NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC VÀ ẢNH HƯỞNG CỦA AUXIN, GIBBERELLIN LÊN KHẢ NĂNG NHÂN GIỐNG VÔ TÍNH CÂY NƯA

Mục tiêu của đề tài Biết được các đặc điểm sinh học, một số thành phần hóa sinh của nưa, đánh giá được ảnh hưởng của auxin và gibberellin lên khả năng nhân giống vô tính từ củ, làm cơ sở

PHẦN I MỞ ĐẦU 1.1 Tính cấp thiết của đề tài

Khi xã hội ngày càng phát triển, đời sống của con người ngày càng được quan tâm, cải thiện Nhưng trong bất cứ hoàn cảnh nào, rau xanh vẫn là thành phần quan trọng không thể thiếu trong mỗi bữa ăn gia đình Cũng như nhiều loại rau xanh khác, nưa cung cấp khối lượng chất xơ dồi dào, các loại khoáng chất và vitamine cần thiết Không chỉ hỗ trợ cho hệ tiêu hóa, giúp cơ thể phát triển khỏe mạnh mà nưa còn phòng chống được nhiều loại bệnh mà con người mắc phải Vì khả năng

đó, nó được sử dụng như nguồn dược liệu có ý nghĩa, vừa có tác dụng dược lý, có giá thành rẻ lại không gây tác dụng phụ

Nưa (Amorphophallus konjac K.Koch) là cây trồng nông nghiệp ở một số

nước Châu Á như Philippin, Nhật Bản, Trung Quốc, Việt Nam… Ở nước ta, Thừa Thiên Huế là tỉnh trồng nưa nổi tiếng, hình ảnh của chột nưa đã đi vào trong thơ của

Tố Hữu trong thời kì chiến tranh chống Pháp “ăn đi vài con cá, dăm bảy cái chột nưa”… Thân nưa được sử dụng làm rau xanh, nấu cùng với cá hay thịt, làm dưa chua…, chế biến thành những món ăn hấp dẫn, khiến ai xa Huế cũng đều nhớ đến món ăn dân dã này Lá nưa có thể dùng để chăn nuôi hoặc tận dụng làm nguồn phân xanh Nưa ít bị sâu bệnh lại có nhu cầu phân bón không nhiều, nên được người sử dụng coi là nguồn rau sạch Củ nưa ít được con người sử dụng, chủ yếu để làm giống cho vụ sau hoặc dùng làm thức ăn chăn nuôi Trong khi đó tất cả những thành phần có ý nghĩa lớn về mặt dược lý lại nằm trên bộ phận này của cây Thực tế, nhiều nghiên cứu về thành phần và vai trò củ nưa cho thấy trong bột củ nưa có chứa glucomannan là hợp chất có nhiều công dụng quý như tác dụng tốt đến bệnh ung thư, tim mạch, béo phì, cao huyết áp…

Ở Việt Nam nói chung và Thừa Thiên Huế nói riêng, vai trò to lớn của cây nưa chưa được biết đến nên việc sử dụng mới chỉ đơn thuần là rau xanh, chưa phát huy hết được giá trị tiềm năng do nưa mang lại Mặt khác, những nghiên cứu ở nước ta trên đối tượng này còn rất ít, các tài liệu chủ yếu chỉ dừng lại ở mức phân loại Các nghiên cứu về đặc điểm sinh học, khả năng sinh trưởng phát triển và nhân giống cây nưa hầu như chưa được quan tâm đến Vì vậy, việc nghiên cứu sâu hơn

về nưa tại Thừa Thiên Huế, làm cơ sở khoa học cho việc phát triển và sử dụng hợp

lý những lợi ích từ nguồn cây nưa là rất cần thiết

Xuất phát từ những lý do đó, chúng tôi thực hiện đề tài “NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC VÀ ẢNH HƯỞNG CỦA AUXIN, GIBBERELLIN LÊN KHẢ NĂNG NHÂN GIỐNG VÔ TÍNH CÂY NƯA”.

1.2 Mục tiêu của đề tài

Biết được các đặc điểm sinh học, một số thành phần hóa sinh của nưa, đánh giá được ảnh hưởng của auxin và gibberellin lên khả năng nhân giống vô tính từ củ, làm cơ sở cho việc đề xuất phát triển và sử dụng đối tượng này ở Thừa Thiên Huế

1.3 Ý nghĩa khoa học và ý nghĩa thực tiễn

Qua tìm hiểu một số đặc điểm sinh học, hàm lượng một số chất có trong thân,

củ của cây, từ đó có cơ sở để đề xuất biện pháp sử dụng hợp lý để tận dụng được tiềm năng sinh học của nưa

Trên cơ sở xác định được nồng độ các chất kích thích ra rễ, chồi có hiệu quả nhất có thể tiếp tục nghiên cứu nhằm áp dụng vào sản xuất

PHẦN II TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Đặc điểm sinh học và sinh thái cây nưa

2.1.1 Đặc điểm sinh học

2.1.1.1 Đặc điểm hình thái

Nưa (còn được gọi là konjac), là cây thân thảo, có củ lớn hình cầu lõm, đường kính có thể tới 25 cm Từ củ lớn còn hình thành nên những củ nhỏ hơn, được gọi là

củ nhánh Từ trục thân, chia thành 3 nhánh mang lá Các nhánh lại chia đốt, phiến lá

xẻ thùy sâu hình lông chim, các thùy cuối hình quả trám thuôn, nhọn đầu, cuống lá thon dài, dài 40 - 80 cm, nhẵn, màu lục nâu, có các đốm chấm màu trắng [1], [61], [66] Cụm hoa dạng bông mo được bao bọc bởi một mo có phiến rộng, có mép lượn sóng, mặt trong có màu tím nâu thẫm Trục cụm hoa dài gấp đôi bông mo, mang hoa đực ở trên, hoa cái ở dưới, đều không có bao hoa, quả mọng Hoa có mùi xác thối [1], [66] Khoai nưa có củ lớn, nếu củ được thu hoạch sớm khi chưa già thì luộc

bở, ít ngứa, nhưng nếu để quá vụ mới thu hoạch thì sượng, không bở mà ngứa, để lâu hơn thì ngứa nhiều, không ăn được [1], [61]

2.1.1.2 Đặc điểm chu kì sống

Chu kì sống của nưa được chia thành hai pha: pha ngủ nghỉ và pha sinh trưởng, phát triển

Pha ngủ:

Củ nưa sau khi thu hoạch trải qua 4 – 6 tháng ngủ nghỉ, acid abscisic (ABA)

và acid ferulic là nhân tố gây “ngủ” ở nưa [17], [49] Khi nghiên cứu chu kì sống

của nưa, Liu & cs kết luận đây là hình thức ngủ sinh lý, không thể có bất kì tác nhân nào có thể phá vỡ trạng thái ngủ để hình thành chồi trong giai đoạn này [36] Đây

không chỉ là đặc điểm của loài, mà là đặc điểm chung của chi Amophorphallus thuộc họ Ráy (Araceae) [17], [49]

Pha sinh trưởng phát triển:

Khi trồng vào mùa vụ thích hợp, tức là giai đoạn ngủ nghỉ đã kết thúc, chồi nhanh chóng hình thành và phát triển Thời gian đầu, chồi non được bao bọc hoàn toàn bởi bao lá có dạng hình mũi tên, bao lá này gia tăng kích thước cùng với kích thước của chồi và lá thật bên trong [36] Dưới biểu bì của cấu trúc này có những tinh thể oxalate calcium, nhọn giống như kim, là yếu tố bảo vệ khỏi sự xâm hại của động vật ăn cỏ, đây được coi là đặc điểm hình thành trong quá trình tiến hóa của

loài [17] Sau một thời gian do sự phát triển của lá, phần lá bao bọc này sẽ bị rách

ra, cuối cùng teo lại, lá thật bắt đầu gia tăng các kích thước như chiều cao, đường kính thân, chiều dài lá, tán cây, và tích lũy vật chất để hình thành củ…

Tất cả các thành viên của Amorphophallus nói chung, nưa nói riêng, đều có 1

chồi nằm ở đỉnh của củ và tồn tại trong “hốc nhỏ” đối với củ chính [49] Trong toàn

bộ đời sống của cây, có khoảng 3 chột lần lượt được hình thành (người dân địa phương gọi thân nưa là “chột”) [65] Các chột này hình thành ở các thời điểm khác nhau, cây sau được hình thành từ cây trước đó Hiện tượng này được Liu giải thích

là do khi chồi đỉnh mọc lên, hình thành chồi thì có một chồi nội sinh khác được hình thành ngay ở phần tận cùng của trục thân, sau đó chồi này phát triển thành chồi đỉnh cho mùa tiếp theo [34] Đặc điểm này cũng giống với nghiên cứu của các tác

giả khi nghiên cứu ở các địa điểm khác nhau trên Amorphophallus paeoniifolius (Dennst.Nicolson) [31], [49] Theo kết quả của nghiên cứu của Agung & cs thì đặc điểm nói trên là chung cho chi Amorphophallus được trồng ở Châu Á [17].

