Góp phần nghiên cứu chế biến vị thuốc mạch môn

BÔ Y TE TRITÔNG DAI HOC DU0C HÀ NÔI NGUYÊN PHÜONG MAI GÔP PHAN NGHIÊN CÜtJ CHÊ BIEN VITHUOC MACH MON • • ( KHO LUÂN TÔT NGHIÊP DÜÇfC SÎ KHO 1998- 2003) - Ngu&i huâng dân : Ts. Vü Vân Diên : Ts. Vü Thi Trâm - Noi thuc hiên : Bô mon Duac hoc co truyên : Bô mon Diroc lue - Thôi gian thuc hiên : 03/2003 - 05/2003. Hà Nôi, thâng 5, 2003 J l è ’i e â m & ni Mach mon Ban ha Ma hoàng Cât cânh Sinh dja Cam thâo Mach mon don g lhang [13]: Ngû vj tù : 4g Tang bach bî : 12g Dja col bl : 10g 12g 10g «g 8g 10g Tù uyën : 4g Sinh khirong : 4g 6g Sâc uô'ng ngày 1 thang Công dung: Trj ho ddm man tinh, ho ra mü, ngue dây truông, nguôi hâo khât, tien bf, tâm phiên nhiêt, bürt rut, nông bàn tay, bàn chân. > Bo phe thang gia giâm [13]: Dâng sâm Bach truât : 16g :12g Mach mon Ngoc truc : 12g :12g Hoài son : 12g Bach bô : 12g Ngû vj tù : 6g Sâc uô'ng ngày mot thang Công dung: Ho nhiêu dôm cô khi cô mâu, ho lao phôi, ra nhiêu mô hôi, kém tiêu hoâ, phân nât. > Bai thuôc chùra tac tia sûfa [10]: -Mach dông bô loi tân nhô. Môi lân uông 10-12g. -Sùng tê giâc mài vôi ruçru, khoâng 4g. Uông dô 2-3 lân. > Bài thuôc chüra dau rang [14]: - Nuôc sâc mach môn: uông vài lân là khôi. > Mach niôn nhân sâm thang [13]: Cam thâo :8g Mach môn :20g Dai mê :20g Nhân sâm Dai tâo : 12g Bân ha : 12g :8g Sâc uông ngày mot thang Công dung: Tri chûng ho dôm, lâu ngày, co thé suy nhuoc, met môi, khô thô. Mot so chê phâm trêti thi truùng hiên nay cô vi mach môn: > Cao hô plié. > Bo phê' chî khâi lô (Siro) ( Công ty co phân duoc phâm Nam Hà, Công ty cô phân dirorc phArn Traphaco.) Nhân xét: Mach môn là mot cây phân bô nhiêu à câc vùng Châu  (Trung Quôc, Viçt Nam, Indoncxia, Nhât Ban, Triéu Tien...) Tuy nhicn viêc su dung cây này trong y hoc thî chî cô à mot sô nuôc, dâc biêt là Trung Quôc và Viêt Nam. Tai câc quôc gia khâc cây này thuông chî dùng làm cành và dê? phü xanh dât trông, chông xôi môn dâ't do dâc diém cüa cây này dê trông, dë sô'ng. Gân dây trên thê' giôi cung dâ cô nhûng công trînh nghiên ciru tâc dung duoc lÿ cüa cây này umg dung trong diêu tri câc chûng bênh nhiêm khuân và tim mach. Dâc biêt nhôm nghiên cihi cüa câc nhà khoa hoc Mÿ gân dây dâ dua ra mot thông tin bô ich khi ûng dung mot sô duoc thâo (trong dô cô mach môn dông) trong diêu tri bênh AIDS, kéo dài su ton tai cüa khâng thë , ûc ché' su phât triën cüa virus HIV [IL Viêt Nam ta là mot nuôc sân cô nën y hoc co truyên tù râ't lâu ddi, lai cô diêu kiên tu nhiên thuân loi cho viêc trông và chê' biê'n duoc lieu nôi chung và mach môn nôi riêng. Vâ'n dê nghiên curu, chê biê'n mach môn sao cho kinh tê', hiêu quâ và thuân tien cho viêc sûr dung là vâ'n dê cân duoc quan tâm. -8- Phân II THUC NGHIÊM VÀ KÊT QU 2.1. Nguyên vât lieu và phuong phâp thuc nghiêm. 