Xây dựng quy trình định lượng methamphetamin trong tóc bằng sắc ký khí khối phổ

Trên thế giới hiện nay đã sử dụng nhiều phương pháp để phân tích MA trong máu, nước tiểu, tóc như các kit phát hiện nhanh bằng ELISA, các phương pháp xác định bằng LC-MS, HPLC, GC-MS, GC

TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

DƯƠNG QUỲNH TRÂM

XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG METHAMPHETAMIN TRONG TÓC

BẰNG SẮC KÝ KHÍ KHỐI PHỔ

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ

HÀ NỘI - 2015

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

DƯƠNG QUỲNH TRÂM

XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG METHAMPHETAMIN TRONG TÓC BẰNG SẮC KÝ KHÍ KHỐI PHỔ

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ

Người hướng dẫn:

1 ThS Phạm Lê Minh

2 ThS Phạm Quốc Chinh Nơi thực hiện:

Khoa Hóa pháp – Viện Pháp y Quốc gia

HÀ NỘI - 2015

LỜI CẢM ƠN

Lời đầu tiên em xin bày tỏ lòng biết ơn đến ThS Phạm Lê Minh, giảng viên

Bộ môn Hóa phân tích và độc chất trường ĐH Dược HN đã tạo mọi điều kiện cho

em tham gia hoàn thành khóa luận tại Viện Pháp y Quốc Gia

Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến ThS Phạm Quốc Chinh, cán bộ Khoa

Hóa pháp – Viện Pháp y Quốc gia, người đã trực tiếp hướng dẫn, dành nhiều thời

gian, tâm huyết, giúp đỡ em hoàn thành khóa luận này

Em xin gửi lời cám ơn tới Ban Giám đốc Viện Pháp y Quốc gia và Khoa

Hóa phân tích và độc chất– Trường ĐH Dược HN đã luôn tạo điều kiện giúp đỡ em

hoàn thành khóa luận tốt nghiệp

Em cũng xin chân thành cảm ơn các anh chị cán bộ ở Khoa Hóa pháp – Viện Pháp y Quốc gia đã nhiệt tình chỉ bảo, hướng dẫn em trong quá trình tiến hành thí nghiệm

Cuối cùng, em xin cảm ơn gia đình và bạn bè, những người đã luôn động viên khích lệ em trong suốt quá trình học tập và thực hiện đề tài này

