Nghiên cứu thành phần flavonoid trong cây cần tây ( apium grraveolens l , apiaceae )

B O Y TE TRĩễNG DAI HOC DlTOC H NễI NGUYấN PHĩONG NHI NGHIấN CU THNH PHN FLAVONOID TRONG CY CN TY (Apium graveolens LvApiaceae ) KHO LUN TOT NGHIấP DĩOC SI DAI HOC KHO 1998 - 2003 Ngudi htiụng dõn : PGS. TS. Be Thi Thuõn Nch thuc hiờn : Bụ mon ducfc lieu Trucmg Dai hoc Diroc H Nụi Thi gian thuc hiờn : Thõng 3/2003 - 5/2003 H Nụi, thõng nam 2003 Y l U . /4 ] L ễ l C M O N ! Sau ba thõng tien hnh nghiờn cỹu tich eue, khan truong cựng vdi su giỹp dd nhiờt tinh cỹa cõc thõy cụ giõo v cõc cõn bụ, nhõn viờn cỷa trudng dai hoc Dỹdc H Nụi, tụi dõ hon thnh khoõ luõn tụt nghiờp dỷng thdi gian quy dinh. Vdi long kinh v biờ't On sõu sac, tụi xin chõn thnh cm an PGS.TS. Bờ'Thi Thuõn Ngudi thõy dõ tõn tinh hudng dõn v ginh nhiờu thdi gian chợ bo, giỷp dd tụi suụt qu trinh nghiờn cỹu de hon thnh cụng trinh tụt nghiờp ny. Tụi xin gỹi ldi cõm an ti thõy giõo TS. Dụ Ngoc Thanh ( Phụng thi nghiờm trung tõm trudng dai hoc Duoc H Nụi ), cụ Nguyởn Quynh Chi, cựng ton the cõc thõy, cụ giõo, k thuõt viờn bụ mon Duoc lieu, Phụng tao, Thu viờn trudng dai hoc Dudc H Nụi dõ nhiờt tinh giỹp dd v tao diờu kiờn cho tụi suụt quõ trinh hoc tõp, nghiờn cỹu v bõo vờ khoõ luõn tụt nghiờp. Nhõn dip ny cho phộp tụi cõm dn cõc ban sinh viờn cựng hoc tõp v nghiờn cỹu suụt quõ trinh thỹc hiờn dờ ti dõ dụng viờn v giỹp dd tụi hon thnh luõn van ny. Cuụ'i cựng tụi xin by tụ long biờ't dn tdi ban giõm hiờu, dng u nh trudng cựng ton thờ cõc thõy cụ giõo, cõc cõn bụ cụng nhõn viờn dõ cung cap cho tụi nhỹng kiờ'n thỹc v k nõng nghờ nghiờp suụt nõm hoc vỹa qua. H Nụi, ngy 25 thõng nõm 2003 Sinh viờn Nguyờn Phircfng Nhj MUC LUC Dõt van de Phõn 1: Tong quan I. Vi nột dai ctfdng vờ Flavonoid II. Tom tõt phuong phõp nghiờn erùu hop chat Flavonoid duoc lieu 2.1. Dinh tfnh 2.2. Dinh luong 2.3. Chiột xuõt 2.4. Phõn lõp 2.5. Nhõn dang III. Mot so hiởu biet vờ cõy Cn tõy 3.1. Dac diởm hùnh thõi thtfc võt 3.2. Thnh phõn hoõ hoc 3.3. Tac dung v cụng dung 3.3.1. Tac dung 3.3.2. Cụng dung Phõn 2: Nguyờn lieu v phirong phõp nghiờn curu 1.Nguyờnliờu 2. Dung eu, dung mụi v hoõ chõt 2.1. Thiột bi, dung eu 2.2. Dung mụi, hoõ chõt 3. phuang phõp nghiờn cuu 3.1. Chiột xuõt 3.2. Dinhtmh 3.3. Phõn lõp 3.4. Phõn tich cõc chõt bng quang phộ Phõn 3: Thirc nghiờm v kột quõ A. Thnc nghiờm v kột quõ 11 11 12 13 13 15 18 18 18 18 18 19 19 19 19 20 21 21 1. Chiột xuõt 2. Dinh trnh 3. Phõn lõp v nhõn dang 3.1. Phõn lõp Flavonoid 3.2. Thir dụ tinh khiột cỹa N v N 3.3. Phõn tfch v nhõn dang N v N 3.3.1. Chõt N ' 3.3.1. Chõt N 4. Nhõn dang N, B. Bn luõn Phn 4: Kột luõn v de xuõt I. II. 3 4 Kột luõn Dờ xuõt Ti lieu tham khõo Phuluc 1 21 23 28 28 29 30 30 31 33 34 36 36 36 37 41 n h ỹ n g c h C v iờ t TT t r o n g l u õ n v õ n Viet tõt Viet dv dỷ Ap Apigenin As õnh sang Dd dung dich Dm dung mụi EtOH Ethanol EtOAc Ethylacetat IR Hong ngoai BuOH Butanol F, Flavonoid ioa.n phõn L Luteolin MeOH Methanol MS Ph khoi NMR Ph cụng hirụ'ng tir hat nhõn RCT Rau Cõn tõy SKG Sc k giõy SKLM Sc k lụp mụng SKC Sc k cụt uv Tỷ ngoai DAT VAN DE Thiờn nhiờn l mot nguụn ti nguyờn vụ giõ cỹa nguụi. Su phong phỹ dõ cung cap cho chỹng ta nhiờu nguụn duoc lieu qu. Viờt Nam vụi hõu nhiờt dụi giụ nụng õm lm thõm thuc võt cng thờm giu c . Ngy nuục ta nụi riờng v trờn thộ gidfi nụi chung nguụi dõ su dung mot cõch triờt dộ nguụn duoc lieu tu nhiờn cho viờc chỹa bờnh. Vụi su phõt triởn cỹa khoa hoc k thuõt-cụng nghờ, nhiờu duoc phõm mai, tụt duoc dụi vụi su da dang cõ vờ duoc chat lõn dang bo chộ. Tuy nhiờn giõ thnh cỹa cõc tõn duoc thuụng võn cao v nhiờu truụng hỗfp gõy tac dung phu khụng mong muụn nờn xu huụng dựng thõo duoc hiờn dang duoc nguụi mờn mụ, dac biờt l viờc sỹ dung cõc cõy rau dộ lm thuục phong v chụng tri nhiờu cõn bờnh dang duoc nhiờu nguụi quan tõm. Cựng vụi thụi gian, cõy Cõn tõy dõ duoc biờt dờn v sỹ dung tir lõu dụi. Tir xua