2.1.1.Nguyên vât lieu - Mach mon: Mua tai huyên Thanh Son - Phü Tho, thu hoach khoâng thâng 9 nâm 2002. - Hoa châ't thuôc thü : Câc hoâ châ't làm thuc nghiêm, mua tai cüa hàng cung irng vât tu hoâ chat 18A - Lê Thânh Tông - Hà Nôi. Dat tiêu chuân phân tich - Trang thiê't bi: - Mây quang ph6 UV-VIS 752 (Trung Quoc). - Mây quang pho UV - VIS Cary - 1E (Hâng Varian- Mÿ). - Mây do thé tfch chân chuôt thuÿ ngân. - Mây xâc dinh dô âm Précisa HA 60. - Cân phân tich Sartorius BP121S (Nhât). - Mây phân tfchtu dông HP-1090-Amino Quant Sériés II. - Suc vât thi nghiêm: Chuôt nhât và chuôt cô'ng trâng dat tiêu chuân suc vât thi nghiêm do Viçn vç sinh djch tê cung câp. 2.1.2. Phitong phâp nghiên cûu ❖ Chê bien vi thuô'c mach mon theo phuctng phâp co truyén._ ■ Mach mon plioi. sâ'y khô(mach mon song). ■ Sao vàng. ■ Sao câch cât. ❖ Phuang phâp nghiên cûu thành phân hoâ hoc: *Dinh tinh: - Djnh tinh so bô mot sô nhom chât thudng cô trong rê cü mach mon vôi câc mâu loi và mâu song mach mon bàng thuôc thü chung và thuôc thir dàc hiêu bàng phuong phâp hoâ thuc vât thông thudng. - Dinh tinh saponin toàn phân bàng sâc kÿ lôp mông, tien hành song song mâu song và ché. Dùng ban mông trâng sân kÿ hiêu Silicagel GF 254-336 (cüa hâng Merk). Khai triën mot sô hê dung môi, chon hê dung môi tâch tôt nhât dë ghi két quâ. -9- * Phuong phàp dinh luong: - Dinh luong saponin loàn phân bàng phuong phàp cân. - Dinh luong duông bàng phuong phàp do quang vôi thuoc thü O. Toluidin - Djnh luong acid amin toàn phân bàng phirong phàp sâc kÿ long cao âp( HPLC) Xâc dinh acid amin lien két bàng mây phân tich tir dông HP - 1090 Amino Quant Sériés II gôm RP WIN HPLC vôi Diode- array Detector vôi 2 hê buôc sông 338 nm dô'i voi acid amin bâc 1 và 262 nm doi vôi acid amin bâc 2. ('Thtfc hiên (ai phông hoâ sinli- Vit7/ công nghç sinh hoc-Ttrung tâm khoa hoc công nghê quôc gia). ♦> Phuong phàp nghiên cüu tac dung sinh hoc - Thûtâc dung ûc chê phân xa ho theo phuong phàp xông hoi amoniac: [5] +Nguyên tac: Gây ho cho chuôt bàng câch cho chuôt tiép xüc v6i hoi amoniac bâo hoà à dieu kiên nhiêt dô, âp suât và thcri gian nhàt dinh. Sau do dém s6 lân ho cüa chuôt trong 5 phut dàu, so sânh sô' tiéng ho trung bînh càc lô thü véi lô chüng và lô dôi chicu dë dành giâ tâc dung cüa thuoc. - Thü tâc dung long dùm theo phuong phàp do nông dô dô phénol bài tiê't qua khi, phé quàn suc vât thi nghiçm. + Nguyên tâc: Dua vào khà nâng long dôm (dich tiét phé quàn) cüa chuôt nhât khi tiêm phénol dô (phenolsunfur phtalein) cô nông dô 0,25% (pha trong NaHC03 5%) Do nông dô dô phénol duoc bài tiét qua khi, phé quàn vôi dd rua phé quàn NaHC03 5% cüa càc lô thü và lô chirng de dành giâ két qua. Lô thü thuoc duoc coi là cô tâc dung long dôfm néu cô nông dô dô phénol gâp 2 lân trôr lên so vôi lô chüng[5], [13]. - Thü tâc dung chong viêm cap Theo phuong phâp cüa Wilhenri: +Nguyên tac: Cho chuôt uông thuoc thü, sau 1 gid do thé tich chân chuôt. Gây viêm bàng câch tiêm dung djeh carragenin 1% duôi da gan bàn chân chuôt. Do thé tich chân chuôt sau khi gây viêm tai mot sô thdi diëm nhàt djnh. Tinh tÿ lê phù và tÿ lê üc chê phù tai câc thôfi diém do và so sânh giâ tri trung bînh gifra câc lô thu vôi lô chüng và lô dôi chiéu. 2.2.Két quâ và nhân xét: 2.2.1. Chê bien vi thuôc mach môn: giô cho cü mêm, tuôc riêng loi và cü dem chc bien nhu sau: - Mâu song: Phoi, sây khô à nhiçt dô 50 - 60°C dén khi cü khô, giôn dê bé là duoc. - Sao vàng: Dun cho châo nông già khoâng 100°C - 140°C, cho cü dâ tuée bô loi sây khô vào dào nhanh, deu téi khi cü mach môn cô mùi thom, nôr phông déu lâ'y ra dé nguôi. - Sao câch cât: Cho cât vào châo dun cho cât nông già, bô cü dâ tuôfc bô loi sây khô vào dâo nhanh, dêu tôi khi nd phông dêu, mùi thom dâc trung thï lâ'y nhanh châo ra, sàng sach cât, dë nguôi. Tât câ câc mâu trên tân thành bôt thô, bâo quân trong tui ni Ion dë nghiên cüu. Câc mâu ché bién duoc tôm tât trong so dô hinh 5, anh 3, 4, 5. Hinh 5: Sodo câc mâu ché bien mqch môn ? Anh 5: Loi mach mon. 2.2.2. Nghiên cûu thành phân hoâ hoc. 2.2.2.1. Dinh tinh s Chuan bi dich chiét: Cân khoâng 20g bot duoc lieu tien hành song song câc mâu: sông(S), lôi(L). Cho vào dung eu chiét soxhlet, chiét bàng ether (100 ml) trong 6 gior, lây riéng djeh chiét ether, lâc voi 20 ml H2S04 20 %, gan riêng tirng phân. Bâ côn lai chiét tiép bàng ethanol 80% (100ml ) theo so dô sau: Hinh 6: So dô chiét mach mon de dinh tinh so bô câc nhôm chat. Djch chiét acid: Dinh tinh Alcaloid. Djch chiét ether 2: Djnh tmh câc nhôm chât sau: + Carotenoid + Anthra noid + Chât béo + Flavonoid Djch chiét Ethanol(djch chiét côn): Djnh tinh câc nhôm chât sau: + Alcaloid + Flavonoid + Anthranoid + Saponin + Coumarin + Tanin + Dudng khir - 13- v ❖ Câc ijhdn üng dinh tinh (Tien hành song song câc mâu S, L). ■ Dinh tmh Saponin: • Quan sât hiên titffng tao bot: Cho vào ong nghiêm to 3 ml djch chiét ethanol, bô'c hoi côn khoâng 1 ml, thêm 5 ml nuôc cât, bjt miêng ô'ng, lâc manh trong 5 phüt, thâ'y xuât hiên côt bot bên vûng sau 30 phüt. Lâp lai thf nghiêm 3 lân, cho két quâ tuang tu. Két quâ: Phân ùng duong tmh. • Xâc dinh chî so tao bot [15]: Cân 1 g bôt nguyên lieu (Dâ rây qua rây sô 32), cho vào blnh non cô dung tfch 500 ml dâ chiia sàn 100 ml nuôc soi, giù cho soi nhe trong 30 phüt, loc, dë nguôi, và thêm nuôc cho dung 100 ml. Lâ'y 10 ong nghiêm cô chiêu cao 16 cm và duông kfnh 16 mm roi cho vào câc ong nghiêm dô lân luçrt 1, 2, 3.... 