khảo sát tình hình nhiễm leptospira trên chó tại thành phố cần thơ

DANH SÁCH HÌNH 2 Các mức độ ngưng kết trong phản ứng vi ngưng kết MAT 24 DANH SÁCH BIỂU ĐỒ 1 So sánh tỷ lệ nhiễm Leptospira trên chó theo các lứa tuổi 27 2 So sánh tỷ lệ nhiễm Leptospi

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG

BỘ MÔN THÚ Y

************************

PHẠM HẬU GIANG

KHẢO SÁT TÌNH HÌNH NHIỄM LEPTOSPIRA

TRÊN CHÓ TẠI THÀNH PHỐ CẦN THƠ

LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP NGÀNH THÚ Y

Cần Thơ, 2014

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG

KHẢO SÁT TÌNH HÌNH NHIỄM LEPTOSPIRA

TRÊN CHÓ TẠI THÀNH PHỐ CẦN THƠ

MSSV: 3102943 Ngành Thú Y

Cần Thơ, 2014

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG

BỘ MÔN THÚ Y

Đề tài: “Khảo sát tình hình nhiễm Leptospira trên chó tại Thành phố

Cần Thơ” do sinh viên Phạm Hậu Giang thực hiện tại Phòng thí nghiệm vi

trùng - Bộ môn Thú Y và Bệnh xá Thú Y Trường Đại học Cần Thơ từ tháng 8 đến tháng 11 năm 2014

Cần Thơ, ngày…tháng…năm 2015 Cần Thơ, ngày…tháng…năm 2015

Duyệt Bộ Môn Duyệt Giáo viên hướng dẫn

Nguyễn Thị Bé Mười

Cần Thơ, ngày….tháng…năm 2015

Duyệt Khoa Nông Nghiệp & SHƯD

LỜI CẢM ƠN

Hoàn thành luận văn, tôi xin chân thành cảm ơn

Cô Nguyễn Thị Bé Mười đã tận tình động viên, hướng dẫn và giúp đỡ

em trong suốt quá trình làm luận văn

Cố vấn học tập Thầy Lê Hoàng Sĩ đã tận tình hướng dẫn em trong suốt khóa học

Quí Thầy, Cô Bộ môn Thú Y và Bộ môn Chăn Nuôi Khoa Nông Nghiệp

và Sinh học Ứng dụng, cùng các Thầy, Cô Trường Đại học Cần Thơ đã hết lòng giảng dạy em trong 5 năm qua

Các anh, chị tại Bệnh xá Thú Y Trường Đại học Cần Thơ, cùng các bạn lớp Thú Y K36 đã luôn ủng hộ và giúp đỡ