Hà Nội, ngày 10 tháng 5 năm 2015

Sinh viên Dương Quỳnh Trâm

MỤC LỤC

Đặt vấn đề 1

Chương 1: Tổng quan 3

1.1 Tổng quan về nhóm ATS 3

1.2 Tổng quan về methamphetamin 5

1.2.1 Công thức cấu tạo và tính chất lý hóa 5

1.2.2 Tác dụng dược lý 5

1.2.3 Dược động học và phân bố trong tóc 7

1.3 Tổng quan về chiết methamphetamin trong tóc 9

1.3.1 Cấu trúc của tóc 9

1.3.2 Các phương pháp chiết methamphetamin trong tóc 9

1.4 Tổng quan về sắc kí khí khối phổ (GC-MS) 10

1.4.1 Khái niệm 10

1.4.2 Hệ thống GC-MS 11

1.4.3 Một số kỹ thuật MS 14

1.5 Các phương pháp xác định methamphetamin trong tóc 15

1.5.1 Phương pháp sắc ký khí khối phổ 15

1.5.2 Phương pháp sắc ký lỏng khối phổ (LC-MS) 15

1.5.3 Phương pháp miễn dịch 15

Chương 2: Đối tượng và phương pháp nghiên cứu 16

2.1 Nguyên liệu, thiết bị 16

2.2 Nội dung nghiên cứu 17

2.2.1 Xây dựng phương pháp định lượng MA trong tóc 17

2.2.2 Ứng dụng phân tích MA trong mẫu thực 17

2.3 Phương pháp nghiên cứu 17

2.3.1 Lấy mẫu, chuẩn bị mẫu nghiên cứu 17

2.3.2 Pha các dung dịch chuẩn 17

2.3.3 Xử lý mẫu, chiết và tạo dẫn xuất 18

2.3.4 Định lượng methamphetamin trong mẫu tóc 19

2.3.4.1 Lựa chọn điều kiện sắc ký 19

2.3.4.2 Lựa chọn nội chuẩn 19

2.3.4.3 Thẩm định phương pháp phân tích 19

2.3.5 Ứng dụng phương pháp đã xây dựng định lượng MA trong mẫu tóc 20

2.4 Phương pháp xử lý số liệu 20

Chương 3: Thực nghiệm và kết quả 22

3.1 Xây dựng phương pháp định lượng MA bằng GC-MS 22

3.1.1 Thiết lập chương trình GC-MS xác định MA 22

3.1.2 Khảo sát phổ khối của MA-TFA và AM-d5-TFA 22

3.2 Thẩm định phương pháp 25

3.2.1 Tính phù hợp hệ thống 25

3.2.2 Tính chọn lọc - độ đặc hiệu 26

3.2.3 Độ tuyến tính 28

3.2.4 Độ đúng và độ chính xác 29

3.2.5 Giới hạn phát hiện, giới hạn định lượng 31

3.2.6 Hiệu suất chiết 31

3.3 Ứng dụng phân tích MA trong mẫu tóc thực 32

Bàn luận 36

Kết luận và kiến nghị 38

TÀI LIỆU THAM KHẢO 40

DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT

DANH MỤC CÁC BẢNG

DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ

TFAA

23

(trên) và MA-TFA với mảnh SIM 154 (dưới)

23

mảnh 154 (dưới)

27

144 (trên) và mảnh 154 (dưới)

28

diện tích pic MA/AM-d5) với hàm lượng mẫu nhiễm

29

(trên) và 154 (dưới)

33

(trên) và mảnh 154 (dưới)

34

là loại ATS có sự gia tăng mạnh và ngày càng tăng trên thị trường ma túy [1][31]

Để thực hiên tốt công tác phòng chống các hành vi bất hợp pháp liên quan tới loại

ma túy trên, công việc kiểm nghiệm phát hiện ra MA cũng đóng một vai trò không nhỏ Trên thế giới hiện nay đã sử dụng nhiều phương pháp để phân tích MA trong máu, nước tiểu, tóc như các kit phát hiện nhanh bằng ELISA, các phương pháp xác định bằng LC-MS, HPLC, GC-MS, GC-FID,….Còn ở Việt Nam chỉ mới phổ biến ở dùng các test thử nhanh, sắc lỏng hay sắc kí khí; một số cơ quan giám định đã bắt đầu nghiên cứu dùng sắc kí khí khối phổ GC-MS, sắc kí lỏng khối phổ LC-MS để phân tích trên mẫu vật máu, nước tiểu, tuy nhiên chưa có nghiên cứu nào sử dụng GC-MS phân tích trên mẫu tóc trong khi mẫu tóc là mẫu vật tiện lợi hơn cả để xác định nhanh chóng methamphetamin Với lý do đó, chúng tôi đã đặt vấn đề xác định methamphetamin trong tóc bằng phương pháp GC-MS nhằm đưa ra quy trình chuẩn giám định methamphetamin trong tóc để ứng dụng trong các phòng xét nghiệm hình

sự trong cả nước với hy vọng sẽ góp phần phục vụ tốt hơn cho công tác phòng chống tội phạm ma túy

Để thực hiện mục tiêu trên, nội dung luận văn sẽ có 2 phần sau:

1 Xây dựng phương pháp định tính và định lượng MA trong tóc bằng kỹ thuật GC-MS

để xác định MA trong tóc và áp dụng vào mẫu tóc thực tế

Chương 1: Tổng quan

ATS là từ viết tắt của amphetamine type stimulants – các chất kích thích thần kinh dạng amphetamin – bao gồm nhiều chất có cấu trúc tương tự nhau, trong đó amphetamin là chất được phát hiện và tổng hợp đầu tiên năm 1887 tại Đức Sau sự

ra đời của amphetamin, methamphetamin được tổng hợp năm1989 tại Nhật Ngoài hai chất chính trên, còn có một số chất khác trong nhóm như MDMA, MDA, DMA,,…vv [4][6][33]

Việc sử dụng amphetamin trong y tế bắt đầu vào cuối những năm 1920 với vai trò một thuốc thông mũi và giãn phế quản để thay thế cho ephedrin Sau đó vào những năm 1930, thuốc được mở rộng trên lâm sàng với tác dụng kích thích thần kinh trung ương, chống trầm cảm, ũ rũ Amphetamin và methamphetamin được dùng rộng rãi trong quân đội ở thế chiến thứ II để tăng cường sức chịu đựng, sự tỉnh táo, tránh mệt mỏi… Đồng thời với việc sử dụng, các thuốc ATS bị lạm dụng nhiều hơn, nhất là ở người trẻ tuổi Càng ngày, tác hại của các thuốc này càng thể hiện nghiêm trọng: dễ gây nghiện, dùng liều cao gây loạn thần, hoang tưởng, dễ kích động, bạo lực vì thế chúng còn được gọi là “các chất loạn thần”, “ma túy điên”, “ma túy bạo lực” [5][26][31]

Hiện nay các chất nhóm ATS được tổng hợp và buôn bán trái phép với số lượng ngày càng nhiều Đây là loại ma túy tổng hợp xuất hiện phổ biến hiện nay với nhiều hình thức đa dạng: ma túy đá, hồng phiến, thuốc lắc,… và nhiều nhất là methamphetamin dạng tinh thể (ma túy đá) [7][31]

Công thức chung của nhóm ATS:

Hình 1.1 Một số dạng ma túy tổng hợp ATS trên thị trường ma túy Việt Nam

Bảng 1.1 Công thức một số ATS điển hình

1.2 Tổng quan về methamphetamin

1.2.1 Công thức cấu tạo và tính chất lý hóa [5][6][13]

MA thường gặp dưới 2 dạng là base và muối hydroclorid

ethanol, cloroform và ether

 Methamphetamin hydroclorid:

nước, 1/4 trong ethanol, 1/5 trong cloroform, không tan trong ether

 Tác dụng kích thích hệ thần kinh trung ương:

MA tác dụng chủ yếu lên não, vỏ não, ngoài ra còn tác dụng lên hệ thống lưới hoạt hóa của hệ thần kinh trung ương Các tác dụng này gây ra những thay đổi

trạng thái tinh thần như cảm giác sảng khoái, tỉnh táo, phấn chấn, tinh thần nhanh nhẹn, tăng tính năng động, tự tin, tăng vận động, nói năng, giảm mệt mỏi, dịu đau Các trạng thái này có thể giúp cho con người cải thiện được những công việc đơn giản, thậm chí làm được nhiều việc hơn, nhất là những vận động thể chất như điền kinh, nhảy múa,…tuy nhiên với các công việc phức tạp thì hiệu quả giảm và khả năng sai sót trong công việc tăng do thiếu năng lực tập trung Do các tác động lên thần kinh như trên, người sử dụng MA có xu hướng tiếp tục sử dụng hết lần này đến lần khác để thỏa mãn kích thích bản thân và dần lệ thuộc vào nó, đó là sự nghiện

MA Việc dùng MA kéo dài hoặc liều cao thường gây chán chường, mệt mỏi, ảo giác, hoang tưởng, hoảng loạn, đau đầu, chóng mặt, rối loạn vận mạch, lẫn lộn, suy nhược tinh thần, suy giảm khả năng tình dục [4][6][17]

 Tác dụng kích thích hệ thần kinh giao cảm [6][9][17]:

MA có tác dụng kiểu α và β như các chất cường giao cảm:

