Nghiên cứu tác dụng hạ lipid máu của hai bài thuốc đông dược

Trong y học cổ truyền , việc sử dụng các dược liệu và các bài thuốc có tác dụng hạ lipid máu chưa được đề cập đến.. Chúng tôi tiến hành thử tác dụng của hai bài thuốc đông dược trên mô h

BỘ Y TÊ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI

- £ 0 ^ 0 3

-l>Ư 0i\« TIIỊ NGỌC

NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG HẠ LIPID MÁU CỦA

(KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP Dược s ĩ KHOÁ 1997 - 2002)

Người hướng dẫn : TS Nguyễn Văn Đồng

Nơi thực hiện : Bộ môn hoá sinh

Thời gian thực hiện : Từ 8 - 3 - 2002 đến 20 - 5 - 2002

L Ờ I c ả m ƠR

& ô i x in ỈM ỊỊ tỏ lềttạ b iết títi iá u sất' tớ i íỉtầ ụ íỊỈíĩo CJ(S Q iy u ụ ễn <Văn rtìồ m j

n ạ tiò i ỉ/tầ ự (Tã tá ti tìn h ỉnứ hiạ d ẫ n , ụ itíp (Tỏ tÂỈ tm ng su ấ t q u á trìn h thự e liiệa

th ầy, eồ tro n ạ bộ m è n h o á ù n h , eáe cú n hộ k h ơ a Itú á iìn ti lìênU oìên 1Ọ- 8 đ ã

huânạ dẫn kặ thuật, tạo mều kiên oi Kì tồi hoàn thành eồtitị trình (túníỊ thòi

h ạ tt.

'Tôà n ộ i, nụàụ 2 0 thúng 5 n á m 2 0 0 2

S in h o iên rỉ)iìtìH íf CJlù Q lợoe.

MỤC LỤC

ĐẶT VÂN Đ Ể 1

PHẦN 1: TỔNG QUAN 2

1.1 Đại cương về lipid 2

1.1.1 Thành phần và vai trò của lipid 2

1.1.2.Lipoprotein và sự vận chuyển lipid 2

1.1.3.Cholestero l 5

1.1.4.Bệnh căn tăng lipid máu 6

1.1.5.Điều trị tăng lipid m áu 6

PHẦN 2 THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 10

2.1.Đối tượng nghiên cứu 10

2.1.1 Bài thuốc sô 1 10

2.1.2.Bài thuốc số 2 10

2.1.3.Chuộ t 13

2.2.Phương pháp nghiên cứu 14

2.2.1.Xử lý và chế biến dược liệu 14

2.2.2.Kỹ thuật xét nghiệm các chỉ số 15

2.2.3.Phương pháp xử lý kết quả 15

2.3.Kết quả thực nghiệm 17

2.4 Nhận xét tổng quát và bàn luận 29

PHẦN 3:KẾT LUẬN VÀ ĐỂ XUÂT 31

TÀI LIỆU THAM KHẢO 32

NHỮNG CHỮ VIẾT TẮT TRONG LUẬN VÃN

ĐẶT VẤN ĐỂ

Rối loạn chuyển hoá lipid máu là nguyên nhân gây ra nhiều bệnh tim mạch Đặc biệt là vữa xơ động mạch (VXĐM) đang được y học trong nước và thế giới quan tâm nhiều Sự hình thành của các mảng vữa xơ gây hẹp lòng mạch làm cản trở lưu thông máu là nguyên nhân dẫn đến những tai biến nguy hiểm như nhồi máu cơ tim trong VXĐM vành tim, tai biến mạch máu não Sự gia tăng cũng như tai biến của nó liên quan tới đời sống con người nhất là các nước phát triển có mức sống cao, sức lao động được giải phóng, khi các chất dinh dưỡng cung cấp cho cơ thể vượt quá nhu cầu

Hiên nay có rất nhiều thuốc hạ lipid máu, chủ yếu là hoá dược Đa số các thuốc này đều có cơ chế tác dụng rõ ràng nhưng thường phải dùng lâu dài nên gây ra nhiều tác dụng phụ Để hạn chế nhược điểm này, xu hướng hiện nay là dùng các thuốc có nguồn gốc tự nhiên đặc biệt là các thảo mộc

