Trung Quốc Tinh khiết PA

2.1.3 Trang thiết bị:

Bảng 2.2 Các thiết bị dùng trong nghiên cứu.

STT Tên thiết bị Số hiệu Nguồn gốc

3 Cân phân tích Ep 214C-Ohaus Mỹ

10 Cân sấy ẩm hồng ngoại MX-50 Mỹ

2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU:

2.2.1 Xây dựng và thẩm định quy trình định lượng quercetin bằng phương pháp HPLC:

2.2.1.1 Khảo sát các điều kiện sắc ký tối ưu:

Tiến hành chạy sắc ký trên quercetin chuẩn để tìm các điều kiện sắc ký tối ưu.Chạy sắc ký với mẫu thử ở điều kiện sắc ký thăm dò, tiến hành thay đổi các điều kiện sắc ký để đỉnh chính (tương ứng với quercetin) đạt các thông số sắc ký

Chuẩn bị mẫu chuẩn: cân chính xác 25mg chuẩn đối chiếu quercetin cho vào

bình định mức 50ml, thêm 30ml methanol, siêu âm trong 10 phút và bổ sung methanol đến vạch, lắc đều để có dung dịch mẹ có nồng độ 500µg/ml

Từ dung dịch mẹ, tiến hành pha các dung dịch có nồng độ thấp hơn như sau: lấy chính xác một lượng thể tích dung dịch mẹ cho vào bình định mức, thêm methanol

vừa đủ thu được dung dịch có nồng độ theo yêu cầu Các số liệu pha mẫu được trình

Nồng độ dung dịch thu được

Chuẩn bị mẫu thử: tiến hành theo mục 2.2.1.2.

2.2.1.2 Khảo sát phương pháp xử lý mẫu cao Diếp cá và viên nang chứa cao Diếp cá để định lượng quercetin:

Tiến hành chiết và theo dõi:

- Quá trình chiết quercetin từ dịch thủy phân cao Diếp cá

- Thời gian để phản ứng thủy phân xảy ra hoàn toàn: dịch thủy phân sau mỗi

1 giờ được chiết kiệt Quercetin bằng CHCl3, theo dõi các dịch thủy phân sau 1 giờ, 2 giờ, 3 giờ,

- Quá trình loại tạp

Theo dõi bằng thuốc thử FeCl3 trong cồn và sắc ký lớp mỏng với hệ dung môi Chloroform – Ethyl acetat – Acid formic (5:4:1) Phát hiện bằng đèn UV ở bước sóng

254 nm, nhúng thuốc thử FeCl3 trong cồn

Quy trình chuẩn bị mẫu thử cao Diếp cá:

Cân chính xác khoảng 1 g cao Diếp cá, hòa tan với 10 ml ethanol 25%, lọc, chuyển vào bình lắng gạn, thêm vào 20 ml chloroform, lắc đều 5 phút, rút bỏ dịch chloroform Dịch nước còn lại hòa tan với 10 ml dung dịch HCl 10%/cồn 25% đun hồi lưu Dịch thủy phân thu được lắc với với 20 ml chloroform trong 5 phút, chuyển

vào bình lắng gạn để yên 60 phút, rút lấy dịch chloroform Lặp lại 3 lần Gộp dịch

chloroform lắc với với 20 ml nước Rút dịch chloroform lọc qua Na2SO4 sau đó đem

cô đến dịch CHCl3 đậm đặc (A1)

Dịch A1 cho qua cột SPE tự chế để loại tạp Cho 20 ml chloroform qua cột SPE

để loại tạp phân cực, tiếp theo cho 40ml hỗn hợp CHCl3: EtOAc – 6:4 để lấy phân đoạn chứa quercetin Cô phân đoạn chứa quercetin đến cắn (A2)

Hòa tan cắn A2 trong methanol rồi cho vào bình định mức 10ml, bổ sung đủ thể tích, lọc sơ bộ Sau đó lọc qua màng lọc 0,45µm, bỏ vài ml dung dịch đầu trước khi bơm vào hệ thống

Quy trình chuẩn bị mẫu thử viên nang chứa Cao diếp cá:

Cân 20 nang, tính khối lượng trung bình của bột thuốc trong nang, nghiền thành

bột mịn Cân lượng bột thuốc tương ứng với 1g cao Diếp cá, hòa tan trong 10 ml cồn 25%, lọc thu lấy dịch lọc, rửa cắn với khoảng 2 ml cồn 25%, thêm vào 20 ml

chloroform, lắc đều 5 phút, chuyển vào bình lắng gạn, rút bỏ dịch chloroform Dịch

nước còn lại hòa tan với 10 ml dung dịch HCl 10%/cồn 25% đun hồi lưu Dịch thủy phân thu được lắc với 20 ml chloroform trong 5 phút, chuyển vào bình lắng gạn để

yên 60 phút, rút lấy dịch chloroform Lặp lại 3 lần Gộp dịch chloroform lắc với 20

ml nước Rút dịch chloroform lọc qua Na2SO4 sau đó đem cô đến dịch CHCl3 đậm đặc (A1)

Các bước còn lại xử lý như đối với mẫu thử cao Diếp cá

Sơ đồ 2.1 Tóm tắt quy trình xử lý mẫu thử.