Nếu trong chu kì sống của nưa có sự xuất hiện của hoa thì hoa hình thành và

nở trước khi hình thành lá, 2 sự kiện này không bao giờ xảy ra đồng thời [1], [36], [66] Đặc điểm trên cũng được Agung & cs khẳng định [17] Liu giải thích đặc điểm này của nưa do hiện tượng trội đỉnh (ưu thế đỉnh) một cách rõ ràng Khi chồi đỉnh biệt hóa hình thành hoa, không có chồi lá xuất hiện, nên không hình thành lá Nghiên cứu này cũng cho rằng khi nưa đạt đến 4 năm tuổi thì từ củ có thể ra hoa Chồi hoa có dạng hình chuông [36]

Sau khi hình thành hoa, quá trình thụ phấn và thụ tinh vẫn diễn ra bình thường sau 2 ngày, sau đó cũng có quá trình thụ tinh kép tạo thành hợp tử Hợp tử tiến hành phân bào sau 4 -5 ngày Lần phân chia đầu tiên tạo thành 2 tế bào tiền phôi, nhưng những lần phân chia kế tiếp không thực hiện được hoàn toàn, tạo thành khối tế bào phôi Những tế bào gần lỗ noãn sẽ trở nên hoạt động với vai trò giống như mô phân sinh và hình thành nên cấu trúc dạng chồi vảy Phôi của nưa thuộc loại đơn cực, không thấy xuất hiện cấu trúc của cực còn lại và trong toàn bộ quá trình phát triển của procorn từ hợp tử, cũng như không thấy có sự xuất hiện của chồi, của mầm rễ

và trụ gian lá mầm [36]

2.1.2 Điều kiện sinh thái

Một số nước trên thế giới đã có những công trình nghiên cứu chi tiết yêu cầu

sinh thái của đối tượng này Kết quả nghiên cứu cho thấy để phát triển tốt, nưa cần thỏa mãn các điều kiện sinh thái, thổ nhưỡng

2.1.2.1 Độ ẩm

Nói đến độ ẩm tức là nói đến tiềm năng cung cấp nước của đất cho cây trồng Hàm lượng nước trong đất ảnh hưởng đến sự phát triển của bộ rễ Rễ thực hiện chức năng hấp thu nước, các chất dinh dưỡng, chất khoáng cung cấp cho các hoạt động sinh lý cũng như mọi hoạt động trao đổi chất diễn ra trong cây Do vậy, sự phát triển của bộ rễ tác động lớn đến khả năng sinh trưởng, phát triển của cơ thể thực vật Nhu cầu nước khác nhau tùy theo từng loài, từng giai đoạn phát triển

Kết quả nghiên cứu của Zhang (1991) cho thấy nưa không đòi hỏi nhiều nước trong quá trình phát triển, nhu cầu này biến đổi theo từng giai đoạn phát triển của nưa, tăng đến khi đạt tuổi trưởng thành sau đó giảm xuống Vì thế trong quá trình phát triển mạnh mẽ ở giai đoạn đầu và giai đoạn giữa, củ có thể chứa 75% nước Nhưng khi củ đã trưởng thành hàm lượng nước chỉ còn khoảng 60% [36]

Mặt khác, nưa có hệ thống rễ nông nên chịu hạn kém Nưa cũng không có khả năng chịu nước đọng, nếu độ ẩm đạt đến độ bão hòa thì sự hô hấp giảm đi, làm cho

rễ bị chết Nhưng nếu độ ẩm xuống còn 25% trong đất thì rễ và lông rễ chết hoàn toàn Khi độ ẩm giảm, dẫn đến sự giảm hàm lượng chlorophyll, hàm lượng protein trong lá, lá dần trở nên vàng úa sau đó chết đi [36]

2.1.2.2 Nhiệt độ

Thực vật nói chung và nưa nói riêng thuộc nhóm sinh vật biến nhiệt, nên chịu tác động lớn của nhân tố nhiệt Nhiệt độ tác động đến quá trình sinh lý, trao đổi chất của cây thông qua ảnh hưởng đến hoạt tính của hệ enzyme, nên ảnh hưởng đến tốc

độ quá trình sinh trưởng Nhiệt độ cao, cường độ trao đổi chất diễn ra mạnh mẽ, chủ yếu là quá trình phân giải, thúc đẩy nhanh quá trình già hóa của các cơ quan khi chưa đạt đến tuổi trưởng thành Nhiệt độ quá cao hay quá thấp đều tác động tiêu cực đến cây, phá vỡ cấu trúc tế bào, làm biến tính hệ enzyme, acid nucleic…, ảnh hưởng đến toàn bộ đời sống của cây do đó ảnh hưởng đến năng suất cuối cùng Mặt khác, nhiệt độ còn ảnh hưởng đến tính ngủ nghỉ ở một số đối tượng thực vật

Zhang (1991) cho rằng nưa là đối tượng ưa ấm Nó có thể chịu được sự biến thiên nhiệt độ từ 5 – 430C, nhiệt độ tối thích cho sự sinh trưởng là 20 – 250C, khi nhiệt độ xuống dưới 00C hoặc trên 450C thì cây sẽ chết sau 5 ngày Sự phát sinh

chồi và sự phát triển diễn ra khi nhiệt độ trên 150C Lá sẽ bị khô héo và đổ rạp khi nhiệt độ dưới 150C, trên 350C, lá bị phai màu Nhiệt độ từ 22 – 260C tốt cho sự phát triển của rễ, 22 – 300C tốt cho sự tăng trưởng của củ Để bảo quản củ, có thể duy trì

ở nhiệt độ 100C, ở nhiệt độ dưới 00C cấu trúc tế bào bị phá hủy, làm cho chồi không thể hình thành được [36]

Giai đoạn phát triển của nưa chịu ảnh hưởng của tổng nhiệt tích lũy, nó cần tổng nhiệt tích lũy là 42790C [36]

2.1.2.3 Ánh sáng

Ánh sáng là nguồn năng lượng tự nhiên duy nhất được cây trồng sử dụng để quang hợp, tạo ra vật chất cho cây Nhu cầu ánh sáng ở các loài, các độ tuổi khác nhau thì không giống nhau Cũng giống như nhiệt độ, độ ẩm và các nhân tố khác, ánh sáng quá cao hay quá thấp đều tác động đến sinh trưởng, phát triển của cây thông qua ảnh hưởng đến bộ máy quang hợp

Với nưa, khi cường độ ánh sáng tăng từ 2254 đến 46000 lux thì khối lượng thân, sự phát triển của lá, hàm lượng chlorophyll giảm dần [36]

2.1.2.4 Điều kiện đất đai

Nưa được trồng ở các nước Đông Nam Á như Philippin, Indonesia và Việt Nam Nhật Bản, Trung Quốc cũng là những nơi trồng nưa nổi tiếng [1], [64], [66] Nưa thích hợp trên đất thịt hay đất phù sa Người ta không thể trồng nưa liên tục 3 -

4 năm trên một vạt đất mà không luân canh Trong trường hợp này, cây sẽ bị thoái hóa: cây thấp, lá có màu xanh đậm, phiến lá có nhiều thùy nhỏ và dày, củ nhỏ, vỏ dày và sần sùi Người ta gọi đó là trạng thái khoai nưa bị dăm hay bị vò [1]

2.2 Thành phần hóa học của thân và củ

2.2.1 Thành phần hóa học

Kết quả phân tích thành phần hóa học của thân nưa cho thấy thân tươi có chứa 78,0% nước Nưa chứa khoảng 76,3% carbohydrate hòa tan, 4% các chất xơ không tan, 7% khoáng (Na, P, K, Mg, Fe, …), 0,5% lipid, 12,2% gồm dẫn xuất của hợp chất chứa N và một số thành phần khác [66] Trong thân còn chứa các loại vitamine như A, E, D, B1, B2, B6, B12, và vitamine C Một số hợp chất như acid folic, niacine, patothenate cũng được tìm thấy trong cây [73] Sợi có chứa dịch cay [66]

Ở củ tươi, hàm lượng nước chiếm 74,8% Trong 100 g củ khô chứa thành phần và tỷ lệ các hợp chất bao gồm khoảng 12,5% protein, 3,27% dẫn xuất không

protein, 75,16% carbohydrate, 3,67% cellulose, 4,42% khoáng, 0,98% lipid Carbohydrate không tan bao gồm tinh bột và glucomannan, trong đó glucomannan chiếm khoảng 70% Ngoài ra, trong củ có chứa các chất alkaloid [61], [66]

Trong củ nưa, glucomannan là hợp chất có những công dụng to lớn trong y học nên đã và đang được quan tâm nghiên cứu

2.2.2 Cấu tạo của glucomannan

Việc nghiên cứu cấu trúc của phân tử glucomannan và khả năng ứng dụng của

nó trong các mặt của đời sống thu hút sự quan tâm của nhiều nhà khoa học của các nước trên thế giới Khi nghiên cứu về cấu trúc mạch, tính chất của glucomannan, người ta đã có những kết luận về thành phần cấu tạo, liên kết của các đơn phân và khả năng thủy phân tạo gel của hợp chất này

Các nghiên cứu đều thống nhất với kết quả cho rằng glucomannan là một dị polysaccaride trung hòa, được cấu tạo bởi đơn vị là β - D glucose (G) và β - D mannose (M), tỷ lệ tương ứng là 5:8 (Kato & Matsuda, 1969) Trên mạch chính, các đơn phân liên kết với nhau bằng liên kết 1β - 4 glucose - manose [24], [38], [43], [67]

Trong mạch chính, trình tự lặp lại theo kiểu: GMMGMMMMMGGM Cứ khoảng 50 - 60 đơn phân từ mạch chính thì xuất hiện mạch nhánh chứa 11-16 đơn phân với liên kết 1β - 3 glucose - manose [71]

