khảo sát tình hình nhiễm leptospira trên chuột ở một số địa điểm tại thành phố cần thơ

DANH SÁCH HÌNH Hình 1 Hình thái Leptospira dưới kính hiển vi điện tử 7 Hình 2 Sự truyền lây của Leptospirosis 12 Hình 3 Các mức độ ngưng kết trong phản ứng vi ngưng kết MAT 23 DANH SÁC

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG

BỘ MÔN THÚ Y

************************

VÕ THỊ PHƯỢNG HẰNG

KHẢO SÁT TÌNH HÌNH NHIỄM LEPTOSPIRA

TRÊN CHUỘT Ở MỘT SỐ ĐỊA ĐIỂM

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG

KHẢO SÁT TÌNH HÌNH NHIỄM LEPTOSPIRA

TRÊN CHUỘT Ở MỘT SỐ ĐỊA ĐIỂM

TẠI THÀNH PHỐ CẦN THƠ

MSSV: 3102945 Ngành Thú Y

Cần Thơ, 2015

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG

BỘ MÔN THÚ Y

Đề tài: “Khảo sát tình hình nhiễm Leptospira trên chuột ở một số địa

điểm tại Thành phố Cần Thơ” do sinh viên Võ Thị Phượng Hằng thực hiện

tại Phòng thí nghiệm vi sinh và Bệnh xá Thú Y, Bộ môn Thú Y, Khoa Nông Nghiệp & Sinh Học Ứng Dụng, Trường Đại học Cần Thơ từ tháng 08/2014 đến tháng 11/2014

Cần Thơ, ngày…tháng…năm 2015 Cần Thơ, ngày…tháng…năm 2015

Nguyễn Thị Bé Mười

Cần Thơ, ngày…tháng…năm 2015

Duyệt Khoa Nông Nghiệp & SHƯD

ii

LỜI CẢM ƠN

Qua 5 năm học tập và rèn luyện dưới mái trường Đại học Cần Thơ Các

thầy, cô là những người đã dành bao tâm huyết cho sự nghiệp trồng người, đã

trang bị những hành trang quý giá cho chúng tôi bước vào đời Nhờ sự nhiệt

tình chỉ dạy của các thầy, các cô; cùng với sự cố gắng phấn đấu không ngừng

của bản thân, hôm nay tôi đã hoàn thành luận văn tốt nghiệp

Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành nhất đến cha, mẹ, người đã nuôi

dạy tôi nên người Và sự kính trọng sâu sắc nhất đến các thầy các cô, người đã

giúp tôi vững bước vào đời bằng những bài học quý giá

Xin chân thành biết ơn:

Trường Đại học Cần Thơ đã tạo nhiều điều kiện học tập, rèn luyện bổ ích

cho tôi trong suốt 5 năm qua

Thầy Lê Hoàng Sĩ đã làm cố vấn cho chúng tôi trong suốt khóa học và đã

tận tình chỉ dạy tôi rất nhiều

Cô Nguyễn Thị Bé Mười, người đã hết lòng chỉ bảo, giúp đỡ, động viên

tôi hoàn thành luận văn

Quý thầy, cô Bộ môn Thú Y, Bộ Môn Chăn Nuôi đã tận tình giảng dạy,

giúp đỡ tôi trong thời gian học tập

Cần Thơ, ngày…tháng…năm 2015

Võ Thị Phượng Hằng

MỤC LỤC

TRANG DUYỆT i

LỜI CẢM ƠN ii

DANH SÁCH CHỮ VIẾT TẮT v

DANH SÁCH BẢNG vi

DANH SÁCH HÌNH vii

DANH SÁCH SƠ ĐỒ, BIỂU ĐỒ vii

TÓM LƯỢC viii

CHƯƠNG 1: ĐẶT VẤN ĐỀ 1

CHƯƠNG 2: LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 2

2.1 Tình hình nghiên cứu bệnh trong và ngoài nước 2

2.1.1 Tình hình nghiên cứu trong nước 2

2.1.2 Tình hình nghiên cứu ngoài nước 4

2.2 Căn bệnh học 6

2.2.1 Phân loại 6

2.2.2 Đặc điểm hình thái 6

2.2.3 Tính chất bắt màu 7

2.2.4 Đặc tính nuôi cấy 7

2.2.5 Cấu tạo kháng nguyên 8

2.2.6 Sức đề kháng 8

2.2.7 Một số nhóm Leptospira gây bệnh 9

2.3 Truyền nhiễm học 10

2.3.1 Loài mắc bệnh 10

2.3.2 Nguồn lây truyền và chất chứa mầm bệnh 11

2.3.3 Đường lây truyền 11

2.3.4 Cơ chế gây bệnh 12

2.4 Triệu chứng và bệnh tích 12

2.4.1 Triệu chứng 12

2.4.2 Bệnh tích 14

2.5 Chẩn đoán 14

iv

2.5.1 Chẩn đoán dịch tễ học 14

2.5.2 Chẩn đoán phân biệt 14

2.5.3 Chẩn đoán phòng thí nghiệm 15

CHƯƠNG 3: NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM 18

3.1 Nội dung 18

3.2 Phương tiện tiến hành thí nghiệm 18

3.2.1 Địa điểm và thời gian 18

3.2.2 Thiết bị, dụng cụ và hóa chất 18

3.2.3 Nguyên liệu dùng trong thí nghiệm 19

3.3 Phương pháp tiến hành thí nghiệm 21

3.3.1 Phương pháp lấy mẫu 21

3.3.2 Thực hiện phản ứng định tính 21

3.3.3 Phản ứng định lượng 24

CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 25

4.1 Kết quả tỷ lệ nhiễm Leptospira trên chuột 25

4.2 Kết quả tỷ lệ dương tính với Leptospira theo loại chuột 26

4.3 Kết quả tỷ lệ nhiễm ghép giữa các chủng Leptospira trên chuột 28

4.4 Kết quả tỷ lệ nhiễm Leptospira trên chuột theo hiệu giá ngưng kết 28

CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 30

5.1 Kết luận 30

5.2 Đề nghị 30

TÀI LIỆU THAM KHẢO 31

PHỤ CHƯƠNG 33

DANH SÁCH CHỮ VIẾT TẮT

MAT: Microscopic Agglutination Test

EMJH: Ellinghausen McCullough Johnson Harris

ELISA: Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay

BSA: Bovine serum albumin

DANH SÁCH HÌNH

Hình 1 Hình thái Leptospira dưới kính hiển vi điện tử 7 Hình 2 Sự truyền lây của Leptospirosis 12 Hình 3 Các mức độ ngưng kết trong phản ứng vi

ngưng kết (MAT)

23

DANH SÁCH SƠ ĐỒ, BIỂU ĐỒ

Sơ đồ 1 Pha loãng huyết thanh 21

Sơ đồ 2 Nâng hiệu giá pha loãng huyết thanh 24 Biểu đồ 1 Tỷ lệ nhiễm Leptospira trên chuột 25 Biểu đồ 2 Tỷ lệ dương tính với Leptospira theo loại chuột 26

viii

TÓM LƯỢC

Chuột là động vật trung gian truyền một số bệnh cho người và vật nuôi,

trong đó Leptospirosis do xoắn khuẩn Leptospira gây nên Trong thời gian từ

tháng 8/2014 đến tháng 11/2014, bằng phản ứng vi ngưng kết (Microscopic Agglutination Test: MAT) chúng tôi đã xét nghiệm được 95 mẫu huyết thanh chuột, trong đó có 44 mẫu huyết thanh chuột cống được bẫy tại ký túc xá Trường Đại học Cần Thơ và tại nhà các hộ dân trên địa bàn Thành phố Cần Thơ, 51 mẫu huyết thanh chuột đồng ở các chợ xung quanh địa bàn thành phố

Cần Thơ Qua kết quả xét nghiệm cho thấy tỷ lệ nhiễm Leptospira trên chuột

là 28,42% (27/95), chuột cống nhiễm với tỷ lệ 38,64% (17/44) và chuột đồng

là 19,61% (10/51) Trong tổng số 27 mẫu huyết thanh dương tính với

Leptospira có 10 mẫu chuột cống nhiễm ghép với 2, 3, 4, 6 chủng Leptospira

và 4 mẫu chuột đồng nhiễm ghép với 2 chủng Leptospira Hiệu giá ngưng kết

ở mức 1/20 chiếm 74,07%, ở mức 1/40 chiếm 25,93% Từ những kết quả trên

cho thấy chuột ở thành phố Cần Thơ mang mầm bệnh Leptospira chiếm tỷ lệ

khá cao

CHƯƠNG 1: ĐẶT VẤN ĐỀ

Xoắn khuẩn Leptospira là nguyên nhân gây bệnh không những ở chó,

mèo, động vật hoang dã mà còn lây truyền cho người ảnh hưởng đến sức khỏe

cộng đồng Leptospirosis là bệnh chung giữa người và gia súc với các triệu

chứng như sốt cao, vàng da, tiểu ra huyết sắc tố, viêm gan, viêm thận, rối loạn tiêu hóa, rối loạn sinh sản,… Bệnh có thể lây truyền trực tiếp từ vật bệnh sang vật khỏe hoặc qua vật trung gian mang mầm bệnh Trong số các vật trung gian mang mầm bệnh, phải kể đến loài gặm nhấm, đặc biệt là chuột Chúng mang

và bài thải trực tiếp mầm bệnh ra môi trường ngoài qua nước tiểu

Chuột là loài gặm nhấm sinh sản rất nhanh, tồn tại ở mọi nơi trên thế giới

và rất khó để tiêu diệt chúng Chúng sinh sống và đào hang xung quanh các trại chăn nuôi, các lò mổ, khu dân cư,… nên dễ phát tán và truyền mầm bệnh sang các loài khác kể cả con người Chuột còn gây ô nhiễm môi trường và làm thiệt hại mùa màng của con người Cần Thơ là tỉnh nằm ở trung tâm của Đồng bằng sông Cửu Long, giữa mạng lưới sông ngòi kênh rạch, có điều kiện thuận lợi phát triển nông nghiệp, đặc biệt là trồng lúa Vì thế, tỉnh Cần Thơ được coi