nguụi Hy Lap dõ dựng Cõn tõy lm thuục loi tiởu, nguụi Ai Cõp dựng Cn tõy chỹ'a bờnh tim. Hypocrates dõ huụng dõn dựng Cõn tõy chỹa roi loan thõn kinh. Tir thộ k XVI, nguụi phuong Tõy dõ dựng rờ Cn tõy lm thuục khai vi, loi tiởu, loi trung tien v xem no l Cõy thuục dõng chu [19]. ễ Viờt Nam, Cõn tõy l mot cõy rau duoc sỹ dung bien dở õn, dụng thụi dở uụng phong v chỷa mot sụ cn bờnh nhu: co thở suy nhuoc, tiờu hụa kộm, tiởu tien bi tac, huyờt õp cao, dau khụp, bon chụn, mõt ngỹ . [4, 5, 7, 10, 11, 12, 19]. Rụ rng Cn tõy dung vựa l cõy rau vựa l cõy thuục. Cho dờn viờc nghiờn cỹu rau Cn tõy dở dua vo sỹ dung lm thuục dang cụn rõt ợt ti lieu dờ cõp dờn. Mõi dờn nhỷng nõm gõn dõy mụi cụ mot sụ cụng trinh nghiờn cỹu cõy Cõn tõy Viờt Nam. Nõm 1997, Hong Tựng dõ nghiờn cỹu vờ dc diởm hinh thõi thuc võt cỹa cõy Cn tõy duoc trụng mot sụ vựng thuục H Nụi v ngoai thnh H Nụi [16]. Vờ tac dung duoc l, cỹng dụng tõc giõ [16], dõ thỹ tõc dung loi tiởu, huyột õp v õnh huong dờn nhip tim trờn tim ờch cụ lõp cỹa chộ phõm cao long ( : ) cỹa diroc lieu. Tiộp sau do, Lờ Thi Hiờn [10] dõ thỹ tac dung huyờ't õp v loi tiởu cỷa dung dich flavonoid ton phõn vụi nụng dụ % v tac dung giõn co tron mach mõu tai thụ cỹa dung dich flavonoid 3% dung dich ringer tai. Nguyờn thi Bõo [1] dõ thur tac dung cỹa chộ phõm flavonoid ton phõn vụi nhỹng nụng dụ khõc trờn bien dụ co bụp cỷa tim ộch tai chụ, tac dung giõn co tron mach mõu tai thụ cụ lõp v tai chụ, tõc dung huyột õp, Cholesterol ton phõn. Vờ thnh phõn hoõ hoc: Nõm 1991, Nguyờn Van Toanh [20] dõ xõc dinh hm luong tinh dõu v thnh phõn cỹa tinh dõu Cõn tõy. Sau dụ Hong Tựng [16] dõ sa bụ xõc dinh Cõn tõy Viờt Nam ngoi tinh dõu cụn cụ chõt bộo, flavonoid, coumarin, carotenoid, v phytosterol, dụ flavonoid l thnh phõn chỹ yeu. Dụ Thi Thõo [14] dõ phõn lõp duoc hai chõt tinh khiờt cụ tinh chõt hoõ hoc v quang phộ dõc trung cỹa coumarin. Nõm 2001, Nguyờn Thi Bõo [1] cỹng dõ xõc dinh duoc thnh phõn flavonoid bng tfnh chõ't hoõ hoc v quang phộ dac trung. Kột quõ nghiờn ciru cỹa cõc tõc giõ trờn dõy cho thõy flavonoid l mot cõc thnh phõn hoõ hoc chỹ yờu cõy Cõn tõy Viờt Nam v l nhụm cụ nhiờu tõc dung sinh hoc, song cho dờn phõn lụn cõc thnh phõn thuục nhụm chõt ny võn chua duoc phõn lõp v nghiờn ciru vờ cõu truc hoõ hoc. Dờ ti luõn võn ny chỹng tụi tiộp tue nghiờn ciru flavonoid cõy Cõn tõy Viờt Nam vụi mue tiờu: phõn lõp, phõn tich v du kiộn cõu truc cỹa cõc chõt phõn lõp duoc. Phn 1: TONG QUAN I.Vi nột dai cirong vờ Flavonoid Flavonoid l mot nhỹng nhụm hop chõt phn bo rụng nhõt thiờn nhiờn. Hon mot nỹa rau qu thuụng dựng cụ chỹa flavonoid. Flavonoid cỹng l thnh phõn hay gp duoc lieu nguụn gục thuc võt. Cho dộn cụ khoõng 4000 chõt dõ duoc xõc dinh cõu truc. Chợ riờng hai nhụm flavon v flavonol v vụi nhụm thộ l OH, CH v OCH thi theo l thuyột cụ thộ gp 38.627 chõt. Phn lụn cõc chõt flavonoid cụ mu vng, cỹng cụ mot sụ chõt cụ mu xanh, tợm, dụ hoc khụng mu. Cõu truc hoõ hoc : Flavonoid l nhỹng chõt cụ cõu truc hoõ hoc kiởu C -C -C6, tire l khung co bõn gụm hai vụng benzen A v B nụi vụi qua mot mach carbon vụng hoac mụ: HZ) C Bõn chõt hoõ hoc cỹa flavonoid l nhỹng polyphenol, chung thuụng ton tai duụi dang glycosid hay dang aglycon. Dang glycosid l sir ngirng tu giỹa mot phn l duụng v mot phn khụng phõi duụng (aglycon hoõc genin). Phn genin cụ cõu trỹc hoõ hoc rat khõc nhau, tac dung sinh hoc phu thuục vo phn ny. Hu hột cõc flavonoid ton tai ụ cõc dang glycosid khõc nhau. Su da dang cỹa cõc flavonoid cụn bụi su khõc cỷa duụng v vi tri liờn kột cỹa chỹng vo cõc vi tri khõc cỹa phõn tỹ flavonoid. Duụng cụ thộ khõc vờ dụ lụn cỹa vụng oxy, cõu hinh cỷa cõc liờn kột glycosid v ihỷ tu liờn kột giỹa chỹng. Trong cõc flavonoid O-glycosid, duụng thudng gp vi tri sụ 7- sau l vi tri so 3-, rat hiộm gp vi tri so 5-. Trong cõc flavonoid glycosid, loai duụng don thuụng gp D-glucose, D-galactose, L-arabinose, L-rhamnose . Flavonoid