Cũng như vậy, với số lượng khoảng 9 – 19 đơn phân trên mạch chính, xuất hiện nhóm acetate ở vị trí carbon số 6 của glucose Khi bị thủy phân, nhóm acetate

sẽ tạo nên tương tác nội phân tử hình thành nên liên kết hydro, là cơ sở cho phản ứng tạo gel của glucomannan nếu cắt bỏ nhóm này thì khả năng tạo gel không còn nữa [54], [70], [71] Dưới đây là công thức cấu tạo trong tỷ lệ GGMM của glucomannan, trong đó đơn vị glucose thứ 2 chứa nhóm acetate

Hình 2.1 Cấu trúc mạch thẳng của glucomannan, với thành phần lặp lại

GGMM, nhóm G thứ 2 chứa nhóm acetate [71]

Hình 2.2 Cấu trúc mạch với liên kết 1β - 3 glucose – manose và 1β - 4 glucose –

manose [54]

Người ta đã xác định được khối lượng phân tử trung bình của glucomannan

từ 200.000 – 2.000.000 Dalton [66]

2.3 Vai trò của nưa

Nưa và các sản phẩm sản xuất từ nưa có thể được sử dụng trong nhiều lĩnh vực khác nhau, đặc biệt là trong y học

Thân cây và cuống lá được dùng giống các loại rau xanh thông thường khác,

có thể nấu canh giấm hoặc chế biến thành dưa chua [64] Lá được tận dụng trong chăn nuôi hoặc làm phân xanh Củ có thể dùng lấy tinh bột Người Nhật dùng bột từ

củ nưa để ăn và nấu rượu [1] Đặc biệt nưa hầu như không bị sâu bệnh, nên không cần phun thuốc trừ sâu Hơn nữa, việc trồng nưa chủ yếu dùng phân chuồng bón lót, nhu cầu phân bón hóa học rất ít, thời gian bón phân cho đến khi thu hoạch có khoảng cách khá dài ngày, nên dư lượng đạm tồn dư trong rau sẽ không có hoặc rất

ít Từ những lý do đó, nưa được người tiêu dùng coi là sản phẩm hoàn toàn sạch, điều rất được quan tâm trong các mặt hàng nông sản hiện nay

Về giá trị kinh tế, nưa mang lại lợi nhuận lớn cho nông dân Mỗi sào nưa (một sào Trung Bộ tương đương với 500 m2) đem lại từ 5 – 7 triệu đồng, lớn hơn rất nhiều lần so với trồng lúa [63]

Không chỉ được sử dụng như một nguồn rau sạch, củ nưa nó còn có nhiều vai trò trong y học, đặc biệt là khả năng ảnh hưởng có lợi trên một số bệnh nan y Sau đây là một số ứng dụng từ củ nưa:

Glucomannan trong củ nưa còn được gọi với tên bột konjac, không được cơ thể tiêu hóa, hấp thu Hợp chất này còn có khả năng hấp thụ nước lớn, cứ 1 gam bột

konjac hấp thu được khoảng 250 ml nước trong khoảng 1 giờ Khi bột được trộn với nước sẽ hình thành nên dạng khối gelatin và di chuyển một cách chậm chạp dọc theo ống tiêu hóa Khối gelatin không chỉ giúp kích thích nhu động ruột mà còn hấp thu một lượng lớn cơ chất dọc theo đường đi của nó trong ruột Với tính chất và vai trò nói trên, bột konjac được sử dụng như là thuốc xổ tự nhiên [71], [73]

Cũng nhờ đặc tính trên, bột konjac không những làm chậm sự hấp thu và giải phóng carbohydrate từ từ vào máu, giúp giữ lượng đường trong máu ở mức độ ổn định mà còn cho ta có cảm giác no trong một thời gian dài Đồng thời, do mang năng lượng thấp, nên bột konjac được nghiên cứu để điều trị bệnh béo phì, bệnh tiểu đường [29], [52], [68] Tuy nhiên, người ta cũng cảnh báo rằng bệnh nhân đái tháo đường nên tránh sử dụng liên tục, lâu dài vì có thể làm giảm lượng đường máu xuống mức nguy hiểm, cho dù đây là chất hoàn toàn tự nhiên [73]

Bột konjac vừa điều tiết sự hấp thu và giúp hấp thu các acid mật một cách dễ dàng Bột konjac giúp điều hòa sự tiêu hóa, là tác nhân tự nhiên trong việc điều hòa lượng cholesterol cao trong máu Dựa trên một số công trình nghiên cứu, người ta thấy nó còn có vai trò trong việc làm giảm tổng lượng cholesterol xấu, giảm lượng triglyceride, và làm tăng lượng cholesterol tốt cho cơ thể, qua đó ảnh hưởng tích cực đến những bệnh nhân có lượng cholesterol cao, đồng thời làm giảm huyết áp của máu [21], [27], [28], [65], [67], [68], [72]

Mao & cs đã nghiên cứu tác dụng của bột konjac lên tính kháng insulin trên chuột Kết quả cho thấy bột konjac làm giảm tính kháng insulin và làm tăng tính nhạy cảm đối với hormone này Ảnh hưởng của bột konjac không làm tăng lượng insulin được giải phóng mà làm tăng cường sử dụng glucose theo con đường không phải oxy hóa không phụ thuộc insulin Ngoài ra, nghiên cứu này cũng cho thấy bột konjac có khả năng làm giảm tổng lượng cholesterol, tổng lượng triglyceride, lipoprotein-cholesterol và làm tăng dự trữ glycogen ở gan [38]

Christina & cs nghiên cứu trên khỉ Mõm chó (Baboon) cho kết quả thấy khi

cho ăn thức ăn bổ sung với bột konjac, đã có hiệu quả hơn khi cho ăn thức ăn có bổ sung bất kỳ loại chất nào khác và so với đối chứng Tác dụng đó thể hiện ở chỗ bột konjac không những làm giảm tổng lượng triglyceride và tổng lượng chất béo, mà còn có hiệu quả hỗ trợ giảm cholesterol [26]

Để giải thích lý do bột konjac làm giảm cholesterol máu, có hai cơ chế được

đưa ra Thứ nhất: bột sẽ “bẫy” acid mật và loại chúng ra ngoài cơ thể giống với con đường mà chúng loại bỏ carbohydrate Như đã biết, acid mật được tổng hợp trong gan, nguyên liệu là cholesterol, nên việc loại bỏ acid mật nhờ bột konjac dẫn đến sự thu hút cholesterol từ máu, tăng cường tổng hợp acid mật nhiều hơn Đây là phản ứng theo cơ chế điều hòa ngược của cơ thể Thứ hai: bột konjac giúp chuyển đổi acid mật (acid cholic) thành một acid khác (acid chenodeoxycholic) có tác dụng ngăn chặn hoạt động của enzyme liên quan đến sự hình thành chất béo và cholesterol (3-hydroxy 3-methylglutaryl CoA reductase), do đó làm giảm cholesterol tạo ra trong gan, đồng thời giảm nồng độ của nó trong máu [72] Ngoài

ra, Gallaher & cs cho rằng do tạo thành dạng nhầy nhớt trong ruột, bột konjac ngăn cản sự hấp thu cholessterol, và thải ra ngoài cơ thể theo phân [32]

Những nghiên cứu trên chuột còn cho thấy bột konjac có hiệu quả ức chế rõ rệt lên bệnh ung thư phổi [65] Một nghiên cứu của Basmacioglu đã nhận thấy glucomannan dạng ester có vai trò trong việc ngăn chặn những tác dụng xấu của

aflatoxin sinh ra từ các loại nấm thuộc Aspergillus do ngăn chặn sự hấp thụ của hệ

tiêu hóa, do đó bảo vệ cơ thể tránh nhiễm độc [23]

Cũng trên thí nghiệm ở chuột, người ta đã chứng minh vai trò của bột konjac trong việc ức chế sự phát triển của bệnh viêm da dị ứng và làm giảm sự dư thừa của phospho, phân bào trước viêm (proinflammatory cytokines) Nó cũng ức chế sự dư thừa của IgE, một loại globulin miễn dịch là nguyên nhân của phản ứng miễn dịch của cơ thể [65]

Trong y học cổ truyền và các bài thuốc dân gian, củ nưa được sử dụng như loại dược liệu có vị cay và ngứa, tính ấm, có tác dụng tiêu viêm, hạ sốt, giải độc Dùng củ tươi giã nát đắp lên chỗ viêm, mụn nhọt, sưng tấy, nơi rắn cắn Hoặc được dùng làm thuốc chữa đờm tích trong phổi sinh suyễn tức, trúng phong bất tỉnh, cấm khẩu, chứng đau đầu nhức, bụng đầy, tức ngực, ăn không tiêu, trị sốt rét, trục thai chết Củ dùng để làm thuốc đều phải chế biến cho hết cay, hết ngứa [1], [61]

Nhật Bản và Trung Quốc là hai nước có lịch sử trồng và sử dụng nưa như loại thực phẩm truyền thống từ hàng nghìn năm trở về trước Dựa trên những nghiên cứu rộng rãi về an toàn thực phẩm, Bộ Y tế Trung Quốc cho phép đưa bột konjac vào trong những thực phẩm quản lý thông thường từ ngày 16 – 2 – 1998 Ở Mỹ người ta chấp nhận konjac như thực phẩm bổ sung (năm 1997), và cũng cho phép

sử dụng bột konjac như nhân tố làm đặc, tạo màng, chất chuyển thể sữa và chất ổn định trong các thực phẩm [72]

