Nghiên cứu chế biến vị thuốc đảng sâm

Nghiên cứu chế biến vị thuốc đảng sâm Nghiên cứu chế biến vị thuốc đảng sâm Nghiên cứu chế biến vị thuốc đảng sâm Nghiên cứu chế biến vị thuốc đảng sâm Nghiên cứu chế biến vị thuốc đảng sâm Nghiên cứu chế biến vị thuốc đảng sâm Nghiên cứu chế biến vị thuốc đảng sâm Nghiên cứu chế biến vị thuốc đảng sâm Nghiên cứu chế biến vị thuốc đảng sâm Nghiên cứu chế biến vị thuốc đảng sâm Nghiên cứu chế biến vị thuốc đảng sâm Nghiên cứu chế biến vị thuốc đảng sâm Nghiên cứu chế biến vị thuốc đảng sâm Nghiên cứu chế biến vị thuốc đảng sâm Nghiên cứu chế biến vị thuốc đảng sâm Nghiên cứu chế biến vị thuốc đảng sâm

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI

************************

-TRẨN THI BÍCH HẲNG

NGHIÊN CỨU CHÊ BIẾN VỊ THUỐC ĐẢNG SÂM

(KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP Dược s ĩ KHOÁ 1996-2001)

Người hướng dẫn: ThS Nguyễn Mạnh Tuvển

ThS Hoàng Minh Chung Nơi thực hiện: Bộ môn Dược học cổ truyề Thời gian thực hiện: 5/3-22/5-2001

Hà Nội, tháng 5 - 2001

LỜI CẢM ƠN

Tôi xin bày tỏ lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc tới:

T h.s Nguyễn Mạnh Tuyển

T h.s Hoàng Minh Chung

đã trực tiếp hướng dẫn, động viên và đóng góp nhiều ý kiến quý báu cho tôi trong quá trình thực hiện khoá luận

Tôi cũng xin trân trọng cảm ơn sự giúp đỡ nhiệt tình và quý báu của PGS

TS Phạm Xuân Sinh cùng toàn thể các thầy cô giáo trong bộ môn Dược học

cổ truyền, bộ môn Dược lý, bộ môn Thực vật cùng các phòng ban: phòng khoa học, phòng giáo tài, phòng tài vụ, thư viện Đại học Dược Hà Nội, Xí nghiệp Dược phẩm Trung Ương m (đã cung cấp nguyên liệu Đảng sâm Việt Nam mà Xí nghiệp đang dùng để sản xuất) và các bạn đã giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho tôi trong suốt quá trình thực hiện khoá luận này

Hà Nội, ngầỵ 22 thắng 5 năm 2001

Sinh viên Trần Thị Bích Hàng

MỤC LỤC

Phần I : Đặt vấn đề 1

Phần II: Tổng quan 2

2.1 Đảng sâm 2

2.2 Một số bài thuốc có vị Đảng sâm 6

Phần III Thực nghiệm và kết quả 8

3.1 Nguyên liệu - thiết bị, dụng cụ và phương pháp nghiên cứu 8

3.1.1.Nguyên liệu 8

3.1.2.SÚC vật 8

3.1.3.Thiết bị và dụng c ụ 8

3.1.4.Phương pháp nghiên cứu 9

3.2 Thực nghiệm và kết quả 12

3.2.1 Đặc điểm thực vật cây Đảng sâm 12

3.2.2 Chế biến rễ Đảng sâm : 15

3.2.3 Nghiên cứu về thành phần hoá học của 11 mẫu Đảng sàm 16

3.2.4 Nghiên cứu tác dụng tăng lực của Đảng sâm theo nghiệm pháp chuột bơi 30

3.2.5 Bàn luận 31

Phần IV: Kết luận và đề xuất 33

4.1 Kết luận: 33

4.2 Đề xuất 33

Tài liệu tham khảo

PHẦN I : ĐẶT VẤN ĐỂ

Đảng sâm (Radix Codonopsis ) là rễ phơi khô của nhiều loài Codonopsis như Codonopsis javanica, Codonopsis pilosula, Codonopsis tangshen đều thuộc họ Hoa chuông Nó có nguồn gốc ở các vùng ôn đới, nhiệt đới ( Trung Quốc, Malaysia, Ấn

độ, Lào, Việt Nam ) [25]

