Nghiên cứu tác dụng chống đông máu của mật gấu

w BỘYTẾ TRUỒNG ĐẠI HỌC DUỢC HÀ NỘI HOÀNG HỒNG ANH NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CHỐNG ĐÔNG MÁU CỦA MẬT GÂU ( KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP DUỢC s ĩ KHOÁ 1999-2004) Người hướng dẫn : TS Nguyễn Văn Đồng Nơi thực : Bộ mơn Hố sinh Thời gian thực : Tháng 2-5/2004 HÀ NỘI, THÁNG 5-2004 nn2 tz MỜ&@cẢMƠ Khảo sát ảnh hưởng mật gấu số mật khác tới trình đơng máu số thời gian Howell > Khảo sát ảnh hưởng mật gấu số mật khác tới q trình tiêu íibrin nghiệm pháp Milstone > Khảo sát ảnh hưởng mật gấu tới thời gian đơng máu tồn phần máu thỏ theo phương pháp Milian PHẦN TỔNG QUAN 1.1 ĐẠI CƯƠNG VỂ MẬT GẤU 1.1.1 Đặc điểm thành phần hố học 1.1.1.1 Đặc điểm [15] [10] Gấu lồi thú lớn, thân dài đến l,5m; đầu to, mõm dài, tai trịn, ngắn, chân có móng to, sắc Bộ lông đen, rậm dài, đặc biệt ngực có khoang (yếm) trắng to, hình chữ V gấu ngựa hình chữ u gấu chó Có hai lồi gấu Việt Nam Gấu ngựa ( Ursus thibetanus G Cuvier Selenarctos thibetanus G Cuvier) Gấu chó ( Ursus malayanus Raffles Helarctos malayanus Raffles ) Gấu ngựa lớn loài gấu, nặng đến 150-200kg Mật gấu cịn ngun thường túi ép bẹp, có cuống dài Khi ép bẹp chiều rộng tới 5-6cm, chiều dài 14-15cm, chiều dày l-2mm, mép phẳng, mép cong trông giống lưỡi dao Khi cắt túi mật thấy có chất đen nhánh, đám đen có hạt lổn nhổn màu vàng óng ánh hổ phách Nếm thấy vị đắng, sau dính lưỡi Ngậm lâu tan hết miệng Đốt không cháy Mật gấu dùng nước Triều Tiên, Trung Quốc Việt Nam Dược điển Triều Tiên quy định tiêu chuẩn mật gấu sau: độ ẩm phải 15%, độ tro 7%, tro không tan acid chlohydric dưứi 4% 1.1.1.2 Thành phần hoá học Thành phần chủ yếu mật gấu gồm: acid cholic, dẫn chất acid cholic: acid chenodesoxycholic (CDCA), acid ursodesoxycholic (UDCA), cholesterol, sắc tố mật bilirubin [10] Trong UDCA acid đặc biệt có mật gấu (vào khoảng 20%), mà có chữ “urso” (từ chữ urse=gấu) UDCA có nhiệt độ nóng chảy 200-204°C, suất quay cực +59,0 — +62,0° (dung dịch 40mg/ml » ethanol) nhờ đặc điểm dựa vào phương pháp sắc ký để nhận biết nó, phân biệt với mật vật khác Cũng sở mà nhân dân lưu truyền cách thử để nhận biết mật gấu thật mật gấu giả [3] [10] 'OOH HO' OH Acid chenodesoxycholic Acid cholic Acid ursodesoxycholic 1.1.2 Cách lấy chế biến mật gấu [10] Bất mùa lấy mật Có thể ba tháng, sáu tháng năm lấy lần Theo kinh nghiệm vào mùa đơng mật gấu nhiều hơn, vào mùa xn phẩm chất mật lại tốt Trước muốn lấy mật người ta phải giết gấu, lấy dịch mật cách chọc hút trực tiếp từ túi mật sau gây mê gấu siêu âm túi mật Túi mật lấy phải phơi khô mát, sau gói kín để vào hộp, để nơi mát Nếu để nơi ẩm có nhiệt độ cao mật gấu chảy nước Dịch mật tưoi hút vào dụng cụ khơ, nút kín để 0°c Hoặc pha vào rượu cồn 1.1.3 Thử mật gấu 1.1.3.1 Theo kinh nghiệm dân gian [10] + Khi nếm lúc đầu thấy có vị đắng, sau mát dính lưỡi, ngậm lâu thấy tan hết miệng Mật vật khác đắng mà không mát, khơng dính lưỡi, khơng bóng, khơng giịn, mùi khó ngửi + Thả vài hạt mật gấu vào bát nước, hạt mật quay trịn chìm xuống đáy cho sợi màu vàng không lan toả + Lấy vài hạt mật gấu đốt lửa đèn cồn, hạt mật sủi bọt mà không cháy 1.1.3.2 Thử phản ứng hố học [10] + Hồ tan 0,5g mật gấu vào dung dịch Kali hydroxid 5% Đun sôi, sau hồ tan acid hố acid chlohydric, lắc với ether ethylic lần, lần lOml Hợp dung dịch ether lại, dùng nước rửa sạch, bốc hết ether Ta có hỗn hợp CDCA UDCA Hoà tan cặn lOml dung dịch amoniac 12%, thêm lOml dung dịch 10% bari chlorua Lọc lấy kết tủa, ta có muối bari acid Thêm lOml dung dịch 10% Natri carbonat đun nóng để loại bỏ bari Rồi acid hố acid chlohydric Lắc với ether ethylic lần, lần lOml ether Hợp dung dịch ether lại cất thu hồi ether Hòa tan cặn ethyl acetat Để yên cho kết tinh, sau lọc lấy tinh thể CDCA khơng kết tinh Để khô, đo độ chảy phải thấy 202°c độ chảy UDCA + Cân thật xác 0,5g mật gấu tiến hành trên, cân ƯDCA chiết xuất Phải 0,10g tức mật gấu phải có tới 20% UDCA ^ 1.1.33 Phản ứng màu [10] a Phản ứng Pettenkofer: Lấy hạt nhỏ tinh thể UDCA hoà tan lml nước cất saccarose thêm 1-2 giọt acid sulfuric đặc thấy xuất màu đỏ đẹp b Phản ứng Liberman-Surchard: Hoà tan hạt tinh thể UDCA 0,5ml chloroform; thêm 0,5ml anhydrid acetic giọt acid sulfuric đặc Bắt đầu có màu đỏ hồng sau chuyển sang xanh lam xanh lục 1.1.4 Cơng dụng cách dùng [2] 1.1.4.1 Tính vị: vị đắng, tính hàn 1.1.4.2 Quy kinh: tâm, can, vị 1.1.4.3 Công nàng chủ trị: - Thanh nhiệt giải độc, dùng cho bệnh hoả độc dẫn đến mụn nhọt, sang lở sưng đau, đặc biệt đau bệnh tri, hồ nước nóng bơi - Thanh nhiệt giáng hoả, dùng bệnh sốt cao dẫn đến co giật, bệnh kinh giản, hồi hộp sợ hãi co quắp Phối hợp với câu đằng, bình vơi sắc lấy nước hồ vói mật gấu để uống - Thanh can hoả, tan màng mộng mắt, dùng can hoả mắt sưng đau, mắt có màng mộng, mật gấu hồ với nước lấy dịch nhỏ vào mắt Trường hợp viêm gan, hôn mê gan, sắc với nước nhân trần hoà với mật gấu mà uống - Hoạt huyết giảm đau, dùng cho trường hợp sưng tấy ứ huyết đau đớn chấn thương, mật gấu hoà vào rượu, xoa bóp nơi sang chấn - Ngồi dùng chữa đau dày, khó tiêu 1.1.4.4 Liều dùng + Uống: 0,5 - 2g/ngày + Nhỏ mắt: mật gấu lượng hạt gạo mài vói nước đun sơi để nguội lấy dịch nhỏ vào mắt + Xoa bóp : dùng dung dịch mật gấu 5g/100ml rượu 35° 1.1.4.5 Kiêng kỵ + Những người đau hoả uất, trạng thái thực nhiệt không dùng + Không nên dùng liều cao kéo dài, dễ ảnh hưỏng đến trạng thái thần kinh 1.2 ĐẠI CƯƠNG VỂ CHỐNG ĐÔNG MÁU VÀ TIÊU FIBRIN 1.2.1 Q trình đơng máu [5] Q trình đơng máu chống đơng máu hai q trình phức tạp mà hai xảy song song tiến triển với hai mục đích khác nhau: đơng máu nhằm mục đích cầm máu chảy máu chống đơng máu nhằm mục đích ngăn cản đơng máu lan tràn, tiêu cục máu để lưu thông mạch phục hồi Về phương diện hố sinh, gọi q trình đơng máu hệ thống nhiều phản ứng hố học để biến íibrinogen (hồ tan huyết tương) thành ílbrin (có dạng sợi khơng hồ tan) Các íibrin liên kết thành lưới sợi huyết ơm lấy huyết cầu tạo thành cục máu đông Cục máu đông nút vào chỗ mạch bị tổn thương để chống chảy máu (cùng với yếu tố co mạch co sợi huyết) Khi mạch phục hồi cục máu đông tiêu Hiện tượng tiêu cục máu đông q trình tiêu íibrin thành sản phẩm hồ tan tác dụng plasmin Sự hình thành plasmin chuỗi phản ứng phức tạp Khi hai hệ thống đông máu chống đông máu thăng gây rối loạn đơng máu q nhanh gây tắc mạch đông máu chậm gây chảy máu 1.2.1.1 Các yếu tố đông máu [5] Theo quan điểm đại, q trình đơng máu có tham gia yếu tố đông máu (của huyết tương, tiểu cầu tổ chức) Hầu hết yếu tố đơng máu có chất protein (trừ yếu tố rv Ca**) có vai trị enzym Bình thường yếu tố đơng máu có huyết tương, tiểu cầu tổ chức tồn dạng không hoạt động xuất yếu tố bất thường (chất ngoại lai, tổn thương mạch ) chúng hoạt hố cách trình tự theo kiểu bậc thang để cuối tạo thành cục máu đông Mẫu Chứng (giây) Thử (giây) 20 90 120 21 113 185 22 124 160 23 133 190 24 155 195 25 120 150 26 120 147 27 115 150 28 87 102 29 89 116 30 82 126 31 120 150 32 118 145 33 137 147 34 79 120 35 108 150 36 118 163 37 113 169 38 112 165 39 130 174 40 116 176 41 118 179 42 128 167 43 123 165 x±ơ 105 ± 19 141 ±27 34% A% p< 0,001 23 ❖ Nhận xét: Qua bảng 2.1 ta thấy thời gian Howell mẫu chứng 105 ± 19 giây nằm giới hạn huyết tương người bình thường (90-150 giây) chứng tỏ mẫu huyết tương điều kiện thực nghiệm tin cậy Dịch mật gấu nồng độ 1/200 huyết tương làm tăng thời gian Hovvell so vứi chứng 34% vói p < 0,001 Sự tăng có ý nghĩa thống kê vổi độ tin cậy 99,9% t (giây) Hình 2.1 Ả nh hưởng mật gấu đến thời gian Howell 24 2.2.2 Tác dụng mật gấu đến thời gian tiêu íìbrin Tiến hành khảo sát trên/45 mẫu huyết tương người bình thường với lượng mật gấu cần dùng cho thử nghiệm 0,1 ml dung dịch mật có nồng độ 1/40 NaCl 0,9% Kết ống thử đối chiếu với ống chứng mẫu huyết tương Bảng 2.2: Tác dụng mật gấu lên thịi gian tiêu ííbrin Mẫu Chứng (giây) Thử (giây) 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 300 320 297 292 348 322 372 327 354 359 344 330 350 330 350 315 365 305 345 