Ngày nay Nhật Bản, Trung Quốc và một số nước đã sử dụng bột củ nưa làm nguyên liệu trong công nghệ dược phẩm, sản xuất thực phẩm chức năng, hỗ trợ nhiều bệnh như đái tháo đường, hạ cholesterol máu, điều trị táo bón, hỗ trợ giảm cân [1], [72] Ở Việt Nam, các nghiên cứu về nưa còn rất ít, những ứng dụng của nó được coi là kinh nghiệm dân gian sử dụng trong một số trường hợp, chưa tận dụng được giá trị y học to lớn có trong củ nưa

2.4 Tác dụng sinh lý và một số ứng dụng của auxin, gibberellin trong nhân giống vô tính

2.4.1 Tác dụng sinh lý và một số ứng dụng của auxin

2.4.1.1 Tác dụng sinh lý của auxin

Auxin (Aux) là hormone thực vật được phát hiện đầu tiên Qua nhiều nghiên cứu của các nhà khoa học, người ta nhận ra rằng Aux là hormone thực vật quan trọng đối với toàn bộ giới thực vật Aux dạng tự nhiên gồm có Acid β – Indolacetic (AIA), Acid Phenylacetic (APA), Acid β – Indolyacetonitril (IAN) Ngoài ra có các dạng Aux được tổng hợp bằng con đường nhân tạo, đáp ứng nhu cầu của con người trong lĩnh vực trồng trọt và nghiên cứu như Acid β – Indolbutiric (IBA), Acid α – Naphtylacetic (α – NAA), Acid 2,4 Diclorophenoxiacetic (2,4D)… [5], [13]

Aux có thể tồn tại trong cây ở 2 dạng: dạng tự do và dạng liên kết Aux tự do

là dạng có hoạt tính sinh lý nhưng hàm lượng rất ít, chỉ khoảng 5% hàm lượng Aux tổng số trong cây Đại bộ phận Aux tồn tại ở dạng liên kết với các hợp chất khác nhau, chủ yếu là liên kết với đường, không có hoạt tính sinh lý Tuy nhiên, 2 dạng này có thể chuyển đổi cho nhau một cách thuận nghịch, góp phần điều chỉnh hàm lượng Aux trong cây [5], [13] Một số vai trò của Aux đối với thực vật như:

Aux kích thích sự giãn nở của tế bào, làm tế bào phình to dẫn đến tăng kích thước của các cơ quan như tăng diện tích lá, phình to của quả, củ, tăng đường kính

và chiều dài của cành, thân, rễ… của cây [5], [13]

Aux điều khiển tính hướng của cây như hướng sáng, hướng đất, liên quan đến

sự phân bố không đều của Aux ở hai phía của cơ quan, dẫn đến sự sinh trưởng không đều của tế bào trong một cơ quan, gây ra tính hướng [5], [13]

Aux điều chỉnh hiện tượng ưu thế ngọn, tức là khi chồi ngọn phát triển thì ức

chế sự phát triển của chồi bên [5], [13].

Aux kích thích sự hình thành quả, sự lớn lên của quả và tạo quả không hạt Sự thụ phấn, thụ tinh tạo nên hạt và sự sinh trưởng của bầu hình thành quả đều được điều khiển bởi hàm lượng Aux nội sinh Khi được bổ sung Aux ngoại sinh sẽ làm cho sự tự thụ phấn và thụ tinh xảy ra tốt hơn, quả sinh trưởng nhanh hơn và nhiều trường hợp quả không có hạt [5], [13]

Aux kìm hãm sự rụng của lá, hoa, quả Sự cân bằng hàm lượng Aux và chất

ức chế sinh trưởng có ý nghĩa quan trọng, quyết định đến việc điều chỉnh sự rụng của các cơ quan [5], [13]

Aux còn ảnh hưởng lớn đến quá trình trao đổi chất, các quá trình sinh lý của cây trồng như: quang hợp, hô hấp, trao đổi nước hay khoáng, tăng khả năng thẩm thấu của tế bào, tăng quá trình trao đổi acid nucleic, protein… [5], [13]

Aux ảnh hưởng đến sự hình thành rễ sơ cấp và rễ bên Aux điều khiển sự phát triển của rễ sơ cấp thông qua ảnh hưởng đến khả năng phân chia, biệt hóa và kéo dài của các tế bào ở vùng đỉnh của loại rễ này Aux ảnh hưởng đến hình thành rễ bên bằng cách cảm ứng sự hình thành mầm rễ bên từ những tế bào trụ bì của rễ mẹ [22], [47], [48], [56] Đây là cơ sở của ứng dụng Aux để kích thích hình thành rễ ở nhiều đối tượng thực vật

Aux kích thích sự hình thành rễ, đặc biệt là rễ bất định trên cành chiết, cành giâm và trên mô nuôi cấy Trong sự hình thành rễ, đặc biệt là rễ phụ, hiệu quả của Aux rất đặc trưng Sự hình thành rễ phụ trong cành giâm, cành chiết có thể được chia làm ba giai đoạn: giai đoạn đầu là phản phân hóa tế bào trước tầng phát sinh, tiếp theo là xuất hiện mầm rễ, cuối cùng là mầm rễ sinh trưởng thành rễ phụ và chọc thủng vỏ và ra ngoài Để khởi xướng sự phản phân hóa tế bào mạnh mẽ thì cần có hàm lượng Aux khá cao Các giai đoạn sinh trưởng của rễ thì cần ít Aux hơn và có khi còn gây ức chế Nguồn Aux này có thể là nội sinh, có thể là do xử lý ngoại sinh Vai trò của Aux trong sự phân hóa rễ còn thể hiện rất rõ trong nuôi cấy mô Trong môi trường nuôi cấy mô chỉ có Aux thì mô nuôi cấy chỉ xuất hiện rễ mà thôi Vì vậy, trong kỹ thuật nhân giống vô tính, việc sử dụng Aux để kích thích ra rễ là cực

kỳ quan trọng và bắt buộc [5], [13]

2.4.1.2 Một số ứng dụng của auxin trong nhân giống vô tính

Nhiều nhà khoa học đã tập trung nghiên cứu cơ sở sinh lý của sự tái sinh rễ

phụ và ứng dụng vào nhân giống vô tính ở nhiều đối tượng cây trồng: cây ăn quả, cây công nghiệp, cây cảnh, cây thuốc… Hiệu quả cao nhất kích thích sự ra rễ là IBA, tiếp theo là IAA, α – NAA và những hóa chất có hoạt tính tương tự Aux, tất cả chúng đều đã được thương mại hóa rộng rãi [5], [13], [53].

Sự kích thích ra rễ bất định của Aux ở cành giâm là do chúng khuếch tán vào bên trong thông qua bề mặt cắt, sau đó tác động gây phản phân hóa để hình thành

rễ IAA được sử dụng đầu tiên trên thị trường mua bán chất điều hòa sinh trưởng ở thực vật, sau đó đến IBA và người ta thấy rằng IBA có hiệu quả tốt hơn trong kích thích rễ cành giâm Ngày nay IBA còn được sử dụng phổ biến để kích thích ra rễ trong công nghệ nuôi cấy lát mỏng (microcutting) [53] Nồng độ sử dụng tùy thuộc vào phương pháp ứng dụng, vào đối tượng sử dụng và mùa vụ sinh trưởng, phát triển của cây Có 3 phương pháp sử dụng chất điều hòa sinh trưởng cho cành giâm: phương pháp nhúng nhanh trong dung dịch kích thích ra rễ có nồng độ đặc (1.000 – 120.000 ppm) trong 3 – 5 giây rồi cắm vào giá thể, phương pháp ngâm lâu trong dung dịch loãng (vài chục đến vài trăm ppm) trong 12 – 24 giờ và phương pháp phun lên lá thay cho xử lý gốc [5], [13]

Trong thí nghiệm nuôi cấy mô khoai tây (Solanum tuberosum L.) của Molla &

cs, sau khi kích thích hình thành chồi bằng BAP, mô nuôi cấy được chuyển sang môi trường chứa 0,5 ppm IBA để cảm ứng hình thành rễ, tỷ lệ sống sau khi đưa ra trồng tự nhiên đạt 100% [40]

Nizamud & cs nghiên cứu ảnh hưởng ảnh hưởng của IBA lên khả năng hình thành rễ trên những mảnh cắt từ củ khoai tây thuộc các dòng khác nhau Những mảnh cắt được nhúng trong dung dịch IBA ở các nồng độ từ 0 – 200 ppm và các thời gian khác nhau, từ 5 - 15 giây Kết quả cho thấy IBA ảnh hưởng rõ rệt đến thời gian hình thành rễ, số lượng rễ và chiều dài rễ ở tất cả các dòng Nồng độ 150 ppm

có hiệu quả cao nhất đối với thời gian bắt đầu hình thành rễ, số lượng rễ Kết hợp giữa nồng độ trên với thời gian nhúng mẫu trong 15 giây thì chiều dài rễ đạt kích thước lớn nhất so với các công thức khác [44]

Để cảm ứng hình thành phôi khi nuôi cấy Xanthosoma sagittifolium (L.)

Schott, Paul & cs sử dụng phối hợp các nồng độ của BAP và NAA thì thấy nồng độ phối hợp của 1 ppm BAP và 2 ppm NAA, tỷ lệ hình thành chồi là cao nhất đạt 90% Phôi đã hình thành chồi được chuyển qua môi trường để tạo rễ, nồng độ 0,4 ppm

IAA được coi là tốt nhất để cảm ứng hình thành rễ [46].