Cần Thơ, ngày…tháng…năm 2015

Phạm Hậu Giang

MỤC LỤC

TRANG DUYỆT i

LỜI CẢM ƠN ii

DANH SÁCH CHỮ VIẾT TẮT v

DANH SÁCH HÌNH vi

DANH SÁCH BIỂU ĐỒ vi

DANH SÁCH SƠ ĐỒ vi

DANH SÁCH BẢNG vii

TÓM LƯỢC viii

CHƯƠNG 1: ĐẶT VẤN ĐỀ 1

CHƯƠNG 2: LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 2

2.1 Tình hình nghiên cứu bệnh 2

2.1.1 Tình hình nghiên cứu trên thế giới 2

2.1.2 Tình hình nghiên cứu trong nước 3

2.2 Căn bệnh học 6

2.2.1 Phân loại 6

2.2.2 Đặc điểm hình thái và tính chất bắt màu 6

2.2.3 Đặc tính nuôi cấy 7

2.2.4 Sức đề kháng 7

2.2.5 Cấu tạo kháng nguyên 8

2.2.6 Một số nhóm Leptospira gây bệnh 8

2.3 Dịch tễ học 10

2.3.1 Loài mắc bệnh 10

2.3.2 Nguồn bệnh 10

2.3.3 Phương thức truyền bệnh 10

2.3.4 Cơ chế gây bệnh 11

2.4 Triệu chứng 12

2.4.1 Trên chó 12

2.4.2 Trên người 12

2.4.3 Trên heo 13

2.5 Bệnh tích 13

2.6 Chẩn đoán 13

2.6.1 Chẩn đoán vi khuẩn học 13

2.6.2 Chẩn đoán huyết thanh học 15

2.7 Phòng và điều trị bệnh Leptospira 16

2.7.1 Phòng bệnh 16

2.7.2 Điều trị 18

CHƯƠNG 3: NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM 19

3.1 Nội dung 19

3.2 Thời gian và địa điểm 19

3.3 Phương tiện tiến hành thí nghiệm 19

3.3.1 Dụng cụ, thiết bị và hóa chất thí nghiệm 19

3.3.2 Nguyên liệu dùng trong thí nghiệm 19

3.4 Phương pháp tiến hành thí nghiệm 21

3.4.1 Phương pháp lấy mẫu 21

3.4.2 Kiểm tra kháng nguyên 21

3.4.3 Thực hiện phản ứng 21

CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ THẢO LUẬN 26

4.1 Tỷ lệ nhiễm Leptospira trên chó tại Thành phố Cần Thơ 26

4.2 Tỷ lệ nhiễm Leptospira trên chó theo nhóm tuổi 27

4.4 Tỷ lệ nhiễm Leptospira trên chó theo giới tính 29

4.5 Tỷ lệ các serovar Leptospira trong số mẫu dương tính và hiệu giá kháng thể Leptospira của chó 31

4.6 Kết quả tỷ lệ nhiễm ghép giữa các chủng Leptospira trên chó 33

4.7 Phân bố mẫu huyết thanh dương tính theo hiệu giá kháng thể 33

CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 35

5.1 Kết luận 35

5.2 Đề nghị 35

TÀI LIỆU THAM KHẢO 36

PHỤ CHƯƠNG 38

EMJH: Ellinghausen McCullough Johnson Harris

ELISA: Ezyme Linred Immuno Sorbet Assay

MAT: Microscopic Agglutination Test

TT: Thể trọng

ml: Milliliter

µm: Micrometer

DANH SÁCH HÌNH

2 Các mức độ ngưng kết trong phản ứng vi ngưng kết (MAT) 24

DANH SÁCH BIỂU ĐỒ

1 So sánh tỷ lệ nhiễm Leptospira trên chó theo các lứa tuổi 27

2 So sánh tỷ lệ nhiễm Leptospira trên chó theo phương thức

DANH SÁCH SƠ ĐỒ

3 Sơ đồ nâng hiệu giá pha loãng huyết thanh 25

DANH SÁCH BẢNG

1 Một số vaccine phòng bệnh Leptospira trên chó 17

2 Danh mục 24 serovar Leptospira sử dụng trong phản ứng

3 Tỷ lệ nhiễm Leptospira trên chó tại Thành phố Cần Thơ 26

5 Tỷ lệ nhiễm Leptospira trên chó theo phương thức nuôi 28

6 Tỷ lệ nhiễm Leptospira trên chó theo giới tính 29

7 Tỷ lệ các serovar Leptospira trong số mẫu dương tính và

hiệu giá kháng thể Leptospira của chó 31

8 Kết quả khảo sát sự nhiễm ghép giữa các chủng

Leptospira trên chó 33

9 Phân bố mẫu huyết thanh dương tính theo hiệu giá kháng

thể

33

TÓM LƯỢC

Đề tài “Khảo sát tình hình nhiễm Leptospira trên chó tại Thành phố Cần

Thơ” được thực hiện từ tháng 8 đến tháng 11 năm 2014 Việc khảo sát bệnh

Leptospira trên chó được ghi nhận trên 135 chó Tình hình nhiễm Leptospira

trên chó được xác định bằng phương pháp vi ngưng kết (MAT) với 24 chủng

kháng nguyên sống Leptospira interrogans trên 135 mẫu huyết thanh chó thu

thập được từ các hộ dân thuộc khu vực Thành phố Cần Thơ Kết quả xét nghiệm bằng phản ứng vi ngưng kết cho thấy 20,00% (27/135) chó có kháng

thể dương tính với một hoặc nhiều chủng Leptospira Tỷ lệ nhiễm Leptospira

trên chó theo giống: chó ta 18,52% (15/135) mẫu huyết thanh và giống chó ngoại 22,22% (12/135) mẫu huyết thanh có kháng thể dương tính với

Leptospira Tuổi có tỷ lệ nhiễm cao nhất ở nhóm >6 năm tuổi (24,00%), kế

đến là ở nhóm 1 - 6 năm tuổi (19,78%) và thấp nhất là nhóm <1 năm tuổi (15,79%) Theo phương thức nuôi, tỷ lệ nhiễm ở chó nuôi thả là 31,03% và nuôi nhốt là 11,69%

Trong 24 chủng Leptospira, chó dương tính với 18 chủng Leptospira, chủng nhiễm cao là L hustbridge (40,74%), L icterohaemorrhagiae (25,93%), L copenhageni (14,84%), L gryppotyphosa (14,84%), thấp nhất là

L bataviae, L canicola, L hebdomadis, L panama, L hardjo và L saxkoebing (3,70%) Chó nhiễm ghép 2 chủng 14,81%, 3 chủng 11,11%, chó nhiễm ghép

4 chủng 3,7%, 5 chủng 3,7% và 6 chủng là 3,7% Hiệu giá ngưng kết từ 1/200

đến 1/1800

CHƯƠNG 1: ĐẶT VẤN ĐỀ

Chó là loài vật rất thông minh và gần gũi với con người Chúng rất trung thành và được con người nuôi từ lâu đời Với sự phát triển của kinh tế đất nước, đời sống của người dân ngày càng được nâng cao nên việc nuôi chó cũng ngày càng nhiều với sự đa dạng về giống, nguồn gốc

Cùng với sự gia tăng số lượng chó là sự gia tăng về tỷ lệ mắc các bệnh

truyền nhiễm, mà trong đó có Leptospirosis Leptospirosis là một bệnh truyền nhiễm do nhiều serovar của vi khuẩn Leptospira interrogans gây ra ở nhiều

loài động vật và con người Bệnh có thể lây truyền trực tiếp từ vật bệnh sang vật khỏe hoặc qua vật trung gian mang mầm bệnh Bệnh có những biểu hiện lâm sàng đa dạng do vi khuẩn gây bệnh có thể gây tổn thương ở nhiều cơ quan, đặc biệt là gan và thận, gây ra những biểu hiện đặc trưng như sốt, vàng

da, đi tiểu ra máu,…

Leptospirosis tuy không lây lan mạnh và làm chết nhiều chó như Canine Parvovirus nhưng lại có khả năng lây truyền cho người, đặc biệt là với chủ

CHƯƠNG 2: LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 2.1 Tình hình nghiên cứu bệnh

2.1.1 Tình hình nghiên cứu trên thế giới

Năm 1800, bệnh được ghi nhận đầu tiên ở thung lũng sông Nill, dựa vào triệu chứng hoàng đản, xuất huyết

Năm 1950, bệnh được phát hiện trên chó tại Stuttgart (Đức) gọi là bệnh thương hàn chó, về sau gọi là bệnh Stuttgart