- Tác dụng lên tim mạch: kích thích trực tiếp làm tăng nhịp tim, gây co mạch, làm tăng huyết áp cả tâm thu lẫn tâm trương Dùng liều lớn có thể gây loạn nhịp tim, co thắt mạch vành gây đau thắt ngực

- Tác dụng lên các cơ trơn khác: làm giảm co thắt cơ trơn dạ dày, ruột, giảm chuyển dịch thức ăn

- Tác dụng giảm đau: tác dụng giảm đau nhẹ, tuy nhiên chưa đủ để điều trị hiệu quả Mặc dù vậy theo một số báo cáo, nó có thể tăng hiệu quả giảm đau của các opiat

- Kích thích trung tâm hô hấp: đối với tình trạng bình thường, tác dụng này là không đáng kể nhưng khi đã bị ức chế hô hấp bởi các chất tác dụng trên hệ thần kinh trung ương thì MA có tác dụng kích thích hô hấp rõ rệt

- Gây chán ăn: MA tác dụng vào vị trí trung tâm no ở dưới đồi bên

 Độc tính:

Khi dùng quá liều thì gây ra các triệu chứng ngộ độc dẫn đến tử vong như hôn mê, co giật, chảy máu não Liều độc tối thiểu gây chết người ở người bình thường là 1g [6][17]

 Cơ chế tác dụng:

Tác dụng lên thần kinh trung ương của MA là do làm tăng giải phóng các chất trung gian thần kinh là dopamin, serotonin và noradrenalin Sự thay đổi trong vận động và hành vi cư xử liên quan nhiều nhất bởi dopamin [6][9][17]

Hình 1.2 Cơ chế tác dụng lên thần kinh trung ƣơng của MA

1.2.3 Dược động học và phân bố trong tóc

MA dễ dàng hấp thu qua đường uống và đường trực tràng, phân bố nhanh chóng vào máu, dễ dàng qua hàng rào máu não để gây ra tác dụng MA đạt nồng độ đỉnh khoảng 3-6 giờ sau khi uống Nó cũng được hấp thu tốt sau khi hít bằng mũi hoặc tiêm MA vào cơ thể sẽ đượcchuyển hóa và thải trừ phần lớn qua nước tiểu, một phần nhỏ MA phân bố vào tóc [4][17][19][30]

Hình 1.3 Sơ đồ chuyển hóa của MA

Trong 24 giờ đầu, MA được đào thải qua đường nước tiểu khoảng 43% ở dạng không biến đổi, khoảng 15% ở dạng 4-hydroxymethamphetamin, khoảng 5%

ở dạng amphetamin và một số chất chuyển hóa khác ở dạng biến đổi hoặc kết hợp [5][12]

Về sự phân bố trong tóc, cơ chế của nó rất phức tạp và hiện nay vẫn chưa rõ ràng, nhiều giả thuyết cho rằng MA đã khuếch tán (thụ động hay chủ động) từ các mạch máu nuôi dưỡng nang tóc vào nang tóc, nằm chủ yếu ở tủy tóc MA tồn tại trong tóc trong vài tháng đến thậm chí hàng năm [17][19][30]

Hình 1.4 Giả thuyết

cơ chế MA đi vào trong tóc

1.3 Tổng quan về chiết methamphetamin trong tóc

1.3.1 Cấu trúc của tóc

Sợi tóc gồm 2 phần là nang tóc và thân tóc

Nang tóc còn gọi là chân tóc, nằm phía dưới bề mặt da sâu từ 3-5mm Nó được bao quanh bởi hệ thống mao mạch máu nuôi dưỡng tóc Nang tóc là phần

“sống” duy nhất của tóc, giúp tóc mọc dài ra Thân tóc là những “sợi tóc” mà ta nhìn thấy hằng ngày, là phần tóc đã “chết” [18][25]

