Nghiên cứu tác dụng hạ đường huyết và khả năng chống rối loạn trao đổi lipid của dịch chiết từ lá atisô (cynara scolymus l ) trên mô hình chuột đái tháo đường thực nghiệm

TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM HÀ NỘI 2 KHOA SINH - KTNN ====== NGUYỄN THỊ CHI NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG HẠ ĐƢỜNG HUYẾT VÀ KHẢ NĂNG CHỐNG RỐI LOẠN TRAO ĐỔI LIPID CỦA DỊCH CHIẾT TỪ LÁ ATISÔ (Cynara scolymus L.) TRÊN MÔ HÌNH CHUỘT ĐÁI THÁO ĐƢỜNG THỰC NGHIỆM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Hóa sinh học Ngƣời hƣớng dẫn khoa học TS. TRẦN THỊ PHƢƠNG LIÊN HÀ NỘI - 2014 LỜI CẢM ƠN Với tấm lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc, tôi xin chân thành cảm ơn TS. Trần Thị Phương Liên, người đã tận tình hướng dẫn và tạo mọi điều kiện thuận lợi nhất giúp tôi hoàn thành đề tài này. Tôi xin chân thành cảm ơn các cán bộ Trung tâm Hỗ trợ thiết bị thí nghiệm và chuyển giao công nghệ - Trường Đại Học Sư phạm Hà Nội 2, viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương đã tạo mọi điều kiện thuận lợi giúp tôi trong suốt quá thời gian học tập và nghiên cứu. Cuối cùng, tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới gia đình, bạn bè, những người luôn động viên, quan tâm giúp đỡ và là chỗ dựa tinh thần lớn nhất đưa tôi vượt qua khó khăn để có được ngày hôm nay. Xin chân thành cảm ơn! Hà nội, ngày 05 tháng 05 năm 2014 Sinh viên thực hiện Nguyễn Thị Chi LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan những kết quả nghiên cứu được trình bày trong khóa luận là do tôi thực hiện và không trùng lặp với bất cứ tác giả nào khác. Tôi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm với những nội dung được đề cập trong bản khóa luận này. Hà nội, ngày 05 tháng 05 năm 2014 Sinh viên thực hiện Nguyễn Thị Chi DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT BP Béo phì Cho Cholesterol ĐTĐ Đái tháo đường EtOAc Ethylacetate EtOH Ethanol Glu Glucose HDL-c Lipoprotein tỷ trọng cao (High- density lypoprotein) HLA Kháng nguyên bạch cầu người (Human Leucocyte Antigen) LDL-c Lipoprotein tỷ trọng thấp (Low- density lypoprotein) LD 50 Medium letalisdosis (liều lượng gây chết trung bình) Metf Metformin n-hex n-hexan PĐ Phân đoạn STZ Streptozotocin TG Triglycerid TN Thí nghiệm TW Trung ương TC Cholesterol toàn phần MỤC LỤC PHẦN 1. MỞ ĐẦU 1 1. Lý do chọn đề tài 1 2. Mục đích nghiên cứu 2 3. Nội dung nghiên cứu 3 4. Đối tượng và phạm vi nghiên cứu 3 5. Những đóng góp của đề tài 3 PHẦN 2 : NỘI DUNG 4 Chƣơng 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 4 1. Giới thiệu tổng quan về đối tƣợng 4 1.1. Giới thiệu về cây Atisô 4 1.1.1. Nguồn gốc 4 1.1.2. Đặc điểm thực vật 4 1.1.3. Phân bố và sinh thái 4 1.1.4. Một số công dụng của Atisô 5 1.1.5. Thành phần hóa học chính của cây Atisô 7 1.2. Giới thiệu một số hợp chất tự nhiên từ thực vật 7 1.2.1. Các hợp chất thứ sinh và các chất có hoạt tính sinh học 7 1.2.2. Hợp chất phenolic trong thực vật. 8 1.2.3. Flavonoid thực vật 9 1.2.3.1. Cấu tạo hóa học 9 1.2.3.2. Tác dụng sinh học 10 1.2.4. Tannin 11 1.2.4.1. Cấu tạo hóa học 11 1.2.4.2. Tác dụng sinh học 12 1.2.5. Alkaloid thực vật 12 1.2.5.1. Cấu