Đóng góp mới về nghiên cứu thành phần hóa học loài cơm rượu (glycomis petelotii)

1 i v  hu (Glycomis petelotii) Phm Th Thu Huyn i hc Khoa hc T  Lu ThS.  ; : 60 44 27 ng dn: PGS.TS. Nguyn Mng o v: 2012 Abstract.      hc c  c vt -   u p ch sinh h hing cha bnh tim m   . Vi  n lc ngu    c    quc t trong ving sinh h sinh hc hii.                   ,        . Keywords. ; a hc; u Content MỞ ĐẦU ,         ,                                 . t kho thuc khng l v  t. Do nh hu,   o    mt h ng thc v. Theo s liu tht Vic 307 h thc vm c s dc cha b [83]. Nguc v thuy mng dc.  tin ph      . Chi Glycosmis          ,  .                 ,                  ,                  . CGlycosmis petelotii i Viu t  [50]. Qua     hong mch chut thc nghi   MeOH Glycosmis petelotii ng cao,         .         Glycosmis petelotii. Nhm mu  v  ha a ch  "Đo ́ ng go ́ p mơ ́ i vê ̀ nghiên cư ́ u tha ̀ nh phâ ̀ n ho ́ a ho ̣ c loa ̀ i Cơm rươ ̣ u (Glycosmis petelotii) ở Việt Nam'' vi n 2 1. c ca thc v 2. p ch sinh h t hin ng cha bnh tim mch . Vihn lc nguc t trong ving sinh h sinh hc hin i.  ,  ,                 . Luc nhiu kt qu mc tin cao. THỰC NGHIỆM 1.1. Đối tượng Mi rng Cc Pc th, Vit nh bc vt hi- Vin c liu. Mn s C-i Vip chn Khoa h Vit Nam. Mu ly v c ra sch, loi b n y  nhi 40 0 n nh ng bt, bo qu  n nh    nhi  t lt b hexan, chlo cn ching.  chiy s khan, lt lc khi s dng. Cc cp chp  nh bt h c, s d  khng (ESI- MS), ph khi cao (HR-ESI-MS), ph cng t ht chi chiu (1D, 2D-NMR).  ch 1.2. Xử lý mẫu thực vật và chiết tách /3) G. petelotii ghin nh t vi 35  nhi t trong n cn metanol (1,27 kg) n MeOH - H 2 O (t l 1 : 1) vt lt b  theo th t  n nhexan, cSau khi ct lot gin chit    i. 1.3. Hằng số vật lý và các dữ kiện phổ của các hợp chất phân lập được Hằng số vật lý và các dữ kiện phổ của hợp chất MC-340 MC  340 (cht mi) Tng: Demethylglypetelotine TS-methyl N,N-2-[(1H)-indol-3-ethyl]-thiocarbamate, CTPT: C 12 H 14 N 2 OS  Tinh th c trong clorofom, axeton.  Ph 1 H-NMR (Axeton-d 6 , 500 MHz),  (ppm): 10,02 (1H; s; H-1); 7,60 (1H; d; 8,0 Hz; H-4); 7,38 (1H; d; 8,5 Hz; H-7); 7,29 (1H; br.s; H--2); 7,09 (1H; t; 7,5 Hz; H-6); 7,02 (1H; t; 7,5 Hz; H-5); 3,55 (2H; dt; 6,5; 6,5 Hz; H- H--  Ph 13 C-NMR (Axeton-d 6 , 125 MHz)  (ppm): 167 (s; C- u); 137,7 (s; C-8); 128,5 (s; C-9); 123,4 (d; C-2); 122,1 (d; C-6); 119,4 (d; C-5); 119,2 (d; C-4); 113,1 (s; C-3); 112,1 (d; C-7); 42,7 (t; C---  Ph HR-ESI-MS: 235,09017 ([M+H] + ); 187,08677 ([M+H-CH 3 SH] + ) 3    : 3420,99 cm -1  N  H (       : N    ,         -1  =CH ( ) , 1678 cm -1  C=O , 1590 cm -1  NH ( ) , 1467 cm -1  CH , 1104 cm -1  CO  S , 730 cm -1  C  S , 2222,72 cm -1 Hằng số vật lý và các dữ kiện phổ của hợp chất MC-339 ( trng MC-308) MC-339 (-308):   : glypetelotine  S-methyl N,N-2-[(1H)-indol-3-ethyl]-methyl-thiocarbamate, CTPT: C 13 H 16 N 2 OS  Tinh th            c trong clorofom, axeton.  