Thực trạng và một số yếu tố liên quan đến nhiễm giun đũa chó mèo (TOXOCARA SP.) ở trẻ em tiểu học từ 6 đến 11 tuổi tại xã Yên Lạc, huyện Yên Định, tỉnh Thanh Hóa năm 2014

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO - BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG PHẠM THỊ THU HOÀI THỰC TRẠNG VÀ MỘT SỐ YẾU TỐ LIÊN QUAN ĐẾN NHIỄM GIUN ĐŨA CHÓ/MÈO (TOXOCARA SP.)Ở TRẺ EM TIỂU HỌC TỪ ĐẾN 11 TUỔI TẠI XÃ YÊN LẠC, HUYỆN YÊN ĐỊNH, TỈNH THANH HÓA NĂM 2014 LUẬN VĂN THẠC SĨ Y TẾ CÔNG CỘNG MÃ SỐ CHUYÊN NGÀNH: 60.72.03.01 HÀ NỘI, 2015 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO - BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG PHẠM THỊ THU HOÀI THỰC TRẠNG VÀ MỘT SỐ YẾU TỐ LIÊN QUAN ĐẾN NHIỄM GIUN ĐŨA CHÓ/MÈO (TOXOCARA SP.) Ở TRẺ EM TIỂU HỌC TỪ ĐẾN 11 TUỔI TẠI XÃ YÊN LẠC HUYỆN YÊN ĐỊNH TỈNH THANH HÓA NĂM 2014 LUẬN VĂN THẠC SĨ Y TẾ CÔNG CỘNG MÃ SỐ CHUYÊN NGÀNH: 60.72.03.01 TS. NGUYỄN THU HƯƠNG PGS.TS. LÊ XUÂN HÙNG HÀ NỘI, 2015 i LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành đề tài này, nhận giúp đỡ nhiệt tình nhiều người. Đặc biệt xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS. Nguyễn Thu Hương, PGS.TS. Lê Xuân Hùng người thầy tận tình hướng dẫn suốt trình thực đề tài. Tôi xin trân cảm ơn: Ban Giám hiệu, Phòng Đào tạo sau Đại học thầy cô giáo môn trường Đại học Y tế công cộng tạo điều kiện thuận lợi cho hoàn thành mục tiêu học tập đề tài mình. Tôi xin chân thành cảm ơn Trung tâm Phòng chống sốt rét – Ký sinh trùng – Côn trùng Tỉnh Thanh Hóa, Trung tâm Y tế Huyện Yên Định, UBND, Trạm Y tế xã Yên Lạc, cộng tác viện y tế thôn xã Yên Lạc cộng tác ủng hộ nhiệt tình trình thu thập số liệu nghiên cứu đề tài này. Tôi xin chân thành cảm ơn Ban Giám đốc, Lãnh đạo cán viên chức Khoa Ký sinh trùng, Viện Sốt rét – Ký sinh trùng – Côn trùng Trung ương tạo điều kiện giúp đỡ trình học tập hoàn thành đề tài. Tôi xúc động vô biết ơn gia đình, bạn bè, đồng nghiệp quan tâm động viên, chia sẻ giúp đỡ trình học tập hoàn thành luận văn. Hà Nội, ngày 17 tháng 03 năm 2015 PHẠM THỊ THU HOÀI ii MỤC LỤC DANH MỤC CÁC HÌNH .vi DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT vii TÓM TẮT NGHIÊN CỨU viii ĐẶT VẤN ĐỀ . MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU Chương . TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1. Lịch sử bệnh giun đũa chó/mèo 1.2. Một số đặc điểm dịch tễ học bệnh giun đũa chó/mèo 1.2.1. Tác nhân gây bệnh . 1.2.2. Các đặc điểm sinh học Toxocara sp . 1.2.3. Chu kỳ phát triển 1.2.4. Quá trình truyền nhiễm 10 1.2.5. Thể lâm sàng bệnh giun đũa chó/mèo . 11 1.2.6. Dịch tễ học . 12 1.2.7. Chẩn đoán . 13 1.2.8. Điều trị . 14 1.2.9. Dự phòng 14 1.3. Tình hình nhiễm ấu trùng giun đũa chó/mèo người Thế giới Việt Nam . 15 1.3.1. Tình hình nhiễm ấu trùng giun đũa chó/mèo người Thế giới 15 1.3.2. Tình hình nhiễm ấu trùng giun đũa chó/mèo người Việt Nam 17 1.4. Các yếu tố liên quan đến nhiễm giun đũa chó/mèo người . 18 1.4.1. Hành vi cá nhân 18 1.4.2. Thói quen ăn uống 19 1.4.3. Tiếp xúc với chó/mèo . 20 1.5. Khung lý thuyết . 