là trung tâm lúa gạo của miền Tây Nam bộ Tuy nhiên, đó cũng là thuận lợi cho chuột phát triển, mặc dù đã có nhiều biện pháp phòng trừ chuột nhưng số lượng vẫn không giảm Do đó, mỗi năm người dân ngoài việc bị thiệt hại về cây lương thực, hoa màu mà còn phải đối mặc với nguy cơ bệnh tật do chuột gây ra

Xuất phát từ thực tế trên, được sự phân công của Bộ môn Thú Y, Khoa Nông Nghiệp và SHƯD Trường Đại học Cần Thơ, chúng tôi tiến hành đề tài

“Khảo sát tình hình nhiễm Leptospira trên chuột ở một số địa điểm tại

Thành phố Cần Thơ”

Mục tiêu đề tài: Xác định sự hiện diện của Leptospira trên đàn chuột

2

CHƯƠNG 2: LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU

2.1 Tình hình nghiên cứu bệnh trong và ngoài nước

2.1.1 Tình hình nghiên cứu trong nước

Năm 1931, Ragiot và Souchrd lần đầu tiên phát hiện mầm bệnh trên người Sau đó, bệnh được nghiên cứu nhiều trên gia súc kể cả người

Vaucel (1937) đã phân lập được mầm bệnh trên bò tại Tuyên Quang và

bằng phương pháp huyết thanh học đã phát hiện Leptospira trên heo, trâu,

người, chó, dê, chuột và một số động vật khác

De Lahudie (1952) xét nghiệm 150 mẫu huyết thanh heo và thấy có 23 mẫu tương ứng với 23 con dương tính

Năm 1970, Đào Trọng Đạt và ctv thuộc viện Thú Y đã xét nghiệm 3.880 mẫu huyết thanh heo ở 19 điểm thuộc 12 tỉnh miền Bắc có kết quả dương tính

là 27,5%

Viện Thú Y Việt Nam (1972) đã phát hiện bò ở Hà Nội và các vùng phụ

cận nhiễm Leptpspira (L) vời nhiều chủng như: L icterohaemorrhagiae, L australis, L pomona, L canicola

Vũ Đình Hưng và ctv (1977) điều tra cơ bản về Leptospirosis trên đàn bò

ngoại và đàn bò nội ở miền Bắc Việt Nam đã nhận xét: khu vực Hà Nội nhiễm cao nhất 42,9%, tiếp theo là Tây Bắc 35,05%, Ba Vì 26,1%, khu bốn cũ 24,8%

và Hải Phòng 23,9%

Năm 1978, Vũ Đình Hưng và Nguyễn Thị Diện điều tra tại một số trại chăn nuôi ở các tỉnh Quảng Ninh, Yên Bái, Lào Cai, Hà Bắc thấy tỷ lệ nhiễm

Leptospira trên bò 38%, trâu 0,1%, heo 22,9%, chó 26,47% và với công nhân

chăn nuôi tỷ lệ dương tính là 56%

Năm 1984, Vũ Đình Hưng và ctv đã nghiên cứu một số ổ dịch Leptospira

điển hình ở người và tìm hiểu sự liên quan với gia súc ở địa phương quanh một trại khai hoang thuộc Hoàng Liên Sơn cho thấy cường độ nhiễm bệnh cao, tốc

độ lây lan nhanh, chỉ trong vòng 5 ngày phát hoang, 75 người mắc bệnh với triệu chứng điển hình Bằng phản ứng huyết thanh học đã phát hiện 63,1% số

người có kháng thể chống Leptospira với các chủng là L gryppotyphosa,

L autumnalis Các tác giả đã phân lập được hai chủng Leptospira từ người

bệnh và việc gây nhiễm bệnh cho chuột cũng cho kết quả cao Đồng thời còn phát hiện 42,7% ở người, 50% ở heo, 70% ở bò và 10% ở chuột bị nhiễm bệnh

