bơi
* Thử khả năng bơi của chuột trước khi uống thuốc:
Cho từng chuột bơi trong cùng điều kiện, ghi lại thời gian bơi được của chúng
* Tiến hành thử tác dụng của thuốc:
Phân bố ngẫu nhiên chuột đã bơi lần 1 vào 3 lồ thí nghiệm.
+Lô l(Lô chứng) : cho uống nước muối sinh lý với lượng lml/100g +Lô 2(Thử 1) : cho uống dịch chiết Đảng sâm sống vói liều 5g/kg +Lô 3(Thử 2) : cho uống dịch chiết Đảng sâm chưng 2 giờ với liều 5g/kg
Chuột được uống mỗi ngày 1 lần, liên tục 7 ngày. Đến ngày cuối, sau khi dùng thuốc 4 giờ, cho chuột bơi, ghi lại thời gian bed (t2).
Bảng 7: Kết quả thời gian theo nghiệm pháp chuột bơi
Lò 1 Lò 2 Lô 3 t l t2 tl t2 tl t2 n= 8 (phút) (phút) t2xl00/tl(%) (phút) (phút) t2xl00/tl(%) (phút) (phút) t2xl00/tl(%) 1 10 22 220.00 9 26 288.89 10 34 340.00 2 12 28 233.33 13 41 315.38 20 53 265.00 3 16 35 218.75 18 35 194.44 11 81 736.36 4 22 12 54.55 24 41 170.83 18 54 300.00 5 32 19 59.38 27 59 218.52 20 77 385.00 6 18 23 127.78 16 49 306.25 9 64 711.11 7 27 10 37.04 32 83 259.38 8 100 1250.00 8 9 7 77.78 15 38 253.33 22 50 227.27 9 128,57 ± 69.73 250.88 ± 44.00 526.84 ±293.99
Bảng 8: So sánh khả năng bơi của chuột
Số lô Lô 1 p ( so với lô 1) p (so với lô 2) Lô 1 128,57± 69,73
Lô 2 250,88 ± 44,00 <0,05
Lô 3 526,84 ± 293,99 <0,05 <0.05
Nhận xét: So sánh tỷ lệ thòi gian bed trước và sau uống thuốc giữa các lô, chúng tôi thấy khả năng bơi của chuột ở cả lô dùng dịch chiết Đảng sâm sống và lô dùng dịch chiết Đảng sâm chưng 2 giờ so với lô thử đều tăng. Lô dùng dịnh chiết Đảng sâm chưng 2 giờ tăng cao hơn lô dùng dịch chiết Đảng sâm sống có ý nghĩa thống kê (P<0.05).
trong nghiệm pháp chuột bơi
Số lô Àm± 8 P(so với lô 1) P(so với lô 2)
Lô 1 3,75± 2,22
Lô 2 2,88±1,76 >0,05
Lô 3 8,50 ±6,32 >0,05 >0,05
Nhận xét: Mặc dù thời gian bơi của chuột ở các lô tăng có ý nghĩa thống kê (bảng 8) nhưng qua bảng 9 chúng ta thấv trọng lượng chuột ở các lô thay đổi không có ý nghĩa thống kê.
3.2.5. B à n luận
Theo lý luận của Y học cổ truyền thì các vị thuốc có màu vàng thường qui kinh tỳ, vị ngọt có tác dụng bổ dưỡng, hoà hoãn, giảm đau và tăng qui kinh tỳ. Đảng sâm sau chế biến có màu vàng và vị ngọt được tăng lên vì vậy giúp vị thuốc tăng qui kinh tỳ, tăng tác dụng bổ dưỡng.
Sau chế biến, hàm lượng đường khử tăng lên một cách rõ rệt ở mẫu Đảng sâm chưng có thể do được thuỷ phân từ tinh bột, polysaccarid, glycosid.... Thêm vào đó, việc xác định được sự có mặt của 17 acid amin phần nào giải thích tác dụng bổ dưỡng của Đảng sâm.
Việc nghiên cứu sự thay đổi một số thành phần hoá học trứơc và sau chế biến đã góp phần vào tiêu chuẩn hoá được vị thuốc Đảng sâm dùng trong bào chế các dạng thuốc Y học cổ truyền.
Bước đầu nghiên cứu chúng tôi đã tìm thấy saponin nhưng cần có những nghiên cứu tiếp nữa để xác định rõ thành phần saponin này.Do thời gian nghiên cứu có hạn nên chúng tôi chưa tìm thấy một số thành phần khác có trong Đảng sâm mà các tài liệu khác đã công bố.
PHẦN IV: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XưẤT
4.1. K ết luận:
Qua một thòi gian nghiên cứu chế biến vị thuốc Đảng sâm Việt Nam, chúng tôi đã thu được một số kết quả:
- Về thực v ậ t: nghiên cứu một số đặc điểm của rễ Đảng sâm Việt Nam thu hái ở Sapa - Lào cai, quan sát cấu tạo vi học của rễ và bột rễ Đảng sâm .
- Về chế biến: Đã tiến hành chế biến cổ truyền theo 5 phương pháp trong đó rút ra phương pháp chưng 2 giờ cho hiệu quả tốt nhất.
- Về thành phần hoá học:
+ Bằng phản ứng định tính đã xác định sơ bộ trong rễ Đảng sâm sống và chế đều có đường khử, acid-amin, saponin triterpenoid, chất béo. Trong đó 2 thành phần acid-amin và saponin chưa thấy có nói tới trong các tài liệu tham khảo.
+ Bằng sắc kí lớp mỏng với các hệ dung môi thích hợp đã xác định trong Đảng sâm trước và sau chế đều cho một vết đường có Rf tương đương Rf của Glucose, và trong Đảng sâm sống và Đảng sâm chưng 2 giờ đều cho 5 vết saponin.
+ Đã xác định hàm lượng đường khử trong các mẫu Đảng sâm sống (14,6%) và chế (từ 8,6 % - 30,9%), cao nhất ở mẫu chưng 150 phút. Xác định được hàm lượng saponin (2,17%- 1,47%) và acid-amin toàn phần (1,78%- 1,30%) trong Đảng sâm sống và Đảng sâm chưng 2 giờ.
- Bước đầu thấy được tác dụng tăng lực của Đảng sâm sống và chưng 2 giờ, đặc biệt mẫu chưng 2 giờ cho kết quả cao.
4.2. Đ ể xuất:
- Nếu có thể nghiên cứu thêm về thực vật để xác định đúng cây Đảng sâm Việt Nam.
v ề thành phần hoá học đi sâu nghiên cứu saponin.
- Nghiên cứu tiếp một số tác dụng sinh học như sự thay đổi về chỉ số huyết, tác dụng chống viêm...
4.3. Góp phần xây dựng một s ố tiêu chuẩn cho quy trình ch ế biến Đảng sâm :
Quy trình chế biến Đảng sâm chưng 2 giờ - Chế biến:
Rửa sạch rễ Đảng sâm, bổ nhỏ những củ to, ngâm nước trong 6 giờ với tỷ lệ Đảng sâm/ nước là 5/6 cho mềm. Sau đó đem chưng trong 2 giờ rồi thái lát dày 1-2 mm, dài 5cm, sấy khô ở nhiệt độ 60-65°C. Tẩm nốt nước Đảng sâm chưng nếu còn, sấy khô hẳn ở 60-65°C.
- Tiêu chuẩn: Đảng sâm sau chưng có màu nâu sẫm, mùi thơm vị ngọt. - Kiểm định: + Định tính có đường, acid-amin, saponin theo mục 3.2.3. + Định lượng: Hàm lượng đường > 29%, hàm lượng saponin >1,4% theo mục 3.2.3.
- Bảo quản: Đóng túi 0,5 kg, để nơi khô ráo thoáng mát. Nhận xét: Để hoàn thành quy trình chế biến Đảng sâm cần làm thêm một số tiêu chuẩn
+ Độ nhiễm khuẩn. + Độ vụn nát.
