Góp phần nghiên cứu thành phần hóa học cây ngoi phần 2

Góp phần nghiên cứu thành phần hóa học cây ngoi phần 2 Góp phần nghiên cứu thành phần hóa học cây ngoi phần 2 Góp phần nghiên cứu thành phần hóa học cây ngoi phần 2 Góp phần nghiên cứu thành phần hóa học cây ngoi phần 2 Góp phần nghiên cứu thành phần hóa học cây ngoi phần 2

Bảng 1: Kết quả định tính các nhóm chất trong lá, vỏ thân và quả STT Nhóm chất Phản ứng Kết quả Sơ bộ kết luận Lá Vỏ thân Quả 1 Alcaloid rr Mayer +++ +++ +++ Có alcaloid trong lá TT Bouchardat +++ +++ +++ vỏ thân và quả. 'l'r Dragendroff +++ +++ +++ Acid Picric 1% +++ +++ +++ 2 Flavonoid Cyanidin + + + Có Flavonoid trong NH3 ++ + ++ lá, vỏ thân và quả. NaOH +++ ++ +++ FeQs +++ ++ +++ 3 Saponin Tạo bọt +++ +++ +++ Có Saponin. Steroid Phân biệt s. +++ +++ +++ trong lá, vỏ thân và steroid và s. quả. triterpenic 4 Coumarin Mở đóng vòng Không có Lacton _ _ Coumarin. Huỳnh quang _ _ _ TTDiazo _ _ _ Vi thăng hoa — — — 5 Anthranoid Bomtraeger — — — Không có Anthranoid. 6 Glycosid tim Lieberaiann +++ +++ +++ Không có Glycosid. Legal _ _ _ Baljet — — - 7 Acid hữu cơ Phản ứng Na2CƠ3 — — Không có acid hữu cơ. 27 8 Tanin FeClj 5% Gelatin 1% +++ +++ +++ Không có Tanin. 9 Acid amin ri' Ninhydrin — - — Không có acid amin. 10 Đường khử tự do TT Felhling A và Felhling B — — — Không có đường khử tự do 11 Chất béo Tạo vết mờ trên giấy — — — Không có chất béo 12 Carolen Phản ứng với H2S04đặc ++ ++ Có caroten trong lá và quả, không có trong vỏ thân. 13 Phytoserol Phảnứng Liebermann — — — Không có Phytoserol. 14 Polysaccharid TT Lugol ++ ++ ++ Có Polysaccharid Ghi chú: + :Phản ứng dương tính. ++ :Phản ứng dương tính rõ. +++ :Phản ứng dương tính rất rõ. :Phản ứng âm tính. 2.2.2. Định lượng và phân tích thành phần tinh dầu trong lá, quả Ngoi 2.2.2.1 Định lượng tinh dầu. Tiến hành định lượng tinh dầu theo phương pháp cất kéo hoi nước ; Dược liệu tưcd được cắt nhỏ, nghiền nát và cân cho vào bình cầu dung tích 500 ml, xác định độ ẩm. Tiến hành cất trong 3 giờ. Làm vói 3 mẫu và lấy kết quả trung bình. Tinh dầu lá và quả thu được dạng lỏng, tỉ trong nhẹ hơn nước. Tinh dầu màu vàng nâu, có mùi thơm nồng đặc tnmg. 28 Hàm lượng tinh dầu theo dược liệu khô được tính theo công thức: V x% = xioo M -M .a X : Hàm lượng % tinh dầu (TT/KL). V : Thể tích tinh dầu đọc được sau khi cất (ml). M : Khối lượng dược liệu tưofi đem cất. a : Độ ẩm dược liệu. Kết quả định lượng tinh dầu được trình bày trong bảng 2. Bảng 2: Kết quả định lượng tinh dầu lá, quả. STT mâu Mẫu lá Mẫu quả M(g) a(%) V (ml) X(%) M(g) a(%) V (ml) X(%) 1 800,29 80,67 0,19 0,12 600,45 78,72 0,11 0,09 2 798,63 81,42 0,25 0,17 598,26 77,98 0,13 0,10 3 197,09 79,83 0,24 0,15 601,84 79,06 0,16 0,13 Giá trị thực 0,15±0,01 0,11±0,01 Hàm lượng tinh dầu tính theo dược liệu khô trong lá là 0,15±0,01%, trong quả là 0,11± 0,01%. 