HCl 10% / cồn 25%

Thủy phân 3h

Cao Diếp cá(Viên Diếp cá)

Dịch SPE chứa Quercetin

Cột SPE tự chế

Cắn

Cô đến cắn

2.1.1.3 Thẩm định quy trình định lượng:

Tính tương thích hệ thống:

Tính tương thích hệ thống của quy trình phân tích được xác định trên giá trị và

độ lặp lại của các thông số kỹ thuật của hệ thống khi tiến hành thực hiện quy trình trên mẫu chuẩn và mẫu thử với 6 lần tiêm mẫu liên tiếp

- Tiến hành:  Chuẩn bị mẫu thử và mẫu chuẩn

 Chạy sắc ký 6 lần với mẫu chuẩn và mẫu thử

 Khảo sát các thông số: thời gian lưu, diện tích đỉnh

 Xử lý thống kê các giá trị thu được

- Yêu cầu:  RSD ≤ 2%

Thẩm định quy trình:

Tính đặc hiệu

- Tiến hành:  Chuẩn bị mẫu thử và mẫu trắng (là mẫu chỉ gồm tá dược),

mẫu dung môi pha mẫu, mẫu dung dịch nước acid phosphoric 0,2%

 Tiến hành chạy sắc ký

- Yêu cầu:  Mẫu trắng, mẫu dung môi, mẫu dung dịch nước acid

phosphoric 0,2% không có các pic trùng với đỉnh chính (tương ứng với quercetin)

Tính tuyến tính

- Tiến hành:  Chạy sắc ký và xác định hàm lượng 6 dung dịch chuẩn với

nồng độ khác nhau

 Xây dựng đường chuẩn và xác định R2

 Thẩm định lại phương trình đường chuẩn bằng phương pháp thống kê

- Yêu cầu: R2 ≥ 0,99

Độ chính xác

- Tiến hành:  Xử lý 6 mẫu thử nồng độ bằng nhau.

 Xác định hàm lượng quercetin trong mỗi mẫu thử

 Tính hàm lượng trung bình và RSD%

- Yêu cầu:  RSD nằm trong giới hạn cho phép của AOAC

Độ đúng

- Tiến hành:  Thêm lượng chất chuẩn quercetin tương ứng với khoảng 80%,

100%, 120% hàm lượng quercetin có trong mẫu thử

 Định lượng tìm lại hàm lượng hàm lượng quercetin đã thêm vào để xác định tỷ lệ phục hồi

- Yêu cầu:  Tỷ lệ phục hồi trong giới hạn cho phép của AOAC

2.2.2 Xây dựng công thức viên nang chứa cao Diếp cá:

Quá trình nghiên cứu như sau: thiết kế công thức → tạo hạt → khảo sát đặc tính của hạt → đóng nang → thử độ rã → lựa chọn công thức chế phẩm

Công thức được thiết kế dựa theo phương pháp cổ điển của Gauss – Geidell [8]

2.2.2.1 Thiết kế công thức viên nang chứa cao Diếp cá:

Lựa chọn hàm lượng cao thích hợp:

Cao dược liệu có khả năng hút ẩm rất lớn, hàm lượng cao càng nhiều thì khả năng hút ẩm càng mạnh Vì vậy, chọn hàm lượng cao thích hợp sao cho giảm bớt lượng tá dược sử dụng mà vẫn đảm bảo độ ẩm thích hợp cho việc đóng nang là điều cần thiết Để thực hiện điều này chúng tôi tiến hành như sau:

- Thiết kế các công thức với hàm lượng cao khác nhau, giữ nguyên tỷ lệ tá dược hút tối đa có thể sử dụng trong công thức

- Tiến hành tạo hạt và khảo sát độ ẩm lúc cân bằng để tìm hàm lượng cao thích hợp

- Hàm lượng cao thích hợp là hàm lượng cao cao nhất và có độ ẩm bột thuốc lúc cân bằng ≤ 5%

Lựa chọn hàm lượng tá dược dính:

Cao dược liệu có độ dính khá lớn, vì vậy có thể làm ẩm bằng nước và tiến hành sát hạt, tuy nhiên tỷ lệ bột mịn thường cao Do vậy chúng tôi chọn PVP K30 làm tá dược dính với hàm lượng là 2%.