TÀI LIỆU THAM KHẢO
1. Bộ môn Dược học cổ truyền, Dược học cổ truyền - Trung tâm thông tin thư viện- Đại học Dược Hà nội, 1998 (100).
2. Bộ môn Dược liệu, Dược liệu tập I - Trung tâm thông tin thư viện Đại học Dược Hà nội, 1998.
3. Bộ môn Dược liệu, Dược liệu tập II - Trung tâm thông tin thư viện Đậi học Dược Hà nội, 1998.
4. Bộ môn dược liệu, Thực tập dược liệu phần vi học, 1998.
5. Bộ Y Tế-Tổng công ty Dược Việt Nam -Xí nghiệp Dược phẩm Trung ương III "Nghiên cứu và xây dựng quy trình chế biến chuẩn cho 5 vị dược liệu"
6. Hoàng Bảo Châu, Phương thuốc cổ truyền, Nhà xuất bản Y học Hà nội, 1995, (153,155, 156).
7. Võ Văn Chi, Từ điển cây thuốc Việt Nam, Nhà xuất bản Y học, 1996, (444). 8. Dược điển Việt Nam II tập 3, Nhà xuất bản Y học, 1994, (122,123).
9. Đỗ Trung Đàm - Vũ Thị Tâm, Nghiên cứu tác dụng tăng lực của Linh chi trong thí nghiệm chuột bcfi, Tạp chí Dược học, số 2, 1996, (14, 15).
10. Nguyễn Văn Đàn - Nguyễn Viết Tựu, Phương pháp nghiên cứu hoá học cây thuốc, Nhà xuất bản Y học - chi nhánh thành phố Hồ Chí Minh, 1985.
11. Nguyễn Phương Lan, Khoá luận tốt nghiệp dược sĩ đại học " Nghiên cứu kiểm nghiệm một số dược liệu mang tên sâm bằng phương pháp hiển vi”, 1995 - 2000, (10, 11).
12. Đỗ Tất Lợi, Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam , Nhà xuất bản Y học, 1997, (811,812,813).
13. Lương Hồng Nga, Luận văn tốt nghiệp cao học " Nghiên cứu sự ảnh hưởng của biến thiên hoạt độ amilaza đến hàm lượng đường trong củ khoai lang khi bảo quản và chế biến ", Đại học Bách khoa Hà nội, 5/1999.
14. Phân biệt và chống nhầm lẫn dược liệu, Nhà xuất bản Y học, 1981, (110, 111, 112,113).
15. Phạm Xuân Sinh, Phương pháp chế biến thuốc cổ truyền, Nhà xuất bản Y học Hà nội, 1999, (88, 89, 90).
16. Ngũ Hậu Thắng - Vương úc Cần, Đông y thực dụng nghiệm phương , Nhà xuất bản Mũi Cà mau, 1999, (67).
17. Trần Thuý - Nguyễn Thị Minh Tâm - Hoàng Minh Chung - Trần Lưu Vân Hiền - Lê Xuân Huê và các cộng sự, Đề tài nhánh cấp nhà nước KHCN 11-14-01 " Nghiên cứu dạng bào chế hai chế phẩm thuốc Y học cổ truyền Cốm bổ tỳ và Chè tan tiêu độc phục vụ cộng đồng", Bộ Y tế, Bộ Khoa học Công nghệ Môi Trường, Viện Y học cổ truyền Việt Nam.
18. Từ điển Bách khoa Dược học, Nhà xuất bản Từ Điển Bách Khoa Hà nội, 1999, (206, 207).
19. Viện Dược liệu, Cây thuốc Việt Nam, Nhà xuất bản Khoa học và Kỹ thuật Hà Nội, 1990, (135).
20. Viện Y học cổ truyền Việt Nam, Phương pháp bào chế và sử dụng đông dược, Nhà xuất bản Y học, 1993.
21. Chen J, An experimental study on the anti-senility effect of shou xing bu zhi,Chung - Hsi - 1 Chih - Ho - Tsa - Chieh, 04/1989, (198, 272, 273,).
22. Gong - MQ, Wang - SL - Gan - c, Aclinical study on treatment of acute upper digestive tract hemoưhage with zin-she decoction, Chung - Hsi - 1 chieh - Ho - Tsa - Chieh, 05/1989, (272, 273, 260).
23. Han-G, He-X, Yang-J, Yuda-M, Kasai - R, Otani-K, Chemical constitrients of Codonopsis pilosula Nannf. ,Chung-Kuo-Chung- Yao-Tsa-Chih, 02/1990, 15(2), (105, 106,127).