ft gp thuc võt bõc thõp, bien thuc võt bõc cao. Flavonoid cụ mõt hõu hột cõc bụ phõn cỹa cõy: hoa, la, thõn, quõ, rở . v khu trỹ thnh tộ bo. No tham gia vo su tao mu sc cỹa cõy, nhõt l hoa, tao mu rue rụ cho hoa cụ suc quyộn rỹ cụn trựng, giỹp cho viờc thu phõn cỹa hoa. Trong cõy, flavonoid dõm nhõn cõc chỹc nng nhu: bõo vờ cõy, chụng oxy hoa ( dõp tõt hay trung ho cõc gục tu do), bõo ton acid ascorbic tộ bo thuc võt, \xc chộ cõc tõc nhõn phõ hoai cõy nhu: vi khuõn, virus, cụn trựng . Mot sụ flavonoid cụ tõc dung diờu ho sinh truụng. Trong Y hoc, nhiờu chõt flavonoid dõ duoc dựng lm thuục phong v chỹa bờnh vụi vai trụ l nhỹng chõt chụng oxy hoa, khõng khuõn, khõng nõm, khõng virus. Flavonoid cụn lm tõng stre bờn thnh mao mach, chụng vỹa xo dụng mach, cụ tõc dung loi tiởu, nờn thuụng sỹ dung diờu tri bờnh cao huyột õp. Mot sụ flavonoid cụn cụ tõc dung bõo vờ tộ bo gan, nhuõn gan, loi mõt. Mot sụ cụ tõc dung chụng khụi u lnh tmh v õc tmh. Tmh chõt ny phu thuục vo su cụ mõt cỹa hờ thụng nụi dụi liờn hop phõn tỹ v vi tri cõc nhụm thộ. Ngoi nụ cụn cụ tõc dung estrogen, lm tõng tao mõu lm tõng tong hop acid folie cỹa vi khuõn duụng ruụt, tõng sụ luỗfng hụng cõu v tợ le Hemoglobin, cụ tõc dung giõm dau chụng co tht, giõn co tron . [2, 7, 17, 23] II. Tụm tõt phircmg phõp nghiờn cuti hop chõt Flavonoid duoc lieu 2.1. Dinh tùnh Truục hột bang cõc phõn ỹng hoõ hoc dở xõc dinh duoc bụ phõn no cỹa cõy cụ flavonoid, sau dụ dinh tmh bng SKLM, SKG dở xõc dinh xem cụ bao nhiờu vờt chõt v vờt chõt no cụ dụ dõm cao dở tự dụ cụ huụng viờc chiet xuõt v phõn lõp. SKG hiờn võn l phuang phõp thụng dung phõn tich flavonoid, thuụng dựng giõy Whatmann sụ 1, 3, l thfch hop cho hu hột cõc flavonoid. Mot s hờ dung mụi thucmg dựng SKG l: Acid Acetic : Nuục (15:85). n-Butanol : Acid acetic : Nuục (4:1:5). Acid acetic : Acid hydroclri? : Nuục (30:3:10). CHC1 : Acid acetic : H20 (13:6:1). Phộnol : Nuục (3:1). Thuụng su" dung SKG chiờu v chiờu hờ dung mụi khai triởn khõc [7], SKLM: mõc dõu SKG tụ cụ uu thộ' hon vờ phuong diờn phõn tich flavonoid, song viờc õp dung SKLM hiờn ngy cng nhiờu vi cho kột quõ nhanh chụng hon so vụi SKG. Thuụng sir dung nhỹng bõn mụng vụi chõt hõp phu l silicagel, cenlulose v polyamid. Sõc k duoc triởn khai cõc hờ dung mụi cụ dụ phõn eue khõc nhau. Su lua chon hờ dung mụi phu thuục vo cõu truc cỷa cõc flavonoid v chõt hõp phu cỹa bõn mụng [7]. 2.2. Dinh lirong Dinh luong flavonoid bng mot sụ phuong phõp sau dõy [7]: 2.2.1. Phuong phõp cõn: Chiột flavonoid bng dung mụi thợch hop, loai tap chõt, sõy, cõn. Cỹng cụ truụng hop thỹy phõn flavonoid ( nhu dinh luong Rutin Hoa Hoố ), phõn aglycon ợt tan nuục duoc loc hoc ho tan dung mụi htfu co, bục hỹi dung mụi, sõy, cõn. Phuong phõp ny chợ õp dung cho nhỷng nguyờn lieu giu flavonoid v dich chiột ợt tap chõt. 2.2.2. Phuong phõp quang: Tao mu flavonoid bng mot sụ phõn ỷng nhu: phõn ỷng cyanidin, phõn ỷng kột hop vụi muụi diazoni, tao phỹc mu vụi dung dich AICI , muụi titan, chrom . Do mõt dụ quang buục sụng thợch hop, dụi chiộu vụi duụng cong chuõn cỹa mot chõt tinh khiột. 2.2.3. Phuong phõp tir ngoai. Dira vo dụ hõp thu phõn tu hoõc cu'ụng dụ hõp thu E]^, mot buục sụng v dung mụi qui dinh cho tựng loai flavonoid. Cõc phuong phõp dinh luong cho chỹng ta biột duoc hm luong flavonoid, xõc dinh duoc bụ phõn no cỹa cõy cụ hm luong cao nhõt vo thcri gian no nõm de tir dụ dinh duoc thdi gian thu hai cho phự hop. 2.3. Chiột xuõt Khụng cụ phuong phõp chung de chiột xuõt flavonoid vi chỹng cụ dụ tan rat khõc nuục v dung mụi hỹu co. Cõc flavonoid glycosid thuụng dờ tan dung mụi phõn eue ( nuục, cụn v hụn hop cụnnuục ), cụn cõc aglycon dờ tan dung mụi kộm phõn eue. Thuụng de chiột xuõt flavonoid nguụi ta phõi loai cõc chõt thõn du bõng ether du hoõ hay chloroform truục hoõc sau chiột flavonoid bang dung mụi thich hop. Dung mụi de chiột xuõt flavonoid tir duoc lieu thuụng dựng cụn methanol hoõc ethanol cõc nụng dụ khõc nhau. Cõc chõt thuục nhụm anthocyan thuụng kộm bờn vỹng, cho nờn thuụng duoc chiột bang cụn cụ af id yộu nhu acetic, citric, tartric hoõc dung dich acid hydrocloric loõng. Cõc dich chiột cỹa flavon v flavonol cụ nhụm thộ OH tu ụ vi tri 7- thuụng duoc chiột bõng nhỹng dung dich kiờm yộu [2, 7, 9]. 