10 ml nuôc sâc, thêm nuôc cât vào môi ô'ng cho dü 10 ml. Dânh sô tir I dén 10. Bjt miçng ô'ng nghiçm roi lâc theo chiéu doc cüa ô'ng trong 15 giây, môi giây 2 lân lâc. Dé yen 15 phüt roi do chiêu cao câc côt ô'ng bot. Két quà xâc djnh chî sô bot duoc ghi à bâng 2. Chî sô tao bot cüa mâu loi (L) là: CSB = 10x1/0,04 =250. Chî sô tao bot cüa mâu song (S) là: CSB =10x1/0,05 = 200. Chî sô tao bot cùa mâu sao câch cât (SCC) là: CSB =10x1/0,05 = 200. Bâng 2: Két quâ xâc dinh chi sô tao bot A/ Mâu Ong co côt bot cao 1 cm CSB L 4 250 S 5 200 SCC 5 200 Két qua: Chî sô' bot cüa mâu L cao hon mâu S và mâu SCC. - 14- • Phân ûng Salkowski: Cho vào ông nghiêm 3ml djch chiê't côn, bdc hoi câch thuÿ don cân, thêm 1ml chloroform, cho tùf tir lml acid sulfuric dâc theo thành ongnghiêm. Quan sât thây cô màu dô nâu xuâ't hiên o lôp phân câch giffa 2 châ't long. Lâp lai thi nghiêm 3 lân cho kê't quâ tuong tu. Ket quâ: Phân ùng duong tinh. • Phân ûng sa bô phân biêt Saponin steoroid hay triterpenoid. Cho khoâng 5 g duoc liêu vào mot bînh non, thêm 20 ml nuée cât, dun soi nhe trong 15 phüt, dë nguôi loc lây dich chiê't. Cho vào 2 ông nghiêm to môi ông 5 ml dich chiê't nuôc. /s' - Ong 1 thêm 5 ml dung dich natri hydroxyd 0,1 N. - Ong 2 thêm 5 ml dung dich acid chlohydric 0,1 N. Lâc manh trong khoâng 30 giây, dë yên sau I phüt cho 6n djnh, nhân thâ'y ông sô 1 cô côt bot cao gâ'p 2 lân ông sô 2. Lâp lai thi nghiêm 3 lân cho kê't quâ tuong tir. Ket quâ: Trong câc dich chiét mach mon cô thë cô saponin steroid. • Phân ûng Rosenthaler Cho vào ông nghiêm 3ml dich chiét côn, bôc hoi câch thuÿ den gân khô. Nhô 5 giot thuôc thù vanilin 1% trong HC1. Không thâ'y màu tfm hoa cà xuâ't hiên. Lâp lai phân ung 3 làn cho ket quâ tuong tu. Phân üng âm tinh Ket quâ: Trong câc dich chiét cô thë không cô saponin triterpenoid. • Phân ûng Liebermann- Burchard: Cho vào ông nghiêm 5ml djch chiê't côn. Bô'c hoi câch thuÿ dén cân, hoà nông và 1 ml anhydrid acetic, cho thêm 1 giot H2S04 dâm dâc, thây xuâ't hiên màu xanh lâ. lâp lai thi nghiêm 3 làn cho kê't quâ tuong tu. Ket quâ: Phân lîng duong tinh. ^ Sor bô nhân xét: Cô saponin steroid trong dich chiê't câc mâu mach mon. -15- ■ Dinh tmh Alcaloid. Dinh tinh alcaloid troua diçh çhiej qçiçl (alçaloid dang base): • Dinh tmh bàng thuoc thûtao tua vôi alcaloid. Cho vào 3 ong nghiçm 