Thân tóc gồm 3 lớp: lớp biểu bì (cuticle), lớp giữa (cortex) và lớp tủy (medulla) Lớp biểu bì là phần ngoài cùng, gồm các lớp keratin trong suốt xếp chồng lên nhau như vảy cá, có tác dụng bảo vệ sợi tóc khỏi hóa chất và những ảnh hưởng bên ngoài Lớp biểu bì còn được phủ một màng lipid mỏng để tóc không thấm nước Lớp giữa bao gồm nhiều bó sợi nhỏ hợp thành và chứa các sắc tố của tóc Lớp tủy là phần trong cùng của sợi tóc, chứa các hạt chất béo và không khí [11][18][25]

thủy phân để giải phóng MA mới chiết được Hiện nay có một số phương pháp thủy phân tóc thường được sử dụng:

- Thủy phân trong môi trường kiềm: thường sử dụng dung dịch NaOH 2,5M

0,1 Thủy phân trong môi trường acid: thường dùng một số acid như HCl,

1.4.1 Khái niệm

Sắc ký khí (GC) là một phương pháp tách các chất từ một hỗn hợp ở thể khí bay hơi với pha động là một chất khí thường là khí trơ Mẫu phân tích được đưa vào đầu cột và quá trình rửa giải được thực hiện nhờ dòng khí trơ qua cột sắc ký, tuy nhiên pha động không tương tác với chất phân tích mà chỉ làm chức năng vận chuyển chất phân tích qua cột Pha tĩnh của GC có thể là chất lỏng trong sắc ký khí- lỏng (GLC) còn gọi là sắc ký khí phân bố hay chất rắn trong sắc ký khí- rắn (GSC) còn gọi là sắc ký khí hấp phụ, nhưng vì quá trình hấp phụ có nhiều hạn chế nên GSC ít được ứng dụng ngoại trừ phân tích một số chất khí [2][35]

Khối phổ (MS) là một kỹ thuật dựa trên việc đo tỷ số khối lượng và điện tích của ion (m/z) để cung cấp thông tin định tính xác định cấu trúc và định lượng các chất Kỹ thuật này là một kỹ thuật phân tích mạnh được sử dụng trong nhiều lĩnh vực khác nhau để xác định các chất vô cơ và hữu cơ [2][28]

Sự kết hợp hai kỹ thuật trên, GC và MS, đã cho ra đời kỹ thuật sắc ký khí khối phổ GC-MS Phương pháp GC-MS sử dụng kĩ thuật GC để tách các chất và

phát hiện chúng với detector MS nhờ đó phát huy được ưu điểm của cả hai phương pháp, phát triển và mở rộng ứng dụng của hai kĩ thuật này

Đi kèm với bình cấp khí mang còn có van giảm áp, đồng hồ kiểm tra lưu lượng khí [2][28][35]

 Buồng tiêm mẫu

Mẫu phân tích lỏng hoặc khíđược tiêm nhanh vào dòng pha động với một lượng vừa đủ bằng bơm tiêm nhỏ hoặc van tiêm mẫu Cỡ mẫu thường thay đổi từ vài µl đến 20µl Mẫu được tiêm qua đệm silicon chịu nhiệt vào buồng hóa hơi, buồng này được đốt nóng tới nhiệt độ thích hợp và nối với cột tách [2][28][35]

Có nhiều kỹ thuật tiêm mẫu khác nhau

- Kỹ thuật tiêm chia dòng (split): chia dòng khí mang 1:100 đến 1:1000 để giảm lượng mẫu vào cột (giảm 90% hoặc hơn) Độ nhạy của mẫu giảm vì chỉ một phần nhỏ vào cột

- Kỹ thuật không chia dòng (splitless): toàn bộ mẫu ngưng tụ ở đầu cột đã làm lạnh, sau đó tăng nhiệt độ làm bay hơi mẫu Độ nhạy tăng nhưng có nguy cơ giãn rộng pic

- Kỹ thuật tiêm thẳng vào cột (on-column): mẫu được ngưng tụ ở đầu cột sau

đó làm bay hơi theo chương trình nhiệt độ Tăng độ nhạy, giảm phân hủy mẫu do nhiệt [2]