2.4. Phõn lõp De phõn lõp tựng chõt flavonoid khụi hụn hỗfp, nguụi ta thuụng õp dung mot sụ phuong phõp sau dõy: + SKC: cõc chõt hõp phu thuụng dựng l bot polyamid, cellulose, silicagel, magnesol, polyvinylpyrolidon, cephadex LH polyamid v cephadex LH ,G25. Trong dụ cụ thộ dựng dờ tõch tõt cõ cõc loai flavonoid. + Bng SKG hoõc SKLM chộ hoõ. + Bng Sac k long cao õp (sc k long hiờu nng cao (HPLC)). Dõy l phuong phõp hiờn dai nhõt hiờn nay. PHU LUC Hợnh 14: Pho IR cỹaN, Hợnh 15: Pho UV cỹa N t Hinh 16: Pho UV cỹaN Hợnh 17: Pho IR cỹa N Hợnh 18: Pho MS cỹaN Hợnh 19: Ph MS cỹa AN Hinh 20: Pho UV cỹa N Hợnh 21: Pho IR cỹa N ~ZrlKIN ELMSR 32.97yj % iv y *ằ i > ii \i/ 6.69- --------------------,--------------------------,-------------------- j 4000 3500 3000 2500 03/04/02 16:03 Phong TNTT-DH Duoc X: scan, 4.0cm-l, fiat, sraooth Samp.Ni-P.Nhi/DL I 2000 Hùnh 14 ABS ABS 0.30216 1.16993 -0 .0 0 NM NM 222.222 202.222 Ê r " 1_p m,ii09 sbu ftBS_______________ Basel ine____ OFF Page I ô i --------- --------- ---------- --------- --- 200.00 240.00 280.00 I f* 0 .0 0 3_________________________________ NM i ----- !--------- ----------!--------- ---------320.00 360.00 ftBS______________: 0.0000 -> 2.0000______ MM : 200.00 -> 400.00 Basel ine Erase Uieu Re-scale 2oom BTWsSH Label More Use the graphies cnrsor, track, slope_________________________________________ HINH 15 400.00 ABS ABS ABS 0.08422 0.09167 0.82099 .0 0 NM NM NM 347.778 256.667 202.222 i ằ r 2-p-N1,iặ 0H sbu ABS_______________Basel ine____ OFF Page V ' ' .0 3_________________________________ NU ftBS______________: 0.0000 -> 1.2000 : 200.00 -> 450.00 Basel ine Erase Uieu Re-scale Zoom ĩfùùBffB Label More Use the graphies cursortrack, slope_________________________________________ ABS 0.31639 NM 348.889 ABS 0.29474 NM 256.667 ABS 2.46785 NM 208.889 -0 .0 0 IZ M3- p nh,ặ 0H sôu ftBS_______________ Basel ine____ OFF Page I T " ?m3 IMb !------------------- -------------------- ------------------200.00 300.00 .0 3_________________________________ NM . . ----1 400.00 ftBS_____________ : 0.0000 -> 3.0000 NU : 200.00 -> 450.00 Basel ine Erase Uieu Re-scale Zoom lĩẽẽWợff- Label More ~~~ Use the graphies cursor. track, slope_________________________________________ PERKIN ELMER r \ ! -f 1500 1000 HINH 17 03/05/15 08:27 Phong TNTT-DH Duoc X: scan, 4.0cm-l, fiat, smooth Mau N2-P.Nhi/DL r 500 - cnr PERKIN ELMEP 03/05/15 06:42 Phong TNTT-DH Duoc Y: scan,4.0c-*l, fiat, smooth Mau N3-P.Hhi/DL H)nh 21 1260.9 -*i---------ợaee 500 cnr* C :\ H P C H E M \ \ D A T A \ M - D I P .D P h o n g C a u truc, V i e n H o a h o c 14 M a y 2:53 pm using A c q M e t h o d N - D I P 5989B MS N2 S o l v e n t : CH30H File Operator Acquired Instrument Sample Name Mise Info Vial Number ABỹndance S ca n 3ĩ3~ (TT7H7T m ùn I T M-D IPT25TD 86 14000 J 12000 J 10000 J 57 8000 153 6000 258 71 97 34 4000 j \ 2000 149 111 229 51 167 213 185 269 298 313 ỹii |m/ z - - > 239 40 60 80 100 120 140 160 180 200 HẻNH 18 220 240 260 280 300 320 353 368 340 360 396 380 4ễ0 S c a n 303 ( 1 . 87 m i n ) : N2 M-DIP325.D m/ z abund. m/ z abund. 50 . 15 1101 61 . 15 891 51 . 15 1736 62 . 15 1227 52 . 15 567 63 . 15 1157 53 . 15 1577 64 . 15 601 54 . 25 746 65 . 15 716 55 . 25 47 66 . 15 846 56 . 2360 67.25 2192 57 . 25 8220 68 . 15 1350 58 . 813 69 . 10 7913 59.15 454 70 . 10 2383 60 . 15 45 71.20 5339 S c a n 303 ( 11, . m i n ) : M - D I P ,. D N2 m/ z 72 . 10 73 . 10 74 . 10 75 . 10 76 . 10 77 . 10 78 . 10 9. 10 80 . 10 81 . 10 82 . 10 abund. 643 368 961 509 561 1488 1484 1592 534 011 1348 m/ z 83 . 10 84 . 