tạo hóa học 12 1.2.5.2. Tác dụng sinh học 12 1.3. Bệnh béo phì 13 1.3.1. Khái niệm 13 1.3.2. Phương pháp đánh giá 13 1.3.3. Phân loại 14 1.3.4. Tác hại của bệnh béo phì 14 1.3.5. Nguyên nhân gây béo phì 14 1.3.6. Giải pháp phòng và điều trị bệnh béo phì 15 1.3.7. Thực trạng béo phì trên thế giới và trong nước 15 1.3.8. Một số chỉ số hoá sinh liên quan đến rối loạn trao đổi lipid máu và bệnh xơ vữa động mạch 16 1.4. Giới thiệu về bệnh tiểu đường 18 1.4.1 Khái niệm 18 1.4.2. Phân loại 18 1.4.3. Rối loạn trao đổi lipid 19 2. Tổng quan tình hình mắc bệnh trong và ngoài nƣớc 19 2.1. Tiêu chuẩn chẩn đoán đái tháo đường 20 2.2. Tình hình mắc bệnh trên thế giới 21 2.3. Tình hình mắc bệnh trong nước 21 Chƣơng 2. ĐỐI TƢỢNG - PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.1. Đối tượng nghiên cứu 22 2.1.1 Mẫu thực vật 22 2.1.2. Mẫu động vật 22 2.2. Phương pháp nghiên cứu 23 2.2.1. Tạo mô hình chuột béo phì và đái tháo đường 23 2.2.2. Tách chiết các phân đoạn dịch chiết từ lá cây Atisô. 23 2.2.3. Định tính một số nhóm hợp chất tự nhiên trong lá cây Atisô, bằng phương pháp hoá học nhờ các thuốc thử đặc hiệu 23 2.2.3.1. Định tính flavonoid 24 2.2.3.2. Định tính tannin 24 2.2.3.3. Định tính alkaloid 24 2.2.3.4. Định tính glycoside 25 2.2.3.5. Định tính các polyphenol khác 25 2.2.4. Định lượng polyphenol tổng số theo phương pháp Folin-Ciocalteau 25 2.2.5. Sắc ký lớp mỏng 26 2.2.6. Sử dụng phương pháp hóa sinh – y dược 26 Chƣơng 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 27 3.1. Kết quả tách chiết và một số đặc tính hóa sinh của phân đoạn dịch chiết lá Atisô (Cynara scolymus L.) 27 3.1.1. Quy trình tách chiết 27 3.1.2. Kết quả định tính một số nhóm hợp chất tự nhiên trong các phân đoạn dịch chiết lá Atisô 28 3.1.3. Phân tích thành phần hóa học trong các phân đoạn bằng sắc ký lớp mỏng 30 3.1.4. Hàm lượng polyphenol tổng số trong cao dịch chiết các phân đoạn 31 3.1.4.1. Xây dựng đường chuẩn acid gallic 31 3.1.4.2. Định lượng polyphenol tổng số theo phương pháp Folin- Ciocalteau . 32 3.2. Kết quả xác định liều độc cấp 33 3.3. Tạo mô hình chuột đái tháo đường thực nghiệm và đáng giá tác động chống rối loạn trao đổi lipid của các phân đoạn dịch chiết. 33 3.3.1. Tạo mô hình chuột béo phì thực nghiệm 33 3.3.2. Kết quả tạo mô hình chuột đái tháo đường type II 38 3.3.3. Tác dụng của một số phân đoạn dịch chiết của lá cây Atisô lên chuột đái tháo đường thực nghiệm. 39 3.3.3.1. Tác dụng của các phân đoạn dịch chiết ethanol, cao phân đoạn n- hexan và cao phân đoạn ethylacetate từ lá cây Atisô đến nồng độ glucose huyết lúc đói của chuột ĐTĐ. 39 3.3.3.2. Tác dụng đến chuyển hóa lipid của lá cây Atisô trên mô hình chuột ĐTĐ type II. 42 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Error! Bookmark not defined. TÀI LIỆU THAM KHẢO 47 DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1. Phân loại BMI của người trưởng thành châu Âu và châu Á 13 Bảng 1.2. Các tiêu chí để chuẩn đoán ĐTĐ theo WHO. 20 Bảng 3.1. Hiệu suất chiết rút các phân đoạn từ lá cây Atisô 28 Bảng 3.2. Kết quả định tính các phân đoạn dịch chiết lá Atisô. 