Đảng sâm Việt Nam (Codonopsis javanica)[8] đã được khai thác rộng rãi ở miền Bắc từ năm 1958 và miền Nam từ năm 1978 với sản lượng hàng chục tấn mỗi năm [25]

Đảng sâm là thuốc bổ có tác dụng kiện tỳ vị, ích khí, chữa các chứng hư như suy nhược cơ thể, mệt mỏi, thiểu năng hô hấp, tiêu hoá, biếng ăn, ỉa lỏng, khát, xuất huyết, thiếu máu, lợi tiểu, trị ho, long đờm Nhưng tác dụng của Đảng sâm nói riêng và của thuốc Y học cổ truyền nói chung phần nào phụ thuộc vào việc chế biến Thậm chí người ta còn quan sát, theo dõi nguồn gốc, diễn biến của bệnh tật để chế biến thuốc nhằm đạt được hiệu quả điều trị tốt nhất [24]

Để góp phần nghiên cứu tiến tới tiêu chuẩn hoá phương pháp chế biến thuốc cổ

truyền của các vị thuốc được sử dụng ở Việt Nam, chúng tôi tiến hành " Nghiên cứu

chế biến vị thuốc Đảng sám " với mục tiêu sau:

- Nghiên cứu phương pháp chế biến Đảng sâm

- Nghiên cứu một số thành phần hoá học của Đảng sâm trước và sau khi chếbiến

- Thăm dò tác dụng tăng lực của dịch chiết Đảng sâm

PHẦN II: TỔNG QUAN

2.1 Đảng sâm

Cây Đảng sâm mọc ở Việt Nam có tên khoa học: Codonopsis javanica Blume hay Campanumoe javanica Blume, họ Hoa chuông (Campanulaceae) [7, 14, 25], Đảng sâm còn được gọi là: phòng Đảng sâm, cang hô, mần cáy, mần rày cáy, ngân đằng, đùi gà, co nhả đòi, sâm leo [l, 7, 8,18, 19, 25]

2.1.1 M ô tả

Đảng sâm là loại cây cỏ sống lâu năm, thân mọc bò hay leo, phân nhiều nhánh, màu lục nhạt hoặc hơi pha tím Lá mọc đối, hình tim ở gốc, nhọn ở đầu, phiến lá mỏng , hình tim hay hình trứng rộng, mép nguyên lượn sóng hoặc hơi khía răng, mặt trên màu xanh lục nhạt, mặt dưới màu trắng xám nhẩn hoặc có lông rải rác, dài 3 - 8

cm, rộng 2 - 4 cm Hoa mọc riêng lẻ ở kẽ lá, có cuốne dài 2 - 6 cm, đài gồm 5 phiến hẹp, tràng hoa hình chuông, màu trắng hoặc hơi vàng, có vân tím ở họng, chia 5 thuỳ, nhị 5, chỉ nhị hơi dẹt, bao phấn đính gốc, bầu hình cầu, có 5 ô Quả nang 5 cạnh, khi chín màu tím đỏ, hạt nhiều, màu vàng nhạt, bóng, toàn cây có nhựa mủ Mùa hoa tháng 10-11, mùa quả tháng 1 2 - 2 [7, 12, 18, 25]

2.1.2 Phân bố, sinh thái

Trên thế giới, chi Codonopsis có 44 loài, châu Á có khoảng 22 loài, Trung Quốc có 6-7 loài, Đông Dương có 3 loài, trong đó Việt Nam có loài (Codonopsis javanica Blume) được dùng làm thuốc với tên Đảng sâm Loài Codonopsis javanicaBlume còn phân bố ở Ấn Độ, Miến Điện, Trung Quốc, Thái Lan, Lào ở Việt Nam, trong thời kỳ 1961-1985,Viện Dược liệu đã phát hiện loài Đảng sâm này ở 14 tỉnh miền núi phía Bắc, còn ở phía Nam chỉ có ở khu vực Tây nguyên Vùng phân bố tập trung nhất của cây bao gồm các tỉnh Lai Châu, Sơn La, Lào Cai, Hà Giang, Cao Bằng, Lạng Sơn, Gia Lai, Kon Tum, Quảng Nam, Đà Nẵng, Lâm Đồng

Đảng sâm được coi là loại cây Á nhiệt đới Các vùng phân bố tập trung của cây hầu hết đều thuộc vùng núi cao, có khí hậu ấm áp Đảng sâm thường mọc trên các vùng nương rẫy đã bỏ hoang lâu ngày có cỏ tranh, đất còn tương đối màu mỡ và ẩm, hoặc ven rừng, trong các thung lũng [7, 12, 18, 25].