295 255 255 220 255 220 240 280 250 247 260 294 304 280 284 277 274 295 255 250 300 285 185 165 180 25 Mẫu 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 Chứng (giây) 264 293 365 285 324 294 280 178 317 304 291 318 245 299 294 326 370 317 361 365 375 334 325 x±ơ 317 ±40 -22% A% p < 0,001 26 Thử (giây) 230 234 212 197 204 254 197 141 323 320 188 250 216 264 234 241 255 227 230 359 299 266 232 248 ±44 ❖ Nhận xét: Thời gian tiêu íibrin mẫu chứng 317 ± 40 phút nằm giới hạn huyết tương người bình thường (trên 180 phút) chứng tỏ mẫu huyết tương điều kiện thực nghiệm tin cậy Dịch mật gấu nồng độ 1/200 huyết tương làm giảm thời gian tiêu íĩbrin 22% so với mẫu chứng với p 0,05 >0,05 >0,05 ❖ Nhận xét: Thời gian Howell mẫu chứng 114±23 giây, nằm giới hạn huyết tương người bình thường (90-150 giây) chứng tỏ mẫu huyết tương điều kiện thực nghiệm tin cậy Dịch mật chó, lợn, gà, ngan, cá trắm nồng độ 1/200 huyết tương làm tăng thời gian Howell 1%, 2%, 4%,11%, 9% so với mẫu chứng tăng khơng có ý nghĩa thống kê Dịch mật gấu nồng độ 1/200 huyết tương làm tăng thời gian Howell 33% so với mẫu chứng với p < 0,01 tăng có ý nghĩa thống kê với độ tin cậy 99% 28 t (giây) □ Chứng □ Gấu ■ Chó □ Lợn ■ Gà ■ Ngan □ Cá trắm Hình 2.3 ‘ã Ảnh hưởng mật gấu số mật khác đến thời gian Howell b Thời gian tiêu íibrỉn Tiến hành khảo sát 11 mẫu huyết tương người bình thường Thử nghiệm mật gấu, chó, lợn, gà, ngan, cá trắm lượng mật cần dùng cho thử nghiệm 0,1 ml dung dịch mật nồng độ 1/40 NaCl 0,9% 29 Bảng 2.3.b: Ảnh hưởng mật gấu số mật khác đến thời gian tiêu Fibrỉn Chứng Gấu Chó Lợn Gà Ngan Cá trắm (phút) (phút) (phút) (phút) (phút) (phút) (phút) 295 185 280 260 247 256 295 255 165 250 245 215 262 275 255 180 280 230 250 240 290 264 230 266 249 286 258 274 293 234 270 284 237 246 289 365 212 280 243 340 325 255 285 197 249 246 280 265 245 324 204 254 256 350 363 255 294 254 274 262 265 240 260 10 280 197 242 247 270 260 252 11 178 141 164 169 150 205 174 Mẫu x±ơ 281± 47 200 ±32 255±33 245± 29 263±55 265±43 260±33 -29% A% p < 0,001 >0,05 -13% -6% -9% >0,05 >0,05 -6% >0,05 -7% >0,05 ❖ Nhận xét: Thời gian tiêu Fibrin mẫu chứng 281± 47 phút nằm giới hạn huyết tương người bình thường ( 180 phút), chứng tỏ mẫu huyết tương điều kiện thực nghiệm tin cậy Dịch mật chó, lợn, gà, ngan, cá trắm nồng độ 1/200 huyết tương làm giảm thời gian tiêu íibrin so với mẫu chứng 9%, 13%, 6%, 6%, 7% với p > 0,05 Sợ giảm ý nghĩa thống kê 30 Dịch mật gấu nồng độ 1/200 huyết tương làm giảm thời gian tiêu fibrin 29% so với mẫu chứng với p < 0,001 Sự giảm có ý nghĩa thống kê với độ tin cậy 99,9% t (phút) □ Chứng □ Gấu ■ Chó □ Lợn HGà ■ Ngan □ Cátrắm Hình 