Virendra & cs sử dụng Aux loại 2,4-D nồng độ 10 ppm để cảm ứng hình thành

phôi trong thí nghiệm nuôi cấy mô khoai nước (Colocasia esculenta (L.) Schott)

Tiếp theo mẫu nuôi cấy được chuyển sang môi trường có bổ sung 2 µM 2,4-D nhằm kích thích sự phản phân hóa hình thành rễ Kết quả quan sát cho thấy 100% rễ hình thành sau 1 tuần và sau 4 tuần rễ được hình thành với số lượng trung bình 10 rễ/1 chồi với chiều dài khoảng 8–15 cm [55]

Nghiên cứu của Nguyễn Thị Ngọc Hương & Võ Thị Bạch Mai trên mảnh lá

cây nhàu (Morinda citrifolia L.) cho thấy khi nuôi cấy mảnh lá trên môi trường MS

có bổ sung các loại Aux khác nhau như IAA, IBA, NAA, 2,4 – D, tất cả đều ở nồng

độ 0,1 mg/l Tiến hành khảo sát sự hình thành rễ sau 4 tuần, thì thấy các loại Aux đều ảnh hưởng đến sự hình thành rễ, trong đó môi trường có bổ sung NAA tỷ lệ tạo

rễ, số lượng và trọng lượng rễ cao nhất 2,4-D kích thích sự hình thành rễ nhưng ngăn cản sự kéo dài rễ Ngược lại với 2,4-D, các loại Aux khác như IAA, IBA và NAA đều kích thích sự kéo dài rễ [2]

Khi nhân giống hom quế của những hom được lấy từ thân của cây 1 năm tuổi

và những cành bánh tẻ những cây từ 3, 5, 7, 10, 13 và 15 năm tuổi, kích thước hom xấp xỉ 5 cm, có ít nhất hai chồi ngủ trở lên, sử dụng các chất kích thích ra rễ là IAA, IBA, ABT, với các nồng độ 0,5, 0,75, 1,0 và 1,5%, Nguyễn Huy Sơn đã kết luận khi giâm hom vào mùa hè với IBA 1% cho tỷ lệ cao nhất, đạt khoảng 77% [9]

Cũng theo nghiên cứu của tác giả này trên giống hồi cho thấy IBA và IAA ở nồng độ 1% đều có tác dụng kích thích ra rễ của hom thân cây hồi 2 tuổi đạt tới 70% [10]

Nguyễn Đình Sỹ & cs nghiên cứu trên giống điều cao sản (Anacardium occidebtable L.), sử dụng chồi in vitro phát triển từ đốt thân, chiều cao 2,5 – 3,0 cm,

mang 4 lá dùng làm mẫu thí nghiệm Gốc chồi được ngâm trong 1 giờ với dung dịch NAA và IBA, nồng độ 100 mg/l trong tủ cấy vô trùng Sau đó, chuyển chồi qua môi trường nuôi cấy giống nhau Kết quả cho thấy IBA ảnh hưởng đến sự tạo rễ tốt hơn NAA khi xử lý cùng nồng độ và các yếu tố nuôi cấy được sử dụng trong thí nghiệm Số rễ trên một chồi xuất hiện lớn hơn gấp hai lần so với NAA [11]

Theo kết quả nghiên cứu của Bùi Trung trên hom giâm sao đen cho thấy NAA

có tác dụng kích thích ra rễ, còn GA3 ức chế ra rễ Nồng độ NAA thích hợp cho khả

năng ra rễ của hom giâm là 1.000 ppm với thời gian nhúng hom giâm 5 giây Nồng

độ càng cao và thời gian nhúng hom giâm càng lớn thì khả năng ức chế của NAA

và GA3 càng mạnh Hom giâm 1 tuổi có khả năng ra rễ tốt hơn hom giâm 2 và 3 tuổi [12]

Từ một kết quả của một số công trình nghiên cứu kể trên, có thể một lần nữa khẳng định vai trò to lớn của Aux trong sự kích thích sự ra rễ ở hầu hết các đối tượng thực vật, cả cây gỗ hoặc cây thân thảo và đã được ứng dụng rộng rãi trong nhân giống vô tính Nồng độ xử lý khác nhau ở các đối tượng, phương pháp và môi trường nghiên cứu Kết quả của việc xử lý kích thích ra rễ phụ thuộc vào đối tượng

xử lý, nồng độ, mùa vụ xử lý, cũng như loại Aux được sử dụng để thí nghiệm

2.4.2 Tác dụng sinh lý và một số ứng dụng của gibberellin

2.4.2.1 Tác dụng sinh lý của gibberellin

* Tác dụng chung của gibberellin

Gibberellin là nhóm phytohormone thứ hai được phát hiện sau Aux Từ việc nghiên cứu bệnh lúa von, một triệu chứng bệnh rất phổ biến trong nghề trồng lúa ở các nước phương Đông thời bấy giờ, dẫn đến nghiên cứu cơ chế gây bệnh và cuối cùng tách được hàng loạt các chất là sản phẩm tự nhiên của nấm bệnh cũng như từ thực vật bậc cao gọi là gibberellin Hiện nay, người ta đã phát hiện được trên 50 loại gibberellin và ký hiệu A1, A2, …, A52 hoặc GA1, GA2, …, GA5,…, trong đó A3 (acid gibberellic) có hoạt tính mạnh nhất [5], [13]

Tất cả các gibberellin (GA) đều có cùng một vòng gibban cơ bản, còn điểm khác biệt nhỏ giữa chúng chủ yếu là vị trí của nhóm –OH trong phân tử [5], [13]

GA được tổng hợp trong phôi đang sinh trưởng, trong các cơ quan đang sinh trưởng khác như lá non, rễ non, quả non… GA được vận chuyển không phân cực,

có thể hướng ngọn và hướng gốc tùy vào vị trí cơ quan sử dụng Trong tế bào, nơi tổng hợp GA mạnh nhất là ở lục lạp GA ở trong cây cũng có thể ở dạng tự do hay dạng liên kết như Aux, chúng có thể liên kết với protein hay với glucose Khác với Aux, GA khá bền vững trong cây và khả năng phân hủy của chúng là rất ít [5], [13].Vai trò sinh lý của GA:

Hiệu quả sinh lý rõ rệt nhất của GA là kích thích mạnh mẽ sự sinh trưởng kéo dài của thân, sự vươn dài của lóng cây họ lúa Hiệu quả này có được do ảnh hưởng kích thích đặc trưng của GA lên pha giãn của tế bào theo chiều dọc Vì vậy, khi xử

lý GA làm tăng nhanh sự sinh trưởng dinh dưỡng nên làm tăng sinh khối của chúng.

GA ảnh hưởng rõ rệt lên sinh trưởng các đột biến lùn Các nghiên cứu về trao đổi chất di truyền của GA khẳng định rằng các đột biến lùn của một số thực vật như ngô, đậu Hà lan (chiều cao của cây chỉ bằng 20% chiều cao của cây bình thường) là các đột biến gen đơn giản, dẫn đến sự thiếu những gen chịu trác nhiệm tổng hợp các enzyme của một số phản ứng trên con đường tổng hợp GA mà cây không thể hình thành được GA dù là một lượng rất nhỏ Với những đột biến này thì việc bổ sung

GA ngoại sinh sẽ làm cho cây sinh trưởng bình thường [5], [13]

Trong nhiều trường hợp, GA kích thích sự ra hoa rõ rệt Ảnh hưởng đặc trưng của lên sự ra hoa là kích thích sự sinh trưởng kéo dài và nhanh chóng của cụm hoa

Vì vậy trong thuyết hormone ra hoa (florigen) của Trailachyan thì GA được xem như một thành viên của tổ hợp florigen Xử lý GA cho cây ngày dài thì chúng có thể ra hoa trong điều kiện ngày ngắn và làm tăng hiệu quả của xuân hóa, có thể biến cây 2 năm thành cây một năm [5], [13]

Trong sự phát triển và phân hóa của cơ quan sinh sản thì GA ảnh hưởng đến khả năng phân hóa giới tính: ức chế hoa cái phát triển nhưng lại kích thích sự phát triển của hoa đực [5], [13]

Đối với quá trình sinh trưởng của quả và tạo quả không hạt thì GA có vai trò gần như Aux vì nó làm tăng kích thước của quả và tạo nên quả không hạt trong một

số trường hợp Hiệu quả tác động này càng rõ rệt khi phối hợp tác dụng với Aux

Vì GA có ảnh hưởng rõ rệt lên các quá trình trao đổi chất, các hoạt động sinh

lý, đến quá trình sinh trưởng và phát triển của cây nên GA được coi là một trong những chất điều tiết sinh trưởng được ứng dụng hiệu quả trong nông nghiệp

GA được coi là hormone phá vỡ trạng thái ngủ nghỉ ở cả chồi cũng như củ và hạt của thực vật [5], [13]

* Ảnh hưởng của gibberellin đến trạng thái ngủ nghỉ của thực vật

GA kích thích sự nảy mầm của hạt và củ nên có tác dụng đặc trưng trong việc phá bỏ trạng thái ngủ, nghỉ ở những đối tượng có giai đoạn này trong chu kì sống

Sự ngủ nghỉ ở hầu hết thực vật có liên quan đến nồng độ của hormone Những nghiên cứu sinh lý ngủ nghỉ đã khẳng định khi cân bằng lệch về phía hormone ức chế ABA (acid abscixic) và ethylen, gây ra sự ngủ nghỉ Khi cân bằng nghiêng về các hormone sinh trưởng như Aux, GA, cytokine tăng lên, đó cũng là lúc chồi, phôi

được “đánh thức” để bắt đầu giai đoạn sinh trưởng mới [3], [5], [13].