Nước ta có nhập từ Trung Quốc loài Codonopsis pilosula, Codonopsis tangshen Olive Những loài này khác Đảng sâm Việt Nam ở chỗ: lá mọc so le, bầu chỉ có 3 ô [25]

2.1.3 Bộ phận dùng : Rễ cây

- Đặc điểm bên ngoài:Rễ hình trụ, có khi phân nhánh, đường kính 0,5 - 2 cm, dài 6 - 15 cm Đầu trên phát triển to, có nhiều sẹo của thân Mặt ngoài màu vàng nâu nhạt, trên có những rãnh dọc và ngang, chia rễ thành những đường lồi lõm, thể chất chắc, dai, khó bẻ, mặt bẻ không bằng phẳng Mùi thơm nhẹ, vị hơi ngọt [7, 8, 18,25]

- Đặc điểm vi phẫu rễ Đảng sâm cắt ngang: Lớp bần gồm 4-5 hàng tế bào hình

chữ nhật xếp đều đặn thành hàng đồng tâm và dãy xuyên tâm Mồ mềm vỏ cấu tạo bởi những tế bào nhiều cạnh, xếp lộn xộn, rải rác có đám tế bào mô cứng Các tế bào libe nhỏ xếp xít nhau, trong libe có ống nhựa mủ, xếp rải rác thành hàng và thành vòng tương ứng với bó libe gỗ Libe thành dải dài chiếm phần lớn lát cắt Các mạch

gỗ xếp thành hàng tạo thành hệ thống hình nan quạt toả ra từ tâm Các bó libe gỗ phân cách nhau bởi tia ruột có tế bào thành mỏng [8,11]

- Đặc điểm bột rễ Đảng sầm : Bột có màu vàng nhạt, mùi thơm, vị ngọt nhạt

Soi kính hiển vi thấy: mảnh mô mềm có thể mang hạt tinh bột Đám tế bào mô cứng riêng lẻ màu vàng nhạt thành dầy Mảnh mạch điểm, tinh thể calci oxalat hình khối, kích thước 0,01-0,02 mm Khối inulin nhiều hình dạng, thường có hình quạt Hạt tinh bột hình tròn, thường đơn lẻ, có rốn phân nhánh, kích thước 0,015-0,025mm [8,

- Thu hái và chế biến:Dược liệu được thu hái vào mùa thu đông, đào cẩn thận

vì rễ ăn sâu, dễ bị gẫy nát Thu hái xong, sơ chế bằng cách rửa sạch đất cát, cắt bỏ

đầu rễ và rễ con, phân loại rễ to, nhỏ để riêng, phơi hoặc sấy nhẹ cho mềm rồi lăn nhẹ nhàng, xong lại phoi hoặc sấy Làm như vậy khoảng 4 lần, cuối cùng phơi hay sấy cho thật khô, để nơi khô ráo [7,12,18, 25].

Chế biến Đảng sâm trong Y học cổ truyền:

+ Đảng sâm phiến: Đảng sâm được cắt lát cho tiện sử dụng [12,15]

+ Đảng sâm sao vàng: tăng tác dụng quy tỳ, thuận tiện cho việc bảo quản [15]

+ Đảng sâm sao gạo: nhằm hoà vị, kiện tỳ [15]

+ Đảng sâm tẩm nước gừng: giúp tăng tính ấm của vị thuốc [12,15,19,25]

+ Đảng sâm tẩm mật ong: tăng tác dụng bổ trung [12]

+ Đảng sâm tẩm rượu: giúp tăng tính ấm của vị thuốc [15]

2.1.4 Thành phần hoá học

Theo một số tài liệu đã công bố, trong rễ Đảng sâm Việt Nam có chứa đường, chất béo, chưa thấy công bố có saponin [7,12,18,19,25], ngoài ra còn có vết alcaloid, tinh dầu [7,12,19]