2.3.b Ả nh hưởng mật gấu số mật khác đến thịi gian tiêu ýibrín 2.2.4 Ảnh hưởng mật gấu đến thời gian đơng máu tồn phần (theo phương pháp Milỉan) Thử nghiệm tiến hành 10 mẫu máu toàn phần thỏ tiến hành đối chứng song song mẫu máu toàn phần 31 Bảng 2.4: Ảnh hưởng mật gấu đến thịi gian đơng máu toàn phần Mẫu Chứng (giây) Thử (giây) 420 580 350 480 480 600 540 720 400 520 380 475 450 490 390 485 520 660 10 460 600 x±ơ 439 ±62 561 ±85 28% A% t = 3,67 p < 0,01 ♦> Nhận xét: Dịch mật gấu nồng độ 1/200 huyết tương làm tăng thời gian đơng máu tồn phần thỏ so vởi mẫu chứng 28% với p < 0,01 Sự tăng có ý nghĩa thống kê với độ tin cậy 99% 32 t (giây) 600 500 • 400 300 200 100 ) Hình 2.4 Ả nh hưởng mật gấu đến thời gừin đông máu toàn phần 2.3 NHẬN XÉT TổNG QUÁT VÀ BÀN LUẬN Qua kết nghiên cứu nhận xét nhận thấy: Dịch mật gấu nồng độ 1/200 huyết tương người bình thường làm tăng thời gian Howell 34% so với chứng với p < 0,001; rút ngắn thời gian tiêu fibrin 22% so với chứng với p < 0,001 Mật gấu có tác dụng kéo dài thời gian đơng máu tồn phần thỏ 22% so vái chứng với p < 0,01 Tác dụng chống đơng máu chứng tỏ mật gấu ức chế số yếu tố đông máu Dịch mật gấu làm tăng thời gian Howell nghĩa làm cho q trình đơng máu chậm lại có tác dụng phòng huyết khối Dịch mật gấu làm giảm thời gian tiêu íibrin hoat hố yếu tố tiêu íibrin làm tan nhanh cục máu đông, hai tác dụng chống đông máu tiêu íìbrin phù hợp với cơng khứứ, tiêu viêm dùng 33 trường hợp sưng tấy, tụ máu, bầm tím, ứ huyết y văn nêu Và thực tế, nhà sản xuất thuốc dựa vào tác dụng mật gấu để sản xuất số chế phẩm thuốc xoa bóp giảm đau sử dụng vị mật gấu Cũng qua khảo sát so sánh điều kiện tác dụng mật gấu vái số mật động vật khác : chó, lợn, gài ngan, cá trắm nhận thấy mật động vật khống làm thay đổi, thay đổi không đáng kể Số đơng máu tiêu íibrin so với mẫu chứng Điều chứng tỏ tất loại mật mà tiến hành thử nghiệm có mật gấu thể tác đụng chống đơng máu tiêu íibrin Và giá trị sử dụng vị mật gấu nêu y văn phù hợp 34 PHẦN KẾT LUẬN VÀ ĐỂ XUẤT Qua q trình thực nghiệm chúng tơi thu số kết sau: + Mật gấu vái nồng độ 1/200 huyết tương người bình thường có tác dụng: > Làm tăng thời gian Howell 34% so vởi mẫu chứng vái p < 0,001 > Làm giảm thời gian tiêu íibrin 22% so với mẫu chứng với p < 0,001 + Mật gấu máu toàn phần thỏ có tác dụng: C -4 > Làm tăng thời gian đơng máu tồn phần 28% so với mẫu chứng với p < 0,01 + Dịch mật chó, lợn, gà, ngan, cá trầm khơng có tác dụng tới số / tơ e*-wo ÍI , Các kết làm sáng tỏ công hoạt huyết, khứ ứ, tiêu viêm dùng trường hợp viêm tấy, đau nhức, tụ máu, bầm tím ngã hay chấn thương mật gấu Tuy nhiên kết bước đầu, thấy cần phải tiếp tục nghiên