2.2.2.2 Phân tích tinh dầu bằng phương pháp sắc ký khí khối phổ (GC- MS) ❖ Chuẩn bị dung dịch thử: Hoà 1 |al tinh dầu trong n-hexan (Merck), lắc kỹ được dung dịch có nồng độ 0,1%. ❖ Điều kiện chạy máy sắc ký khí khối phổ: Cột sắc ký khí DB-5MS (30 m X 0,25 m m ID). Khí mang He. 29 Tỷ lệ m/z từ 40-200. Nhiệt độ buồng tiêm: 150®c. Nhiệt độ Detector: 200 ®c. Chương trình nhiệt độ: 60-230°C; tốc độ tăng 8° c / phút. Thể tích tiêm mẫu: l|xl. Hệ số tách dòng: 50. Qua sắc ký khí khối khổ của tinh dầu lá Ngoi (Phụ lục 1, 2) đã xác định được 11 thành phần, trong đó thành phần chứứi là Caryophylen. Tinh dầu quả có 14 thành phần, thành phần chính là Caryophylen và Germacren D. Kết quả được trình bày trong bảng 3. Bảng 3: Kết quả phân tích tinh dầu bằng phương pháp GC-MS. STT Tinh dầu lá Tinh dầu quả Hàm lượng % trong tinh dầu Tinh dầu Hàm lượng % trong tinh dầu Tinh dầu 1 0,65 a-Cubeben 1,42 Methyl salicylat 2 14,28 a-Copaen 8,63 a-Copaen 3 4,77 (-)-p-Elemen 3,62 (-)-p-Elemen 4 9,30 Cis-Caryophyllen 17,60 Caryophyllen 5 37,22 Carylophyllen 1,69 a-Humulen 6 4,11 a-Humullen 12,03 Germacren-D 7 10,46 a-Copaen 2,00 a-Muurolen 8 1,01 a-Muurolen 10,45 Cadida-l,4-dien 9 1,83 (-)-Caryophyllen oxid 1,09 p-copaen-4-ol 10 0,94 Cadinol (a) 0,65 Phytan 30 11 11,16 Cis-chrysanthemol 1,84 a-Longipinen 12 4,62 Himachacol 13 4,68 Cadinol<a>DB5-2003 14 0,94 (-)-Caryophyllen oxid Nhân xét: Tinh dầu lá và tinh dầu quả Ngoi quả có thành phần tương tự nhau nhưng hàm lượng trong tinh dầu khác nhau. Tuy nhiên trong tinh dầu quả Ngoi có nhiều thành phần hơn tinh dầu lá và thành phần chính là Caưyophylen và Germacren D. 2.2.3. Nghiên cứu Flavonoid trong lá Ngoi 2.2.3.1. Qui trình chiết tách Flavonoid từ lá cây Ngoi Lấy 400 g dược liệu sấy khô 60-65°C trong tủ sấy 1 giờ. Dược liệu ngâm với 2500 ml cồn 90° trong 3 ngày trong bình ngấm kiệt. Dịch chiết được cất thu hồi dung môi rồi cô cách thuỷ thành cao dược liệu. Cao được hoà vào Methanol rồi trộn với Sillicagel đến bột tơi khô (hỗn hợp X), chiết Soxhlet với n-Hexan cất thu hồi dung môi thu được cắn A. Hỗn hợp X để bay hoi hết n-Hexan chiết tiếp trong Soxhlet bằng Chloroform được cắn B. Sau đó chiết bằng Ethylacetat, cất thu hồi dung môi sấy khô ở 55°c đến khối lượng không đổi, đem cân. Qui trình chiết tách được mô tả ở sơ đồ hình bên. 31 Sơ đồ: Qui trình chiết Flavonoid trong lá Ngoi 32 2.23.2. Định tính Flavonoid bằng sắc ký lớp mỏng (SKLM) ❖ Chuẩn bị dịch chấm sắc ký: cắn thu được trong phân đoạn Ethylacetat được hoà tan trong Methanol, lọc qua giấy lọc để được dung dịch chấm sắc ký. ❖ Chuẩn bị SKLM: Dùng bản mỏng được tráng sẵn Sillicagel 6OF254 của hãng Merck được hoạt hoá 110°c trong 1 