- Kỹ thuật bay hơi nhanh (flash vaporization): mẫu tiêm vào vùng có nhiệt độ

do nhiều ưu điểm nên người ta sử dụng phổ biến cột mao quản.Sau đây là các đặc điểm của 2 loại cột trên:

- Nguyên liệu: silica nung chảy rất tinh khiết (tạp kim loại <1ppm)

- Kích thước: dài 10-100m (cuộn tròn) Đường kính trong 0,1-0,7mm, có áo bảo vệ bằng polymid hoặc nhôm

- Pha tĩnh: lớp chất lỏng dày 0,1-5µm bao mặt trong của cột hoặc chất mang bao pha tĩnh

- Khí mang: heli hoặc hydro

- Độ phân giải: phân tích nhiều thành phần: 100 chất hoặc hơn, nhất là với cột đường kính trong <0,2mm Chất tan được rửa giải ở nhiệt độ thấp hơn

so với cột nhồi

- Nguyên liệu: thủy tinh, thép không gỉ

- Kích thước: dài 1-3m (cuộn tròn) Đường kính trong 2-3mm

- Pha tĩnh: kích thước hạt 150-250µm, được bao lớp mỏng (0,05-1µm)

- Khí mang: nitơ, heli

- Độ phân giải: thấp, tốt nhất chỉ có thể tách được 20 thành phần

 Pha tĩnh: pha tĩnh sử dụng chủ yếu là chất lỏng và được cố định trong cột cần đảm bảo yêu cầu sau:

 Detector khối phổ

Detector khối phổ là một detector đặc biệt vì ngoài vai trò phát hiện khối phổ còn có khả năng tách các chất đồng rửa giải dựa trên sự khác nhau về khối lượng của chúng

Nguyên tắc hoạt động: Các ion được tạo thành trong buồng ion hóa, được gia tốc và tách riêng nhờ bộ phân tích khối trước khi đến được detector Tất cả quá trình

tương ứng với các ion sẽ được thể hiện bằng một số vạch (pic) có cường độ khác nhau tập hợp lại thành một khối phổ đồ hoặc phổ khối Nó cung cấp thông tin định tính (khối lượng phân tử, nhận dạng các chất) xác định cấu trúc và định lượng các chất [2][5][28]

Hình 1.7 Sơ đồ khối của máy khối phổ

Detector khối phổ gồm có 5 bộ phận:

- Bộ nạp mẫu: là đầu ra của máy GC kết nối với máy khối phổ

- Bộ nguồn ion: ion hóa các nguyên tử, phân tử của mẫu ở trạng thái khí hoặc hơi

- Bộ phân tích khối: tách các ion theo tỷ số m/z Các ion được gia tốc tách riêng nhờ tác dụng của từ trường, điện trường để đi đến detector

- Detector: có nhiệm vụ chuyển các ion đến thành tín hiệu điện đo bằng hệ điện tử của máy

- Bộ xử lý dữ liệu: tín hiệu từ detector được khuếch đại trước khi chuyển thành tín hiệu số phục vụ xử lý dữ liệu theo yêu cầu khác nhau như: ghi phổ khối, định lượng,…[2][28]

1.4.3 Một số kỹ thuật MS

 Kỹ thuật phân tích toàn thang (FULL SCAN)

Với một hỗn hợp nhiều chất sau khi được tách ra qua cột sắc ký khí và đưa vào detector khối phổ, detector sẽ ghi nhận tổng cường độ các ion sinh ra từ mỗi chất Ta có một sắc ký đồ toàn bộ ion TIC (Total Ion Chromatogram) và phổ khối được lấy toàn bộ các ion (FULL SCAN) FULL SCAN cho đầy đủ thông tin về chất phân tích hơn, tuy nhiên độ nhạy không cao, nhiễu đường nền có thể lớn [2][4][5]

 Kỹ thuật phân tích chọn lọc ion (SIM, SelectedIon Monitoring)