24. Hui Cao, Xiao Tao Wang - Why must Chinese Medicinal Dried plants be processed. Chinese Herbal Medicine 09/01/1998.
25. National institute of materia medica HaNoi - Việt Nam. Selected Medicinal plants in Viet Nam, volụmn 1. Science and Technology publishing house - HaNoi, 1999.
26. Tun - L; Zenzao - L, Gocoshi -T, Seperation & determination of 8Ị3- hydroxy asterolid, J - Chromatogr, 08/30/1989; 477 (2); (458, 462).
27. Wang ZT; Du-Q; Xu-Gj-Wang-Rj; Fu-DZ; Ng-TB, Investigation on the protective action of Codonopsis pilosula extract on experimentally- induced gastric ulcer in rats, Gen-Pharmacol. 03/1997; 28(3), (469, 473).
VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC CỘNG HOÀ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM
Phòng Hoá sinh Protein Độc lập - Tự do • Hạnh phúc
ĐT : 7561903 ---
KẾT QUẢ PHÂN TÍCH MAU
Đơn vị gửi mẫu : Chị Chung - ĐH Dược - Hà nội Số lượng mẫu: 02mẫu
Chỉ tiêu phân tích: Hàm lượng các acid amin toàn phần. Kết quả phân tích: STT Acid ainin BT IS (%) BT2C (%) 1 Aspartic acid 0.16 0.11 2 Glutamic acid 0.23 0.23 3 Serine 0.06 0.04 4 Histidine 0.07 0.05 5 Glycine 0.09 0.06 6 Threonine 0.07 0.04 7 Alanine 0.19 0.07 8 Arginine 0.17 0.21 9 Tyrosine 0.07 0.04 10 Cystein + Cystine 0.05 0.03 11 Valine 0.09 0.06 12 Methionine 0.03 0.02 13 Phenylalanine 0.09 0.05 14 Isoleucine 0.08 0.05 15 Leucine 0.12 0.08 16 Lysine 0.06 0.04 17 Proline 0.14 0.12 Tổng SÔ 1.78 1.30
Hà nội, ngày 4 tháng 5 năm 2001 Phụ trách phân tích
( X M ,
nata File C:\HPCHEM\l\DATA\BT I S .D Sample Name: bot thuocls Injection Date Sample Name Acq. Operator Acq. Method Last changed Analysis Method Last changed 4/27/01 11 : 54:32 AM bot thuocls Le thanh Hai "D'AD'1“A7~Sig DAD1 B, Sig Seq. Line Vial Inj Inj Volume c :\HPCHEM\l\METHODS\DEFAA.M 10/21/00 11:13:05 AM by Le thanh Hai C:\HPCHEM\l\METHODS\CHUANTP8.M 5/2/01 3:16:02 PM by Le thanh Hai
(modified after loading)_________________
4 6 1 Inj prog =33B7TCTRẽFJ9D;20‘ (BT"l S.'D) =262,16 Ref=324,8 (BT 1S.D) Norm. -4 3 5 0 - 300 -i 250 1 2.5 7.5 10 12.5 15 17.5 min
Internal standard Report
Sorted By
Calib. Data Modified Multiplier
Dilution
Sample Amount
Sample ISTD Information: ISTD ISTD Amount Name
# [pmol] 1 250.00000 NVA 2 250.00000 SAR Signal 5/2/01 3 :15 : 58 1.0000 1.0000 1.00000 [pmol] PM
(not used in calc.)