Đảng sâm Trung Quốc : Codonopsis pilosula Nannf Campanulaceae và Codonopsis tangshen Olive Campanulaceae có saponin, đường, chất béo [12], glycosid là tangshenoid I [23], secquitecpenoid lacton, alcaloid [26]

+ ích khí bổ phế: dùng trong bệnh ho, khí phế hư nhược, hơi thở ngắn, xuyễntức

+ Lợi niệu: dùng trong bệnh phù do thận, viêm thượng thận, đặc biệt trong trường hợp nước tiểu có albumin, có thể phối hợp với sa tiền tử, bạch mao căn

- Liều lượng, cách dùng: mỗi ngày có thể dùng 6-12g cho đến 20-40g dạng thuốc sắc, hãm hoặc viên hoàn, bột, rượu thuốc Uống liền 7-14 ngày Thường phối hợp với các vị thuốc bổ khác

- Kiêng kỵ: không dùng chung với lệ lô [1,7,12,18,19,25]

• Một số nghiên cứu gần đây về tác dụng dược lý của Đảng sâm cho thấy:

- Đảng sâm có tác dụng gây phát triển nội mạc tử cung kiểu progesteron mức

độ nhẹ, gây tăng trương lực cổ tử cung, tiết sữa ở súc vật mẹ cho con bú và đồng thời

có tác dụng chống viêm [18,25]

- Khi nghiên cứu tác dụng của Đảng sâm trên các tương bào chứa IgG và các dưỡng bào của chuột nhắt được tiêm hydrocortison, các tác giả đã nhận thấy các tương bào chứa IgG trons lớp mỏng của ruột non giảm ở chuột nhắt được tiêm hydrocortison đơn thuần, nhưng lại tăng ở chuột nhắt được tiêm hvdrocortison và dùng dịch chiết Đảng sâm Điều này có thể do Đảng sâm đã làm tăng chức năng của tuỷ xương sản sinh các tế bào có hoạt tính miễn dịch và các dưỡng bào, vì thế có tác dụng điều hoà và làm giảm hội chứng suy giảm miễn dịch ở chuột với một mức độ nhất định [18, 25]

- Một số nghiên cứu trên Đảng sâm Trung Quốc (Cođonopsis pilosula, Codonopsis tangshen) cho thấy:

+ Nước sắc Đảng sâm có tác dụng làm tăng số lượng hồng cầu, giảm sô' lượng bạch cầu, hạ huyết áp [25]

+Khi dùng phối hợp Đảng sâm và một số dược liệu khác, thấy có tác dụng điều trị đối với bệnh nhàn bị chảy máu cấp đường tiêu hoá [22] và có tác dụng chống lão hoá thực nghiệm [21]

+ Dịch chiết Đảng sâm có tác dụng giảm tiết pepsin, acid dịch vị ở động vật gây loét dạ dày thực nghiệm [27]

2.2 M ột s ố b ài thuốc có v ị Đảng sâm

Đảng sâm thường được dùng thay nhân sâm trong phương thuốc cổ truyền như:

- Tứ quân tử thang (Cục phương): Nhân sâm - Bạch truật - Bạch linh - Cam

thảo chích lượng đều nhau Tán nhỏ, mỗi lần dùng 2 đồng cân, sắc uống

+ Công dụng: ích khí, kiện tỳ

+ Chủ trị: Tỳ vị khí hư, mặt bệch, tiếng nói nhỏ yếu, chân tay không có sức, ăn

ít, lưỡi nhợt, mạch tế hoãn [6]

- Sâm linh bạch truật (Cục phương):

Sơn dược 2 cân

Tán mịn, dùng mỗi lần 2 đồng cân với nước sắc Đại táo

Công dụng: ích khí kiện tỳ, thẩm thấp chỉ tả hoặc nôn, chân tay không có sức, người gầy [6],

- Bổ trung ích khí thang (Tỳ vị luận):

Hoàng kỳ 1 đồng cân Cam thảo chích 0,5 đồng cânNhân sâm 0,3 đồng cân Đương qui 0,2 đồng cân

Sắc uống xa bữa ăn, lúc thuốc còn nóng

Công dụng: Bổ trung ích khí, thăng dương cử hãm

Chủ trị: Tỳ vị khí hư, người nóng ra mồ hôi, khát, thích uống ấm, người mệt mỏi, tay chân yếu, sắc mặt trắng bệch [6]

Gần đây, Đảng sâm có trong một số bài thuốc như:

- Cốm bổ tỳ cải dạng:

Các vị thuốc được chế biến theo một số phương pháp chế biến cổ truyền (chưng, sao, chiết ) rồi được bào chế thành dạng cốm Đóng gói lOg/túi, cho trẻ em uống ngày 8-10g Có tác dụng điều trị suy dinh dưỡng kể cả thể tỳ hư và cam tích

- Bồi dưỡng cơ thể chữa thận suy, đau lưng, mỏi gối, đái rát: Đảng sâm 20g, tắc kè 6g, huyết giác lg, trần bì lg, tiểu hồi 0,5g, rượu 40 °c, 250ml, đường đủ ngọt Các vị thuốc cắt nhỏ, ngâm rượu trong khoảng một tháng Mỗi lần uống 30ml, ngày 1-2 lần [7, 25]

- Chữa bệnh lao mới nhiễm, ho: Đảng sâm 16g, hoài sơn 15g, ý dĩ nhân lOg, mạch môn lOg, cam thảo 3g, hạnh nhân lOg, khoản đông hoa lOg, xa tiền tử lOg, nước 600ml sắc còn 200ml, chia 3 lần, uống trong ngày [12, 25]

- Chữa tiểu tiện ra huyết, niệu đạo đau buốt: Đảng sâm 6g, thị bích 2 quả Đem sắc vófi lượng nước thích hợp, pha thêm đường, cho ăn trái hồng và uống nước, mỗi ngày một thang, liên tục 3-5 thang [16]

[17]

PHẦN III: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ

3.1 Nguyên liệu - thiếi bị, dụng cụ và phương pháp nghiên cứu

3.1.1.Nguyên liệu

* Dược liệu

- Rễ Đảng sâm dùng cho sản xuất của XN Dược phẩm TW in (được thu mua tại Lào Cai)

- Rễ Đảng sâm được thu hái tại Sapa - Lào Cai

* Hoá chất đạt tiêu chuẩn phân tích :

- Cân xác định độ ẩm Precisa PH60 - Thuỵ Sĩ

- Máy cất quay Buchi

- Máy sắc ký lỏng hiệu năng cao Hellpackard 1090 USA

- Các dụng cụ thuỷ tinh

3.1.4.Phương pháp nghiên cứu

* Phương pháp chế biến thuốc cổ truyền [1,20]

- Đảng sâm phiến (Đảng sâm sống): đem Đảng sâm rửa sạch, rễ to thái vát dàyl-2mm, dài 5 cm, rễ nhỏ cắt từng đoạn 5cm

- Đảng sâm sao vàng: lấy Đảng sâm phiến, sao tới khi có màu vàng

- Đảng sâm trích nước gừng: gừng rửa sạch, giã nát, vắt lấy nước cốt, thêm nước lã bóp chắt lấy hết dịch gừng Đem nước gừng trộn đều vào Đảng sâm phiến (tỷ lệ Đảng sâm/gừng 5:1 ), ủ 1 giờ cho thâm đều, đem sao đến khi mặt phiến hơi vàng, mùi thơm của gừng bốc lên

- Đảng sâm tẩm rượu: đem rượu trộn đều vào Đảng sâm phiến (tỷ lệ Đảng sâm/ rượu 5:1), ủ 1 giờ cho ngấm đều, sao cho tới khô

(Để theo dõi một cách chính xác về màu sắc và nhiệt độ chế trong phương pháp sao, lấy một lượng nhỏ Đảng sâm của các mẫu chế đưa vào tủ sấy ở các mức nhiệt độ hằng định 70° c, 80° c, 90° c, 100° c, 110° c,120° c,130° c, 140°c trong thời gian

10 phút, 20 phút, 30 phút, sau đó đem so sánh với các mẫu Đảng sâm sao)

- Đảng sâm đồ: Đảng sâm phiến ủ với một lượng nước vừa đủ cho mềm rồi đem

đồ trong 2 giờ, sấy khô ở 60-65 °c

- Đảng sâm chưng: Đảng sâm rửa bằng nước sạch, ủ cho mềm, thỉnh thoảng đảo đều rồi chưng cách thuỷ với những thời gian khác nhau

* Xác định đặc điểm thực vật của Đảng sâm

- Mô tả đặc điểm bên ngoài: mô tả mẫu thu hái từ Sapa, đối chiếu theo Dược Điển Việt Nam 2 tập 3 [8]