10 85 . 10 86 . 10 87 . 10 88 . 10 89 . 10 90 . 10 91 . 10 92 . 10 93 . 10 abund. 4062 1629 3790 603 1370 1828 883 292 1256 925 979 m/ z abund. m/ z abund. 94 . 10 589 105.10 1542 95 . 10 3027 106.10 666 96 . 10 2864 107.10 855 97 . 10 4519 108.10 896 98 . 10 1830 109.10 1773 99 . 10 1313 110.10 945 100 . 10 405 111.10 885 101 . 10 696 112.10 615 102.10 606 113.10 1214 103.10 505 114.10 429 104.10 391 115.10 1396 S c a n 303 ( 1 . mi n) : M- DI P . D N2 m/ z 116.00 117 . 10 118.10 119.10 120.10 . 10 122.10 123 . 00 124 . 00 125.10 126 . 10 abund. 770 665 437 908 767 1024 652 27 3623 1322 845 m/ z 127.10 128 . 10 129.00 130 . 10 131 . 10 132.00 133.10 134.00 135 . 10 136.10 137 . 10 abund. 1514 601 92 326 787 337 905 3992 1477 457 1594 m/ z abund. m/ z abund. 138 . 10 524 149.10 669 139.10 763 150.10 726 140 . 10 331 151.10 719 141 . 10 509 152.00 1944 142.00 417 153.00 7621 143 . 10 781 154.10 775 144.10 737 155.10 820 145.10 925 156.00 269 146 . 10 371 157.10 525 147 . 10 892 158.10 277 148 . 10 302 159.10 509 S c a n 303 ( 1 . mi n) : M- DIP32 . D N2 m/ z 160 . 10 161.10 162.10 163.05 164.05 165 . 05 166 . 05 167.05 168.05 169 . 15 170 . 05 abund. 474 537 228 536 191 457 352 1200 337 361 206 m/ z 171.05 172.05 173.05 173.95 175.05 176.05 177 . 05 178.05 179.05 180.05 181 . 05 abund. 548 183 516 275 454 285 248 184 237 192 312 m/ z abund. m/ z abund. 182.05 145 193.15 274 183.05 434 194.15 219 184.05 403 195.15 235 185.05 447 196.05 142 186.05 186 197.15 252 186.95 412 198.05 130 188 . 05 191 199.05 280 189.05 358 200.05 150 189.95 343 201.05 387 191 . 05 308 202.05 282 192.15 106 203.05 405 S c a n 03 ( 1 . mi n) : M- DI P . D N2 m/ z 204 . 05 205.05 206.05 206.95 208.15 209.15 210.15 211.05 212 . 05 213 . 05 215 . 15 abund. 182 195 162 353 184 235 108 471 242 728 170 m/ z 217.05 219.15 220 . 15 221 . 15 222.15 223.15 224.15 225.05 226.15 227 . 15 228.15 abund. 173 253 166 208 143 191 115 210 105 206 171 m/ z abund. m/ z abund. 229.05 71 243 . 15 131 230.05 552 245.15 104 231 . 15 143 247.25 146 233 . 25 118 248 . 15 300 235.25 122 249.15 159 236.15 282 250.25 135 237.25 250 251.05 121 239.15 375 253 . 25 158 240 . 15 111 255.15 204 241.15 324 256.15 286 242 . 15 182 257.00 1883 S c a n 303 (11 . mi n) : M- DIP32 .D N2 m/ z 295.10 296.10 297.20 298.10 299.20 300.10 311.10 312.20 313.30 314 . 315.00 abund. 183 170 146 190 187 110 163 110 250 136 127 m/ z 335.30 341 . 10 342 . 10 353 . 368 . 369.35 396.35 abund. 109 159 313 139 363 163 106 m/ z 258.00 259.00 260.10 261.10 263 . 20 264.20 265.30 267.10 268.00 269.10 270 . 00 m/ z abund. 5528 753 161 125 149 132 125 160 119 600 444 m/ z 271.10 279.10 281 . 10 283.00 285.00 286.00 287 . 00 288.10 289.10 291.40 293.20 abund. 144 153 170 139 1932 58 7 2543 329 103 105 338 abund. m/ z abund. Library Searched Quality ID C :\ D A T A B A S E \ W I L E Y .L 97 F L A V O N E - T E T R A O L (?) $$ L u t e o l i n $$ L u t e o l i n e ( , , 1, ' - t e t r a h y d r o x y f l a v o n e ) $$ H - l - B e n z o p y r a n - - o n e , - ( , - d i h y d r o x y p h e n y l ) - , -d Abundance Scan 3ĩ'3 T X I T m i n ) : M-DTP325.D 286 (*) 8000 6000 57,69 153 4000 258 97 134 2000 229 313 342 368 >Iiằilii______ m/ zA.bundance#166591 : FLAVONE-TETRAOL (?) I i 50 00 $$ L u t e o l i n $$ L u t e o l i n ~C57T7X 286 8000 . 6000 4000 153 2000 69 29 m / z - -> 51 50 96 J--r p - i 100 134 202 r V I 150 396 f---- 1 I , 258 229 r -*-r-T r-I t 1-----------------------; r-4- 200 ri 250 ri p 30 3I can 187 (8.103 m i n ) : AN2 M-DIP324.D m/ z abund. m/ z abund. 50 . 15 2300 61 . 15 910 51. 15 3288 62 . 15 2492 52 . 15 00 63 . 15 2503 53 . 15 302 64 . 15 1333 54 . 2135 65 . 15 1657 55.15 196 66 . 15 1456 56 . 6995 67 . 15 9045 57.25 48 68 . 25 3897 58.25 1933 69 . 10 25096 59 . 15 1124 70 . 10 7692 60 . 15 1433 71.20 27072 : a n 187 (8. . 10 m i n ) : M- DI P324 .D AN2 m/ z 72 . 10 73 . 10 74 . 10 75 . 