Điều khiển thời gian ngủ và nảy mầm phụ thuộc chủ yếu vào tỷ lệ ABA:GA ABA cũng như các chất ức chế khác được hình thành trong quá trình trưởng thành của cây, vẫn duy trì tổng hợp cao trong giai đoạn nghỉ Giai đoạn cuối, nồng độ và hoạt động sinh tổng hợp, tính nhạy cảm của chất ức chế giảm đi, sinh tổng hợp GA cũng như nồng độ và tính nhạy cảm của GA tăng lên, kích thích sự nảy chồi [3], [5], [13], [30], [31], [39], [50] Tuy nhiên, vấn đề kích thích nảy mầm của GA vẫn còn nhiều tranh cãi Sự chuyển đổi trạng thái này thường liên quan đến tín hiệu môi trường Ánh sáng, nhiệt độ là những nhân tố tác động đến tổng hợp GA và suy giảm

ABA ở Arabidopsis [50] Rõ ràng các yếu tố cảm ứng cho hoạt động sinh tổng hợp

hay suy thoái các hormone ABA, GA, tác động đến quá trình giải phóng ngủ nghỉ

và nảy mầm

Khi nồng độ các hormone ức chế đã giảm, thay vào đó là tác động mạnh của các hormone kích thích sinh trưởng làm tăng hoạt tính của các enzyme phân giải và tổng hợp Trong trường hợp này, GA kích thích sự tổng hợp enzyme amilase và các enzyme thủy phân khác như protease, phosphatase, …, và làm tăng hoạt tính của những enzyme này Vì vậy mà GA giúp xúc tiến quá trình phân hủy tinh bột thành đường cũng như các polymer thành các monomer khác, tạo điều kiện về mặt nguyên liệu và năng lượng cho quá trình nảy mầm Đây là con đường chung trong sinh lý nảy mầm của tất cả các đối tượng thực vật GA còn có tác dụng thúc đẩy pha phát triển phôi sang pha phát triển dinh dưỡng [3], [50] Trên cơ sở đó, xử lý GA ngoại sinh có thể phá vỡ trạng thái ngủ, nghỉ của hạt, củ, căn hành kể cả trạng thái nghỉ sâu Không chỉ có những enzyme phân giải hợp chất dự trữ bên trong củ mà còn có tham gia của những enzyme phân giải vách tế bào Vách tế bào thực vật được cấu tạo từ những polymer phức tạp: cellulose, hemicellulose, lignin…, các thành phần đó được gắn kết với nhau bởi các loại protein đặc biệt, làm cho vách tế bào trở nên vững chắc Cấu trúc vách dày ngăn cản sự hấp thụ nước, oxy… cũng là nhân tố ngăn cản sự nảy mầm Những bằng chứng đã chứng minh endo – β – 1,4 mannanase và endo–β–1,3 glucanase xuất hiện làm biến đổi protein của vách nên ảnh hưởng đến mối liên hệ giữa các tế bào Ở những đối tượng đang “ngủ”, hoạt động của những enzyme này bị ức chế bởi ABA, chúng chỉ được hoạt hóa dưới tác dụng của GA β–1,3 glucanase là một protein bám màng

glycosylphosphatidylinosytol, có hoạt tính enzyme đồng thời giống như receptor liên quan đến tính gắn kết của các tế bào, quá trình phân chia, biệt hóa tế bào Hoạt động phân giải vách phá vỡ liên kết nội bào của enzyme này kích thích cho hoạt động phân chia và hoạt hóa tế bào diễn ra thuận lợi và mạnh mẽ hơn [3], [33], [57] Đồng thời, khi vách biến đổi làm tăng cường khả năng hấp thụ nước, oxi, và chất dinh dưỡng từ môi trường ngoài, tạo điều kiện cho hô hấp diễn ra mạnh hơn Ngoài

ra còn có các loại oxydase như peroxydase, amine oxydase…, hoạt động của các enzyme này cũng tạo điều kiện cho nảy mầm [3], [33]

2.4.2.2 Một số ứng dụng của gibberellin

Để phá bỏ trạng thái ngủ nghỉ, người ta sử dụng chủ yếu GA3 Khi GA3 xâm nhập vào cơ quan đang ngủ nghỉ sẽ làm lệch cân bằng hormone thuận lợi cho sự nảy mầm [5], [13] Trên thế giới và ở Việt Nam, có nhiều công trình nghiên cứu ứng dụng GA để phá ngủ ở một số đối tượng

Okezie & cs xử lý với các hóa chất nhóm Aux: IAA, NAA, IBA, và 2,4–D; nhóm GA: GA3, GA4, và GA7, nhóm cytokinin: BAP và kinetin; 3 loại ức chế sự

nảy mầm, sinh trưởng gồm ABA, ancymidol và ethephon trên khoai mỡ (Dioscorea rotundata) là đối tượng cũng thuộc họ Ráy (Araceae) trồng ở Gile Tất cả các

hormone đều được xử lý với nồng độ 0 – 50 mg/l (ppm) Kết quả thu được cho thấy: những công thức thí nghiệm tiến hành với chất ức chế đều không xảy ra nảy mầm Tỷ lệ nảy mầm cao nhất 92,4% với GA4 ở nồng độ 5 mg/l Với nồng độ như trên, tỷ lệ nảy mầm tương ứng ở GA3 và GA7 là 76,6 và 73,2% Khi không xử lý, chỉ có 4,6% hạt nảy mầm Hiệu quả kích thích tăng lên khi tăng nồng độ xử lý từ 0,0 – 5,0 mg/l, ở nồng độ cao hơn thì hiệu quả kích thích giảm đi Với những công thức được xử lý với Aux và cytokinin đều cho kết quả thấp hơn nhiều lần so với các công thức xử lý bằng GA [41]

Hala & cs dùng GA để kích thích những chồi ngủ ở dâu tây (Fragaria x ananassa cv Camarosa), thấy hiệu quả kích thích đạt 97% trên tổng số chồi ngủ ở

nồng độ 50 ppm [45]

Rahman & cs xử lý kích thích bằng GA3 trên tỏi, ở 3 loại nhánh có kích thước lớn, kích thước trung bình và kích thước nhỏ, với các nồng độ từ 0 – 500 mg/l, thì thấy rằng ở nồng độ 125 mg/l và nồng độ 250 mg/l đều cho hiệu quả hơn so với 2 nồng độ còn lại ở tất cả các kích thước [54]

Ở nước ta, việc nghiên cứu ứng dụng những vai trò của GA vào sản xuất đã được tiến hành trên nhiều đối tượng và đưa vào áp dụng khá rộng rãi trong thực tế.

Bộ môn Sinh lý Sinh hóa trường Đại học Nông nghiệp I Hà Nội đã nghiên cứu biện pháp phá ngủ nghỉ cho khoai tây thu hoạch vụ đông để trồng vụ xuân, đã xây dựng được quy trình tối ưu cho việc phá ngủ khoai tây vừa thu hoạch, đạt tỷ lệ nảy mầm trên 90% trong 5 – 7 ngày Biện pháp này bao gồm các công đoạn phun dung dịch GA3 và sau đó xông hơi bằng rindite hoặc CS2 trong 3 ngày dưới hầm kín đất Biện pháp phá ngủ hữu hiệu này đã được ứng dụng rộng rãi trong sản xuất khoai tây xuân hiện nay, giúp cho người nông dân chủ động được giống vụ xuân mà không phải nhập nội giống [5], [13]

Lê Công Xuân & cs nghiên cứu hiệu quả của GA3 cho hạt trước khi gieo đến khi sinh trưởng và năng suất của rau muống ở bằng cách ngâm hạt ở các nồng độ 5,

10, 15, 20, 25, 30 ppm, kết quả thu được đã chứng minh GA3 có làm tăng tỷ lệ nảy mầm của hạt rau muống Cao nhất ở công thức 15 ppm, tăng 3% so với đối chứng Ngoài tăng tỷ lệ nảy mầm, nó còn có làm tăng thời gian nảy mầm, sớm hơn so với đối chứng 0,75 – 0,77 ngày [14]

Hoa Loa kèn (Lilium longiflorum Thunb) là đối tượng được trồng từ củ cũng

phải trải qua một thời gian ngủ Ở Đà Lạt, để rút ngắn thời gian ngủ, người ta đã sử dụng dung dịch GA từ 10 đến 15 mg/l theo cách phun ướt đẫm hoặc ngâm củ của

nó Sau đó đem đi xử lý lạnh trong một thời gian nhất định, việc làm này đã có hiệu quả giúp tăng mùa vụ tăng thu nhập cho người trồng hoa [59]

Rõ ràng, GA3 là hormone có vai trò to lớn, ảnh hưởng đến nhiều hoạt động sinh lý của thực vật Ảnh hưởng đó khác nhau ở các đối tượng khác nhau Con người đã nghiên cứu ứng dụng GA3 rộng rãi vào sản xuất, xử lý ở nhiều giai đoạn sinh trưởng, phát triển khác nhau, đem lại năng suất và lợi nhuận kinh tế cao

PHẦN III ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

3.1 Đối tượng và nội dung nghiên cứu

3.1.1 Đối tượng nghiên cứu

- Đối tượng nghiên cứu: cây

nưa còn được gọi với tên konjac,

tên khoa học là Amorphophallus

3.1.2 Nội dung nghiên cứu

- Nghiên cứu một số chỉ tiêu sinh trưởng của nưa

- Nghiên cứu một số thành phần hóa sinh ở thân nưa

- Nghiên cứu ảnh hưởng của Aux và GA3 lên khả năng nhân giống vô tính củ nưa

3.2 Phương pháp nghiên cứu

3.2.1 Bố trí và theo dõi thí nghiệm

3.2.1.1 Nghiên cứu các chỉ tiêu sinh trưởng của nưa trồng trong điều kiện tự

nhiên

- Cây nưa được trồng tại thôn La Vân Thượng, xã Quảng Thọ, huyện Quảng Điền, Thừa Thiên Huế từ tháng 6 đến hết tháng 11 năm 2010, khâu làm đất và chăm sóc đều theo chế độ canh tác của địa phương

- Các củ nưa giống có khối lượng, kích cỡ đồng đều được giâm với mật độ 40×40 cm

- Diện tích trồng: 15 m2, được chia thành 3 lô, mỗi lô ứng với 5 m2

- Theo dõi thời gian ra chồi, chiều cao thân (chột), chiều dài lá, theo thời gian

Hình 3.1 Cây nưa

sinh trưởng của nưa (14 ngày/lần), xác định khối lượng tươi, khối lượng khô của các chột tại thời điểm thu hoạch.