Năm 1886, Mathieu và Weil cùng một lúc mô tả một bệnh với các triệu chứng hoàng đản, sốt lập lại nhiều ngày

Martin và Petit (1916), đã phân lập được chủng gây bệnh đầu tiên ở Pháp

và sau đó một năm đặt ra nguyên tắc phản ứng vi ngưng kết để chẩn đoán bệnh về mặt huyết thanh học Cũng vào năm 1916, Y.I Do và R Inada đã

phân lập được Leptospira gây bệnh cho người ở Nhật Bản Đến năm 1917,

Noguchi đã tìm thấy xoắn khuẩn trong thận và nước tiểu ở chuột, sau đó ông

đã đề nghị đặt tên cho căn bệnh Leptospira vào năm 1918

Cũng năm 1918, Tarrasor đã phân lập được loài L gryppotyphosa ở bệnh

nhân có triệu chứng viêm màng não ở Liên Xô, Utlenhut và Frome (1918)

phát hiện loài L icterohaemorrhagiae

Nikonxki, Dexiatop và Mactrenko (1936) đã phân lập được mầm bệnh ở trâu bò và sau đó tìm thấy ở nhiều loài động vật khác

Tùy theo điều kiện sinh thái từng vùng, từng nước, tùy theo tập quán chăn nuôi, điều kiện vệ sinh và các loại thú hoang mà các chủng gây bệnh cho các động vật khác nhau theo tỷ lệ nhất định

Năm 1980, theo Milner et al., (Úc) vào những năm 70 của thế kỷ 20, chủng gây bệnh chủ yếu cho bò là L ponama (16%), nhưng sau đó là L

hardjo (34%) đã trở nên phổ biến hơn và về sau hai chủng này đều tồn tại

Adrew (1992) cho rằng bò ở nước này có tỷ lệ huyết thanh dương tính với

Leptospira là 86%, ở gia súc bị bệnh do Leptospira gây sẩy thai 30% và chết

5%, ảnh hưởng đến sức khỏe của 40% cư dân nước Úc

Alvarez Leonardo et al., (2011) thực hiện một nghiên cứu dịch tễ học cắt ngang về bệnh Leptospira trên 70 chó ở Cienaga de Oro, Cordoba (Colombia)

Bằng phản ứng MAT, kết quả có 33/70 (47,14%) con chó dương tính với

Leptospira Serovar có tỷ lệ xuất hiện cao nhất là L gryppotyphosa (37,14%),

tiếp theo là L icterohaemorrhaegiae (34,29%), L pomona (25,71%), 10,01%

nhiễm với 1 serovar duy nhất, 5,72% nhiễm 2 serovar, 4,24% nhiễm với 3 serovar và 27,17% nhiễm với 4 serovar hoặc nhiều hơn

Solomon Dhliwayo et al., (2012) điều tra về tình hình nhiễm Leptospira

trên chó ở Harare thuộc Zimbabwe, Mỹ Kết quả xét nghiệm cho thấy 15,6%

mẫu huyết thanh dương tính với Leptospira (39/250 mẫu huyết thanh) Chó ở thành thị có tỷ lệ bệnh Leptospira (25%) cao hơn chó ở nông thôn (11,2%) Không có sự khác biệt đáng kể về tỷ lệ dương tính với Leptospira giữa 5 khu

vực nông thôn và giới tính Nghiên cứu cũng cho thấy có sự liên quan giữa

Leptospirosis với các triệu chứng suy gan và thận

Năm 2013, một điều tra cắt ngang của Jo E B Halliday et al., về tình nhiễm Leptospirosis ở loài gặm nhấm ở Kibera - một khu ổ chuột gần Nairobi,

Kenya thuộc Châu Phi Kết quả của cuộc điều tra cho thấy tỷ lệ dương tính là

18,3%, trong đó chi Rattus (chuột cống) là 10,25% (4/39), chi Mus (chuột nhà)

là 20% (37/185)

Koizumi et al., (2013) thực hiện cuộc khảo sát huyết thanh học để giám sát sự lưu hành của Leptospira trên chó từ đó đánh giá được yếu tố nguy cơ

của bệnh này đối với con người, đặc biệt là khi căn bệnh nguy hiểm này đang

có mặt tại Nhật Bản Với 283 mẫu huyết thanh chó nghi ngờ được thu thập từ năm 2007 đến tháng 3 năm 2011 Kết quả 83 (29,3%) trường hợp dương tính

với Leptospira, trong đó chó đực chiếm 63,4% với tỷ lệ tử vong là 53,2% Các nhóm huyết thanh chủ yếu là hebdomadis (53,3%), tiếp theo là australis (16,7%) và autumnalis (16,7%) Leptospira interrogans phân lập từ 45 con chó của các nhóm huyết thanh: australis (16), autumnalis (6), canicola (1),

hebdomadis (21) và icterohaemorrhagiae (1) Tất cả các nhóm huyết thanh

này gây chết 57,1 % đến 100% những người bị nhiễm Từ xưa nhóm huyết

thanh canicola và icterohaemorrhagiae được xem là nhóm huyết thanh gây bệnh trên chó, bên cạnh đó nhóm hebdomadis đã trở thành nhóm huyết thanh

chủ yếu gây tử vong cao ở Nhật Bản

Calderón et al., (2014) điều tra về tình hình nhiễm Leptospira ở lợn,

chó, chuột, con người và môi trường nước ở Cordoba - một khu vực của vùng nhiệt đới Colombia, kết quả cho thấy tỷ lệ nhiễm ở lợn là 55,9%, ở chó