23 iii 1.6. Địa điểm nghiên cứu . 24 Chương . 25 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU . 25 2.1. Đối tượng nghiên cứu 25 2.2. Thời gian địa điểm nghiên cứu . 25 2.3. Thiết kế nghiên cứu . 25 2.4. Cỡ mẫu 25 2.5. Phương pháp thu thập số liệu 25 2.6. Thử nghiệm công cụ . 26 2.7. Các kỹ thuật sử dụng nghiên cứu 26 2.8. Các biến số nghiên cứu . 28 2.9. Phương pháp quản lý phân tích số liệu 31 2.9.1. Quản lý số liệu . 31 2.9.2. Phân tích số liệu . 32 2.10. Vấn đề đạo đức nghiên cứu . 32 2.11. Hạn chế nghiên cứu, sai số biện pháp khắc phục sai số 33 Chương . 35 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 35 3.1. Thông tin chung đối tượng nghiên cứu 35 3.1.1. Phân bố đối tượng nghiên cứu theo làng . 35 3.1.2. Tuổi đối tượng nghiên cứu 35 3.1.3. Phân bố đối tượng nghiên cứu theo giới 36 3.1.4. Thực trạng nuôi chó/mèo gia đình đối tượng nghiên cứu 36 3.2. Thực trạng nhiễm giun đũa chó/mèo đối tượng nghiên cứu 38 3.2.1. Kết xét nghiệm ELISA đối tượng nghiên cứu 38 3.2.2. Kết xét nghiệm bạch cầu toan đối tượng nghiên cứu . 40 3.3. Phân tích yếu tố liên quan đến nhiễm giun đũa chó/mèoở đối tượng nghiên cứu 42 iv 3.3.1. Liên quan giới với nhiễm giun đũa chó/mèo . 42 3.3.2. Liên quan tiếp xúc chó/mèo với nhiễm giun đũa chó/mèo người 42 3.3.3. Liên quan vệ sinh môi trường với nhiễm giun đũa chó/mèo người 45 3.3.4. Liên quan hành vi cá nhân đối tượng nghiên cứu với nhiễm giun đũa chó/mèo . 46 3.3.5. Mối liên quan thói quen ăn uống trẻ với ELISA (+) . 49 3.4. Kết phân tích đa biến: số yếu tố liên quan đến nhiễm giun đũa chó/mèo trẻ em Trường tiểu học Yên Lạc . 49 Chương . 52 BÀN LUẬN . 52 4.1. Địa điểm đối tượng nghiên cứu 52 4.1.1. Địa điểm nghiên cứu 52 4.1.2. Đối tượng nghiên cứu . 52 4.2. Tỷ lệ nhiễm giun đũa chó/mèo trẻ em từ – 11 tuổi điểm nghiên cứu 53 4.3. Một số yếu tố liên quan đến nhiễm giun đũa chó/mèo trẻ em điểm nghiên cứu 57 4.3.1. Yếu tố liên quan đặc điểm ĐTNC 57 4.3.2. Một số yếu tố liên quan tiếp xúc với chó, mèo ĐTNC . 58 4.3.3. Liên quan vệ sinh môi trường với nhiễm giun đũa chó/mèo 61 4.3.4. Liên quan hành vi cá nhân với nhiễm giun đũa chó/mèo 62 4.3.5. Liên quan thói quen ăn uống với nhiễm giun đũa chó/mèo . 63 KẾT LUẬN . 64 5.1. Thực trạng nhiễm giun đũa chó/mèo trẻ em – 10 tuổi điểm nghiên cứu . 64 5.2. Một số yếu tố liên quan đến nhiễm ấu trùng giun đũa chó trẻ em từ – 10 tuổi điểm nghiên cứu . 64 KHUYẾN NGHỊ . 66 PHỤ LỤC 73 Phụ lục 1: Bộ câu hỏi dành cho trẻ em đối tượng nghiên cứu . 73 v Phụ lục 2: Bộ câu hỏi dành cho người chăm sóc trẻ 76 Phụ lục 3: Phiếu đồng ý tham gia nghiên cứu 79 Phụ lục 4: Kỹ thuật đếm phân loại bạch cầu 81 Phụ lục 5: Kỹ thuật ELISA tìm kháng thể Toxocara máu 84 Phụ lục 6: Biên giải trình chỉnh sửa sau bảo vệ luận văn 86 vi DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1.Một đoạn ruột non chó với Toxocara canis trưởng thành …………… .5 Hình 1.2. Hình ảnh trứng Toxocara canis …………………………………………… Hình 1.3. Chu kỳ phát triển Toxocara sp. …………………………………… Hình 1.4. Bản đồ hành xã Yên Lạc, huyện Yên Định, tỉnh Thanh Hóa ……….24 Hình 3.1. Đối tượng nghiên cứu theo giới ……………………………………………36 Hình 3.2. Tỷ lệ dương tính với ELISA theo tuổi ĐTNC ……………………… .39 vii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT BCAT Bạch cầu toan ĐTNC Đối tượng nghiên cứu ELISA Enzyme – Linked Immunosorbent Assay (Kỹ thuật miễn dịch gắn men) HGĐ Hộ gia đình viii TÓM TẮT NGHIÊN CỨU Nhiễm ấu trùng giun đũa chó/mèo – Toxocariasis bệnh lây nhiễm từ động vật sang người hay gọi bệnh ấu trùng di chuyển nội tạng.Nguyên nhân Toxocara canis Toxocara cati gây nên. Bệnh ấu trùng giun đũa chó mèo gây gặp lứa tuổi, gặp nhiều trẻ em, trẻ em thường hiếu động, thích chơi đùa, bồng bế chó, mèo, chơi trò chơi tiếp xúc với đất bụi bẩn, ý thức vệ sinh trẻ kém. Nghiên cứu cắt ngang tiến hành 243 trẻ em tiểu học từ 6-11 tuổi xã Yên Lạc, huyện Yên Định, tỉnh Thanh Hóa. Mục đích nghiên cứu nhằm tìm hiểu mối liên quan tập quán nuôi chó, mèo gia đình có trẻ em số hành vi nguy với tình trạng nhiễm giun đũa chó/mèo trẻ em tiểu học. Nghiên cứu sử dụng kỹ thuật ELISA xác định tình trạng nhiễm câu hỏi vấn để tìm hiểu tập quán, yếu tố nguy cơ. Kết cho thấy tỷ lệ trẻ dương tính với xét nghiệm ELISA 74,9%. Tỷ lệ xét nghiệm ELISA dương tính trẻ em hộ nuôi chó 78,1%; tỷ lệ xét nghiệm ELISA dương tính trẻ em hộ nuôi mèo 87,3%. Kết nghiên cứu có mối liên quan nuôi chó với nhiễm giun đũa chó/mèo (OR = 2,9; p < 0,05), có mối liên quan tẩy giun cho chó với nhiễm giun đũa chó/mèo (OR = 8; p < 0,001), có mối liên quan giữ xử lý phân chó/mèo với nhiễm giun đũa chó/mèo (OR = 8,4; p < 0,001). Một số hành vi nguy có liên quan đến nhiễm giun đũa chó/mèo chơi đùa với chó/mèo (OR = 3,28; p < 0,001); không rửa tay sau chơi với chó/mèo (OR = 18,2; p < 0,001); không vệ sinh sau tiếp xúc đất (OR = 4,2; p < 0,001); không rửa tay trước ăn (OR = 4,5; p < 0,001). Khuyến nghị: Cần có chương trình giáo dục truyền thông cung cấp đầy đủ thông tin lời khuyên phòng chống Toxocariasis kết hợp thú y quan y tế nhằm bảo vệ sức khỏe cho người dân, đặc biệt trẻ em xã. 73 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Bộ câu hỏi dành cho trẻ em đối tượng nghiên cứu Xin chào anh/chị cháu. Chúng tiến hành nghiên cứu “Thực trạng số yếu tố liên quan đến nhiễm giun đũa chó, mèo trẻ em từ – 11 tuổi xã Yên Lạc, huyện Yên Định, tỉnh Thanh Hóa năm 2014” Cảm ơn anh/chị cháu đồng ý tham gia vấn.Chúng đánh giá cao việc anh/chị cháu bỏ thời gian để tham gia với chúng tôi. Tôi muốn anh/chị cháu hoàn toàn thoải mái nói chuyện tự do. Cảm ơn anh/chị cháu đồng ý tham gia nghiên cứu, anh/chị cháu có câu hỏi trước bắt đầu vấn không? Tên trẻ vấn: …………………………………Lớp: ………… Tên bố/mẹ trẻ: ……………………………………………………………… Địa chỉ: …………………………………………………………………… STT Câu hỏi Trả lời Mã A. Thông tin chung: Ngày vấn Tuổi ___/_____/___________ tuổi (Ghi số tuổi dương lịch) Giới tính Nam Nữ B. Hành vi nguy Cháu có chơi đùa với chó, mèo không? Có Không Chuyển 74  Q9 Vuốt ve Cháu chơi với chó, mèo nào? Ôm hôn Cho ngủ Khác……………………… Sau chơi đùa với chó, mèo cháu có rửa tay không? Cháu thường xuyên rửa tay không? Cháu rửa