10 76 . 10 77 . 10 78 . 10 79 . 10 80 . 10 81 . 10 82 . 10 abund. 1855 2600 1294 1276 891 3324 3361 4484 2336 13250 6733 m/ z 83 . 10 84 . 10 85 . 10 86 . 10 87 . 10 88 . 10 89 . 10 90 . 10 91 . 10 92 . 10 93 . 10 abund. 25120 7735 30 2164 82 846 036 586 327 43 3992 m/ z abund. 94 . 2711 95 . 15593 96 . 10 1624 97 . 10 30696 98 . 10 746 99.20 12799 100 . 10 1710 101.10 605 102.10 686 ; .10 251 104.10 646 : a n 187 ( 8. , 103 m i n ) : AN2 m/ z abund. 105.10 4387 106 . 00 2315 107 . 10 4326 108 . 10 2825 109.10 11906 110 . 10 5937 111 . 10 0696 112 . 10 5403 113 . 10 11561 114 . 20 2162 115 . 10 3621 M - D I P ,.D m/ z 116.00 117.10 118 . 10 119 . 10 120 . 10 121.10 122.10 123 . 10 124 . 10 125 . 10 126 . 10 abund. 447 3455 1597 468 2850 5724 2383 11517 11497 12111 3892 m/ z 127 . 10 128 . 10 129.00 130 . 00 131 . 10 132 . 10 133 . 10 134.00 135.10 136.10 137.10 abund. 300 49 2702 1345 2893 1212 4328 10 7061 2767 9483 m/ z abund. 138.10 4135 139.10 558 140 . 10 2574 141.10 5696 142.10 1504 143.10 2549 144.10 1304 145.10 3272 146.10 1500 147 . 10 3304 148.10 1505 c a n 187 (8. . 103 m i n ) ;: AN2 m/ z abund. 149.10 4489 150 . 10 057 151 . 10 5134 152 . 10 8263 153 . 00 9832 154.10 4352 155 . 10 7988 156.10 1538 157 . 10 2431 158.10 1621 159 . 10 3004 M- DI P324 .D m/ z 160 . 10 161.10 162.10 163.05 164.05 165 . 05 166.05 167 . 05 168.05 169 . 15 170 . 15 abund. 1602 2554 900 2826 1633 3973 2166 419 559 6887 1463 m/ z 171.05 172 . 05 173.05 173.95 175.05 176.05 177.05 178.05 179.05 180 . 05 181 . 05 abund. 2902 1026 101 1338 2439 1243 1945 1280 2982 2083 3982 m/ z abund. 182.15 2083 183.15 616 184.05 1822 185.05 2997 186.05 059 186.95 959 187.95 910 189.05 1853 190.05 969 191.05 1917 192.15 1043 c a n 187 ( 8. . 103 m i n ) : AN2 m/ z abund. 193.05 2665 194.05 2119 195 . 15 3591 196.15 1971 197.15 3491 198 . 15 775 199.05 689 199.95 1034 . 05 1630 202 . 05 1209 203.05 2188 M - D I P ,. D m/ z 204 . 05 205 . 15 206 . 15 207 . 15 208.15 209.15 210.15 211.15 212.05 213.05 214.05 abund. 982 1381 1003 2122 829 3296 1692 4792 1581 880 1088 m/ z 215.05 215.95 217.15 218.15 219.15 220.15 221.15 222.15 223.15 224.15 225 . 25 abund. 978 651 1110 869 1734 941 2108 977 3042 1663 3819 m/z abund. 226.15 991 227 . 15 2258 228.05 1104 229.05 8671 230 . 05 1730 231 . 05 1075 232 . 15 708 233.15 1383 234.15 1097 235 . 15 1484 236.25 5050 3can 187 (8. . 10 m i n ) : AN2 m/ z abund. 237.15 4061 238.25 1931 239.15 5302 240 . 15 1422 241.15 2068 242.15 1766 243.15 1009 244 . 05 571 245 . 15 779 246 . 15 553 247 . 15 1204 M- DI P324 .D m/ z 248 . 15 249.25 250.25 251.25 252.25 253.25 254.25 255 . 15 256.15 257 . 00 258 . 00 abund. 1828 1325 1610 1948 1414 2283 544 1589 010 6828 19848 m/ z 259.00 260.10 261.20 262.20 263.20 264.20 265.20 266.20 267.20 268.20 269.00 3789 1179 1114 1093 1201 347 2133 1371 960 1163 44 m/ z abund. 270.00 5420 271.10 1543 272.10 506 273.20 622 274.20 504 275.20 654 276.20 608 277 . 30 1192 278.30 1094 279.20 1337 280.30 1127 Sc an 187 (8. , 103 m i n ) : AN2 m/ z abund. 281.30 2151 282 . 20 989 283.10 1437 284.20 1446 285.10 14858 286.00 00832 287 . 00 19144 288.10 2890 289.10 702 290.20 545 291.30 908 M- DI P324 .D m/ z 292.30 293.30 294.30 295.30 296.30 297.20 298.20 299.20 300.10 301.20 302.10 abund. 1182 1246 1115 1776 1004 1303 790 1976 1209 792 903 m/ z 303.20 304.10 305 . 306.20 307.30 308 . 309.30 310 . 30 311.20 312.20 313.30 und. 801 1210 930 1192 1047 1155 1451 649 1689 852 3805 m/ z abund. 314 . 20 1101 315 . 10 785 316.20 518 317 . 20 636 318 . 459 319 . 614 320 . 10 1435 321 . 30 1085 322 . 30 1127 323 . 1345 324 . 30 593 S c a n 187 (8. . 103 m i n ) : AN2 m/ z abund. 325.30 848 326.20 883 327.30 1325 328.20 480 329.20 429 330 . 10 1130 331.30 936 332 . 40 551 333 . 30 1034 334 . 30 1001 335.40 965 M - D I P ,. D m/ z 336.40 337.40 338.30 339.30 340.30 341.30 342 . 20 343.10 344 . 30 345.30 346.30 abund. 