là 35,2%, ở người là 75,8%

2.1.2 Tình hình nghiên cứu trong nước

Năm 1931, Ragiot và Souchrd lần đầu tiên phát hiện mầm bệnh trên

người Sau đó, Vaucel (1934) cũng đã phát hiện Leptospirosis với các triệu

chứng của bệnh Weil’s Đến năm 1937, Vaucel đã phân lập được mầm bệnh ở

Hà Nội, Hải Phòng, Tuyên Quang, Phú Thọ

Đào Trọng Đạt và ctv (1970) thuộc viện Thú y đã xét nghiệm 3.880 mẫu

huyết thanh heo ở 19 điểm thuộc 12 tỉnh miền Bắc có kết quả dương tính là

27,5%

Viện Thú Y Việt Nam (1972) đã phát hiện bò ở Hà Nội và các vùng phụ

cận nhiễm Leptpspira (L) với nhiều chủng như: L icterohaemorrhagiae,

L australis, L pomona, L canicola

Viện Thú Y (1978) đã điều tra tại một số trại chăn nuôi ở các tỉnh Quảng

Ninh, Yên Bái, Lào Cai, Hà Bắc, kết quả cho thấy trâu, bò, heo, chó và công

nhân ở các trại này đều có phản ứng dương tính với Leptospira, trong đó bò

38%, trâu 0,1%, heo 22,9%, chó 26,47% và với công nhân chăn nuôi tỷ lệ

dương tính là 56%

Năm 1984, Vũ Đình Hưng và ctv đã nghiên cứu một số ổ dịch

Leptospira điển hình ở người và tìm hiểu sự liên quan với gia súc ở địa

phương quanh một trại khai hoang thuộc Hoàng Liên Sơn cho thấy 75 người

mắc bệnh với triệu chứng điển hình, bằng phản ứng huyết thanh học đã phát

hiện 63,1% số người có kháng thể chống Leptospira với các chủng là

L gryppotyphosa, L autumnalis Các tác giả đã phân lập được hai chủng

Leptospira từ người bệnh và việc gây nhiễm bệnh cho chuột cũng cho kết quả

cao, đồng thời còn phát hiện 42,7% ở người, 50% ở heo, 70% ở bò và 10% ở

chuột bị nhiễm bệnh ở khu vực xung quanh xảy ra ổ dịch Các chủng được

phát hiện là L canicola, L autumnalis, L gryppotyphosa, L hebdomadis,

L mitis, L bataviae Cũng năm 1984, Phùng Quốc Chương điều tra trên heo

tại ĐakLak với tỷ lệ nhiễm là 9,2%

Sofia Boqvist (1998) xét nghiệm 444 mẫu huyết thanh heo nái tại 6 tỉnh

ở Đồng bằng sông Cửu Long cho thấy tỷ lệ nhiễm bình quân ở Cần Thơ là

64,92%, trong đó heo nuôi ở các trại là 76,47%, heo nuôi hộ gia đình là

57,14%

Lê Thanh Hải và ctv (1988, 1989) nghiên cứu về tình hình nhiễm

Leptospira ở đàn chó nghiệp vụ trong các trại giam đã công bố: trại V21 có

73,3% chó nhiễm bệnh, trại T24 có 66,2% chó nhiễm bệnh Chó ở cơ sở của

công an Hải Phòng nhiễm 27%, chủ yếu là chó đực trên 1 tuổi Chó nuôi tại

các cơ sở Nam Bộ nhiễm 88% so với toàn cầu

Theo Vũ Đạt và Lê Huỳnh Thanh Phương (1999), tỷ lệ nhiễm Leptospira

của chó ở các địa phương vùng phụ cận Hà Nội 23,19% với các serovar là

L bataviae, L canicola, L grippotyphosa và L icterohaemorrhagiae Tỷ lệ

nhiễm Leptospira của các giống chó ngoại cao: chó Ý 29,03%, chó Đức

30,55% và chó Nga 35,90% Giống chó Việt Nam chỉ nhiễm 17,50% Tỷ lệ nhiễm của chó đực 27,66% và chó cái 18,50%

Năm 2001, Hoàng Mạnh Lâm và ctv nghiên cứu xác định một số serovar

Leptospira trên bò và heo tại ĐakLak, kết quả kiểm tra 257 mẫu huyết thanh

bò và 537 mẫu huyết thanh heo cho thấy ở bò là 3,8%, heo là 3,53% với 14

serovar Leptospira trên bò và 15 serovar Leptospira trên heo Trong số các

serovar đã xác định có 4 serovar ở bò từ trước chưa được công bố ở Việt Nam

là: L panama, L pyrogens, L semranga và L tasaaovi và 4 serovar chưa được công bố ở heo là L djasiman, L jivanica, L panama, L semaranga

Sau đó năm 2002 cũng tại ĐakLak, Hoàng Mạnh Lâm và ctv qua kiểm

tra xác định một số serovar Leptospira ở chó, chuột và người kết quả cho thấy

ở chuột tỷ lệ nhiễm là 21,1% (151/714 mẫu huyết thanh) với 4 serovar mới

công bố lần đầu ở Việt Nam là L cellendoni, L panama, L sejroe và L

semaranga Ở chó là 19,8% (54/273 mẫu huyết thanh) với 3 serovar mới phát

hiện là L pyrogenes, L mini và L javanica Ở người là 19,8% (74/411 mẫu huyết thanh) với 4 serovar mới phát hiện là L panama, L sejroe, L tarassovi

và L semaranga

Võ Thành Thìn và ctv (2012) đã khảo sát tình hình nhiễm Leptospira

trên đàn lợn nái tại Khánh Hòa với tỷ lệ dương tính là 17,7% Tỷ lệ này phụ thuộc vào điều kiện chăn nuôi và mùa vụ tại địa phương Có sự lưu hành của