tay nào? 10 11 Cháu có rửa tay trước ăn không? Cháu thường xuyên rửa tay không? Cách cháu rửa tay nào? Cháu có chơi trò chơi có 12 liên quan tới đất cát không? Có Không Thường xuyên (lần rửa) Thỉnh thoảng (có lần rửa, có lần không) Rửa nước Rửa với xà phòng Có Không Thường xuyên (lần rửa) Thỉnh thoảng (có lần rửa, có lần không) Rửa tay với nước Rửa tay với xà phòng Có Không (đá bóng, bắn bi, nặn đất…) 13 14 Cháu có thường xuyên chơi trò chơi không? Sau chơi xong cháu có rửa tay chân không? 15 Cháu thường xuyên rửa Q12 Thường xuyên (hàng ngày) Thỉnh thoảng Có Không Thường xuyên (lần rửa) Q17 75 taychân không? Thỉnh thoảng (có lần rửa, có lần không) Rửa nước 16 Cháu rửa tay nào? Rửa với xà phòng Có 17 Cháu có ăn rau sống không? 18 19 20 Không Cháu có thường xuyên ăn rau sống không? Q19 Thường xuyên (trên lần/tuần) Thỉnh thoảng (1lần, lần/tuần) Cháu có uống nước lã Có không? Không Cháu có thường xuyên uống nước lã không? Thường xuyên (trên lần/tuần) Thỉnh thoảng (1 lần, lần/tuần) Chú ý: Sau vấn, điều tra viên kiểm tra lại điền đầy đủ thông tin vào phiếu chưa Rất cảm ơn cháu trả lời câu hỏi cô Họ tên điều tra viên Kết xét nghiệm Kết xét nghiệm ELISA Dương tính OD: …………. Âm tính Bạch cầu toan …………………. Tăng Bình thường 76 Phụ lục 2: Bộ câu hỏi dành cho người chăm sóc trẻ Xin chào anh/chị cháu. Chúng tiến hành nghiên cứu “Thực trạng số yếu tố liên quan đến nhiễm giun đũa chó, mèo trẻ em từ – 11 tuổi xã Yên Lạc, huyện Yên Định, tỉnh Thanh Hóa năm 2014” Cảm ơn anh/chị cháu đồng ý tham gia vấn.Chúng đánh giá cao việc anh/chị cháu bỏ thời gian để tham gia với chúng tôi. Tôi muốn anh/chị cháu hoàn toàn thoải mái nói chuyện tự do. Cảm ơn anh/chị cháu đồng ý tham gia nghiên cứu, anh/chị cháu có câu hỏi trước bắt đầu vấn không? Tên bố/mẹ : . Tên trẻ: .Lớp: . Địa chỉ: . STT Câu hỏi Trả lời Mã Chuyển A. Thông tin chung: Ngày vấn Tuổi ___/_____/___________ tuổi (Ghi số tuổi dương lịch) Giới tính Nam Nữ B. Yếu tố môi trường Nhà anh/chị có nuôi chó không? Có nuôi chó nuôi Có Không Q8 77 con? 2-3 Trên Khác……………………… …… Cách nuôi chó? Nhà anh/chị có tẩy giun cho chó không? Nhà anh/chị có nuôi mèo không Nuôi nhốt Nuôi thả Có Không Có Không Có nuôi mèo nuôi con? 2-3 Trên Khác …………………………… 10 Cách nuôi mèo? 11 12 13 Nhà anh/chị có tẩy giun cho mèo không? Nhà anh/chị có cho chó, mèo vào nhà không? không nuôi mèo Q12 Nếu nuôi chó lẫn Q16 Nuôi nhốt Nuôi thả Có Không Có Không Nhà anh/chị có cho chó, Có mèo lên giường không? Không 14 Anh/chị có thấy phân chó, Nếu nuôi chó Có không mèo 78 mèo quanh khu vực nhà Không không? Có Anh, chị xử lý phân chó Không 15 mèo khu vực xung quanh 16 nhà anh chị? thúc vấn nhà không? Cách xử lý phân chó, mèo Kết Hót cho vào sọt rác Chôn lấp Khác……………………… Chó mèo nhà hàng xóm có Có 17 chạy sang nhà anh/chị chơi Không không? Các gia đình không nuôi chó, mèo Anh/chị có thấy phân chó, Có 18 mèo quanh khu vực nhà Không không? Anh chị có xử lý phân chó, Có 19 mèo quanh khu vực nhà Không không? Hót cho vào thùng rác 20 Cách xử lý phân chó, mèo anh/chị nào? Chôn lấp Khác……………………… …. Chú