Ph ESI-MS (+): 272.1 ([M+Na] + ); HR-ESI-MS (+): 272.09019 ([M+Na] + ), 201.10204 ([M-CH 3 SH] + ).  Ph 1 H-NMR (Axeton-d 6 , 500 MHz),  (ppm): 10,05 (1H; s; H-1); 7,67 (1H; d; 7,5 Hz; H-4); 7,39 (1H; d; 8,0 Hz; H-7); 7,19 (1H; br.s; H-2); 7,11 (1H; t; 7,5 Hz; H-6); 7,04 (1H; t; 7,5 Hz; H-5); 3,66 (2H; br.d; H---  Ph 13 C-NMR (Axeton-d 6 , 125 MHz)  (ppm): 168.2 (s; C--8); 128,5 (s; C-9); 123,4 (d; C-2); 122,2 (d; C-6); 119,5 (d; C-5); 119,2 (d; C-4); 112,8 (s; C-3); 112,2 (d; C-7); 51,1 (t; C--- Hằng số vật lý và các dữ kiện phổ của hợp chất GPH 1 GPH 1 CTPT: C 29 H 50 O   : -Sitosterol IUPAC: 17-(5-Ethyl-6-methylheptan-2-yl)-10,13-dimethyl- 2,3,4,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-3-ol.   , c trong metanol.          140  145 o C     1 H  NMR (500MHz, CDCl 3 )  (ppm): 0,68 (3H; s; CH 3 -18); 1,01 (3H; s; CH 3 - 19); 0,81 (3H; d;7,7 Hz;CH 3 -26); 0,88 (3H;d; 7,7Hz; CH 3 -27); 0,84 (3H; t; 7,3 Hz; CH 3 -29); 0,92 (3H; d; 10Hz; CH 3 -21); 3,53 (1H; m; H-3); 5,35 (1H, d, 5,5 Hz, H -6 ) Hằng số vật lý và các dữ kiện phổ của hợp chất GPH 2 CTPT: C 18 H 34 O 2   : axit oleic  -9-octadecenoic    , , , tan trong n - Hexan.          13  14 o C     1 H  NMR ( 500 MHz, CDCl 3 ) :  (ppm): 0,88 (3H;t; CH 3 -18); 1,63 (2H; m; H - 17); 2,00 2,01 (2x2H; d; H-8 -11); 2,34 (2H; t; H-2); 5,34 (2H, m, H -9, H-10 ) KẾT QUẢ T (Glycosmis petelotii)     GPH 1 ( -Sitosterol) , GPH 2 ( Axit oleic)    -Hexan, MC340 (DemethylGlypetelotine)     1 308 (MC339) (Glypetelotine) Hợp chất MC- 340 :   MC – 340             , xanh tan c trong clorofom, axeton. 4 1-340 Vị trí δ C (ppm) δ H (ppm) HMBC (HC) ROESY (HH) 1  10,02 (1H; s)   2 123,4 (d) 7,17 (1H; br.s) C-3; C-8; C-9  3 113,1 (s)    4 119,2 (d) 7,60 (1H; d; 8,0 Hz) C-3; C-6; C-8 H-6 5 119,4 (d) 7,02 (1H; t; 7,5 Hz) C-7; C-9  6 122,1 (d) 7,09 (1H; t; 7,5 Hz) C-4; C-8 H-4 7 112,1 (d) 7,38 (1H; d; 8,5 Hz) C-5; C-9  8 137,7 (s)    9 128,5 (s)    1’ 26,4 (t) 2,97 (2H; t; 7,5 Hz) C-2; C-3; C-9; C- H- 2’ 42,7 (t) 3,56 (2H; dt; 6,5; 6,5 Hz) C-3; C-- H- 3’  7,29 (1H; s)   4’ 167 (s) (yu)    5’     6’ 11,9 (q) 2,27 (3H; s) C-        (      ) : N CH 2 CH 2 N S CH 3 O H H H H H H H 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1' 2' 3' 4' 5' 6'             2     : 5 N CH 2 CH 2 N S CH 3 O H H H H H H H 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1' 2' 3' 4' 5' 6'                 , h-340    , ,   : S- methyl N,N-2-[(1H)-indol-3-ethyl]-thiocarbamate. H     Glycosmis petelotii.     : C 12 H 14 N 2 OS ( M = 234). Hơ ̣ p châ ́ t MC – 339 (trng MC – 308): MC  339  308                        90%    1    13 C  NMR. nh MC  308  339  1   c trong clorofom, axeton. -339 (308) Vị trí δ C (ppm) δ H (ppm) HMBC (HC) COSY (HH) NOESY (HH) 1  10,05 (1H; s)   H-2 2 123,4 (d) 7,19 (1H; br.s)   H--1 3 112.8 (s)     4 119,2 (d) 7,67 (1H; d; 7.5 Hz) C-6; C-8; C-9 H-5 H-5, H-- 5 119,5 (d) 7,04 (1H; t; 7,5 Hz) C-7; C-9 H-4, H-6 H-4, H-6 6 122,2 (d) 7,11 (1H; t; 7,5 Hz) C-4; C-8 H-5, H-7 H-5, H-7 7 112,2 (d) 7,39 (1H; d; 8,0 Hz) C-5; C-9 H-6 H-6 8 137,7 (s)     9 128,5 (s)     1’ 51.1 (t) 3.66 (2H; br.d)  H-2 H-4, H-2 2’ 24.2 (t) 2.98 (2H; br.d) C--4 H-1 H-2, H-4, H-1 3’      4’ 168.2 (s)     5’      6’ 12.8 (q) 2,29 (3H; s) C-4 -  7’ 35,2 2,88(3H; s) C   -  6 +       , COSY, NOESY,     ,                ,                    . N CH 2 H 2 C N S H 3 C CH 3 O H H H H H H 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 ' 2 ' 3 ' 4 ' 5 ' 6 ' 7 ' NH CH 2 CH 2 N S CH 3 CH 3 O H H H H H 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 ' 2 ' 3 ' 4 ' 5 ' 6 ' 7 ' NH CH 2 CH 2 N S CH 3 CH 3 O H H H H H 1 2 3 4 5 6 7 8 1 ' 2 ' 3 ' 4 ' 5 ' 6 ' 7 ' HMBC COSY NOESY Kê ́ t luâ ̣ n:         308, MC340  Hơ ̣ p châ ́ t GPH 1 :                   , ,   1      Sitosterol              -Hexan.                       ,       1 H  NMR                         Sitosterol (       ) Kê ́ t luâ ̣ n: GPH 1    Sitosterol : HO 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 19 11 12 13 14 15 16 17 18 20 22 23 24 28 29 25 27 28 21 Hơ ̣ p châ ́ t GPH 2 :                 , , ,     2   axit Oleic              -Hexan.                       ,       1 H          .                     axit oleic Kê ́ t luâ ̣ n: GPH 2  axit oleic : 7 OH O Đánh giá hoạt tính sinh ho ̣ c dịch phân bố và dịch chiết của cây Glycosmis petelotii 1. Ảnh hưởng của các chất khảo sát tác dụng gây giãn mạch động mạch chuột đã loại bỏ lớp tế bào nội mô (-EC) và gây co nhờ dung dịch K60 ng mch chut b loi b lp no co tht trong dung dch PSS cha 60 mM KCl (K60) cho t cht th ng lic  u nh ng ca ch ng cong th hin nng  - phi  li m lp li (mean  e.s. (n = 4-7)). .ang biu din s  mch ph thuc n cht th  ng mch chut loi lp t  nc bng dung dch PSS cha 60mM KCl (K60) (n 3-7). Nhng hot chch chi  tr Emax c tip tc th   nng  c ch 50%.      