Trong y học cổ truyền , việc sử dụng các dược liệu và các bài thuốc có tác dụng hạ lipid máu chưa được đề cập đến Nhằm mục đích tạo nguồn nguyên liệu làm thuốc, nâng cao giá trị sử dụng của dược liệu, góp phần làm phong phú thêm thuốc hạ lipid máu để phòng và điều trị VXĐM Chúng tôi tiến hành thử tác dụng của hai bài thuốc đông dược trên mô hình gây tăng cholesterol thực nghiêm trên chuột cống Tác dụng của thuốc được theo dõi bằng các chỉ

PHẦN 1: TỔNG QUAN

1.1 Đại cương về lipid[2]

1.1.1 Thành phần và vai trò của lipid:

Lipid là sản phẩm ngưng tụ của acid béo và alcol, hầu hết dưới dạng este, có trong động vật và thực vât Ở người lipid có vai trò rất quan trọng trong dự trữ và cung cấp năng lương cho cơ thể hoạt động, lipid tham gia cấu tạo màng tế bào, màng nhân, màng ty thể trong tế bào Ngoài ra lipid còn có vai trò bảo vệ, điều hoà thân nhiệt, hấp thu vận chuyển các chất tan trong dầu đặc biệt là các vitamin A,D,E,K và các hormon steroid

phospholipid, sterid , và các lipid phức tạp khác Tính chất chung của các lipid là không tan trong nước Trong máu nó kết hợp với protein được gọi là apoprotein để chuyển thành dạng hoà tan mang tên lipoprotein lưu hành trong máu

1.1.2 Lipọprotein và sư vân chuyển lipid:

1.1.2.1.CẾU trúc và phân loại lipoprotein (Lp):

*Cấu trúc lipoprotein:

Lipoprotein có dạng hình cầu, đường kính từ 100-800 A° Phần lõi của phân tử Lp chứa các loại lipid không phân cực (CH este,TG), phần vỏ được cấu tạo bởi các apoliprotein và các phân tử lipid phân cực (phospholipid, cholesterol tự do ) Chính nhờ lớp vỏ này mà Lp có khả năng tan trong nước

* Phân loại lipoprotèin :

+ Theo tỷ trọng Lp được phân thành 5 lo ạ i:

Lipoprotein tỷ trọng trung gian IDL: 1,006 <¿/<1,019

Trong máu chylomicron tương tác với lipoprotein lipase (LPL) ở mao

giàu cholesterol este hơn, đến gan sẽ được thâu tóm và tiêu hoá trong Lysosome cho cholesterol tự do Cholesterol này có thể sử dụng tham gia tổng hợp màng, dự trữ ở gan tạo muối mật, tổng hợp lipoprotein.

*Lipoprotein tỷ trọng rất thấp (VLDL):

VLDL chủ yếu do gan tổng hợp, kích thước 300- 800 A°, lipid chủ yếu là triglycerid nội sinh và một phần cholesterol Vai trò chính là vận chuyển triglycerid nội sinh VLDL cũng tương tác với LPL để thuỷ phân bớt TG làm cho kích thước VLDL giảm dần và được gọi là VLDL tồn dư hay IDL Khoảng một nửa số IDL đựơc chuyển hoá ở gan Phần còn lại trong máu tiếp tục mất dần TG để trở thành LDL

*Lipoprotein tỷ trọng thấp (LDL).

LDL là sản phẩm chuyển hoá của VLDL có tỷ trọng cao hơn và kích thước nhỏ hơn VLDL, có 25% protein (chủ yếu apo B100) và 75% lipid (chủ yếu là cholesterol nội sinh ) Vai trò chính của LDL là vận chuyển cholesterol nội sinh tới các tổ chức Ở tế bào ngoại vi LDL tương tác với receptor- LDL trên màng tế bào để vào trong tế bào

Cơ chế hoạt động: LDL được thâu tóm theo cơ chế ẩm bào thông qua receptor

LDL gắn trên receptor- LDL với ái lực cao qua trung gian ApoB100 của LDL

Phức hợp của LDL và receptor- LDL được nhấn chìm trong bào tương, đồng thời tạo thành túi chứa phức hợp endosome

pH trong endosome thấp hơn làm cho phức hợp phân ly Receptor có thể quay ra mặt tế bào còn LDL nhập vào lysosome giải phóng cholesterol và acid amin

Mọi tế bào có thể tự điều hoà tiếp nhận CH theo nhu cầu Khi nhu cầu cao, tế bào tăng tổng hợp receptor và giảm khi thừa CH Ngoài sự thoái hoá

LDL theo con đường receptor đặc hiệu này LDL còn thoái hoá theo con đường kém đặc hiệu hơn trong đó có sự tham gia của đại thực bào.