ý: Sau vấn, điều tra viên kiểm tra lại điền đầy đủ thông tin vào phiếu chưa Rất cảm ơn anh/chị trả lời câu hỏi Họ tên điều tra viên 79 Phụ lục 3: Phiếu đồng ý tham gia nghiên cứu 1. Thông tin giới thiệu nghiên cứu: Đây nghiên cứu nhằm đánh giá thực trạng nhiễm tìm hiểu số yếu tố liên quan đến nhiễm giun đũa chó, mèo trẻ em từ – 11 tuổi xã Yên Lạc, huyện Yên Định, tỉnh Thanh Hóa năm 2014. Kết xét nghiệm máu trả lời vấn cháu anh/chị góp phần quan trọng vào việc cho thấy thực trạng nhiễm bệnh địa phương đặc biệt đối tượng trẻ em, để từ xây dựng kế hoạch phòng chống bệnh phù hợp với tình hình thực tế địa phương, nâng cao sức khỏe cho cháu cộng đồng. Để thu thập đầy đủ thông tin cần thiết, thời gian cho trao đổi dự kiến 20 – 30 phút. 2. Sự tham gia vào nghiên cứu tự nguyện: Sự tham gia vào nghiên cứu hoàn toàn tự nguyện. Chúng mong nhận hợp tác từ anh /chị cháu mong thu thông tin xác từ phía anh/chị cháu. Trong trình vấn anh/chị cháu thấy câu hỏi vấn đề khó trả lời đề nghị anh/chị cháu không trả lời, không nên trả lời cách thiếu xác.Mặt khác anh/chị cháu dùng vấn lúc thấy bất tiện. Chúng đảm bảo toàn thông tin mà anh/chị cháu cung cấp buổi trao đổi giữ bí mật. 3. Địa liên hệ cần thiết: Nếu anh/chị muốn biết thêm thông tin có câu hỏi liên quan đến nghiên cứu hỏi liên hệ trực tiếp với: Nghiên cứu viên: Phạm Thị Thu Hoài Địa chỉ: Viện Sốt rét – Ký sinh trùng – Côn trùng Trung ương, ĐT: 0977970118 80 Sau nghe tất thông tin nghiên cứu trên, anh/chị cháu có đồng ý tham gia vào nghiên cứu không? Đồng ý Từ chối ………… , ngày . tháng năm 2014 Chữ ký người chăm sóc trẻ 81 Phụ lục 4: Kỹ thuật đếm phân loại bạch cầu 1. Nguyên lý Bạch cầu tế bào có nhân, có chức bảo vệ thể, máu ngoại vi bình thường có loại bạch cầu tiêu số khu vực để phản ánh phân bố tỷ lệ loại bạch cầu máu bệnh nhân. 2. Chuẩn bị 2.1. Dụng cụ: - Dụng cụ kéo lam - Kính hiển vi - Máy đếm 2.2. Hóa chất: - Dung dịch Giemsa cốt - Dầu soi 2.3. Bệnh phẩm: - Máu tĩnh mạch máu mao mạch 3. Tiến hành 3.1. Làm tiêu máu đàn - Đối chiếu họ tên, tuổi … bệnh nhân - Mỗi bệnh nhân làm tiêu máu đàn 3.2. Nhuộm Giemsa 10% 3.3. Phân loại đếm: - Lấy vi trường vật kính 10x, 40x để quan sát tìm nơi tế bào rải - Nhỏ giọt dầu lên tiêu chuyển sang vật kính 100x - Xác định loại tế bào dựa vào đặc điểm hình thái, tính chất bắt màu 82 - Đếm nơi hồng cầu rải 1/3 đuôi tiêu (nơi tế bào rải đều, tế bào hồng cầu đứng sát nhau) - Đếm theo hình zíc zắc - Đếm riêng loại tế bào có nhân tổng số 100 tế bào có nhân loại - Đếm tối thiểu 100 tế bào có nhân dừng lại - Ghi lại tỷ lệ phần trăm tính trị tuyệt đối loại bạch cầu - Trong trình đếm có tế bào Blast tế bào non mô tả kỹ hình thái cấu trúc, có hồng cầu non phải lấy toàn số lượng tế bào có nhân trừ số lượng hồng cầu non để có số lượng bạch cầu thực tế, phải ý xem độ tập trung tiểu cầu, ký sinh trùng đường máu có (sốt rét, ấu trùng gun chỉ…). 