VIP 11 E max (%) ,   IC 50  . .5.b th hin s ch ph thuc n ct th  Emax  ng mch chut loi lp t  c bng dung dch PSS cha 60mM KCl (K60) (n =4-7). Tt c t chch chit th nghi IC 50 trong khong 13  63 g/ml. 0.1 1 10 100 0 50 100 05 [VIP] (g/ml) 10 14 13 11 12 23 16 03 06 Risposta (% di K60) .5.b. ng biu din s ch ph thuc n ct th   ng mch chut loi lp t c bng dung dch PSS cha 60mM KCl (K60) (n =4-7). ch chit cu petelotii (Glycosmis petelotii Guillt). Dch chi hin   Emax ph  50  Effect of VIP on K60-induced contraction in rat aorta rings 0.1 1 10 100 0 50 100 VIP0007 VIP0008 VIP0017 VIP0001 VIP0004 VIP0018 VIP0019 VIP0020 VIP0024 VIP0027 VIP0026 VIP0002 VIP0025 VIP0021 VIP0028 VIP0015 VIP0022 VIP0029 VIP009 [drug] g/ml Risposta (%) 8 Ảnh hưởng của các chất khảo sát tác dụng gây giãn mạch động mạch chuột đã loại bỏ lớp tế bào nội mô (-EC) và gây co nhờ dung dịch phenylephrine VIP11   nhng dch chich cao nhng mch ch i b lp n t qu th nghic  H.c ng 3.3 0.1 1 10 100 0 50 100 [VIP] (g/ml) 10 11 14 06 Risposta (% di fenilefrina) .c. ng biu din s ch ph thuc n ct th  ng mch chut loi lp t -c bng (n =3- ng  e.s. (n = 3-6). Ti tr Bng 3.3. ng ca dch chit VIP 11   loi b n- p nbng phenylephrine VIP -EC +EC IC 50 (µg/ml) E max IC 50 (µg/ml) E max 11      chit VIP 11  hiu qu ch cao, th hin    3.1  50 38.1  Ảnh hưởng của các dịch chiết khảo sát tác dụng gây giãn mạch động mạch chuột, còn lớp tế bào nội mô (+EC) và gây co nhờ dung dịch phenylephrine VIP11   nhng dch chich cao nhng mch ch p vp t  t qu th nghi3.5.d ng 3.3. 0.1 1 10 100 0 50 100 [VIP] (g/ml) 10 06 11 14 Risposta (% di fenilefrina) .d. ng biu din s ch ph thuc n ct th  ng mch chup t c bng - ng  e.s. (n = 3-6). Ti tr 9 VIP11    nhng dch chich cao nhng mch ch p v lp n t qu th nghi   Bng 2   50 . Kt qu cho thy   thuc lp t  endothelium cells. Ảnh hưởng của phân đoạn từ dịch chiết tác dụng gây giãn mạch động mạch chuột, đã loại bỏ lớp tế bào nội mô (-EC) và gây co nhờ dung dịch K60 t VIP11  m nhng dch chiu qu nht trong s ch chit khch chit methanol tc tip tc chin v -Hexane, chloroform, ethylacet gim, n ching VIP11H, VIP11C, p tc th nghim hoch c ng mch chung dung d -ch ph thuc n ch chi ng. Kt qu .e 1 10 100 0 50 100 [VIP] (g/ml) 11 11B 11C 11E 11H 11W 14 14B 14C 14E 14W Risposta (% di K60) 3.5.e. ng biu din s ch ph thuc n cn  ng mch chut loi lp t -c bng  ng  e.s. (n =1-2). Ti tri K60  Kt qu cho thn chloroform ca dch chi ch hiu qu nha, kh a dch chi dch chit tng methanol VIP11. Kt qu u su cho thy dch chit VIP11 t Glycosmis petelotii ng mch chu i K60 hoc phenylephrine  thuc n  thuc n-independent vasodilato d ng thuc ch  u  ch  thun th (voltage-dependent Ca2+ channels u khin th th (Receptor-m n n t Kết quả sàng lọc trên dòng ung thư gan ngươ ̀ i SK-Hep-1 và ung thư vú MCF-7   bic hot cht ch             MCF-7 (human breast adenocarcinoma)    SK-Hep-1 (human liver adenocarcinoma). Kt qu c        : 10  3.4-- Hep-Glypetelotine. (CI -concentration inhibitory %) Name Origin SK-Hep-1 cytotoxicity (CI%) MCF-7 cytotoxicity ug/ml CI% ug/ml CI% glypetelotin Glycosmis petelotii 0.1 7.606 0.1 -1.71 1 9.975 1 -0.18 10 12.54 10 8.166  Kt qu cho th c ch 8-12% c hai loi ph. Sàng lọc trên phép thử Wnt  hii nhc hot cht ch u protein Wnt. Kt qu cho thy: 3.5 Stt Code Wnt signaling 21 VHKC-0021 0.35 : kt qu th cho thy m protein Wnt. KÊ ́ T LUÂ ̣ N        (Glycosmis petelotii)         hai alkaloid    ,            ,      .      Sitosterol, Axit oleic.         t kh ,         Glycosmis petelotii , ng mch chui b lp t  n- dung dch K60; ng mch chui b lp t - dung dch phenylephrine; ch ng mch chup t  dung dch phenylephrine  dng mch chui b lp t - dung dch K60.                    Glycosmis petelotii ,          Clorofom.  hot      ch chi - gan (SK-Hep-1)    . Th s/b-catenin signalling pathway. [...]... Nguyễn Mạnh Cường (1999), Nghiên cứu thành phần hóa học cây Cơm rượu (Glycosmis petelotii Guill.), cây Vù Hương (Cinnamonmum balansae Lecomte) và cây Mạy Châu (Carya tonkinensis Lecomte) ở Việt Nam, Luận án tiến sĩ khoa học, Viện Hóa học 5 Nguyễn Nghĩa Thìn, Đỗ Thị Thu Hà (1998), Nghiên cứu thuốc dân tộc của đồng bào dân tộc Dao thôn Hợp nhất, xã Ba vì, tỉnh Hà tây, Tạp chí dược học, số 8, tr 5-7 6... Lợi (2001), Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam, NXB y học, Hà Nội, tr.142-143 2 Đỗ Huy Bích và các cộng sự (2006), Cây thuốc và động vật làm thuốc ở Việt Nam, NXB Khoa học và kỹ thuật, Tập 1, tr 542 3 Mai Hùng Thanh Tùng (2012), Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của hai loài Khổ sâm mềm (Brucea mollis Wall ex Kurz) và Cơm rượu trái hẹp (Glycosmis stenocarpa (Drake) Guillaum)... tr 5-7 6 Phạm Hoàng Hộ (2000), Cây cỏ Viê ̣t Nam , Xuấ t bản lầ n thứ 2, NXB Khoa ho ̣c và công nghê ̣ ki ̃ thuâ ̣t, Tâ ̣p 2, Tr 1286 7 Võ Văn Chi (2004), Từ điển thực vật thông dụng, NXB Khoa học và kỹ thuật, Tập 2, Tr 1286 Tài liệu tiế ng Anh: 8 Arruda, M.S.P., Fernandes, J.B., Silva, M.F.D.G.F.D., Vieira, P.C., Pirani, J.R., 1992, Quinolone alkaloids from Zanthoxylum actifolium, Phytochemistry .  "Đo ́ ng go ́ p mơ ́ i vê ̀ nghiên cư ́ u tha ̀ nh phâ ̀ n ho ́ a ho ̣ c loa ̀ i Cơm rươ ̣ u (Glycosmis petelotii) ở Việt Nam'' vi. 1 i v  hu (Glycomis petelotii) Phm Th Thu Huyn i hc Khoa hc T 