ở khu vực xung quanh xảy ra ổ dịch Các chủng được phát hiện là L canicola,

L autumnalis, L gryppotyphosa, L hebdomadis, L mitis, L bataviae

Lê Thanh Hải và ctv (1988, 1989) nghiên cứu về tình hình nhiễm

Leptospira ở đàn chó nghiệp vụ trong các trại giam đã công bố: trại V21 có

73,3% chó nhiễm bệnh, trại T24 có 66,2% chó nhiễm bệnh Chó ở cơ sở của

công an Hải Phòng nhiễm 27%, chủ yếu là chó đực trên 1 tuổi Chó nuôi tại

các cơ sở Nam Bộ nhiễm 88% so với toàn cầu

Năm 2001, Hoàng Mạnh Lâm và ctv nghiên cứu xác định một số serovar

Leptospira trên bò và heo tại ĐakLak, kết quả kiểm tra 257 mẫu huyết thanh

bò và 537 mẫu huyết thanh heo cho thấy ở bò là 3,8%, heo là 3,53% với 14

serovar Leptospira trên bò và 15 serovar Leptospira trên heo Trong số các

serovar đã xác định có 4 serovar ở bò từ trước chưa được công bố ở Việt Nam

là: L panama, L pyrogens, L semranga và L tasaaovi và 4 serovar chưa

được công bố ở heo là L djasiman, L jivanica, L panama, L semaranga

Hoàng Mạnh Lâm và ctv (2002), qua kiểm tra xác định một số serovar

Leptospira ở chó, chuột và người tại ĐakLak, kết quả cho thấy ở chuột tỷ lệ

nhiễm là 21,1% (151/714 mẫu huyết thanh) với 14 serovar Leptospira, trong

đó 4 chủng mới công bố lần đầu ở Việt Nam là L cellendoni, L panama,

L sejroe và L semaranga Ở chó là 19,8% (54/273 mẫu huyết thanh) với 6

serovar Leptospira, trong đó có 3 serovar mới phát hiện là L pyrogenes,

L mini và L javanica Ở người là 19,8% (74/411 mẫu huyết thanh) với 14

serovar Leptospira, trong đó có 4 serovar mới phát hiện là L panama,

L sejroe, L semaranga và L tarassovi

Theo Vũ Đình Hưng và ctv (2002), kiểm tra tình hình nhiễm Leptospira

ở chuột và người tại Hà Nội, qua xét nghiệm 420 mẫu huyết thanh chuột gồm

316 chuột cống, 104 chuột nhà và 63 mẫu huyết thanh người nghi nhiễm

Leptospira cho thấy tỷ lệ dương tính với Leptospira ở chuột rất cao 43,8%,

trong đó chuột cống 50,31%, chuột nhà 24,03% với 4 serovar phổ biến là

L bataviae, L autummalis, L canicola và L sejroe Ở người, trong số 63 mẫu

huyết thanh nghi nhiễm Leptospira có 32 mẫu dương tính

Nguyễn Ngọc Hải và ctv (2010), tìm hiểu về tình hình nhiễm Leptospira

trên chuột qua khảo sát 22 mẫu huyết thanh chuột được bẫy trong khuôn viên

ký túc xá và các khu vực lân cận Trường Đại học Nông Lâm thành phố Hồ

Chí Minh cho thấy tỷ lệ dương tính là 40,9% (9/22), tương ứng với các

serovar thường gây bệnh trên người và thú có vú là L icterohaemorrhagiae,

L copenhageni, L canicola, L pyrogens, L panama, L pomona,

L grippotyphosa, L castellonis và L saxkoebing Chuột nhiễm Leptospira

dạng mang trùng với hiệu giá kháng thể từ 1/40 đến 1/640

4

Năm 2012, Võ Thành Thìn và ctv bằng phản ứng vi ngưng kết trên phiến

kính (MAT) đã xác định được tỷ lệ nhiễm Leptospira trên đàn lợn nái tại

Khánh Hòa là 17,7% Tỷ lệ này phụ thuộc vào điều kiện chăn nuôi và mùa vụ

tại địa phương Có sự lưu hành của 10 serovar Leptospira trên đàn lợn, trong

đó, các serovar chiếm ưu thế là L pomona (51,2%), L panama (19,5%),

L icterohaemorrhagiae (14,6%), L autumnalis (12,2%)

Lý Thị Liên Khai (2012), điều tra về tình hình nhiễm khuẩn Leptospira

trên đàn bò sữa, chó và chuột tại công ty cổ phần thủy sản sông Hậu, kết quả

cho thấy tỷ lệ nhiễm Leptospira ở trại cao nhất tìm thấy trên chuột (55,55%),

kế đến là chó (40,46%) và đàn bò sữa (22,61%)

Nguyễn Thị Bé Mười (2013), nghiên cứu bệnh do Leptospira trên chó tại

thành phố Cần Thơ, kết quả kiểm tra 300 mẫu huyết thanh chó với 12 chủng

kháng nguyên sống đã cho thấy tỷ lệ chó bị nhiễm Leptospira interrogans là

21,33% (64/300)