- Soi bột, cắt vi phẫu rễ Đảng sâm sống, nhuộm kép theo [4], đối chiếu theo Dược Điển Việt Nam 2 tập 3 [8]

* Phàn tích một số thành phần hoá học

- Định tính các nhóm chất (alcaloid, saponin, glycosid tim, a-amino acid, đường khử, anthraglycosid, coumarin, flavonoid, tanin, chất béo) trong dược liệu theo [2,3,10]

- Định lượng đường khử theo phương pháp Lane-Eynon [13]

+ Nguyên tắc: Đường khử có khả năng làm mất màu xanh metylen trong môi trường kiềm Dùng xanh metylen làm chất chỉ thị cho phản ứng oxy hoá đường bằng Fehling

+ Cách tiến hành: cho một giọt xanh metylen vào bình đựng dung dịch thuốc thử Fehlinh, đun sồi, nhỏ từng giọt đường khử vào Trước tiên, đường sẽ khử đồng của Fehling Khi tất cả đồng của Fehling đã phản ứng hết, đường sẽ khử xanh metylen làm nó mất màu Quá trình định lượng phải nhanh và giữ dung dịch luôn trong trạng thái sôi ổn định

- Định lượng saponin theo [2]

- Định lượng acid amin toàn phần bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC).Nguyên tắc: dung dịch hỗn hợp acid amin sau khi đã thuỷ phân được đưa qua van tiêm mẫu và được một dung môi động kéo qua cột phàn tách nhờ một bơm cao

áp Tại cột xảy ra quá trình tách các acid amin trong hỗn hợp dựa trên khả năng phân bố khác nhau của chúng giữa hai pha không tan được vào nhau, luôn tiếp xúc với nhau, một pha tĩnh luôn giữ lại trong cột các acid amin khác nhau, và một pha động chảy qua cột luôn rửa giải các aciđ amin ra khỏi cột với các mức độ mạnh yếu khác nhau Kết quả là các acid amin sẽ ra khỏi cột với thời gian khác nhau tạo ra sự phân tách

Sau khi các acid amin được tách ra khỏi hỗn hợp và đi ra khỏi cột, chúng lần lượt được phát hiện bởi Diodaray detector Detector chuyển tín hiệu sang máy tính,

ta sẽ nhận được sắc ký đồ và thông tin định tính (thời gian lưu) và định lượng (diện tích hoặc chiều cao pic)

* Nghiên cứu tác dụng tăng lực của Đảng sâm [9]

Cách tiến hành: dùng một thùng có kích thước nhất định, chứa nước ấm, ổn định nhiệt độ từ 28-32°C Cho chuột vào thùng, quan sát thời gian bơi của từng chuột Tính thời gian từ lúc bắt đầu cho chuột bơi đến khi chuột không bơi được nữa

và chìm xuống đáy thùng nước trong 3-4 giây mà không ngoi lên được Ngay lập tức vớt chuột lên, lấy khăn xô khô thấm vào lông chuột cho hết nước, rồi sấy chuột khô, cho chuột nghỉ ngơi

Để hạn chế thời gian bơi của chuột, dùng một dây chì có trọng lượng bằng 10% trọng lượng chuột, kẹp chặt vào gốc đuôi chuột

ữ

3.2 Thực nghiệm và kết quả

3.2.1 Đặc điểm thực vật cây Đảng sàm

* Mô t ả :

Quan sát trên thực địa nơi thu hái chúng tôi thấy:

Đảng sâm là cây cỏ, leo bằng thân quấn Thân màu lục nhạt hoặc hơi pha tím

Lá mọc đối, hình tim ở gốc, nhọn ở đầu, phiến lá mỏng, hình tim hay hình trứng, mép nguyên lượn sóng hoặc hơi khía răng, mặt trên màu xanh lục nhạt, mặt dưới màu trắng xám nhẵn hoặc có lông, dài 3-8cm, rộng 2-4cm Rễ hình trụ dài, đường kính có thể đạt 1-2 cm, phân nhánh hoặc không, đầu rễ phình to, có nhiều sẹo lồi của thân cũ, màu vàng nhạt

Do thời điểm lấy mẫu cây chưa ra hoa nên chúng tôi chưa có mô tả hoa và quả của cây