29 Bảng 3.3. Kết quả đường chuẩn gallic 31 Bảng 3.4. Kết quả hàm lượng polyphenol tổng số trong các phân đoạn dịch chiết 32 Bảng 3.5. Kết quả thử độc tính cấp theo đường uống 33 Bảng 3.6. Thành phần thức ăn giàu lipid 34 Bảng 3.7. Trọng lượng trung bình của hai nhóm chuột nuôi bằng hai chế độ dinh dưỡng khác nhau. 35 Bảng 3.8. So sánh một số chỉ số hóa sinh máu giữa chuột nuôi thường và nuôi béo phì thực nghiệm. Error! Bookmark not defined. Bảng 3.9. Kết quả nồng độ glucose huyết lúc đói của các lô chuột sau 21 ngày điều trị. 40 Bảng 3.10. So sánh một số chỉ số lipid máu ở chuột ĐTĐ trước và sau điều trị bằng cao phân đoạn ethanol, cao phân đoạn n-hexanvà cao phân đoạn ethylacetate. 43 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1. Flavan (2-phenyl chroman) 10 Hình 2.1.Lá cây Atisô 22 Hình 2.2. Mẫu động vật dùng trong thí nghiệm 23 Hình 3.1. Mô hình chiết rút các phân đoạn hợp chất tự nhiên từ lá Atisô. 27 Hình 3.2. Sắc kí đồ các phân đoạn dịch chiết lá cây Atisô 30 Hình 3.3. Kết quả đường chuẩn gallic 32 Hình 3.4. Hình ảnh chuột nuôi bằng 2 chế độ dinh dưỡng khác nhau 34 Hình 3.5. Biểu đồ biểu diễn sự tăng trọng của các nhóm chuột với 2 chế độ dinh dưỡng khác nhau trong vòng 8 tuần. 35 Hình 3.6. Biểu đồ so sánh một số chỉ số hóa sinh giữa các lô chuột TN.Error! Bookmark not defined. Hình 3.7. Biểu đồ một số chỉ số hóa sinh trong huyết thanh chuột bình thường, chuột béo phì và chuột ĐTĐ 39 Hình 3.8. Nồng độ glucose huyết lúc đói của các lô chuột 41 Hình 3.9. So sánh một số chỉ số lipid máu ở chuột ĐTĐ trước và sau điều trị bằng cao phân đoạn ethanol, cao phân đoạn n – hexan vàcao phân đoạn ethylacetate. 43 [...]... 4.2 Phạm vi nghiên cứu Nghiên cứu tác dụng hạ đường huyết và khả năng chống rối loạn trao đổi lipid của dịch chiết từ l Atisô (Cynara scolymus L. ) trên mô hình chuột đái tháo đường thực nghiệm 5 Những đóng góp của đề tài Cung cấp các dẫn liệu khoa học về thành phần hóa học, hàm l ợng các nhóm hợp chất hữu cơ, khả năng chống béo phì, chống đái tháo đường của phân đoạn dịch chiết từ l cây Atisô (Cynara. .. tài: Nghiên cứu tác dụng hạ đường huyết và khả năng chống rối loạn trao đổi lipid của dịch chiết từ l Atisô (Cynara scolymus L. ) trên mô hình chuột đái tháo đường thực nghiệm. ” 2 Mục đích nghiên cứu Mục đích nghiên cứu nhằm góp phần hiểu biết thêm về đặc tính sinh l , hóa sinh và khả năng chữa bệnh của dịch chiết từ l cây Atisô, tạo cơ sở cho 2 những hướng nghiên cứu tiếp theo trong l nh vực tìm... niệm Đái tháo đường (ĐT ) hay còn gọi l tiểu đường l một nhóm bệnh rối loạn chuyển hóa cacbonhidrat khi hoocmon insulin của tụy bị thiếu hay giảm tác động trong cơ thể, biểu hiện bằng mức đường trong máu luôn cao Đái tháo đường với biểu hiện chung nhất l tăng glucose huyết do tế bào  của đảo tụy Langerhan bị phá hủy mất khả năng sản xuất insulin (đái tháo đường type I) hoặc do rối loạn trao đổi lipid- glucid... hiểu tác dụng của các loại thảo dược sẵn có trong tự nhiên 3 Nội dung nghiên cứu - Định tính, định l ợng và tách một số phân đoạn chứa hoạt chất thiên nhiên từ l cây Atisô - Nghiên cứu đặc tính hóa sinh của các phân đoạn dịch chiết từ l cây Atisô 4 Đối tƣợng và phạm vi nghiên cứu 4.1 Đối tƣợng nghiên cứu - Mẫu thực vật : L