giờ. cắt thành bản cỡ 2 X 10 (cm), 3x10 (cm), 10 X 10 (cm). ❖ Tiến hành chạy SKLM 1 chiều vói các hệ dung môi sau: Hệ I : Benzen - aceton (4-1). HệII : EtOAc-HCOOH-CHCl3(2-1-Z). Hệ m : EtOAc- HCOOH-CHCI3 (3-3-1). Hệ IV : EtOAc- MeOH (4-1). Hệ V : CHCI3- EtOAc- HCOOH-H2O (4-7-1-1). Hệ VI : Toluen-EtOAc-HCOOH (5-4-1) (hình 6- trang 34). Hệ VII : CHCls-EtOAc-HCOOH (5-8-2,5) (hìnhS-trang 34). Sau khi lấy bản mỏng ra để bay hơi hết dung môi, quan sát dưới ánh sáng tử ngoại 254nm và 366nm và phun thuốc thử AICI3 3% trong cồn thấy hệ VII là tách tốt nhất. Sau khi phun thuốc thử thấy có 3 vết mà vàng rõ khi nhìn ở mắt thường và dưói ánh sáng tử ngoại màu vàng tăng lên rõ rệt. Kết quả SKLM một chiều được chỉ ra ở bảng 4. ❖ SKLM 2 chiều dịch chiết Ethylacetat của lá Ngoi (hình 9-trang 34). Chiều 1: CHQs-EtOAc-HCOOH (5-8-5) (Hệ VII). Chiều 2: CHCI3- MeOH (10-1). Thuốc thử hiện màu AICI3 3% trong cồn, soi ở X, = 365 nm. 33 Hình 5: SKLM hệ vn Hình 6: SKLM hệ VI Hình 7: SKLM hệ IV Hình 8: SKLM hệ II 1cm Chiều 2 Hình 9: SKLM 2 chiều của Havonoid J P Hình 10: Tinh thể N 1 34 Bảng 4; Kết quả SKLM một chiều dịch chiết FIavonoidtp trong các hệ dung môi khác nhau. Thứ tự vết Rf trong các hệ dung môi Hiện màu vói thuốc thử AICI3 3% trong cồn (h= 365 nm) Hệ VI Hệ VII Hệ VI Hệ VII 1 ( «’V 0,27 Vàng Vàng 2 0,19 0,47 Vàng Vàng 3 0,22 0,55 Vàng nhạt Vàng nhạt 4 0,32 0,65 Xanh Xanh 5 0,41 0,72 Xanh Xanh 6 0,48 0,76 Xanh Xanh * Nhân xét: Khảo sát trên sắc ký 1 chiều và 2 chiều cho thấy trong dịch chiết Ethylacetat có ít nhất 7 vết chất trong đó có ít nhất 3 Flavonoid. 2.2J.3. Định lượng Flavonoid toàn phần Cân chính xác khoảng 10 g bột lá, xác định độ ẩm, chiết Soxhlet với n- Hexan thu được cắn A. Dược liệu để bay hoi hết n-Hexan chiết tiếp trong Soxhlet bằng Chloroform được cắn B, rồi Ethylacetat được cắn c. Cất thu hồi dung môi và thu lấy cắn. cắn c sấy khô ở 55®c đến khối lượng không đổi, đem cân. Hàm lượng cắn được tính theo công thức; m H% = X 100. M - M .X H(%) : Hàm lượng cắn trong phân đoạn Ethylacetat. M(g) : Lượng dược liệu đem cân. m(g) : Lượng cắn thu được. x(%) : Độ ẩm của dược liệu. 35 Bảng 5: Kết quả xác định hàm lượng cắn trong phân đoạn Ethylacetat ST mâu M(g) m(g) X(%) H(%) 1 9,8228 0,1348 8,49 1,50 2 9,9107 0,1461 8,45 1,61 3 10,1128 0,1534 8,47 1,66 4 10,2609 0,1484 8,47 1,58 Giá tậ thực 1,59±0,01 Hàm lượng Flavonoid toàn phần trong phân đoạn Ethylacetat là 1,59±0,01%. 