9

A n h l: Cây Đảng sâm mọc tại Sapa

Anh 2: Rê của cây Đ ảng sâm mọc ỞSapa

* Đặc điểm vi phẫu rễ:

Cắt ngang rễ, tẩy nhuộm kép và soi kính hiển vi thấy (hình 1):

- Lớp bần gồm 4-5 hàng tế bào hình chữ nhật xếp đều đặn thành hàng đồngtâm và dãy xuyên tâm, có nhiều chỗ bị nứt rách

- Mô mềm vỏ cấu tạo bởi nhiều tế bào hình nhiều cạnh, hơi dài dẹt, rải rác cóđám tế bào mô cứng

- Các tế bào libe nhỏ xếp xít nhau

- Các mạch gỗ xếp thành hàng tạo thành hệ thống hình nan quạt toả ra từ tâm

- Các bó libe gỗ phân cách nhau bởi tia ruột rộng có tế bào thành mỏng

- Tinh thể calci oxalat hình khối.

- Hạt tinh bột đơn lẻ có rốn phân nhánh

Nhân xét: Từ kết quả nghiên cứu ở trên, đối chiếu với những đặc điểm của Đảng sâm Việt Nam (Codonopsis javanica) theo Dược Điển Việt Nam 2 tập 3 [8], chúng tôi có thể coi mẫu Đảng sâm nghiên cứu của chúng tôi là: Codonopsis javanica Blume Campanulaceae

- Đảng sâm tẩm nước gừng: cân 30 g gừng tươi, rửa sạch, giã nát, thêm nước

lã, bóp chắt lấy hết dịch gừng Gộp dịch gừng được khoảng 30 ml đem trộn vào 150g Đảng sâm phiến, ủ 1 giờ cho thấm đều Đem sao tới khi mặt phiến hơi vàng, mùi thơm của gừng bốc lên (Mẫu 3)

- Đảng sâm tẩm rượu: lấy 30 ml rượu trộn đều vào 150 g Đảng sâm phiến, ủ 1 giờ cho ngấm đều, sao tới khô (Mẫu 4)

(Lấy một lượng nhỏ ở mỗi mẫu Đảng sâm sao, đem sấy ở 80°c, 90°c, 100°c, 110°c, 120°c, 130°c, 140°c trong 10 phút 20 phút, 30 phút, 40 phút So sánh thấy các mẫu Đảng sâm sao vàng, chích gừng có màu tương tự màu mẫu Đảng sâm sấy ở 140° c trong 20 phút, mẫu Đảng sâm chích rượu có màu tương tự màu mẫu Đảng sâm sấy

ở 80°c trong 20 phút)

- Đảng sâm đồ: cân 150 g Đảng sâm phiến, ủ với 50 ml nước trong 3 giờ rồi đem đồ trong 2 giờ Sấy khô ở nhiệt độ 60 - 65 °c (Mẫu 5)

- Đảng sâm chưng: cân 150 g rễ Đảng sâm, rửa sạch,bổ nhỏ rễ to, thêm 180

ml nước, ủ trong 6 giờ thỉnh thoảng đảo đều rồi chưng cách thuỷ 30 phút, sau đó thái lát, sấy khô ở nhiệt độ 60 -65 °c, tẩm nốt nước Đảng sâm chưng nếu có, sấy khô hẳn ở nhiệt độ 60 -65 °c được mẫu 6

Làm tương tự như vậy với thời gian chưng là 60 phút, 90 phút, 120 phút, 150 phút, 180 phút được các mẫu 7, 8, 9, 10 , 11

Chúng tôi sử dụng 11 mẫu Đảng sâm này để làm các nghiên cứu tiếp theo

3.2.3 Nghiên cứu về thành phần hoá học của 11 mẫu Đảng sâm

* Định tính bằng phản ứng hoá học

- Định tính saponin :

+ Quan sát hiện tượng tạo bọt:

Đun cách thuỷ 3g bột rễ Đảng sâm với 15ml alcol ethylic 70° lọc vào ống nghiệm, cô gần cạn, thêm nước đủ 10ml, lắc mạnh trong 2 phút, thấv xuất hiện cột bọt bền trong 15 phút Phản ứng dương tính

• Phản ứng Salkowski: lấy 1 ml dịch chiết cho vào ống nghiệm, bốc hơi tới cắn, thêm 1 ml chloroform, lắc cho tan, thêm 1 ml acid H2S04 đặc, thấy dung dịch xuất hiện màu đỏ Phản ứng dương tính

• Phản ứng Rosenthaler: lấy 2 ml dịch chiết cho vào ống nghiệm, thêm 2 giọt dung dịch vanilin 1% trong ethanol, thêm một giọt acid HC1 đặc, lắc đều, thấy dung dịch màu xanh lục Phản ứng dương tính.