cứu so sánh thêm tác dụng mật gấu với mật động vật khác, nghiên cứu tác dụng khác mật gấu góp phần chứng minh giá trị nâng cao khả sử dụng vị mật gấu 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO Vương Thừa Ân (2002), Thuốc quý quanh ta, NXB Thuận Hoá, ữ 37-38 Bộ môn Dược học cổ truyền Trường Đại học Dược Hà Nội (2003), Dược học cổ truyền, NXB Y học, tr 205 - 206; 290 - 291 Bộ môn Dược liệu Trường Đại học Dược Hà Nội (1998), Dược liệu II, tr 249 Bộ môn Dược lý Trường Đại học Y Hà Nội (2001), Dược lý học, NXB Y học, tr 435-450 Bộ mơn Hố Sinh Trường Đại học Dược Hà Nội (2004), Hoá Sinh học, NXB Y học Nguyễn Văn Đồng (1995), Nghiên cứu tác dụng chống đông máu hạ Lipid máu số Dược liệu, Luận văn Phó tiến sĩ Dược học Nguyễn Trung Hồ (2000), Đơng Y tồn tập, NXB Thuận Hoá, ữ 973 - 975 Hội đồng dược điển Việt Nam (2002), Dược điển Việt Nam, NXB Y học, tập 1, tr 297 Nguyễn Thế Khánh, Phạm Tử Dương (2001), Xét nghiệm sử dụng lâm sàng, NXB Y học, tr 297-363 10 Đỗ Tất Lợi (1999), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Khoa học kỹ thuật, tập 1, tr 503-503 11 Nguyễn Ngọc Minh, Nguyễn Đình Ái (1999), Cầm máu đơng máu kỹ thuật ứng dụng lâm sàng, NXB Y học, tr 376-379, 639-646 12 Lê Khánh Trai, Hoàng Hữu Như (1979), ứng dụng xác suất thống kê Y, Sinh học, NXB Khoa học kỹ thuật, tr 72-76, 137-138, 144145,166-175,183 36 13 Nguyễn Anh Trí (2000), Đơng máu ứng dụng lâm sàng, NXB Y học, tr 29-116 14 Mai Xuân Vấn (1969), Thú rừng Việt Nam, NXB Khoa học kỹ thuật, tr 27-28 15 Viện Dược liệu (2004), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, NXB Khoa học kỹ thuật, tập 1, tr 1122-1124 16 Vũ Đình Vinh, Đặng Hanh Phức (1974), Kỹ thuật Y Sinh Hoá, Trường Đại học Quân y, tr.106 17 Vũ Hướng Văn (2001), Mật gấu với y học đương đại, Sức khoẻ đời sống, Số 121, tháng 4/2001, tr 10 18 Avery G.s (1980), Drug treatment, 2nd edition, Adis press, p 907-908 19 Jann Hau and Gerald L Van Hoosier, Jr, Handbook of Laboratory Animal Science, 2n edition, CRC press, Vol 1, p 379-385, 389, 402 d 37 ... Zentrifligen- Đức) > Các dụng cụ thơng thường phịng thí nghiêm 2.1.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.2.I Thử tác dụng chống đông máu tiêu ýibrin mật gấu Tác dụng chống đông máu mật gấu thực phương pháp... với p < 0,001 Mật gấu có tác dụng kéo dài thời gian đơng máu toàn phần thỏ 22% so vái chứng với p < 0,01 Tác dụng chống đông máu chứng tỏ mật gấu ức chế số yếu tố đông máu Dịch mật gấu làm tăng... nhức, tụ máu, bầm tím ngã hay chấn thương mật gấu Tuy nhiên kết bước đầu, thấy cần phải tiếp tục nghiên cứu so sánh thêm tác dụng mật gấu với mật động vật khác, nghiên cứu tác dụng khác mật gấu góp