cây Atisô - Mẫu động vật : Chuột nhắt trắng chủng Swiss 4 tuần tuổi (14-16g)... xuất năng l ợng Đái tháo đường type I chiếm tỉ l khoảng 5-10% bệnh đái tháo đường thế giới + Đái tháo đường type II (đái tháo đường) : Được gọi l bệnh tiểu đường không phụ thuộc insulin Bệnh tiểu đường type II xuất hiện khi cơ thể không thể sản xuất đủ insulin hoặc cơ thể không đáp ứng với insulin như bình thường Đái tháo đường type I chiếm tỉ l khoảng 90% bệnh đái tháo đường trên thế giới Bệnh đái tháo. .. Cholesterol toàn phần (2,9 – 5,2 mmol /l) * Triglycerid (0,8 – 2,3 mmol /l) * HDL-c (0,90 – 1,50 mmol /l) * LDL-c (0,5 – 3,4 mmol /l) Rối loạn hoặc tăng nồng độ các thành phần lipid trong máu, hậu quả l sự tạo thành các mảng xơ vữa gây tắc mạch l m tăng nguy cơ biến chứng tim mạch và đột qụy Đồng thời tăng các biến chứng mạch máu khác, hậu quả nặng nề nhất l dẫn đến tử vong hoặc tàn phế gọi l rối loạn. .. tháo đường l hậu quả của béo phì và thừa cân quá mức Không chỉ mang tính chất l một bệnh mãn tính đái tháo đường còn kéo theo nhiều biến chứng nguy hiểm như: Đột quỵ, hôn mê, mù l a, suy thận, nhồi máu cơ tim, tai biến mạch máu não Bệnh đái tháo đường l hậu quả của tình trạng béo phì và thừa cân quá mức 18 1.4.3 Rối loạn trao đổi lipid Rối loạn lipid máu l tình trạng tăng cholesterol, triglycerides... lipid- glucid dẫn đến đối kháng insulin (đái tháo đường type II) 1.4.2 Phân loại Dựa vào sự phụ thuộc insulin trong máu của cơ thể người ta chia l m 2 loại đái tháo đường: + Đái tháo đường type I (đái đường) : Được gọi l bệnh tiểu đường phụ thuộc insulin, l một tình trạng mãn tính, trong đó tuyến tụy sản xuất insulin ít hoặc không có, nội tiết tố cần thiết để cho phép đường (glucose) nhập vào tế bào... Keller-Killian: Chuẩn bị các dung dịch thuốc thử gồm dung dịch A: 0,5 ml dung dịch FeCl3 5% trong 50 ml acetic acid 10% Dung dịch B: 0,5 ml dung dịch FeCl3 5% trong 50 ml sunfuric acid đặc Cho cặn dịch chiết vào ống nghiệm, thêm 1ml dung dịch A vào l c nhẹ cho tan hết rồi nghiêng ống nghiệm cho từ từ dung dịch B vào Phản ứng dương tính khi xuất hiện vòng nâu đỏ giữa 2 l p chất l ng 2.2.3.5 Định tính các polyphenol... 500 mg /l Chuẩn bị cóng định l ợng, cho vào mỗi cóng 20 l mẫu hoặc dung dịch chuẩn + 1.58 ml nước + 100 l thuốc thử Folin-Ciocalteau + 300 l dung dịch Na2CO3 Cách đo với dịch nghiên cứu: tiến hành như trên nhưng thay 0.02 ml (20 l) dịch chuẩn bằng dịch nghiên cứu được pha loãng thích hợp sao cho số đo nằm trong đường chuẩn 25 2.2.5 Sắc ký l p mỏng Sắc kí l p mỏng (TLC- thin layer choromatography) l kĩ . tác dụng hạ đường huyết và khả năng chống rối loạn trao đổi lipid của dịch chiết từ l Atisô (Cynara scolymus L. ) trên mô hình chuột đái tháo đường thực nghiệm. 5. Những đóng góp của đề tài. PHẠM HÀ NỘI 2 KHOA SINH - KTNN ====== NGUYỄN THỊ CHI NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG HẠ ĐƢỜNG HUYẾT VÀ KHẢ NĂNG CHỐNG RỐI LOẠN TRAO ĐỔI LIPID CỦA DỊCH CHIẾT TỪ L ATISÔ (Cynara scolymus L. ). dừng l i ở mức độ ứng dụng chúng theo kinh nghiệm dân gian. Chính vì vậy, tôi chọn đề tài: Nghiên cứu tác dụng hạ đường huyết và khả năng chống rối loạn trao đổi lipid của dịch chiết từ l Atisô