2ml djch chiét acid. a' f ^ Ong 1: Thêm vài giot thuôc thir Mayer: Không thây xuât hiên tua ■ trâng. Két quâ: Phân tfng âm tinh. A '' • ' f Ong 2: Thêm vài giot thuôc thü Bouchardat: Không thây xuât hiên tua nâu. Két quâ: Phân un g âm tinh. a' Ong 3: Thêm vài giot thuôc thu Dragendorff: Không thây xuât hiên • tüa màu vàng cam. Két quâ: Phân irng âm tmh. Lâp lai thf nghiêm 3 lân cho kêt quâ tuong tu Sa bô nhân xét: Không cô Alcaloid trong djch chiét ether câc mâu mach mon. Dinh tinh alcaloid trong diçh çhiej catv Cho vào 3 ong nghiêm to khoâng 2 ml djch chiét côn. Bôc hoi câch thuÿ dén khô, thêm 2ml dung dich H2S04 20%. Cho vào 3 ông nghiêm 2ml djch chiét acid. -O ng 1: Thêm vài giot thuôc thir Mayer: Không thây xuât hiên tüa trâng. Két qua: Phân irng âm tmh. - Ong 2: Thêm vài giot thuôc thü Bouchardat: Không thây xuât hiên tüa nâu. Két quâ: Phân üng âm tmh. - Ong 3: Thêm vài giot thuôc thü Dragendorff: Không thây xuât hiên tüa màu vàng cam. Két quâ: Phân ung âm tmh. ^ Sa bô nhân xét: Không cô Alcaloid trong djch chiét côn câc mâu mach mon. - 16- ■ Dinh tmh Flavonoid: Dinh tinh Flavonoid trong. diçh chiét çoiv • Phân ûng cyanidin: Cho vào ô'ng nghiêm nhô khoàng 2 ml dich chiét côn, thêm mot ft magiê bot, nhô tù tù vài giot acid HC1 dâc, lâc nhe, dun câch thuÿ 2 phüt. Quan sât : Dung djch chuyën sang màu hông. Lâp lai thf nghiêm 3 lân cho két quâ tuong tu. Két quâ: Phân ürng duong tmh. • Phân ûng vâi sât (III) Chlorid 5% (FeCl3 5%): Cho vào ong nghiêm 1 ml dich chiét côn, thêm vài giot FeCl3 5%, lâc kÿ. Quan sât: Dung dich chuyën sang màu xanh den. Két quâ: Phân ûng duong tmh. • Phân ûng vâi kiém: + Phân ûng vâi amoniac: Nhô môt vài giot dich chiét côn lên môt miêng giây loc, dë khô, dùng môt mânh giây che mot nüa vêt djch chiê't, ho trênmiêng loamoniac dâc. Quan sât:phân không che giây cô màu vàng dâm hon phàn chegiây. Lâp lai thinghiêm 3lân dêu cho kê't quâ tuong tu. Két qua: Phân ung duong tmh. + Phân ûng vâi dung dich NaOH 10%: Cho vào 2 ô'ng nghiêm môi ô'ng 2 ml djch chiê't côn câc mâu mach môn, à ô'ng nghiêm 1 thêm 5 giot NaOH 10%, ô'ng nghiêm 2 thêm 5 giot nuôc cât, lâc dêu. Quan sât: dung djch trong ô'ng nghiêm 1 cô màu vàng dâm hon ô'ng nghiêm 2. Lâp lai thi nghiêm 3 lân cho két quâ tuong tu. Két qua: Phân ûng duong tmh. • Phân ümgvûiH2S 0 4 dâc: Cho vào ô'ng nghiêm 2 ml djch chiét côn câc mâu mach môn, thêm 3 giot H2S04 dâc, lâc nhe. Quan sât: Dung djch chuyën sang màu dô thâm, lâp lai thi nghiêm 3 lân cho kê't quâ tuong tu. Két quà: Phân ûng duong tmh. -17- ^ So bô nhân xét: Cô Flavonoid trong djch chiét côn câc mâu S và L cüa mach mon. Dinh tinh l'Iavonoid [roua.