4. Kết 4.1 Gá trị bình thường - Tỷ lệ % thay đổi theo tuổi bảng sau: Loại bạch cầu Mới đẻ Trung tính 54 – 86 25 – 40 35 – 50 45 – 60 55 – 75 0–2 1–2 1–4 1–4 1–8 0,4 0,2 0,1 0,1 10 – 38 50 – 70 45 – 60 40 – 50 25 – 35 Mono 0–7 1–4 Stab 0–2 1–4 Axít Bazơ Lympho - tháng tuổi 10 tuổi Người lớn Muốn biết số lượng loại bạch cầu tăng hay giảm thực sự, người ta phải tính giá trị tuyệt đối loại 1mm3 máu (hay lít máu) 83 - Bình thường: Trung tính: 2500 – 7000/mm3 Axits: 40 – 250/mm3 Bazơ: 10 – 50/mm3 Lympho: 1200 – 3000/mm3 Mono: 150 – 500/mm3 4.2. Thay đổi loại bạch cầu - Bạch cầu đoạn trung tính Tăng: nhiễm khuẩn mủ, viêm khớp, bệnh bạch cầu Giảm: suy tủy, sốt rét nặng - Bạch cầu đoạn ưu axits Tăng: bệnh ký sinh trùng (giun, sán …), bệnh da, dị ứng Giảm: suy tủy - Bạch cầu đoạn ưa bazơ Tăng: bệnh bạch cầu, tan máu mạn tính… - Bạch cầu Lympho Tăng: ho gà, lao, sởi, sốt rét, bệnh bạch cầu … Giảm: thương hàn nặng, sốt phát ban - Bạch cầu mono: tăng bệnh nhiễm vi rút … 5. Nguyên nhân sai chệch kết Do bệnh phẩm đông dây, đếm sai nhận biết hình thái sai. 84 Phụ lục 5: Kỹ thuật ELISA tìm kháng thể Toxocara máu 1. Nguyên lý Kháng nguyên kết hợp với kháng thể đặc hiệu hiệu có huyết người tác dụng chất làm đổi màu chất. Định lượng đo độ quang học (OD) chất chuyển màu. Các giai đoạn: Giai đoạn 1: Kháng nguyên gắn vào giếng nhựa (đã gắn sẵn) Giai đoạn 2: Phủ huyết bệnh nhân cần phát kháng thể vào giếng Giai đoạn 3: Phủ Enzyme Conjugate lên phức hợp kháng nguyên – kháng thể vừa hình thành Phủ chất (Chromogen) để làm màu phản ứng kết dương tính Cuối phủ dung dịch ngừng phản ứng trước đọc kết quả. 2. Chuẩn bị - Bộ Kit ELISA Toxocara Mỹ sản xuất - µl huyết người - Bộ Micropipet: – µl, – 20 µl, 20 – 200 µl, 200 – 1000 µl - Tuýp Eppendorf (pha loãng mẫu), đầu tip - Máy lắc - Máy đọc ELISA với bước sóng 450/650 – 620 nm. 3. Tiến hành - Lấy số lượng giếng cần thiết (hai giếng cho chứng cộng với số lượng giếng cho mẫu) đặt vào giá để giữ giếng 85 - Nhỏ 100 µl (hoặc giọt) dung dịch trứng âm vào giếng 1, nhỏ 100 µl dung dịch trứng dương vào giếng 100 µl dung dịch pha loãng (1:64) huyết mẫu vào giếng tương ứng *Chú ý: Dung dịch trứng âm trứng dương pha loãng sẵn. Không pha loãng hơn. - Ủ nhiệt độ phòng (15 đến 25 o C) 10 phút - Đổ dung dịch giếng rửa lần với dung dịch rửa pha loãng - Nhỏ giọt Enzyme Conjugate vào giếng - Ủ nhiệt độ phòng phút - Đổ dung dịch giếng rửa lần với dung dịch rửa pha loãng. Đập plate vào khăn giấy để loại bỏ giếng. - Nhỏ giọt Chromogen vào giếng - Ủ nhiệt độ phòng phút (các trường hợp dương tính dung dịch xuất màu xanh cây) - Nhỏ giọt dung dịch ngừng phản ứng vào giếng trộn lên (các giếng màu xanh chuyển sang màu vàng). - Đọc kết máy đọc ELISA 450/650 – 620 nm. 4. Kết - Chất lượng trứng: Trứng âm OD : 0,0 – 0,3 Trứng dương OD ≥ 0,5 - Mẫu xét nghiệm: Dương tính OD ≥ 0,3 Âm tính OD < 0,3 5. Nguyên nhân sai chệch kết - Rửa không kỹ làm cho trứng âm lên màu - Khắc phục: Rửa thật sạch, loại bỏ hết dung dịch khỏi giếng sau rửa cách đập mạnh giếng vào giấy thấm giếng khô. 86 Phụ lục 6: Biên giải trình chỉnh sửa sau bảo vệ luận văn BIÊN BẢN GIẢI TRÌNH CHỈNH SỬA SAU BẢO VỆ ĐỀ CƯƠNG/BÁO CÁO Họ tên học viên: Phạm Thị Thu Hoài Tên đề tài: Thực trạng số yếu tố liên