Lựa chọn hàm lượng tá dược hút:

Xây dựng công thức với hàm lượng tá dược hút lần lượt là 0%, 5%, 10%, 15%, xác định độ ẩm lúc cân bằng của khối bột thuốc

Chọn hàm lượng tá dược hút sao cho độ ẩm lúc cân bằng < 5%

Lựa chọn tá còn lại và tối ưu công thức viên nang:

Sau khi chọn hàm lượng cao và các loại tá dược, chúng tôi tiến hành thiết kế 10 công thức với 2 loại tá dược độn A và B có tỷ lệ: 3:1, 2:1, 1:1, 1:2,1:3; tỷ lệ tá dược hút ở giá trị tối đa và tối thiểu, cố định tá dược dính và cao

Bảng 2.4 Các công thức thiết kế tối ưu công thức viên nang.

T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 T9 T10 Cao Diếp cá A% A% A% A% A% A% A% A% A% A%

độ ẩm; đo độ rã của viên nang thành phẩm và chọn công thức tối ưu

2.2.2.2 Phương pháp khảo sát đặc tính của khối bột thuốc và đo độ rã của viên nang:

Đo độ ẩm của khối bột thuốc: đo độ ẩm bằng cân sấy ẩm hồng ngoại với các

thông số như sau

- Lượng cân: khoảng 3g.

- Nhiệt độ sấy: 105oC

- Tốc độ độ ẩm tới hạn: 0,01%/phút

Khảo sát sự phân bố cỡ hạt:

Cân 50g bột thuốc, cho qua bộ rây gồm các rây 0,45mm; 0,3mm; 0,2mm, lắc đều

5 phút, cân lượng bột còn lại trên mỗi rây, vẽ đường phân bố cỡ hạt

Xác định tỷ trọng biểu kiến trước và sau khi gõ:

Xác định tỷ trọng biểu kiến trước khi gõ (tỷ trọng thô) và tỷ trọng biểu kiến sau khi gõ (tỷ trọng vỗ) theo công thức sau:

Với:

ρ: Tỷ trọng biểu kiến của hạt.

M: Khối lượng của hạt

Vb: Thể tích biểu kiến của hạt

Tỷ trọng biểu kiến sau khi gõ xác định theo USP30 trên máy đo tỷ trọng biểu kiến Pharma test touch

Xác định lưu tính của hạt: đo góc chảy

Cân 50g bột thuốc, đổ hạt chảy liên tục để tạo thành khối chóp và xác định góc nghỉ α biết:

Trong đó:

h: chiều cao khối bột

r: bán kính đáy của khối bột

b V

M

=

ρ

r h

tgα =

Hình 2.1 Phương pháp xác định góc nghỉ của bột, hạt thuốc.

Độ tan rã:

Thực hiện theo DĐVN IV, phụ lục 11.4.

2.2.2.3 Quy trình điều chế viên nang chứa cao diếp cá:

- Trộn đều cao Diếp cá với magnesi carbonat, tá dược độn A và B bằng tay sau

đó bằng máy trộn, sấy khối bột ở 50oC trong 12 giờ

- Pha tá dược dính: pha PVP K30 nồng độ 7,5% trong cồn 50%

- Trộn đều khối bột thuốc với tá dược dính, sát hạt qua rây 1,2mm, tốc độ vòng

70 vòng/phút, sau đó sấy trong tủ sấy 12 giờ ở 50oC

- Sửa hạt qua rây 0,6mm, tốc độ vòng 50 vòng/phút, thêm bột talc, trộn hành tinh

5 phút

- Đóng nang số 0 bằng máy đóng nang thủ công (the capsule machine)

2.2.3 Xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm cho viên nang chứa cao Diếp cá:

2.2.3.1 Hình thức cảm quan: quan sát bằng mắt thường.

2.2.3.2 Độ đồng đều khối lượng: thử theo DĐVN IV, phụ lục 11.3.

2.2.3.3 Độ tan rã: thử theo DĐVN IV, phụ lục 11.6.

2.2.3.4 Độ ẩm: đo độ ẩm bằng cân sấy ẩm hồng ngoại giống mục 2.2.2.2.

2.2.3.5 Định tính:

Bằng phản ứng hóa học:

Cho bột thuốc trong nang vào cối chày và nghiền thành bột mịn Cân một lượng bột thuốc tương ứng khoảng 0,5g cao Diếp cá hòa tan trong khoảng 15ml cồn 96%, đun nóng nhẹ Lọc lấy dịch lọc chia làm 3 ống nghiệm làm các phản ứng

Bảng 2.5 Định tính viên nang chứa cao Diếp cá bằng phản ứng hóa học.

2r

h

α