1153 1656 613 1339 955 34 1293 603 298 475 434 m/ z 347.40 348 . 349.40 350.35 351.35 352.35 353.25 354.25 355.25 356.25 357.35 und. 592 926 970 1005 1386 444 1179 1129 912 354 391 m/ z abund. 358 . 340 359.35 542 360.35 365 361 . 603 362 . 35 694 363 . 789 364 . 45 1091 365.35 1495 366.25 711 367.25 1588 368.35 2912 Sc a n 187 (8. . 103 m i n ) : AN2 m/ z abund. 369.35 1765 370.35 669 371.35 403 372.35 334 373.35 290 374.55 331 375.45 621 376.45 819 377.45 780 378.45 779 379.45 1128 M- DI P324 .D m/ z 380.45 381.35 382.35 383.35 384.25 385.35 386.35 387 . 35 388 . 35 389.45 390.45 abund. 444 681 663 426 272 307 231 356 271 769 817 m/ z 391.45 392.45 393.45 394.35 395.35 396.45 397.45 398.45 399.35 400.45 401.45 und. 732 671 1236 480 758 460 269 178 170 241 317 m/ z 413 . 55 414.45 m/ z 423 . 45 424 . 55 abund. 916 532 m/ z 434.65 435.65 und. 351 647 m/ z 402 . 45 403.45 abund. 228 544 abund. 197 227 404.45 650 405.55 684 406.55 529 407.45 1020 408.45 310 409.45 553 410.45 441 411.35 342 412.35 152 S c a n 187 (8. . 103 m i n ) : AN2 414.95 415.45 416.45 417.45 418.55 419.55 420.45 421 . 45 422 . 35 M- DI P . D 119 241 269 453 521 675 592 792 290 425.45 426.45 427.45 428 . 45 429.45 430 . 55 431 . 55 432.55 433 . 55 246 144 189 180 297 295 424 474 470 436.55 437.45 438.45 439.55 440 . 55 441.45 442 . 55 443 . 444 . 50 328 366 415 221 164 238 182 238 m/ z abund. 445.50 403 446.60 532 447.60 560 448.50 370 449.60 633 450.50 213 451.40 499 452.50 339 453.50 375 454.40 155 455.50 150 S c a n 187 (8. . 103 m i n ) : AN2 m/ z abund. 456.50 177 457.60 195 458.60 222 459.60 271 460 . 70 318 461 . 60 278 462 . 70 295 463.60 523 464 . 60 200 465 . 50 435 466.50 398 M- DI P324 .D m/ z 467.50 468 . 60 469 . 60 470.60 471.60 472.60 473 . 60 474.70 475 . 60 476.60 477 . 60 abund. 269 123 156 104 232 217 260 323 342 297 511 m/ z 478.60 479.60 480 . 60 481.60 482.60 483.60 484.70 485.70 487.60 488.60 489.80 nd. 210 302 327 304 212 194 115 193 254 345 252 m/ z abund. 490.70 235 491.70 346 492.60 207 493.60 458 494.60 414 495.60 699 496.60 248 497.60 198 498.60 147 499.70 116 500.70 144 S c a n 187 ( 8. . 103 m i n ) : AN2 m/ z abund. . 80 250 502.80 264 503.80 259 504.70 300 505 . 70 371 506.60 173 507 . 60 538 508 . 70 310 509.70 632 510 . 70 281 511 . 70 200 M- DI P324 .D m/ z 512.80 513.70 514 . 80 515.70 516 . 80 517.70 518 . 80 519.70 520 . 70 521 . 70 522 . 70 abund. 110 169 154 271 297 244 226 455 338 782 584 m/ z 523 . 70 524.70 525.80 526.70 527 . 80 528 . 80 529.80 530 . 80 531 . 80 532 . 80 533.70 nd. 179 313 219 157 271 115 214 182 290 190 377 m/ z abund. 534 . 80 350 535 . 80 576 536 . 70 314 537 . 75 705 538 . 75 422 539.75 133 540.75 108 541.75 136 542.75 104 543 . 75 187 544.75 200 S c a n 187 (8. . 103 m i n ) : AN2 m/ z abund. 545.75 148 546 . 85 210 547 . 75 447 548 . 75 454 549.65 684 550 . 65 623 551.75 1016 552.75 438 554.75 129 556.95 111 557.75 146 M- DI P324 .D m/ z 558.85 559.75 560 . 75 561 . 85 562 . 85 563.75 564.75 565.75 566 . 85 567 . 85 570.05 abund. 175 221 224 417 198 386 279 375 183 121 101 m/ z 570.85 571 . 85 572.95 573.95 574.85 575 . 85 576.75 577.75 578.85 579.85 580 . 85 .nd. m/ z 605 . 95 606.95 607.95 611.95 614.05 m/ z 629.05 631 . 00 632.10 632.90 635.10 abund. 115 132 170 103 110 m/ z 645.10 646 . 10 647.00 nd. 135 219 100 m/ z . 85 585.05 586.95 587 . 85 588.95 abund. 120 105 190 141 201 abund. 180 105 146 112 120 212 121 167 166 179 216 360 226 365 252 287 146 589.85 591.95 599.75 0 . 95 602.95 603.95 205 121 128 54 109 181 614.95 616.05 616.85 617.95 621.95 626.95 195 107 38 127 124 104 636.90 639.00 640.00 641.10 . 10 644.00 05 173 144 26 175 138 Library Searched Quality ID C :\ D A T A B A S E \ W I L E Y .L 91 F L A V O N E - T E T R A O L (?) $$ L u t e o l i n $$ L u t e o l i n e ( , , , - t e t r a h y d r o x y f l a v o n e ) $$ H - l - B e n z o p y r a n - - o n e , 2-(3,4-dihydroxyphenyl)-5,7-d S c a n 187 Abundance (8 . mi n ) : M - D I P .D (*) ^ i 8000 6000 4000 57 9V 153 2^7 2000 229 Đ93 52455^78 646 m/z --> A b u n d a n c e # 6 :.F L A V O N E - T E T R A O L (?) 