3.2.1.2 Thí nghiệm theo dõi ảnh hưởng của IBA và GA 3

* Thăm dò ảnh hưởng của IBA: tiến hành thăm dò ảnh hưởng của nồng độ

IBA lên sự ra rễ của nưa qua xử lý 7 công thức ở 7 nồng độ khác nhau:

- CT1: đối chứng: Không xử lý IBA - CT2: xử lý với IBA 50 ppm

- CT3: xử lý với IBA 100 ppm - CT4: xử lý với IBA 300 ppm

- CT5: xử lý với IBA 500 ppm - CT6: xử lý với IBA 700 ppm

* Nghiên cứu ảnh hưởng của GA 3 đến sự phát triển của chồi:

Tiến hành xử lý củ nưa giống với GA3 ở các nồng độ từ 0 – 500 ppm:

- CT1: đối chứng: không xử lý GA3 - CT2: xử lý với GA3 50 ppm

- CT3: xử lý với GA3 100 ppm - CT4: xử lý với GA3 300 ppm

- CT5: xử lý với GA3 500 ppm

Sơ đồ thí nghiệm được bố trí theo kiểu hình khối ngẫu nhiên như sơ đồ sau:

Theo dõi thời gian ra chồi, chiều dài chồi, số lượng chồi/củ, từ đó rút ra nồng

độ GA3 thích hợp nhất đối với việc tạo chồi

* Nghiên cứu ảnh hưởng phối hợp của IBA và GA 3 : trên cơ sở kết quả của

thí nghiệm xử lý riêng rẽ, đem phối hợp xử lý các nồng độ có tác dụng nhất lên sự hình thành rễ và chồi, từ đó rút ra được hiệu quả kích thích khi phối hợp đồng thời IBA và GA3

* Cách xử lý:

- Củ nưa giống có kích thước, khối lượng đồng đều được ngâm trong dung dịch chất điều hòa sinh trưởng 10 giờ, thể tích dùng để ngâm là 0,5 l/10 củ Sau đó giâm củ với mật độ 40×40 cm, việc chăm sóc dựa theo quy trình của người dân địa phương

- Tiến hành đo, đếm các chỉ tiêu với khoảng cách thời gian các lần theo dõi: 7 ngày/lần

3.2.2 Phương pháp nghiên cứu, phân tích các chỉ tiêu

3.2.2.1 Phương pháp xác định các chỉ tiêu sinh trưởng của cây

* Trong điều kiện tự nhiên:

- Thời gian ra chột: tính từ ngày bắt đầu giâm củ đến khi chột 1, 2, 3 xuất hiện (đơn vị: ngày)

- Thời gian sinh trưởng: tính từ khi chột xuất hiện đến khi thu hoạch (đơn vị: ngày)

- Chiều cao thân: đo từ gốc đến điểm phân nhánh của thân (đơn vị: cm)

- Đường kính thân: đo chu vi của thân, cách gốc 15 cm sau đó tính đường kính

theo công thức C=2πR (đơn vị: cm).

- Chiều dài lá: chọn lá dài nhất, đo từ điểm phân nhánh đến mút của lá (đơn vị: cm)

(Các kích thước được đo bằng thước có chia chính xác đến mức mm)

- Xác định khối lượng tươi và khối lượng khô của cây: mẫu sau khi thu được rửa sạch, lau khô, cân chính xác đến mức gam, để xác định khối lượng tươi của cây Sấy khô đến khối lượng không đổi rồi cân trên cân điện tử có độ chính xác 0,001 g thì được khối lượng khô

* Trong điều kiện thí nghiệm:

- Xác định thời gian ra rễ (tính theo ngày, kể từ ngày giâm củ)

- Xác định số lượng rễ trung bình bằng phương pháp đếm

- Xác định chiều dài của rễ bằng phương pháp đo từ cổ rễ đến mút rễ bằng thước đo có chia đến mm

- Xác định thời gian ra chồi (tính theo ngày, kể từ ngày giâm củ)

- Xác định chiều dài của chồi bằng cách đo từ gốc chồi đến mút chồi bằng thước đo có chia đến mm

- Xác định số lượng chồi/củ bằng phương pháp đếm

- Số củ mỗi lần đo, đếm: 5 củ

3.2.2.2 Định lượng một số thành phần sinh hóa của cây

* Định lượng vitamin C theo phương pháp chuẩn độ bằng Iod [7]

* Định lượng cellulose theo phương pháp thủy phân bằng acid [7]

* Định lượng N tổng số theo phương pháp Kjeldahl [7]

* Định lượng K tổng số bằng phương pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử AAS [4]

* Định lượng phospho tổng số theo phương pháp so màu [7]

* Định lượng tinh bột thật từ củ [6]

Cân 2 g bột hay nguyên liệu khô đã xay hay nghiền kỹ cho vào phễu sứ có lót giấy lọc Dùng ether – cồn 700 – nước cất để rửa kết tủa theo tuần tự trên, mỗi thứ rửa 2 lần, rửa xong bằng loại này mới chuyển sang rửa bằng loại tiếp theo Mỗi lần rửa cần dùng 20 ml mỗi loại

Chuyển cặn và giấy lọc sang cốc thủy tinh, cho vào cốc tiếp 11 ml nước cất +14 ml HCl đậm đặc Khuấy kỹ để cho tinh bột tan hết rồi chuyển toàn bộ sang

bình định mức 100 ml Rửa sạch cốc rồi dồn nước rửa sang bình định mức, thêm nước cất cho 100 ml.

Lấy 50 ml dịch lọc trên cho vào cốc thủy tinh khác, thêm vào đó 110 ml cồn

960 để trong tủ lạnh qua đêm (11-12 giờ)

Lọc kết tủa qua giấy lọc, đem cân kết tủa để xác định khối lượng của kết tủa tức là khối lượng của tinh bột Để cân kết tủa, giấy lọc trước khi dùng để lọc cần sấy khô, cân giấy lọc được P1(g) Sau khi sấy cả giấy lọc và kết tủa là P2 (g) Lượng tinh bột được kết tủa sẽ là P2- P1= PTB (g) Đó là lượng tinh bột có trong 50 ml dịch lọc tức là của một gam nguyên liệu (vì 2 g nguyên liệu rút ra 100 ml dịch lọc) Vậy hàm lượng tinh bột/100 g nguyên liệu sẽ là:

100100

)(

a Xây dựng đường chuẩn

- Cân chính xác 0,1000 gam D-Glucose cho vào bình định mức 100 ml rồi định mức bằng nước cất Như vậy, nồng độ dung dịch D-Glucose là 1 mg/ml (1000 µg/ml)

- Lấy 50 ml dung dịch Glucose ở trên pha thành 500 ml thu được dung dịch Glucose có nồng độ 100 µg/l

D Lần lượt lấy 0; 25; 50; 75; 100 ml dung dịch DD Glucose trên pha thành 100 ml thu được dãy dung dịch D-Glucose có nồng độ là 0; 25; 50; 75; 100 µg/ml

- Mỗi mẫu lấy 1 ml cho vào ống nghiệm có nút, thêm vào mỗi ống nghiệm 1 ml dung dịch phenol 5%, 5 ml dung dịch H2SO4 đậm đặc, lắc đều các ống nghiệm

- Đặt các ống nghiệm vào cốc nước sôi trong 2 phút, sau đó làm lạnh các ống nghiệm ở nhiệt độ phòng trong 30 phút

- Đo độ hấp thụ quang (A) của các dung dịch này ở bước sóng 490 nm, thu được các giá trị A1, A2, A3, A4, A5

- Từ kết quả thu được, xây dựng đường chuẩn

mô tả, dùng phép so sánh với LSD, với mức ý nghĩa p<0,05

PHẦN IV KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 4.1 Các chỉ tiêu sinh trưởng

4.1.1 Thời gian sinh trưởng

Thời gian sinh trưởng của thực vật khác nhau tùy theo từng loài, điều kiện thời tiết, thời vụ trồng…

Tổng thời gian sinh trưởng, phát triển của nưa từ khi giâm củ đến khi thu hoạch kéo dài khoảng 5 tháng đến 5 tháng rưỡi Trong quá trình này, nưa lần lượt hình thành 3 chột, mỗi chột hình thành ở các thời điểm khác nhau và có thời gian sinh trưởng khác nhau, thể hiện qua kết quả thu được ở bảng 4.1