10 serovar Leptospira trên đàn lợn, trong đó, các serovar chiếm ưu thế là L

pomona (51,2%), L panama (19,5%), L icterohaemorrhagiae (14,6%), L autumnalis (12,2%)

Lý Thị Liên Khai (2012), điều tra về tình hình nhiễm khuẩn Leptospira

trên đàn bò sữa, chó và chuột tại Công ty cổ phần thủy sản sông Hậu, kết quả

cho thấy tỷ nhiễm Leptospira ở chuột là 55,55%, kế đến là chó 40,46% và đàn

bò sữa là 22,61%

Năm 2013, Nguyễn Thị Bé Mười nghiên cứu bệnh do Leptospira trên

chó tại Thành phố Cần Thơ, kết quả kiểm tra cho thấy tỷ lệ chó bị nhiễm

Leptospira interrogans là 21,33% (64/300)

Giống Leptospira được phân chia thành hai loài:

- Leptospira interrogans là loài gây bệnh cho người và gia súc

- Leptospira biflexa thường sống hoại sinh trong nước và không

gây bệnh (Watch, Binger và Noguchi, 1918)

2.2.2 Đặc điểm hình thái và tính chất bắt màu

Hiện nay, người ta đã phát hiện được 23 nhóm huyết thanh với 260

serovar Leptospira gây bệnh Các chủng xoắn khuẩn này có hình thái tương tự

nhau và được cấu tạo gồm nhiều vòng xoắn nhỏ xếp (10 - 20 vòng) sát vào nhau, rất khó phân biệt dưới kính hiển vi thường Chiều dài trung bình 4 - 20µm, rộng 0,1 - 0,2µm, đầu uốn cong tựa hình móc câu hoặc hình chữ C hay

chữ S Chuyển động của Leptospira nhờ một bộ phận cơ động gồm một trục ở

giữa và thân xoắn như lò xo quanh trục Ngoài cùng có một lớp vỏ mềm co giãn được chứa nhiều kháng nguyên, kế đến là màng bao bọc tế bào chất bao gồm 3 - 5 lớp, ở giữa là nhân không có màng ngăn cách với nguyên sinh chất đảm nhận chức năng di truyền, nó có thể xoay dọc, xoay ngang, xoay tròn (Nguyễn Vĩnh Phước, 1977) Do cấu trúc đặc biệt, kích thước khá nhỏ, sự di động uyển chuyển và khả năng co giãn dễ dàng như vậy nên chúng có thể chui qua màng lọc có đường kính 0,1 - 0,45µm như da, niêm mạc của gia súc hoặc người hay qua vết xước để gây bệnh (Nguyễn Vĩnh Phước và ctv, 1978)

Leptospira khó bắt màu khi nhuộm bằng thuốc nhuộm màu anilin thông

thường Nhuộm bằng phương pháp giemsa xoắn khuẩn bắt màu đỏ tím và xem được dưới kính hiển vi thường Khi nhuộm bằng phương pháp mạ bạc

(Fontana tribondeau) Leptospira có màu đen Ngoài ra, còn có phương pháp

nhuộm Romanopxki, xoắn khuẩn bắt màu tím sau khi nhuộm

http://www.impe-qn.org

Hình 1 : Đặc điểm hình thái Leptospira

2.2.3 Đặc tính nuôi cấy

Leptospira là một vi khuẩn hiếu khí, rất khó nuôi cấy, nhiệt độ thích hợp

28 - 30oC, không mọc ở 13oC, pH thích hợp 7,2 - 7,4, mọc chậm trong các môi trường nuôi cấy vì vậy việc nuôi cấy có thể kéo dài hàng tháng (Trần Thanh Phong, 1998)

Người ta dùng nhiều môi trường giàu dưỡng chất để nuôi cấy như môi trường Tween - Albumine hay EMJH, môi trường Stuart

Leptospira có thể mọc được ở những môi trường nhân tạo thông thường

như môi trường Terkish, EMJH Môi trường EMJH gồm hai thành phần: môi trường cơ sở và môi trường làm giàu bằng albumine bò hoặc huyết thanh thỏ (Srivastava and Harbola, 1989) Môi trường EMJH có thêm 5-fluoro-uracile (100µg/ml) thường dùng làm môi trường tuyển lựa Các kháng sinh hoặc Sulfamide khác cũng có thể dùng được như Neoycine 300µg/ml, Kanamycine,

Rifamycine,… Ngoài ra, có thể cấy Leptospira vào màng niệu đệm phôi gà 10

ngày tuổi, sau khi cấy 7 ngày phôi gà bị chết, bệnh tích không điển hình (Prydie, 1968)

2.2.4 Sức đề kháng

Leptospira có sức đề kháng tương đối yếu với các yếu tố lý hóa Sự sấy

khô làm xoắn khuẩn chết nhanh Leptospira nhạy cảm với nhiệt độ cao, bị giết

chết ở nhiệt độ 56oC – 60oC trong 5 phút, nhưng lại chịu được nhiệt độ thấp ở

- 30oC Leptospira không chết, ở 4oC Leptospira có trong gan chuột lang có thể

sống được 26 ngày mà không giảm độc lực (Nguyễn Như Thanh, 2001) Trong nước tiểu của gia súc bị bệnh, ở nhiệt độ môi trường bình thường xoắn khuẩn tồn tại hàng tháng và lây truyền bệnh tốt

Trong môi trường ẩm ướt, đặc biệt ở các đầm lầy, ao hồ, sông suối, đồng

cỏ thoát nước kém, trong bùn lầy nước đọng, nhất là cống rãnh, kênh mương, ruộng đồng xoắn khuẩn có thể sống dai dẳng