286 50 0 (5,7,3 $$ L u t e o l i n $$ L u t e o l i n e 8000 6000 4000 53 2000 ; 87 134 69 229 39 . m/z - 50 1ễ0 1^0 i 2ễ0 i j ' A V - r i n t r i t r T ' n O 250 300 H O 3ố0 T r r - - r i T T n ~i r j 400 4ẩ0 i r t t "T "T f ' I T [...]... 3-n-Buthylphtalid, sedanoid, anhydric sedanoic v 3-Butyl- 4,5 -dihydrophtalid (sedanenoid ), Mựi thom cỷa Cn tõy chrnh l do limonen v phtalid [1 3, 20] Mot sụ ti lieu cụng bụ trong Cn tõy chrùa Flavonoid dụ l: apigenin, luteolin, apiin (apigenin 7 apiosyl glycosid ), luteolin 7-glycosid, luteolin 7-apiosyl glycosid, luteolin 3 -methyl ether 7- apiosyl glycosid, ngoi ra cụn cụ quercetin, rutin ; cõc Coumarin: psoralen... cỹa nụ l: bergapten ( 5-methoxy psoralen ), xanthotoxin ( -methoxy psoralen ), 8 isopimpinellin (5 ,8 -dimethoxy psoralen ) v 4,5 , -trimethoxy psoralen [1 0, 8 1 4,2 1,2 2, 2 4, 28] Dụi vụi cõy Cn tõy Viờt Nam, theo Nguyờn Võn Toanh [20] hm luong tinh du trong hoa l 0,4 2 %, trong la v thõn l 0,3 5% (tmh theo duoc lieu khụ ). Trờn sac k dụ sc k khi cụ 21 pic, trong dụ da sụ cõc pic nm trong vựng mono-terpen, mot... Hm luong tinh du trong cõy khoõng 1 %, trong quõ l 2-6% Tinh du Cn tõy chrùa khoõng 50 thnh phõn khõc nhau, trong dụ d-limonen l cao nhõt (7 2,1 6% ), sau dờn [3-selinen (1 2,1 7 %) Trong tinh du quõ D-limonen chiờm 60 %, (3 -selinen chiộm 10% v 3% l phtalid, ngoi ra cụn cụ stiben, v mot ancol 2 vụng oc-y terpin, ot-[3 pinen, santanol, a-P eudesmol, dihydrocarvone [ 4, 5, 1 3, 20] Phtalid bao gụm: 3-n-Buthylphtalid,... v , tõp trung nhiờu l p libe [16] -11- Nõm 199 7, trong luõn vn tụt nghiờp, Hong Tựng dõ nghiờn ciợu va kột luõn mõu Cn tõy duoc trong H Nụi v nhỹng vựng xung quanh dung l cõy Cn tõy cụ tờn khoa hoc l Apium graveolens L ho Hoa tan ( Apiaceae ) 3.2 Thnh phõn hoõ hoc Trong Cn tõy cụ cõc vitamin A, B, C, P; cõc khoõng chõt Mg, Mn, Fe, Cu, Ca, P, Na v dõc biờt l Kali [18] , cụ protid, ducmg, chõt bộo,... doan trong quõ trinh phõn l p flavonoid bng SKC v dụ tinh khiột cỹa cõc chõt phõn l p duoc 3 Phõn l p v nhõn dang flavonoid 3.1 Phõn l p flavonoid Chỹng tụi tiộn hnh phõn l p flavonoid bng SKC vụi chõt nhụi cụt l cephadex LH2 0, dung mụi pha dụng l methanol 80% Chuõn bi cụt: Cụt sõc k duoc rỹa sach, sõy kh , lot mot l p bụng mụng dõy cụt roi l p l n giõ inox Ngõm cephadex trong methanol 80 %, dở l ng,... KBr, cho cõc bng hõp thu eue dai dõc trung cỹa cõc nhụm chỹc: OH-Phenol (3 44 8,8 cm '1 ), Carbonyl (C = 0) cỹa vụng y-pyron ( 160 7,9 cm ) v bõng hõp thu cỹa hop chõt nhõn thom (1 49 0,4 cm ) ' 1 ' 1 Dira vo nhựng kột quõ phõn tich vờ tmh chõt l hoc v hoõ hoc trờn dõy, N cụ thở l mot flavonoid glycosid 2 3.3.2 Chõt N3 N l chõ't kột tinh mu vng nhat ( hinh 3 8 ), dở tan trong methanol, ethanol v nuục nụng,... 150 m/e 100% Pic (M + ) 151 m/e 1 0,2 % 1 Pic (M + 2) 152 m/e 0,8 8% Chõt dụ cụ phõn tỹ khụi l 150 ỹ*ằ Cõch xõcvfcụng thỹc phõn tỹ cỹa chõt thỹ khụng nhỹng dua vo M, m cụn dua vo ( M +1 ), ( M +2 ) v su phõn mõnh phõn tỹ trong khụi pho dở bien luõn v xõc dinh cụng thỹc Khụi pho rõt cụ giõ tri trong cõu truc flavonoid, nhõt l khi luong chõt thỹ chợ cụ duoc rõt ft ( . sô tài lieu công bô trong Càn tây chrïa Flavonoid dô l : apigenin, luteolin, apiin (apigenin 7 apiosyl glycosid ), luteolin 7-glycosid, luteolin 7-apiosyl glycosid, luteolin 3 -methyl ether. phu thuông dùng l bot polyamid, cellulose, silicagel, magnesol, polyvinylpyrolidon, cephadex LH2 0 ,G25. Trong dô polyamid và cephadex LH2 0 cô thé dùng dê tâch tât câ câc loai flavonoid. + Bàng. psoralen ) và 4,5 ,8 -trimethoxy psoralen [1 0, 1 4,2 1,2 2, 2 4, 28]. Dôi vôi cây Càn tây Viêt Nam, theo Nguyên Vân Toanh [20] hàm luong tinh dàu trong hoa l 0,4 2 %, trong la và thân l 0,3 5% (tmh