Nguồn gốc CH ứ đọng trong đại thực bào là do LDL bị oxy hoá Khi đó receptor LDL không còn nhận ra chúng nữa, nhưng có Receptor- Scavenger nằm trên bề mặt của các đại thực bào tiếp nhận nó và chui vào tế bào Quá trình này không chiu ảnh hưởng của cơ chế điều hoà ngược, dẫn đến quá tải

CH trong tê bào Khi đó đại thực bào biến dạng thành tế bào có bọt là nguyên nhân hình thành mảng vữa xơ động mạch Vì vậy CH trong LDL còn gọi là

vữa xơ động mạch càng lớn Nghiên cứu cho thấy các thuốc làm giảm thời gian tồn tại của LDL trong máu hoặc có tác dụng ngăn ngừa sự peroxyd hoá acid béo sẽ hạn chế được sự hình thành các tế bào có bọt và có tác dụng ngăn ngừa vữa xơ động mạch

1.1.3 Cholesteroir21

* Cholesterol trong cơ thể có hai nguồn gốc:

- Nguồn gốc ngoại sinh do niêm mạc ruột hấp thu từ thức ăn chủ yếu là

Trong máu Cholesterol tồn tại dưới hai dạng: tự do ( chiếm 1/3) và este (chiếm 2/3) Cả hai dạng này đều kết hợp với protein dưới dạng lipoprotein

Bình thường ở người nồng độ cholesterol toàn phần trong máu khoảng 200

mg/dl trong đó phần lớn là cholesterole este

Nồng độ cholesterol trong hồng cầu và trong huyết thanh bằng nhau

Trong trường hợp bệnh lý chỉ thấy tăng ở huyết thanh Trong VXĐM

cholesterol là thành phần chính ứ đọng ở mảng vữa xơ Nồng độ cholesterol càng cao thì tỷ lệ VXĐM càng lớn

1.1.4 Bênh căn tăng Lipid máu :

Bệnh tăng lipid máu là những trường hợp có CH hoặc TG máu tăng cao

Có rất nhiều nguyên nhân gây tăng lipid máu để tiện cho việc điều trị trên lâm sàng người ta chia làm hai loại:

+ Tăng lipid máu nguyên phát: do yếu tố di truyền

+ Tăng lipid máu thứ phát : thường gặp trong một số bệnh như đái tháo đường, bệnh gút, suy tuyến giáp nguyên phát, hội chứng tắc mật, hội chứng thận hư và suy thận mãn tính Và khi dùng một số thuốc như glucocorticoid kích thích tế bào gan tổng hợp triglycerid, nếu dùng thuốc lâu dài sẽ tăng triglycerid nội sinh Thuốc lợi tiểu làm tăng nhẹ cholesterol toàn phần (3 -

8%), tăng triglycerid (20%) Thuốc ức chế cảm thụ p , nhất là p 2 ức chế men

LPL làm tăng triglycerid Ngoài ra do lối sống không hợp lý (ăn quá nhiều, hút thuốc lá, nghiện rượu, sống tĩnh tại, nhiều stress, .) là những yếu tố thuận lợi gây bệnh tăng lipid máu

1.1.5.1 Điều trị bằng chế độ ăn và luyện tập :

Đây là bước khởi đầu phải áp dụng cho tất cả các dạng tăng lipid máu Chế độ

ăn cần giảm tỷ lệ lipid trong khẩu phần đặc biệt cholesterol và mỡ bão hoà,giảm rượu và bia Cần tăng các thức ăn có dầu thực vật chứa nhiều acid béo

không bão hoà đồng thòi kết hợp hoạt động thể lực thường xuyên tuỳ theo hoàn cảnh cụ thể.

1.1.5.2 Điều trị bằng thuốc :

Áp dụng sau khi đã điều trị bằng chế độ ăn không có kết quả và khi cholesterol máu > 250 mg/dl (6,5 mmol/1), triglycerid >200 mg/dl (2,3 mmol/l) đồng thòi vẫn duy trì chế độ ăn hợp lý Mục đích của việc dùng thuốc là làm giảm hàm lượng lipid máu bằng cách giảm nguồn cung cấp và tăng đào thải lipid

* Thuốc hoá dược :

Hiện nay trên thế giới có nhiều thuốc hạ lipid máu vói nhiều cơ chế tác dụng khác nhau Sau đây là các thuốc hay được dùng :

- Các Fibrate được dùng phổ biến nhất Có nhiều dẫn chất của Fibrate như Clofibrate, Fenofibrate, Bezafibrate, Ciprofibrate