2.1.2 Tình hình nghiên cứu ngoài nước

Năm 1800, bệnh được ghi nhận đầu tiên ở thung lũng sông Nill, dựa vào

triệu chứng hoàng đản, xuất huyết Năm 1886, Mathieu và Weil cùng một lúc

mô tả một bệnh với các triệu chứng hoàng đản, sốt lập lại nhiều ngày

Năm 1916, Martin và Petit đã phân lập được chủng gây bệnh đầu tiên ở

Pháp và sau đó một năm đặt ra nguyên tắc phản ứng vi ngưng kết để chẩn

đoán bệnh về mặt huyết thanh học

Y.I Do và R Inada đã phân lập được Leptospira gây bệnh cho người ở

Nhật Bản năm 1916 Đến năm 1917, Noguchi đã tìm thấy xoắn khuẩn trong

thận và nước tiểu ở chuột, sau đó ông đã đề nghị đặt tên cho căn bệnh

Leptospira vào năm 1918 Cùng năm, Tarrasor đã phân lập được loài

L gryppotyphosa ở bệnh nhân có triệu chứng viêm màng não ở Liên Xô,

Utlenhut và Frome (1918) phát hiện loài L icterohaemorrhagiae

Nikonxki, Dexiatop và Mactrenko (1936) đã phân lập được mầm bệnh ở

trâu bò và sau đó tìm thấy ở nhiều loài động vật khác Năm 1950, bệnh được

phát hiện trên chó tại Stuttgart (Đức) gọi là bệnh thương hàn chó, về sau gọi là

bệnh Stutgart

Tùy theo điều kiện sinh thái từng vùng, từng nước, tùy theo tập quán

chăn nuôi, điều kiện vệ sinh và các loại thú hoang mà các chủng gây bệnh cho

các động vật khác nhau theo tỷ lệ nhất định

Năm 1980, theo Milner (Úc) vào những năm 70 của thế kỷ 20, chủng gây

bệnh chủ yếu cho bò là L ponama, nhưng sau đó là L hardjo đã trở nên phổ

biến hơn và về sau hai chủng này đều tồn tại Adrew (1992) cho rằng bò ở

nước này có tỷ lệ huyết thanh dương tính với Leptospira là 86%, ở gia súc bị bệnh do Leptospira gây sẩy thai 30% và chết 5%, ảnh hưởng đến sức khỏe của

40% cư dân nước Úc Năm 1982 tại vùng Đông nước Anh tình trạng người bị

nhiễm Leptospira tăng, các nhà nghiên cứu đã bắt 30 chuột hải ly (coypu), lấy

nước tiểu và thận của các chuột này cấy vào môi trường phân lập, họ đã phân

lập được L hebdomadis (Wanyangu and Waitkins, 1987)

Solomon Dhliwayo et al., (2012) điều tra về tình hình nhiễm Leptospira

trên chó ở Harare thuộc Zimbabwe, Mỹ Kết quả xét nghiệm cho thấy 15,6%

mẫu huyết thanh dương tính với Leptospira (39/250 mẫu huyết thanh) Chó

ở thành thị có tỷ lệ bệnh Leptospira (25%) cao hơn chó ở nông thôn (11,2%) Không có sự khác biệt đáng kể về tỷ lệ dương tính với Leptospira giữa 5 khu

vực nông thôn và giới tính Nghiên cứu cũng cho thấy có sự liên quan giữa

Leptospirosis với các triệu chứng suy gan và thận

Koizumi et al., (2013) thực hiện cuộc khảo sát huyết thanh học để giám sát sự lưu hành của Leptospira trên chó tại Nhật Bản với 283 mẫu huyết thanh

chó nghi ngờ được thu thập từ 2007 đến tháng 3 năm 2011 Kết quả 83

(29,3%) trường hợp dương tính với Leptospira

Một điều tra cắt ngang của Halliday et al., (2013) về tình nhiễm Leptospirosis ở loài gặm nhấm ở Kibera - một khu ổ chuột gần Nairobi,

Kenya thuộc Châu Phi Kết quả của cuộc điều tra cho thấy tỷ lệ dương tính

là 18,3%, trong đó chuột cống (Chi Rattus) là 10,25% (4/39), chuột nhà (Chi Mus) là 20% (37/185)

Romero - Vivas et al., (2013) thực hiện một nghiên cứu cắt ngang thu

thập từ 128 các mẫu huyết thanh của con người, 83 con chó, 49 con chuột trong một khu phố thuộc thành phố cảng biển của Colombia, nơi mà có người

bị bệnh do Leptospira đã được báo cáo để tìm sự hiện diện của xoắn khuẩn Leptospira Trong đó có 12,5% (16/128) mẫu huyết thanh con người, 22,9%

(19/83) mẫu huyết thanh chó, 20,4% (10/49) mẫu huyết thanh chuột đều

dương tính với Leptospira

Calderón et al., (2014) điều tra về tình hình nhiễm Leptospira ở lợn,

chó, con người và môi trường nước ở Cordoba - một khu vực của vùng nhiệt đới Colombia, kết quả cho thấy tỷ lệ nhiễm ở lợn là 55,9%, ở chó là 35,2%,

ở người là 75,8%

6

2.2 Căn bệnh học

Bệnh xoắn khuẩn Leptospira hay Leptospirosis là một bệnh truyền

nhiễm của nhiều loại gia súc kể cả người, hiện nay người ta đã phát hiện trên

200 serovar gây bệnh (Hồ Thị Việt Thu, 2012)