quan đến nhiễm giun đũa chó/mèo (Toxocara sp.) trẻ em tiểu học từ 6-11 tuổi xã Yên Lạc, huyện Yên Định, tỉnh Thanh Hóa năm 2014. TT Nội dung cần chỉnh sửa theo biên Nội dung chỉnh sửa (mô tả chi tiết, ghi rõ số trang) Mục tiêu sửa từ “tìm Học viên thay từ “tìm hiểu” hiểu” thành “mô tả” thành “mô tả” mục tiêu nghiên cứu trang Bổ sung tài liệu tham Học viên bổ sung tài liệu khảo tham khảo cho đoạn thiếu trang 2, trang 15-22. Xem lại tài liệu tham Học vien bổ sung thêm số khảo theo quy trang báo tham khảo định theo quy định giáo dục. Đối tượng học sinh Học viên không bỏ qua nhóm tiểu học bỏ qua nghiên cứu làm toàn nhóm 11 tuổi trẻ học trường tiểu học từ lớp học sinh tiểu học? 1đến lớp học viên chia nhóm tuổi chưa xác nên Nội dung không chỉnh sửa (lý không chỉnh sửa) 87 dễ bị hiểu nhầm bỏ qua nhóm 11 tuổi, học viên sửa chia lại nhóm tuổi cho hợp lý trẻ từ 6-11 tuổi. Bổ sung hạn chế nghiên Học viên bổ sung thêm vào cứu nhóm trẻ 6-7 hạn chế nghiên cứu theo tuổi có khác biệt góp ý ủy viên trang 33. vấn với nhóm từ tuổi trở lên. Bảng kết 3.14 nên Học viên chỉnh sửa lại bảng chỉnh sửa “có nuôi chó” 3.14 theo góp ý Chủ tịch hội thay “chỉ nuôi chó” đồng trang 42. Bảng 3.17, 3.25 chỉnh Học viên chỉnh sửa lại sửa lại giá trị p cho hợp bảng 3.17, 3.25 trang 44, trang lý, không để p=1 49. Đưa tiêu chí cụ thể Học vien đưa tiêu chí cụ thể xác định tình trạng xác định tình trạng nhiễm nhiễm nghiên cứu nghiên cứu có xét nghiêm ELISA dương tính vào phần “Thiết kế nghiên cứu” trang 25. Khuyến nghị cần cụ thể Học viên sửa phần khuyến xác hơn. nghị cho cụ thể xác trang 66. 88 Xác nhận giáo viên hướng dẫn (ký ghi rõ họ tên) Tôi xác nhận nội dung chỉnh sửa học viên (ký ghi rõ họ tên) TS. Nguyễn Thu Hương Phạm Thị Thu Hoài PGS.TS. Lê Xuân Hùng Học viên Ý kiến thành viên HĐ/chủ tịch HĐ(GV phân công đọc lại đề cương sau bảo vệ có): …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… Đại diện hội đồng (ký ghi rõ họ tên) [...]... tả thực trạng nhiễm giun đũa chó/ mèo (Toxocara sp.) ở trẻ em từ 6 – 11 tuổi tại xã Yên Lạc, huyện Yên Định, tỉnh Thanh Hóa năm 2014 2 Xác định một số yếu tố liên quan đến nhiễm giun đũa chó/ mèo (Toxocara sp.) đối tượng nghiên cứu tại điểm nghiên cứu năm 2014 4 Chương 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Lịch sử bệnh giun đũa chó/ mèo Nhiễm giun sán khá phổ biến ở các nước nhiệt đới đang phát triển, trong đó nhiễm. .. điều tra và nghiên cứu nào về thực trạng nhiễm bệnh giun đũa chó/ mèo, vì vậy để có thêm thông tin về thực trạng nhiễm bệnh giun đũa chó/ mèo và để đưa ra các khuyến cáo người dân về việc phòng tránh bệnh chúng tôi tiến hành nghiên cứu Thực trạng và một số yếu tố liên quan đến nhiễm giun đũa chó/ mèo (Toxocara sp.) ở trẻ em tiểu học từ 6 – 11 tuổi tại xã Yên Lạc, huyện Yên Định, tỉnh Thanh Hóa năm 2014 ... phì, và sử dụng các công viên công cộng Trẻ em trong nhóm tuổi >12 và < 16 tuổi có huyết thanh dương tính cao hơn(17,59%) nhóm >2 tuổi và < 11 tuổi (4 ,62 %) [19] Một số nghiên cứu chỉ ra yếu tố cá nhân có liên quan đến nhiễm giun đũa chó/ mèo là giới.Nghiên cứu “Tỷ lệ và một số yếu tố nguy cơ nhiễm Toxocara ở trẻ em tại Ecatepec Morelos, Mexico”, nghiên cứu cắt ngang được thực hiện giữa tháng 8 và tháng... cho thấy tỷ lệ nhiễm ở nhóm 12 – 16 tuổi là 17,59% cao hơn so với nhóm 2 – 11 tuổi (4 ,62 %)[19] Nghiên cứu tại miền Đông tỉnh Azerbaijan, Iran tỷ lệ huyết thanh dương tính ở trẻ em 0 – 15 tuổi là 29, 46 % [41] Một nghiên cứu ở trẻ em tại Ba Lan về tình trạng nhiễm giun đũa chó, phần lớn các trẻ ở nông thôn bị nhiễm bệnh (68 ,9%) [29] 1.3.2 Tình hình nhiễm ấu trùng giun đũa chó/ mèo ở người tại Việt Nam Trần... tiến hành tại trường tiểu học Yên Lạc Hình 1.4 Bản đồ hành chính xã Yên Lạc, huyện Yên Định, tỉnh Thanh Hóa 25 Chương 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu Đối tượng chính: trẻ em từ 6 - 11 tuổi sống tại xã Yên Lạc, huyện Yên Định, tỉnh Thanh Hóa, hiện đang theo học tại trường tiểu học Yên Lạc Đối tượng hỗ trợ trả lời phỏng vấn: người chăm sóc chính của trẻ (bố hoặc mẹ) Tiêu... với chó, mèo Thói quen ăn uống - Ăn rau sống - Uống nước lã Tiếp xúc với chó/ mèo - Gia đình có nuôi chó, mèo - Chơi đùa, bồng bế chó/ mèo - Cho chó, mèo vào nhà - Cho chó, mèo lên giường Vệ sinh môi trường - Cách nuôi chó, mèo - Không xử lý phân chó, mèo - Không tẩy giun định kỳ cho chó, mèo 24 1 .6 Địa điểm nghiên cứu Xã Yên Lạc, huyện Yên Định, tỉnh Thanh Hóa có diện tích 60 5 ,6 ha, dân số là 51 36 người,... gồm tình trạng gia đình, điều kiện sống, nhận thức[41] Nghiên cứu tại Cẩm Xuyên, Hà Tĩnh đã chỉ ra có mối liên quan giữa nhiễm giun đũa chó/ mèo với không tẩy giun định kỳ cho vật nuôi và ô nhiễm môi trường [7] 23 1.5 Khung lý thuyết Thực trạng nhiễm Toxocara sp .ở trẻ em từ 6 – 10 tuổi - Xét nghiệm ELISA - Yếu tố nghi ngờ nhiễm (Xét nghiệm BCAT) Các yếu tố liên quan đến nhiễm Toxocara sp (yếu tố nguy... cũng chỉ ra có mối liên quan giữ nuôi chó, nuôi mèo với nhiễm giun đũa chó/ mèo [13] 1.4.4 Yếu tố môi trường Tại châu Á cũng có một nghiên cứu về tỷ lệ nhiễm Toxocara trong số trẻ em đi học ở Manado, Indonesia (Hayashi E và cs., 2010).Họ đã thực hiện một điều tra huyết thanh học về nhiễm trùng Toxocara canis ở các học sinh trung học từ 3 quận của phía bắc Sulawesi.Trong số 117 học sinh ở 2 quận nông thôn... cắt ngang tại Hoa Kỳ trong các năm từ 1988 đến 1994 với trên 20.000 người lớn hơn 6 tuổi cho thấy tỷ lệ huyết thanh dương tính là 13,9% [30,40] Tỷ lệ huyết thanh dương tính Toxocara sp ở trẻ em từ 1 – 11 tuổi ở Mỹ thay đổi từ 4% đến 8%.Tỷ lệ cao hơn ở Pueto Rico và ở Đông Nam nước Mỹ Tỷ suất nhiễm cao hơn nữa ở trẻ em tuổi học sinh ở Châu Âu Trẻ em nghịch đất và tiếp xúc với chó con là lứa tuổi đặc... (p=0,00 16) Tương quan có ý nghĩa được quan sát giữa huyết thanh dương tính và thường xuyên chơi trong các hộp cát ở trường hoặc trung tâm chăm sóc ban ngày (p=0, 011) , và sự có mặt của một con mèo ở trong nhà (p=00 56) Thông tin từ các gia đình của trẻ, 50% là các gia đình có chó [33] Nghiên cứu thực trạng nhiễm và đánh giá một số yếu tố nguy cơ lây nhiễm ấu trùng giun đũa chó ở người tại một số điểm