+ Phản ứng sơ bộ xác định loại saponosid:

Lấy 2 ống nghiệm có kích thước giống nhau, ống thứ nhất cho 5 ml dung dịch HC1 0,1N, ống thứ hai cho 5 ml dung dịch NaOH 0,1N Cho vào mỗi ống 1 ml dịch chiết, lắc mạnh 2 ống trong 1 phút, để yên, quan sát thấy cột bọt ở ống thứ nhất cao

và bền hơn ở ống thứ hai

Tiến hành song song 11 mẫu Đảng sâm, mỗi mẫu 3 lần, ta đểu thu được kết quả dương tính Vậy sơ bộ kết luận trong các mẫu Đảng sâm sống và chế có saponin triterpenoid

- Định tính a-amino acid:

Cân 0,5g bột rễ Đảng sâm, thêm 5ml cồn 70°, đun cách thuv tới sôi, lọc lấv dịch, thêm vài giọt thuốc thử ninhydrin trong aceton, thấv dung dịch xuất hiện màu tím Phản ứng dương tính

Tiến hành song song 11 mẫu Đảng sâm, mỗi mẫu 3 lần, ta đều thu được kết quả dương tính Vậy sơ bộ kết luận trong Đảng sâm sống và chế có acid amin

- Định tính đường khử:

+ Phản ứng trong ống nghiệm: cho lg bột rễ Đảng sâm vào ống nghiệm, thêm

10ml nước, đun cách thuỷ trong 15 phút, lọc lấy dịch chiết làm phản ứng

Phản ứng với thuốc thử Fehling: cho vào ống nghiệm 2ml dung dịch Fehlins

A, 2ml dung dịch Fehling B, 2ml dịch chiết, đun cách thuỷ 3 phút Quan sát thấy đáy ống nghiệm có tủa đỏ Phản ứng dương tính

Phản ứng tráng bạc: cho lml địch chiết vào ống nghiệm, thêm lml thuốc thử Tollens, lắc nhẹ, đun cách thuỷ trong 3 phút Quan sát có tủa đen ánh bạc bám trên thành ống nghiệm Phản ứng dương tính

Cô lấy cắn Cắn thu được hoà vào cồn tuyệt đối để chấm sắc ký Triển khai trong các

hệ dung môi khác nhau Sau khi sắc ký triển khai xong, lấy tấm sắc ký ra, để bay

hơi hết dung môi, phun thuốc thử AgN03 5%, sấy ở 110°c trong 10 phút Quan sát dưới ánh sáng thường

Sau khi tiến hành sắc ký trên một số hệ dung môi khác nhau, tìm thấy được một hệ tách tốt hơn cả

Benzen: methanol: acid acetic (1 :3 : 1)

Nhận xét: sắc ký đồ của mẫu Đảng sâm sống và các dạng chế đều cho một vết gần trùng với đường glucose chuẩn với Rf = 0,52.

- Định tính chất béo:

Cho 5g bột rễ Đảng sâm vào bình nón, đun hồi lưu cách thuỷ bằng 30ml ether ethylic trong 15 phút Lọc Bốc hơi cách thuỷ tới cắn Hoà tan cắn trong 10ml chloroform Dùng đũa thuỷ tinh chấm dịch chiết lên một tờ giấy lọc Để khô Quan sát thấy vết mờ của chất béo trên giấy lọc

Tiến hành song song 11 mẫu Đảng sâm, mỗi mẫu 3 lần, ta đều thu được kết quả dương tính Vậy sơ bộ kết luận trong Đảng sâm sống và chế có chất béo

o Tiến hành định tính hoá học các nhóm chức khác (alcaloid, tanin, anthraglycosid, coumarin, glycosid tim, flavonoid) của 11 mẫu Đảng sâm sống và chế, ta đều thu được kết quả âm tính