Giống Leptospira được phân chia thành hai loài:

- Leptospira interrogans là loài gây bệnh cho người và gia súc

- Leptospira biflexa thường sống hoại sinh trong nước và không gây

bệnh (Watch, Binger và Noguchi, 1918)

2.2.2 Đặc điểm hình thái

Hiện nay, người ta đã phát hiện được 23 nhóm huyết thanh với 260

serovar Leptospira gây bệnh Các chủng xoắn khuẩn này có hình thái tương tự

nhau và được cấu tạo gồm nhiều vòng xoắn nhỏ xếp (10 - 20 vòng) sát vào nhau, có chiều dài trung bình 4 - 20µm, rộng 0,1 - 0,2µm, đầu uốn cong tựa

hình móc câu hoặc hình chữ C hay chữ S Chuyển động của Leptospira nhờ

một bộ phận cơ động gồm một trục ở giữa và thân xoắn như lò xo quanh trục Ngoài cùng có một lớp vỏ mềm co giãn được chứa nhiều kháng nguyên, tiếp theo là màng bao bọc tế bào chất bao gồm 3 - 5 lớp, ở giữa là nhân không có màng ngăn cách với nguyên sinh chất đảm nhận chức năng di truyền, nó có thể xoay dọc, xoay ngang, xoay tròn (Nguyễn Vĩnh Phước, 1977) Do cấu trúc đặc biệt, kích thước khá nhỏ, sự di chuyển uyển chuyển và có khả năng co giãn dễ dàng như vậy, nên chúng có thể chui qua màng lọc có đường kính 0,1 - 0,45µm như da, niêm mạc của gia súc hoặc người hay qua vết xước để gây bệnh (Nguyễn Vĩnh Phước và ctv, 1978)

(http://www.institutpasteur.nc) (www.lookfordiagnosis.com)

Hình 1 : Hình thái Leptospira dưới kính hiển vi điện tử

2.2.3 Tính chất bắt màu

Leptospira khó bắt màu khi nhuộm bằng thuốc nhuộm màu anilin thông

thường Nhuộm bằng phương pháp giemsa xoắn khuẩn bắt màu đỏ tím và xem được dưới kính hiển vi thường Khi nhuộm bằng phương pháp mạ bạc

(Fontana tribondeau), Leptospira có màu đen Ngoài ra, còn có phương pháp

nhuộm Romanopxki, xoắn khuẩn bắt màu tím sau khi nhuộm

Phương pháp Romanopxki: Cố định mẫu bằng cồn, để 30 phút rồi nhuộm bằng hỗn hợp gồm dung dịch bão hòa Blue methylen và dung dịch eosin 1% với tỷ lệ 2 : 1

2.2.4 Đặc tính nuôi cấy

Leptospira là một vi khuẩn hiếu khí, mọc tốt ở nhiệt độ 28 - 30oC, không mọc ở 13oC, pH thích hợp 7,2 - 7,4, mọc chậm trong các môi trường nuôi cấy

vì vậy việc nuôi cấy có thể kéo dài hàng tháng (Trần Thanh Phong, 1998)

Khi nuôi cấy trên môi trường thạch máu hoặc các môi trường thông thường, nếu không bổ sung 5 - 10% huyết thanh thỏ, xoắn khuẩn không mọc được Ngoài ra, giống như các loài vi khuẩn khác, xoắn khuẩn cũng cần sắt để phát triển Người ta dùng nhiều môi trường giàu dưỡng chất để nuôi cấy như môi trường Tween - Albumine hay EMJH, môi trường Stuart

Leptospira có thể mọc được ở những môi trường nhân tạo thông thường

như môi trường Terkish, EMJH Môi trường EMJH gồm hai thanh phần: môi trường cơ sở và môi trường làm giàu bằng albumine bò hoặc huyết thanh thỏ (Srivastava and Harbola, 1989)

Ngoài ra, có thể cấy Leptospira vào màng niệu đệm phôi gà 10 ngày tuổi,

sau khi cấy 7 ngày phôi gà bị chết, bệnh tích không điển hình (Prydie, 1968)

8

2.2.5 Cấu tạo kháng nguyên

Năm 1956, Rothotein và Riatto chia cấu trúc kháng nguyên ra làm hai phần chính:

Kháng nguyên P thuộc phần vỏ có cấu trúc là Lipopolysacharide giúp

phân biệt các nhóm Leptospira, là cơ sở phân loại xoắn khuẩn

Kháng nguyên S thuộc tế bào chất, thành phần cấu tạo là

Lipopolysacharide có tính chuyên biệt, dùng để nhận biết các Leptospira, đặc

trưng cho giống

Do sự khác nhau về cấu trúc kháng nguyên, người ta chia Leptospira

thành nhiều nhóm huyết thanh (Serogroup), mỗi nhóm huyết thanh có nhiều chủng huyết thanh (Serotype) Ngày nay, người ta chia mỗi nhóm huyết thanh thành nhiều serovar (Jonhson và Feine, 1984)