Xoắn khuẩn nhạy cảm với pH acid, ở trong dạ dày chỉ 10 phút là chết,

môi trường acid pH<6,5 Leptospira không sống được, pH≥7 xoắn khuẩn tồn

tại vài tuần Tuy nhiên, nước hơi kiềm mà không bị pha loãng như trong rơm,

cỏ khô thì mầm bệnh chỉ sống được vài giờ (Davidson và Smith, 1936; Fuhner, 1950)

Dưới ánh sáng mặt trời chiếu trực tiếp, Leptospira bị chết trong vòng

30 - 120 phút, nhưng với tia tử ngoại sau 30 phút Leptospira vẫn còn hoạt

động, sau 50 phút giảm hoạt động, sau 2 giờ tự ngưng kết 50%, sau 3 giờ ngưng kết 100%, sau 4 giờ ngừng hoạt động hoàn toàn

Các chất sát trùng thông thường có thể diệt xoắn khuẩn nhanh chóng: acid phenic 0,5% trong 5 phút, formol 0,25% trong 5 phút, acid sunfu 0,05%

trong 10 phút, biclorua thủy ngân 1/2000 sau 10 - 15 phút Leptospira rất mẫn

cảm với muối, dung dịch muối 2,8% giết xoắn khuẩn trong vòng 15 phút

Kháng sinh penicillin có tác dụng rất tốt đối với Leptospira (Nguyễn Tiết

Liên và Nguyễn Thanh Bình, 1991)

2.2.5 Cấu tạo kháng nguyên

Năm 1956, Rothotein và Riatto chia cấu trúc kháng nguyên ra làm hai phần chính

Kháng nguyên P thuộc phần vỏ có cấu trúc là Lipopolysacharide giúp

phân biệt các nhóm Leptospira, là cơ sở phân loại xoắn khuẩn

Kháng nguyên S thuộc tế bào chất, thành phần cấu tạo là

Lipopolysacharide có tính chuyên biệt, dùng để nhận biết các Leptospira, đặc

trưng cho giống

Do sự khác nhau về cấu trúc kháng nguyên, người ta chia Leptospira

thành nhiều nhóm huyết thanh (Serogroup), mỗi nhóm huyết thanh có nhiều chủng huyết thanh (Serotype) Ngày nay, người ta chia mỗi nhóm huyết thanh thành nhiều serovar (Jonhson và Feine, 1984)

2.2.6 Một số nhóm Leptospira gây bệnh

Nhóm L canicola

L canicola lần đầu tiên phân lập được từ bò ở Israel vào năm 1955, sau

đó vào năm 1956 phân lập được mầm bệnh từ heo và chó ở Czechoslovakia,

Mỹ và Chi Lê (Chenukha, 1981) Nhóm L canicola gồm các serovar đại diện

là L canicola, L bafani, L benjamin, L broomi, L schueffneri và L kamituga

L canicola có thời gian tồn lưu ở heo ít nhất là 90 ngày và có thể sống

trong nước tiểu là 6 ngày (Michna, 1962) Điều kiện thuận lợi này giúp mầm bệnh khuếch tán và lây truyền dễ dàng giữa các loài gia súc

Nhóm L autumnalis

Kitemura năm 1918 đã phân lập được L autumnalis từ heo, sau đó phân

lập được từ bò tại Nhật năm 1953 (Cacciapuotti, 1981) Gồm các serovar là

L autumnalis, L bangkinang, L.butembo, L bim, L bungarica và L rachmati

Nhóm L icterohaemorrhagiae

L icterohaemorrhagiae được Do Y I và Inada R phân lập từ chuột năm

1915 Nhóm L icterohaemorrhagiae gồm: L copenhageni, L lai, L 017,

L mankarso, L nadambari, L wijinberg, L shiromizu và L shibaura (Krover

et al., 1988) Bằng phản ứng vi ngưng kết, L icterohaemorrhagiae còn được

tìm thấy trên nhiều loài gia súc như trâu, bò, heo, chó, dê, cừu (Hathaway, 1981)

Nhóm L pomona

L pomona lần đầu tiên phân lập từ heo ở Australia năm 1939, sau đó

phân lập từ bò, ngựa, dê Nhóm này bao gồm các serovar là L kennewicki,

L mozdok, L proechimys, L salinem và L tropica Động vật mang trùng là

loài gặm nhấm (Sebek và cộng sự, 1983) L pomona thường khu trú, sinh sản

ở thận và theo nước tiểu ra ngoài môi trường, góp phần phát tán mầm bệnh

Nhóm L grippotyphosa

Nhóm L grippotyphosa gây bệnh ở bò, dê, cừu, ngựa, kể cả người Gồm các serovar là L valbuzzi, L muelleri, L moskva và L canalzonae (Sebek and

Vlcek, 1990)

Tarasova đã phân lập được L grippotyphosa năm 1928, đó là một trong

những serovar gây bệnh chủ yếu ở vùng Trung và Đông Âu, ở Liên Xô năm

Lần đầu tiên Morissey phân lập được L australis ở bò năm 1934, sau đó

L australis cũng phân lập được ở bò tại Nhật vào các năm 1953, 1955 và năm

1960 (Waitkins, 1981)

2.3 Dịch tễ học

2.3.1 Loài mắc bệnh

Bệnh Leptospira là bệnh truyền nhiễm chung cho nhiều loài gia súc, thú

hoang dã và người Trong đó, loài gặm nhấm là ổ chứa xoắn khuẩn trong tự nhiên, chúng đóng vai trò quan trọng trong việc truyền bệnh và bài thải mầm bệnh ra môi trường Ở thú hoang hay loài gặm nhấm thường mang mầm bệnh

ở thể mang trùng hay ẩn tính (Nguyễn Vĩnh Phước, 1978)