Signal 1: DAD1 A, sig=338,10 Ref=390,20
RetTime Type [min] Area [mAU*s] Amt/Area ratio Amount [pmol] Grp Name 1.401 w 1.570 MM 4.63 9 MM 180 . 16098 249 . 09224 97.10918 1. 25311 1.16853 1.18345 411.78681 530.91003 209.61973 AS? GLU SER
Jata File C:\HPCHEM\1\DATA\BT I S .D Sample Name: hot thuoc
RetTime Type Area Amt/Area Amount Grp Name
[min] 1 [mAU*s] 1 1 ratio [pmol] 1 1 5 .798 w 146 .32254 1.55674 415.47824 GLY 6 .144 w 87 . 73767 1.25158 200.29263 THR 7.444 MM 195 . 25258 1.22223 435 . 28112 ALA 7 . 725 MM 153.04335 1.19745 334.26787 ARG 8 . 979 MM 50.77121 1.37649 127.47153 TYR 10.209 MM 52.84707 1.54402 148 . 83155 CYS-CYS 10.867 MM 125 .14896 1.18189 269.79047 VAL 11.130 MM 24.70891 1.68743 76 . 05041 MET 11.513 MM I 137.06261 1.00000 250.00000 NVA 12 . 549 MM 74.60101 1.31480 178.90642 PHE 12.752 MM 94 . 78913 1.18206 204 .37127 ILE 13 .431 MM 142 . 50403 1.22543 318.51924 LEU 14.028 MM 43 .35962 1.37978 109 .12285 LYS
Totals without ISTD(s) : 4080.10002
Signal 2: DAD1 B, sig=262,16 Ref=324,8
RetTime Type Area Amt/Area Amount Grp Name
[min] [mAU*s] ratio [pmol]
17.330 MM I 153.88951 1.00000 250.00000 SAR 17.946 MM 204.71921 1.23811 411.76589 PRO
Totals without ISTD(s) : 411.76589
Results obtained with standard integrator! 1 Warnings or Errors :
Viarning : Calibration warnings (see calibration table listincr)
Data File C:\HPCHEM\l\DATA\BT 2 C.D Sample N a m e : bot thuoc 2c Injection Date Sample Name Acq. Operator Acq. Method Last changed Analysis Method Last changed 4/27/01 12:34 bot thuoc 2c Le thanh Hai 03 PM Seq. Inj Vi Line Vial Inj 5lume 5 7 1 c :\HPCHEM\l\METHODS\DEFAA.M 10/21/00 11:13:05 AM by Le thanh Ha: C:\HPCHEM\l\METHODS\CHUANTP8.M 5/2/01 3:16:02 PM by Le thanh Hai Inj Drog
Internal standard Report
Sorted By
Calib. Data Modified Multiplier
Dilution
Sample Amount
Sample ISTD Information: ISTD ISTD Amount Name
# [pmol] 1 250.00000 NVA 2 250.00000 SAR Signal 5/2/01 3:15:58 1.0000 1. 0000 1.00000 [pmol] PM
(not used in calc.)
Signal 1: DAD1 A, sig=338,10 Ref=390,20
RetTime Type Area Amt/Area Amount Grp Name
[min] [mAU*s] ratio [pmol]
- - - ỉ--- I- - - I- - - I- - - I- - I---
1.389 w 130.79539 . 1.24154 287.70340 ASP
1.567 MM 264.02066 1.16820 546.44346 GLU 4^651 MM 64.79527 1.16133 133.31885 SER
Đaca File C:\HPCHEM\l\DATA\BT 2 C.D Sample Name: bot thuoc
RetTime Type Area Amt/Area Amount Srp Name
[min]
1 11 [mAU*s]- - I ratio ị [pmol] - 1 5 . 810 1w 1í 94 . 53799 1 1.57913 264.49352: 1GLY 6 .152 w 57.51881 1.25121 127.50610 THR 7.456 MM 128.32753 1.22804 279.20616 ALA 7 . 731 MM 202.60516 1.19656 429.51277 ARG 8 . 994 VB 32 .43787 1.43712 82.59155 TYR 10.223 MM 30 . 09155 1.50951 80.47722 CYS-CYS 10.895 MM 80.93539 1.18674 170.17024 VAL 11.147 MM 17.14947 1.96478 59.69731 MET 11.529 MM I 1 41.10704 l . o o o o c 2 50.00000 NVA 1 2.567 MM 45.54817 1.35594 109.42176 PHE 12.772 MM 58 . 70559 1.19225 124.00430 ILE 13.466 MM 1 0 1 . 1 7 5 6 2 1.23479 221.33954 LEU 1 4.085 MM 3 0.87331 1.45776 7 9.73725 LYS
Totals without ISTD(s) : 3078 . 03723
Signal 2: DAD1 B , sig=262,l6 Ref=324,3
RetTime Type Area Amt/Area Amount Grp Name
[min] [mAU*s] ratio [pmol]
17.343 MM I 140.56145 1.00000 250.00000 SAR 17.956 MM 172.15819 1.23743 378.91345 PRO
Totals without ISTD(s) : 378.91345
Results obtained with standard integrator! 1 Warnings or Errors :
Warning : Calibration warnings (see calibration rable listir.g)