2.2.6 Sức đề kháng

Sức đề kháng của Leptospira tương đối yếu với các yếu tố lý hóa

Sự sấy khô làm xoắn khuẩn chết nhanh Leptospira nhạy cảm với nhiệt

độ cao, bị giết chết ở nhiệt độ 56 - 60oC/5 phút, nhưng lại chịu được nhiệt độ thấp ở âm 30oC Leptospira không chết, ở 4oC Leptospira có trong gan chuột

lang có thể sống được 26 ngày mà không giảm độc lực (Nguyễn Như Thanh, 2001) Trong nước tiểu của gia súc bị bệnh, ở nhiệt độ môi trường bình thường xoắn khuẩn tồn tại hàng tháng và lây truyền bệnh tốt

Trong môi trường ẩm ướt, đặc biệt ở các đầm lầy, ao hồ, sông suối, đồng

cỏ thoát nước kém, trong bùn lầy nước đọng, nhất là cống rãnh, kênh mương, ruộng đồng xoắn khuẩn có thể sống dai dẳng

Dưới ánh sáng mặt trời chiếu trực tiếp, Leptospira bị chết trong vòng

30 - 120 phút, nhưng với tia tử ngoại sau 30 phút Leptospira vẫn còn hoạt

động, sau 50 phút giảm hoạt động, sau 2 giờ tự ngưng kết 50%, sau 3 giờ ngưng kết 100%, sau 4 giờ ngừng hoạt động hoàn toàn

Xoắn khuẩn nhạy cảm với pH acid, ở trong dạ dày chỉ 10 phút là chết,

môi trường acid pH<6,5 Leptospira không sống được, pH≥7 xoắn khuẩn tồn

tại vài tuần

Các chất sát trùng thông thường có thể diệt xoắn khuẩn nhanh chóng: acid phenic 0,5% trong 5 phút, formol 0,25% trong 5 phút, acid sunfur 0,05%

trong 10 phút, biclorua thủy ngân 1/2000 sau 10 - 15 phút Leptospira rất mẫn

cảm với muối, dung dịch muối 2,8% giết xoắn khuẩn trong vòng 15 phút

Kháng sinh penicillin có tác dụng rất tốt đối với Leptospira (Nguyễn Tiết

Liên và Nguyễn Thanh Bình, 1991)

2.2.7 Một số nhóm Leptospira gây bệnh

Nhóm L icterohaemorrhagiae

L icterohaemorrhagiae được Do Y I và Inada R phân lập từ chuột năm

1915 Nhóm L icterohaemorrhagiae gồm: L copenhageni, L lai, L 017, L mankarso, L nadambari, L wijinberg, L shiromizu và L shibaura (Krover et

al 1988) Bằng phản ứng vi ngưng kết, L icterohaemorrhagiae còn được tìm

thấy trên nhiều loài gia súc như trâu, bò, heo, chó, dê, cừu (Hathaway, 1981)

Động vật mang mầm bệnh là chuột cống Rattus norvegicus

Nhóm L canicola

L canicola lần đầu tiên phân lập được từ bò ở Israel vào năm 1955, sau

đó vào năm 1956 phân lập được mầm bệnh từ heo và chó ở Czechoslovakia,

Mỹ và Chi Lê (Chenukha, 1981) Nhóm L canicola gồm các serovar đại diện

là L canicola, L bafani, L benjamin, L broomi, L schueffneri và L kamituga

L canicola có thời gian tồn lưu ở heo ít nhất là 90 ngày và có thể sống

trong nước tiểu là 6 ngày (Michna, 1962) Điều kiện thuận lợi này giúp mầm bệnh khuếch tán và lây truyền dễ dàng giữa các loài gia súc

Nhóm L pomona

L pomona lần đầu tiên phân lập từ heo ở Australia năm 1939, sau đó phân lập từ bò, ngựa, dê Nhóm này bao gồm các serovar là L kennewicki, L mozdok, L proechimys, L salinem và L tropica Động vật mang trùng là loài gặm nhấm (Sebek et al., 1983) L pomona thường khu trú, sinh sản ở thận và

theo nước tiểu ra ngoài môi trường, góp phần phát tán mầm bệnh

Nhóm L grippotyphosa

Nhóm L grippotyphosa gây bệnh ở bò, dê, cừu, ngựa, kể cả người Gồm các serovar là L valbuzzi, L muelleri, L moskva và L canalzonae (Sebek and

Vlcek, 1990)

Tarasova đã phân lập được L grippotyphosa năm 1928, đó là một trong

những serovar gây bệnh chủ yếu ở vùng Trung và Đông Âu, ở Liên Xô năm

1946, ở Mỹ (Hanson et al., 1965, 1971)

ở Nhật Bản (Akama, 1981) Năm 1982 tại vùng Đông nước Anh các nhà

nghiên cứu đã bắt 30 chuột hải ly (coypu), lấy nước tiểu và thận của các chuột này cấy vào môi trường phân lập, họ đã phân lập được L hebdomadis