Tỷ lệ mắc bệnh do Leptospira tùy thuộc vào các chủng gây bệnh, động

vật cảm thụ, điều kiện thổ nhưỡng, chế độ chăm sóc nuôi dưỡng, vệ sinh chuồng trại và môi trường xung quanh Những trận dịch quan trọng được ghi nhận thường do lây truyền qua nước lũ, ô nhiễm mầm bệnh từ nước tiểu chuột

và động vật khác (Hồ Thị Việt Thu, 2012) Thú non cảm nhiễm mạnh hơn thú lớn, nhưng tỷ lệ cảm nhiễm ớ thú lớn (ví dụ: heo nọc, nái sinh sản, ) thường cao hơn do thời gian sống lâu hơn, cơ hội tiếp xúc với mầm bệnh nhiều hơn

Ở người, bệnh thường gặp trên cán bộ lâm nghiệp, công nhân chăn nuôi, đặc biệt là cán bộ thú y làm công tác chẩn đoán xét nghiệm

2.3.2 Nguồn bệnh

Các loài gia súc bệnh như chó, heo, bò, đặc biệt loài gặm nhấm là

nguồn bài thải xoắn khuẩn trong tự nhiên Ở nước ta Rattus norvegicus mang

Leptospira chủ yếu là L bataviae (Nguyễn Như Thanh, Nguyễn Bá Hiên, Trần

Thị Lan Phương, 1997)

Gia súc mang trùng không mang mầm bệnh suốt đời như loài gặm nhấm nên mầm bệnh thải ra ngoài lúc có lúc không Gia súc mang xoắn khuẩn sau khi lành bệnh ở thể ẩn, thời gian mang trùng và mức độ bài thải qua nước tiểu thay đổi tùy theo loài mang xoắn khuẩn và chủng gây bệnh Khi ra ngoài môi trường, xoắn khuẩn có mặt ở những khu vực nhiễm nước tiểu loài mang trùng, các ao, hồ, đầm lầy, đất bùn, đây là những nguồn lây truyền bệnh trong tự nhiên

Ở động vật khi mới nhiễm bệnh, trong máu có xoắn khuẩn nhưng khi bệnh kéo dài trên 15 ngày thì mầm bệnh khu trú ở bể thận, bàng quang, nước tiểu, gan, lách, hạch lâm ba,

2.3.3 Phương thức truyền bệnh

Ở động vật, bệnh lây chủ yếu qua đường tiêu hóa do thức ăn và nước

uống có nhiễm Leptospira từ nước tiểu của động vật mắc bệnh hoặc mang

trùng (Hồ Thị Việt Thu, 2012) Leptospirosis còn lây qua các chất tiết mắt,

mũi, miệng (Alson và Broom, 1958; Alexander, 1964)

Bệnh có thể truyền qua vết xay xát ngoài da hoặc niêm mạc do tiếp xúc với bùn, đất có nhiễm xoắn khuẩn hoặc tiếp xúc trực tiếp với nước tiểu, phủ tạng của gia súc bệnh

Ngoài ra, bệnh còn lây nhiễm qua côn trùng chích hút, qua nhau thai, lây nhiễm qua đường âm đạo Trong phòng thí nghiệm, khi bôi canh trùng xoắn khuẩn vào đùi chuột lang sau 20 phút trong máu chuột đã tìm thấy xoắn khuẩn, hay cho chuột lội trong nước nhiễm khuẩn, tiêm dưới da, phúc mạc, bắp thịt hay cho uống đều bị nhiễm

bệnh như L pomona, L grippotyphosa, L canicola,… có độc tố phá hủy hồng

cầu, do đó gia súc bị thiếu máu, vàng da, có huyết sắc tố trong nước tiểu Độc

tố còn gây tổn thương ở các mao quản gây xuất huyết, thủy thũng, hoại tử da

và niêm mạc Cuối thời kỳ bệnh, mầm bệnh vào thận, căn bệnh thường khu trú

ở niệu quản, có lúc được bài thải ra ngoài theo nước tiểu, gây viêm thận, hoại

tử Độc tố còn gây viêm gan, viêm màng não Ở thú cái mang thai, xoắn khuẩn gây sẩy thai

Thời gian nung bệnh từ 10 - 20 ngày Thời kỳ này dài hay ngắn còn tuỳ thuộc vào trạng thái cơ thể, điều kiện chăm sóc nuôi dưỡng, đường xâm nhập

và trạng thái cơ thể Sau khi khỏi bệnh con vật có miễn dịch nhưng chỉ có miễn dịch với chủng gây bệnh mà thôi

2.4 Triệu chứng

2.4.1 Trên chó

Thể xuất huyết: thường xảy ra trên chó trưởng thành

Bệnh xảy ra đột ngột Chó sốt cao (40,5oC - 41,5oC), bỏ ăn, có trường hợp sung huyết ở niêm mạc mắt Sang ngày thứ 2 nhiệt độ giảm xuống

37oC - 38oC, chó ủ rũ, khó thở, bỏ ăn, khát nước, có trường hợp nôn mửa

Đến ngày thứ 2 - 3 niêm mạc miệng sung huyết sau đó xuất huyết hoặc hoại tử, hơi thở có mùi hôi, đôi khi viêm họng khó nuốt Những ngày sau có hiện tượng run cơ bắp, đau vùng bụng khi nằm, hoặc khi sờ nắn nôn mửa ra máu, chảy máu ở mũi, con vật gầy nhanh, da khô, mắt lõm sâu, viêm kết mạc, táo bón, nước tiểu ít, màu vàng đôi khi phù mật, hạch cổ nổi rõ Bệnh tiến triển nặng dần, con vật bị hôn mê hoặc co giật và chết Tỷ lệ chết rất cao 65 -