Bảng 4.1 Thời gian sinh trưởng của các chột (đơn vị: ngày)

Thời gian ra chột: các chột không hình thành cùng một thời điểm mà hình thành ở ba thời điểm khác nhau Từ kết quả ở bảng 4.1 cho thấy chột 1 xuất hiện sau khi giâm củ khoảng 20 ngày Sau khi chột 1 phát triển được khoảng 35 ngày thì chột 2 được hình thành, từ gốc thân của chột 1 (tức là chột 2 xuất hiện sau khi giâm

củ khoảng 55 ngày) Chột 3 mọc lên sau khi giâm củ khoảng 83 ngày tức là sau khi chột 2 đã trải qua khoảng 28 ngày sinh trưởng Như vậy, khi một chột sinh trưởng được khoảng 28 – 35 ngày thì chột tiếp theo sẽ được hình thành

Thời gian sinh trưởng của chột: kết quả ở bảng 4.1 cho chúng ta thấy chột 2 có thời gian sinh trưởng dài nhất, trung bình khoảng 87 ngày, chột 3 có thời gian sinh trưởng trung bình là 78 ngày, trong khi chột 1 trung bình khoảng 65 ngày, ngắn hơn thời gian sinh trưởng trung bình của chột 2 và 3 tương ứng là 22 và 13 ngày

Khoảng thời gian sinh trưởng của các chột khác nhau có thể một phần chịu tác động của điều kiện thời tiết, khí hậu Điều kiện này thuận lợi hơn cho sinh trưởng phát triển của chột 2 nên thời gian sinh trưởng của chột 2 kéo dài hơn so với chột 1

và chột 3 Trong khi đó, điều kiện không thích hợp trong quá trình sinh trưởng, phát triển của chột 1 và 3 nên thời gian sinh trưởng của chúng ngắn lại

4.1.2 Một số chỉ tiêu sinh trưởng

Sự sinh trưởng của cây được thể hiện qua nhiều chỉ tiêu Trong nghiên cứu này, chúng tôi khảo sát các chỉ tiêu chiều cao thân cây, đường kính thân, chiều dài

lá, là những yếu tố tham gia cấu thành năng suất của cây

Như đã đề cập, nưa hình thành 3 chột ở các thời điểm khác nhau, kết quả sinh trưởng của các chột khác nhau thì khác nhau Điều này được thể hiện ở các kết quả dưới đây:

4.1.2.1 Chột 1

Chiều cao cây cuối cùng là chỉ tiêu phản ánh rõ nét nhất về tình trạng sinh trưởng và phát triển của cây Khi các điều kiện độ ẩm, ánh sáng… phù hợp, cây sinh trưởng mạnh, chiều cao cây tăng lên, các chỉ tiêu khác cũng tăng lên theo Chiều cao cây nưa còn có ý nghĩa quan trọng vì nó liên quan đến năng suất chất xanh, là yếu tố chủ yếu cấu thành năng suất và kinh tế của nưa Đây là đặc điểm của giống, tuy nhiên nó cũng phụ thuộc nhiều vào điều kiện bên ngoài Các chỉ tiêu sinh trưởng của chột 1 được thể hiện qua bảng dưới đây:

Bảng 4.2 Một số chỉ tiêu sinh trưởng của chột 1 qua thời gian sinh trưởng

Chỉ tiêuThời

gian sinh trưởng

Chiều cao thân trung bình (cm)

Đường kính thân trung bình (cm)

Chiều dài lá trung bình (cm)

Chữ cái trong cùng một cột biểu thị mức độ sai khác, với p<0,05.

Từ kết quả được thể hiện ở bảng 4.2 nhận thấy tất cả các chỉ tiêu được xét tăng lên liên tục, có sự khác nhau về ý nghĩa thống kê với p<0,05 Tuy nhiên tốc độ tăng không đều qua các thời gian, có mức chênh lệch lớn giữa 3 lần đo đầu tiên chứng tỏ tốc độ sinh trưởng mạnh ở những thời điểm này, sau đó giảm dần Cụ thể:

Chiều cao thân: trong khoảng 14 ngày đầu tiên sau khi hình thành chột,

chiều cao của chột rất thấp, chỉ đạt khoảng 5 cm Ngày thứ 28 chiều cao chột đạt

19,68 cm, đến ngày thứ 42 chiều cao đã tăng lên 31,21 cm, tức là sau 14 ngày chiều cao chột tăng lên 14,68 cm, tương đương với tốc độ khoảng 1,04 cm/ngày đêm Ở ngày thứ 56, chiều cao đo được là 37,32 cm, nhưng đến ngày thứ 70 chiều cao chỉ đạt 39,97 cm, mức chênh lệch giữa 2 lần đo cuối cùng chỉ đạt 2,65 cm Như vậy chiều cao chột tăng lên nhanh đến ngày thứ 42, sau đó sự sinh trưởng chậm lại Kết quả này được thấy rõ ở biểu đồ 4.1

Biểu đồ 4.1 Chiều cao thân trung bình chột 1

Đường kính thân: vì đường kính đo cách gốc 15 cm, nhưng ở 14 ngày đầu

tiên chiều cao chột chưa đạt đến 15 cm, nên đường kính không được xác định Đường kính tăng rất nhanh sau ngày thứ 14, đến ngày thứ 28 đã đạt đến 1,66 cm Ở giữa 2 lần đo vào ngày thứ 42 (lần 3) và ngày thứ 56 (lần 4), đường kính có tăng nhưng không có sự sai khác với mức ý nghĩa thống kê p<0,05 Lần đo thứ 5 (ở ngày thứ 70), đường kính thân đo được là 2,48 cm chỉ cao hơn lần đo thứ 4 là 0,19 cm Kết quả này cho thấy đường kính tăng chậm từ lần thứ 3 trở đi Biểu đồ 4.2 cho thấy rõ xu hướng sinh trưởng trên

Biểu đồ 4.2 Đường kính trung bình chột 1

Chiều dài lá: như đã đề cập, khi chồi mới hình thành được bao bọc trong cấu

trúc gọi là bao lá, lá thật chỉ được hình thành khi những bao lá này rách ra và teo đi

Ở ngày thứ 14, lá thật chưa xuất hiện Đến ngày thứ 28 thì chiều dài lá đã đạt đến 25,35 cm Khoảng thời gian 14 ngày giữa 2 lần đo nói trên, chiều dài lá có mức tăng nhanh nhất, chứng tỏ bộ lá phát triển mạnh nhất trong giai đoạn này Ngày thứ 42, chiều dài lá đo được là 31,1 cm, nhưng đến ngày thứ 70 (sau 28 ngày sinh trưởng), chiều dài chỉ đạt 40,82 cm Như vậy, chiều dài lá tăng lên liên tục ở các thời điểm

đo, nhưng tăng mạnh mẽ nhất từ ngày thứ 14 đến ngày thứ 42, sau đó thì chậm lại

Biểu đồ 4.3 Chiều dài lá trung bình chột 1

Qua phân tích sự sinh trưởng của chột 1 đã cho chúng ta thấy chiều cao thân, đường kính thân, độ dài lá tăng lên theo thời gian sinh trưởng, nhưng mức độ tăng mạnh cho đến ngày thứ 42 sau đó chậm lại Kết quả này thể hiện tốc độ phát triển của cây diễn ra nhanh và mạnh mẽ từ khi chột hình thành đến ngày thứ 42, sau đó

sự sinh trưởng của chột giảm dần

4.1.2.2 Chột 2

Sau khi giâm củ khoảng 55 ngày, chột 2 bắt đầu hình thành từ gốc của chột 1, trải qua quá trình sinh trưởng tương tự chột 1 Kết quả theo dõi quá trình sinh trưởng của chột 2 được thể hiện ở bảng 4.3

Bảng 4.3 Một số chỉ tiêu sinh trưởng của chột 2 qua thời gian sinh trưởng

Chỉ tiêu Thời

gian sinh trưởng

Chiều cao thântrung bình (cm)

Đường kính thântrung bình (cm)

Chiều dài lá trung bình (cm)

Chữ cái trong cùng một cột biểu thị mức độ sai khác, với p<0,05.

Từ kết quả được trình bày trong bảng 4.3 cho chúng ta nhận xét tốc độ sinh trưởng của chột 2 thông qua sự tăng lên của chiều cao thân, đường kính và chiều dài

lá như sau:

Chiều cao thân: chiều cao thân cũng tăng lên liên tục qua các thời điểm đo,

có sự sai khác với mức ý nghĩa thống kê p<0,05 Chiều cao đo được là 8,84 cm vào ngày thứ 10 sau khi chột hình thành, kích thước này đã tăng lên đến 23,99 cm vào ngày thứ 24, có nghĩa là chênh lệch giữa 2 lần đầu là 15,15 cm, tương đương với tốc

độ tăng khoảng 1,1 cm/ngày đêm Chiều cao đo được ở ngày thứ 38 là 54,06 cm, cao hơn ở ngày thứ 24 là 31,07 cm Trong khi đó, chiều cao ở ngày thứ 80 và 94 đo được lần lượt là 76,82 cm và 79,24 cm, mức tăng lên không đáng kể, chỉ 2,42 cm Như vậy, chiều cao thân chột 2 tăng lên nhanh chóng cho đến ngày thứ 52, sau đó mức độ tăng chậm dần Lấy chiều cao cuối cùng làm mốc so sánh, chột 2 đạt đến 79,24 cm, cao trong khi chột 1 chỉ có 39,97 cm, thấp hơn chột 2 là 39,27 cm