2.23.4. Phân lập Flavonoid từ lá Ngoi Lấy cắn A, B, c các phân đoạn n-Hexan, Chloroform, Ethylacetat hoà tan bằng Methanol rồi thử các phản ứng định tính Cyanidin, phản ứng vối kiềm, phản ứng với dung dịch FeClj, dung dịch AICI3 3% trong cồn thấy cắn Ethylacetat có kết quả dương tmh rõ nhất. Vậy Flavonoid chủ yếu có mặt trong dịch chiết Ethylacetat. Tiến hành phân lập Flavonoid từ cắn Ethylacetat bằng sắc ký cột. Tiến hành sắc ký cột với 1,5 gam cắn c, chất hấp phụ là Sillicagel (Merck) cỡ hạt 0,02-0,063 mm. Tỷ lệ Sillicagel và cắn là 50:1. Dung môi khai triển là EtOAc: MeOH vói tỷ lệ thay đổi dần như sau: [97:3], [90:10], [80:20], [70:30], [60:40], [50:50], [40:60], [30:70], [20:80], [10:90], [0:100]. Hứng lần lượt vào 100 ống nghiệm, mỗi ống nghiệm 1-2 ml. Kiểm tra từng ống nghiệm bằng sắc ký lớp mỏng. Sau đó gộp dịch rửa giải ở các ống nghiệm có Rf giống nhau. Ống 1-16: ống có 3 vết. Ống 17-27: ống có 2 vết. Ống 28-76: ống có 2 vết. Ống 77-88: ống có 3 vết. 36 [...]... 179.05 180.05 181.05 1 82. 15 183.15 185.10 191.00 193.00 195.00 197.10 abund 525 63 62 2096 750 305 3 71 122 7 359 460 510 36 52 , m/ z 198.10 199.10 20 0 .20 20 1.10 20 3.00 20 6.10 20 8.10 21 0.10 21 [ l 10 21 B.10 abund 626 5 1341 53 9 379 455 346 380 477 528 87 9 m/ z 22 7.10 22 8.10 22 9 .20 23 6.10 24 1.10 2 55 2 0 25 6 .20 27 5.10 29 3.05 29 4.05 abund 1 87 3 1 57 7 1 63 6 373 707 1 24 1 530 124 2 39384 6995 1756 abund... cis-chrysanthemoỉ 19.9 42 0.83 21 .300 1 .21 21 . 421 1 .23 Oxirane, hexadecyl 22. 778 1^00 100.00 ^ PHU LUC 2: SÁCKY DO SAC K t KHÍ KHÓIPHÓ CÚA TINH DÁU QUA NGOI Peak« 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 R.Time 6 .23 4 8.906 9.081 9. 720 10.409 10. 926 11 .22 6 11.638 12. 4 52 12. 966 13.113 13 .20 7 13.663 13.951 14 .24 4 14.4 72 14.579 15.4 42 16.905 17.011 18.493 19.310 19.946 21 .304 22 .785 Peak Report... 169.05 171.15 1 72. 15 173.15 175.15 abund 1131 50 6 733 123 6 20 040 21 28 8 18 123 7 314 635 5 52 m/ z 176.05 177.15 178.15 179.05 180.05 181.05 1 82. 15 183.15 184.10 185.00 186.00 abund 376 511 6 27 531 546 629 4 62 471 3 57 121 4 3 42 m/z 23 9 .20 25 4.10 25 6 .20 25 7 .20 27 9 .20 28 0 .20 28 1 .20 abund 569 33 9 776 417 4886 8 12 320 m/ z 189.00 191.10 1 92. 10 193.10 197.00 199.10 20 0.00 20 3.10 2 05 10 20 6 .20 abund 434... 697 7 72 124 69 26 35 22 248 3879 23 880 6170 m/ z 83 05 84 0 5 85.05 86.05 87.05 88.05 88.95 91.05 92. 05 93.05 94.05 abund 1 2 74 3 64 35 99 82 1495 28 76 558 10 52 21896 3708 307 12 529 3 tn/z abund m/ z abund 95.05 ,22 360 106.05 5 326 96.05 ' 523 5 107.05 14518 97.05 9063 108.05 3585 98.05 4 021 109.05 17 720 9Ị9.05 ’ 4 627 110.05 3477 99.95 ! 122 9 111.05 5 82 2 101.05 1994 1 12. 05 3381 1 02. 05 687 113.05 3 021 iop.95... 7018 125 7 103.05 114.05 1187 104.05 3194 115.05 1 31 4 105.05 3314 116.05 781 cin 91 (4 9 8 0 m i n ) : D - D I P 1 2 7 D NGOC 2 m/ z 117.05 118.05 119.05 120 .05 121 .05 122 .05 123 0 5 124 .05 125 .05 126 .05 127 .05 abund 756 4 82 1818 1976 3 623 23 70 3684 23 33 4678 26 18 1 527 m/z 128 .05 129 .05 129 .95 131.05 1 32. 