95%, nếu qua khỏi thì thường viêm thận mạn (Binrbaum et al., 1998)

Thể vàng da: thường xuất hiện ở chó còn nhỏ

Bệnh tiến triển từ từ cho đến khi vàng da, cũng có khi bệnh phát ra đột ngột Chó bị bệnh lúc đầu thân nhiệt 39,5 - 40oC, khi xuất hiện vàng da thì thân nhiệt hạ xuống 36 - 36,5o

C

Ở thể vàng da, lúc đầu chó bệnh vẫn vui vẻ, nhưng khi bệnh tiến triển sẽ

có những biểu hiện mệt mỏi Giai đoạn cấp tính nghe phổi có tiếng ran, không

ho, cá biệt có chảy máu mũi Niêm mạc miệng màu vàng đậm hay vàng nhạt phụ thuộc vào thời gian và mức độ nặng nhẹ của bệnh Nhiều trường hợp nôn

ra máu, nước tiểu thường có màu vàng sẫm và lượng protein rất cao Thường

viêm kết mạc, đôi khi ngứa Thể vàng da thường do L icterohaemorrhagiae gây nên (Bishop et al., 1979)

2.4.2 Trên người

Thời gian ủ bệnh từ 3 đến 21 ngày (thường từ 3 - 14 ngày) Bệnh xảy ra với các triệu chứng rất đa dạng, tùy thuộc vào tuổi, sức đề kháng của cơ thể, chủng vi khuẩn cũng như số lượng vi khuẩn xâm nhập (Phạm Sỹ Lăng và Hoàng Văn Năm, 2012)

Người bệnh thường có biểu hiện theo hai giai đoạn:

Giai đoạn 1: sốt đột ngột >39oC, kéo dài trong vài ba ngày; sau đó có các triệu chứng giống như bị cúm Người bệnh mệt mỏi, đau đầu (>90% trường hợp), mắt có màu đỏ, đau cơ (đặc biệt cơ vùng lưng và bắp chân), buồn nôn,

2.4.3 Trên heo

Con vật sốt bất thường, ăn ít hoặc bỏ ăn, phù thũng ở đầu và hầu, nước tiểu vàng nhạt; niêm mạc, da có màu vàng

Heo nái đang mang thai bị nhiễm bệnh sẽ bị sẩy thai

Heo con theo mẹ nhiễm Leptospira sẽ bị thiếu máu; da nhợt nhạt, hơi

bở, màu nâu vàng Trên bề mặt thận có nhiều nốt hoại thử màu trắng Bệnh

tích vi thể tập trung chủ yếu ở gan bao gồm hoại tử tế bào gan, thâm nhiễm tế bào lympho và đơn nhân lớn, tế bào ống dẫn mật tăng sinh, hoại tử ống dẫn mật Ngoài ra, có thể quan sát thấy các vùng viêm ở thận (Phạm Sỹ Lăng và Hoàng Văn Năm, 2012) Lách có kích thước bình thường, đôi khi bị teo nhỏ,

- Sốt trong 10 ngày thì lấy nước tiểu

- Nếu con vật bị chết thì lấy những cơ quan như gan, thận, phổi, tim,

2.6.1.1 Kiểm tra bằng kính hiển vi tụ quang nền đen

Xem tươi mẫu máu và nước tiểu

Mẫu máu: Lấy 1ml máu trộn với 2ml dung dịch 1,5% citrat natri, trộn đều rồi để lắng 1 giờ, lấy phần dịch trong phía trên nhỏ lên lame đem quan sát

dưới kính hiển vi tụ quang nền đen

Mẫu nước tiểu: Ly tâm nước tiểu ở tốc độ 10.000 vòng/phút trong 10 phút; mô bào được nghiền thành huyễn dịch bệnh phẩm theo tỷ lệ 1/10 với BSA 1% Hút 1 giọt nhỏ lên phiến kính và soi dưới kính hiển vi tụ quanh nền

đen

Làm tiêu bản và nhuộm màu

Phương pháp miễn dịch huỳnh quang có thể phát hiện xoắn khuẩn trong nước tiểu, mô bào

Ngoài phương pháp trên còn có phương pháp nhuộm thấm bạc và immunoperoxidase được sử dụng để tìm xoắn khuẩn trong lát cắt mô bào của thận, gan và các cơ quan khác

2.6.1.2 Nuôi cấy vào môi trường thích hợp

Lấy bệnh phẩm đem cấy vào các môi trường như Terkich, Korthoff Để ở

28 - 30oC, sau vài ngày đem quan sát dưới kính hiển vi tụ quang nền đen

2.6.1.3 Tiêm truyền cho động vật thí nghiệm

Sử dụng thí nghiệm là chuột nhảy, chuột Hamster hoặc chuột lang non, không sử dụng chuột trên 30gram vì ít nhiều chúng đã cảm nhiễm với

Leptospira trong tự nhiên

Tiêm vào xoang bụng 0,5 - 1ml nước tiểu đã trung hòa, máu đã được chống đông hoặc huyễn dịch bệnh phẩm 1/10 pha trong EMJH hoặc BSA 1% Khi nhiệt độ cơ thể tăng hoặc tại thời điểm 5, 8, 10 và 14 ngày sau khi tiêm, tiến hành lấy máu tim rồi nuôi cấy 2 - 3 giọt máu trong các môi trường nuôi xoắn khuẩn Nếu động vật nuôi thí nghiệm còn sống sau 21 ngày, tiến hành gây chết nhân tạo và lấy máu làm phản ứng huyết thanh học (Phạm Sỹ Lăng

và Hoàng Văn Năm, 2012)