Kỹ thuật này chỉ cho khối phổ kế nhận diện một ion và ghi sắc ký đò theo thời gian Kỹ thuật SIM có tác dụng làm giảm bớt nhiễu đường nền và do đó tăng

độ nhạy, tức tăng tỷ lệ tín hiệu (S) trên nhiễu đường nền (N) [2][4][5]

1.5.1 Phương pháp sắc ký khí khối phổ

Phương pháp sắc ký khí khối phổ ngày càng được sử dụng rộng rãi trong phân tích MA Máy sắc ký khí tách MA và đưa vào detector khối phổ, có khả năng định tính, định lượng MA với độ nhạy và độ chính xác cao Để sử dụng phương pháp này, MA cần được tạo dẫn xuất để tăng khả năng bay hơi và bền với điều kiện sắc ký [16][18][20][27][30][34]

1.5.2 Phương pháp sắc ký lỏng khối phổ (LC-MS)

Phương pháp sắc ký lỏng khối phổ cũng là một phương pháp đã được sử dụng nhiều để phát hiện MA Với mẫu tóc, chiết MA bằng phương pháp thích hợp rồi đưa vào hệ thống LC-MS mà không cần tạo dẫn xuất như với GC-MS Bộ phận

LC có chức năng chia tách MA trong dung dịch, đưa vào bộ phận khối phổ với vai trò detector để định tính , định lượng [18][22][23][30]

1.5.3 Phương pháp miễn dịch

Nguyên lý của phương pháp này là sử dụng kháng thể đặc hiệu với chất cần phân tích (kháng nguyên) và dạng đánh dấu của chất phân tích Dạng đánh dấu của chất phân tích sẽ tranh chấp với chất phân tích để kết hợp với kháng thể theo cơ chế phản ứng giữa kháng nguyên với kháng thể Kết quả là số lượng các phân tử bị đánh dấu sẽ tỷ lệ nghịch với lượng chất cần phân tích trong mẫu Tùy thuộc vào bản chất của chất đánh dấu mà các phương pháp phân tích sẽ được áp dụng Phương pháp này thường ứng dụng để tạo các kit xác định nhanh MA Mẫu tóc sau khi được xử

lý và chiết sẽ được đem xác định bằng phương pháp miễn dịch để phát hiện MA [5][10][14][30]

Chương 2: Đối tượng và phương pháp nghiên cứu

- Mẫu tóc được gửi tới viện Pháp y Quốc gia để giám định

Hình 2.1 Máy sắc ký khí khối phổ Agligent Technologies 6980N

- Bình định mức, bình nón, ống nghiệm, và các dụng cụ khác

2.2.1 Xây dựng phương pháp định lượng MA trong tóc

 Xây dựng phương pháp định lượng MA trong tóc bằng GC-MS: bao gồm các nội dung

- Xử lý mẫu: đưa ra quy trình xử lý mẫu chiết lỏng lỏng sau khi thủy phân trong môi trường kiềm

- Lựa chọn điều kiện sắc ký, lựa chọn chuẩn nội: đưa ra chương trình sắc ký khối phổ để định lượng, chất chuẩn nội phù hợp

 Thẩm định phương pháp: bao gồm các nội dung

- Giới hạn phát hiện, giới hạn định lượng

2.2.2 Ứng dụng phân tích MA trong mẫu thực

Sử dụng phương pháp đã xây dựng để phân tích MA trong mẫu tóc của người nghi ngờ sử dụng ma túy gửi đến giám định tại Khoa Pháp y – Viện Pháp y quốc gia

2.3.1 Lấy mẫu,chuẩn bị mẫu nghiên cứu

Mẫu tóc được gửi đến hoặc lấy trực tiếp ở Khoa Hóa pháp - Viện Pháp y

2.3.2 Pha các dung dịch chuẩn

chuẩn MA 1mg/ml vào bình định mức 100ml, thêm lượng methanol vừa đủ vào, lắc đều