05 133.05 134.05 135.05 136.05 137.05 138.15 abund 8 25 329 5 451 943 1499 1347 1 2 33 21 08... 81.05 82. 05 abund 44 82 9589 3487 1550 22 25 47 72 11 32 5039 20 90 8159 7139 m/z 83.05 84 05 8 5 05 8 6 05 87.05 88.15 8 9 05 91.05 92. 05 93.05 94.05 abund 14408 8038 10973 1 52 8 4049 911 848 4684 19 92 7038 22 56 m/ z abund m/z abund 95.05 ' 6345 106.05 9 32 96.05 3437 107.05 3718 97.05 7148 108.05 1 54 2 98.05 427 8 109.05 4565 99.05 3357 110.05 22 22 100.05 123 3 111.05 3738 101.05 ! 1 720 1 12. 05 39 52 1 02. 05... 3 021 iop.95 25 79 114.15 818 103.95 1175 114.95 3 529 105.05 34056 116.05 978 Scan 56 ( 3 843 m i n ) : D - D I P 1 2 8 D NGOC 1 m/z 117.05 119.05 120 .05 121 .05 122 .05 123 .05 124 0 5 125 .05 126 .05 127 .05 128 .05 abund m/z 129 .05 130.05 131.05 1 32. 05 133.05 134.05 135.05 136.05 137.05 138.15 139.05 abund 3668 79 720 9811 624 64 16536 9178 3319 3919 1596 3611 1434 m/ z äbund m/ z 1410.05 22 68 151.05 141.05... 9 776 417 4886 8 12 320 m/ z 189.00 191.10 1 92. 10 193.10 197.00 199.10 20 0.00 20 3.10 2 05 10 20 6 .20 abund 434 757 3 53 553 490 455 354 403 3 92 354 m/ z 20 8.10 20 9.10 21 0.10 21 1.10 21 3.10 21 9.00 22 1.10 22 7 .20 22 8.00 23 6 .20 abund 24 74 656 565 747 6 52 339 371 4 02 346 391 m/ z abund PHỤ LỤC 7 TTÊU BẢN MẪU KHÔ Dược LIỆU ... bản Thống kê, tr 25 4-400 20 Viện Dược liệu (1990), Cây thuốc Việt nam, Nhà xuất bản Khoa học và kỹ thuật, tr 371-374 21 Viện Dược liệu (20 04), Cây thuốc và động vật làm thuốc Việt Nam, tập I, Nhà xuất bản khoa học kỹ thuật, tr 28 1 ,28 4,661 22 Viện Dược liệu (20 04), Cây thuốc và động vật làm thuốc Việt Nam, tập II, Nhà xuất bản khoa học kỹ thuật, tr 180 ,28 3, 399-400 23 Viện Dược liệu (20 04), “Dịch ép... Nhà xuất bản nông nghiệp, tr 59 2 Lê Đình Bích, Trần Văn ơ n (20 05), Thực vật học, trường Đại học Dược Hà Nội, tr 303, 304 3 Võ Văn Chi (1997), Từ điển cây thuốc Việt Nam, nhà xuất bản Y học, tr 146-158 4 Vũ Văn Chuyên (1976), Tóm tắt đặc điểm các họ cây thuốc, Nxb Y học, tr 175-177 5 Trần Anh Dũng (20 06), Góp phần nghiên cứu đặc điểm thực vật và thành phần hoá học cây Ngoi (Solanum verbasciýolium L., . nghiên cứu hoá học cây thuốc, Nhà xuất bản Y học, tr. 24 3 -29 0. 7. Phạm Hoàng Hộ (20 00), Cây cỏ Việt Nam, tập n, Nhà xuất bản trẻ, tr.755-770. 8. Hoàng Thanh Hương (1980), Nghiên cứu thành phần. cis-chrysanthemoỉ 12 19.9 42 0.83 13 21 .300 1 .21 14 21 . 421 1 .23 Oxirane, hexadecyl- 15 22 .778 1^00 100.00 ^ PHU LUC 2: SÁCKY DO SAC K t KHÍ KHÓIPHÓ CÚA TINH DÁU QUA NGOI Peak« 1 R.Time 6 .23 4 Area% 1. 42 Name Peak. Trường Đại học Dược Hà Nội, tr. 81,143, 25 9. 16. Ngô Văn Thu (1990), Hoá học Saponin, Trưcmg Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh,tr. 55,1 12. 17. Nguyễn Thị Bích Thu (20 02) , Nghiên cứu cây Cà gai