(Wanyangu and Waitkins, 1987)

2.3 Truyền nhiễm học

2.3.1 Loài mắc bệnh

Leptospirosis là bệnh truyền nhiễm chung cho nhiều loài gia súc (bò,

heo, chó, ), thú hoang dã (chuột, chồn, ) kể cả người Trong đó, loài gặm nhấm là ổ chứa xoắn khuẩn trong tự nhiên, chúng đóng vai trò quan trọng trong việc truyền bệnh và bài thải mầm bệnh ra môi trường Ở thú hoang hay loài gặm nhấm thường mang mầm bệnh ở thể mang trùng hay ẩn tính (Nguyễn Vĩnh Phước, 1978)

Tỷ lệ mắc bệnh do Leptospira tùy thuộc vào các chủng gây bệnh, động

vật cảm thụ, điều kiện thổ nhưỡng, chế độ chăm sóc nuôi dưỡng, vệ sinh chuồng trại và môi trường xung quanh Những trận dịch quan trọng được ghi nhận thường do lây truyền qua nước lũ, ô nhiễm mầm bệnh từ nước tiểu chuột

và động vật khác (Hồ Thị Việt Thu, 2012) Loài chuột có thể nhiễm một số

chủng Leptospira, chúng không mắc bệnh, không biểu hiện triệu chứng lâm

sàng nhưng có thể truyền mầm bệnh cho các loài vật khác, kể cả người Chuột được coi là ổ chứa thường xuyên, luôn mang và thải mầm bệnh; chuột không chỉ là nhân tố trung gian truyền bệnh mà còn được coi là nguồn bệnh

Người mắc bệnh do chủng L Icterohaemorrhagiae và L grippotyphosa, mang

tính chất nghề nghiệp rõ: công nhân làm vệ sinh cống rãnh, công nhân chăn nuôi, cán bộ địa chất, lâm nghiệp hay mắc bệnh Theo nghiên cứu của Nguyễn Thị Ngân và ctv (2004), tại Việt Nam, trong số các ca bệnh có biểu hiện của

hội chứng gan - thận thì có tới 66,83% cho phản ứng dương tính với Leptospira

2.3.2 Nguồn lây truyền và chất chứa mầm bệnh

Các loài gia súc bệnh như chó, heo, bò, đặc biệt loài gặm nhấm là

nguồn bài thải xoắn khuẩn trong tự nhiên Ở nước ta, Rattus norvegicus có tới 27% mang Leptospira mà chủ yếu là L bataviae, chuột nhà (Rattus flavipectus), chuột nhắt (Mus musclus) Chuột có thể mang khuẩn suốt đời

Thời gian mang khuẩn và mức độ bài thải xoắn khuẩn qua nước tiểu thay đổi

tùy theo loài mang khuẩn và serovar Leptospira Thời gian mang khuẩn ở cáo

là 514 ngày, đại gia súc 120 ngày, heo 200 ngày và chó 700 ngày (Nguyễn Thị Ngân, 2000) Gia súc mang trùng không mang mầm bệnh suốt đời như loài gặm nhấm nên mầm bệnh thải ra ngoài lúc có lúc không Gia súc mang xoắn khuẩn sau khi lành bệnh ở thể ẩn, thời gian mang trùng và mức độ bài thải qua nước tiểu thay đổi tùy theo loài mang xoắn khuẩn và chủng gây bệnh

Khi ra ngoài môi trường, xoắn khuẩn có mặt ở những khu vực nhiễm nước tiểu loài mang trùng, các ao, hồ, đầm lầy, đất bùn, đây là những nguồn lây truyền bệnh trong tự nhiên

Ở động vật khi mới nhiễm bệnh, trong máu có xoắn khuẩn nhưng khi bệnh kéo dài trên 15 ngày thì mầm bệnh khu trú ở bể thận, bàng quang, nước tiểu, gan, lách, hạch lâm ba,

2.3.3 Đường lây truyền

Ở động vật, bệnh lây chủ yếu qua đường tiêu hóa do thức ăn và thức

uống có nhiễm Leptospira từ nước tiểu của động vật mắc bệnh hoặc mang

trùng (Hồ Thị Việt Thu, 2012)

Bệnh còn có thể truyền qua vết xay xát ngoài da hoặc niêm mạc do tiếp xúc với bùn, đất có nhiễm xoắn khuẩn hoặc tiếp xúc trực tiếp với nước tiểu, phủ tạng của gia súc bệnh

Ngoài ra, bệnh còn lây nhiễm qua côn trùng chích hút, qua nhau thai, lây nhiễm qua đường âm đạo Trong phòng thí nghiệm, khi bôi canh trùng xoắn khuẩn vào đùi chuột lang sau 20 phút trong máu chuột đã tìm thấy xoắn khuẩn, hay cho chuột lội trong nước nhiễm khuẩn, tiêm dưới da, phúc mạc, bắp thịt hay cho uống đều bị nhiễm