+ Cơ chế tác dụng : thuốc làm giảm tổng hợp VLDL ở gan, làm giảm hoạt tính của men HMG - CoA reductase qua đó giảm tổng hợp cholesterol nội sinh, tăng hoạt tính của men LPL dẫn tới giảm TG, tăng đào thải cholesterol qua mật

- Acid nicotinic : thường không được dùng dưới dạng tự do mà dùng dưới dạng este để giải phóng dần acid nicotinic như novacyl Acid nicotinic

làm giảm cholesterol và triglycerid máu do ức chế quá trình tiêu mỡ ờ tổ chức,

ức chế tổng hợp cholesterol thông qua tác động đến men HMG- CoA reductase, giảm VLDL do hoạt hoá men LPL

- Nhựa trao đổi ion: cholestiramin và colestipol

Nhựa trao đổi ion không bị men tiêu hoá tác động, không bị hấp thu qua niêm mạc ruột có khả năng trao đổi Cl' với acid mật, làm cho acid mật ở dạng liên kết và không bị tái hấp thu, được thải ra ngoài theo phân

- Các Statin: lovastatin, fluvastatin, pravastatin, Simvastatin Các chất

này ức chế quá trình sinh tổng hợp CH ở trong tế bào làm tăng tổng hợp các

receptor LDL để LDLthoái giáng theo con đường qua các receptor nhiều hơn, làm giảm sự thoái giáng theo con đường qua các đại thực bào.

* Thuốc đông dược:

Trong y dược học cổ truyền khái niệm về bệnh tăng lipid máu và vữa xơ động mạch chưa rõ ràng và rất ít được nhắc đến mà chỉ được hiểu như đàm thấp, đàm trọc, gần đây đã có một số công trình nghiên cứu về các vị thuốc và các bài thuốc có tác dụng hạ lipid và cholesterol máu tuy chưa nhiều nhưng đã có những kết quả bước đầu góp phần làm rõ hơn khái niệm về các căn bệnh trên

- Ngưu tất: Cao lỏng ngưu tất có tác dụng hạ cholesterol huyết trên thỏ gây tăng cholesterol ngoại sinh và nội sinh(Đoàn Thị Nhu) và đã được GS.Phạm Khuê ứng dụng trên lâm sàng thấy có tác dụng hạ cholesterol huyết trên người có

cholesterol huyết cao và làm giảm đáng kể tỷ lệ p la lipoprotein [9,14] Viện

dược liệu và XNDPTW 25 sản xuất viên bidentin dạng nang chứa bột bidentin Chỉ định điều tri chứng cholesterol huyết cao, VXĐM, tăng huyết áp

- 1974, Đặng Thị Mai An (Viện y học cổ truyền TW) nghiên cứu tác dụng của nghệ trên thỏ gây tăng cholesterol, thấy hạ nồng độ cholesterol huyết 1981 Phạm Tử Dương đã sử dụng cao lỏng nghệ do bộ môn hữu cơ trường Đại học Dược bào chế điều trị cho bệnh nhân VXĐM trong một tháng

đã thấy nghệ làm giảm cholesterol máu [6] XNDPTW 25 đã sản xuất viên cholestan (thành phần chính là tinh dầu nghệ ) Chỉ định điều trị tăng cholesterol huyết[ 16]

- Tỏi: Vũ Hiền Hạnh dùng alisa, một chế phẩm từ tỏi nghiên cứu trên

thực nghiệm và lâm sàng thấy có tác dụng hạ CH và tỷ lệ p Ịa lipoprotein rất

rõ rệt XNDP Đồng Tháp đã sản xuất viên nén “Dogarlic” chỉ định: Hạ CH, điều hoà triglycerid huyết thanh, tăng tuần hoàn máu bảo vệ thành mạch, ngừa VXĐM, ngừa cảm cúm

Nguyễn Văn Đồng và cộng sự (trường Đại học Dược Hà Nội ) đã nghiên cứu tác dụng của một số vị thuốc: Xuyên khung, đương qui, đào nhân, đan sâm, giá đậu xanh, hy thiêm trên chuột gây tăng CH ngoại sinh thấy giảm

rõ rệt CH huyết, giảm lipid toàn phần, giảm tỷ lệ Ị3la lipoprotein [1,7].

PHẦN 2: THỰC NGHIỆM VÀ KÊT QUẢ

2.1 Đối tượng nghiên cứu :

2.1.1 Bài thuốc số 1

*Công thức

2.1.2 Bài thuốc số 2: Bao gồm tất cả các vị của bài 1 và được bổ sung thêm 2 vị

theo công năng, chủ trị, tác dụng dược lý của từng vị thuốc đã được nghiên cứu và độ lặp lại của chúng trong các bài thuốc hạ lipid máu [12] Trong đó bài

số 2 được bổ sung thêm hai vị hương phụ và ích mẫu có tác dụng điều kinh nhằm mục đích so sánh tác dụng trên hai lô đực và cái

*Đặc điểm của hai bài thuốc :

Tất cả các vị thuốc đều đã được DĐVN tiêu chuẩn hoá, ít độc, đã được

sử dụng lâu đời, trong đó sơn tra, đan sâm, xuyên khung, ngưu tất được nghiên cứu có tác dụng hạ lipid máu

8 gam

8 gam

+ Theo y học cổ truyền: Sơn tra có tác dụng tiêu thực hoá tích, khứ ứ thông kinh, bình can hạ áp, bổ khí.

+ Theo y học hiện đại: Sơn tra làm tăng sự co bóp của cơ tim, đồng thòi làm giảm sự kích thích cơ tim, tăng tuần hoàn ở mạch vành tim và mạch máu não

cholesterol máu, giảm tỷ số ¡3la lipoprotein và lipid toàn phần, có tác dụng

chống đông máu và tiêu fibrin trên cả invitro và in vivo [7]

*Ngưu tất [3,13]

Là rễ đã chế biến khô của cây ngưu tất (Achyranthes bidentata Blum)

họ rau giền (Amaranthaceae)

+ Theo y học hiện đại: Hồng hoa có tác dụng tăng co bóp tử cung rõ rệt,

hạ huyết áp làm tăng lưu lượng máu động mạch vành tim của chó được gây mê Thuốc có tác dụng ức chế sự ngưng tập tiểu cầu, bảo vệ chống nhồi maú cơ tim [11] Hồng hoa có tác dụng chống đông máu và tiêu fibrin trên invitro, có tác dụng hạ cholesterol máu trên mô hình gây tăng cholesterol ngoại sinh [7]

- Liều dùng : 6-12 gam

* Hương phụ [3,13]

Là thân rễ phơi hay sấy khô của cây củ gấu hay cỏ gấu (Cyperus rotundus L.) họ cói (cyperaceae)

- Liều dùng: 6-12 gam.

2.1.3.Chuổt:

Chuột cống trắng có trọng lượng khoảng 100- 120 gam Sau 7 ngày nuôi ở điều kiện bình thường, loại đi những con bất thường Tiến hành chia 7 lô một cách ngẫu nhiên có điều chỉnh sao cho cân nặng ở mỗi lô là tương đương nhau

+ Lô l(lô bình thường) : Gồm 20 chuột (10 đực , 10 cái) được nuôi

riêng để tránh hiện tượng giao phối, sinh sản Chuột được nuôi trong 44 ngày bằng chế độ ăn bình thường cho một con trong một ngày như sau :

+ Lô 2 (lô chứng) : Gồm 20 chuột (10 đực , 10 cái ) được nuôi riêng

giống như lô 1 nhưng được gây tăng CH trong 44 ngày bằng cách bổ sung

thêm vào thức ăn bình thường cho mỗi con trong một ngày là :

+ Lô 3 : Gồm 10 chuột đực được gây tăng CH giống lô 2 đến ngày thứ

28 cho uống 8 ml dịch hãm bài 1 (tương đương với 0,84 gam dược liệu /con

/ngày), trong 16 ngày

+ Lô 4 : 10 chuột đực uống thuốc giống lô 3 nhưng thời gian kéo dài

26 ngày

+ Lô 5 : 10 chuột đực nuôi giống lô 2 và đến ngày thứ 28 cho uống 8 ml

dịch hãm bài 2 (tương đương với 1,08 gam dược liệu /con/ngày) trong 16

ngày

+ Lô 6 :10 chuột đực uống thuốc như lô 5 nhưng thòi gian kéo dài 26 ngày

+ Lô 7 : 10 chuột cái được nuôi và uống thuốc giống lô 5

2.2 Phương pháp nghiên cứu:

2.2.1.Xử lv và chế biến dươc liêu :

* Dược liệu được mua tại phố Lãn Ông được xác định đúng loài, bộ phận

dùng và xử lý đạt tiêu chuẩn dược điển Việt Nam Sau đó sấy khô, xay nhỏ lấy

bột thuốc dưới rây số 5 và trên rây số 4, cân đúng tỷ lệ theo công thức rồi trộn