Nghiên cứu đặc điểm thực vật thành phần hóa học của cây mũi mác (desmodium triquetrum (l ) DC , họ đậu (fabaceae) mọc hoang ở bắc kạn

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN MINH NGỌC NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT, THÀNH PHẦN HOÁ HỌC CỦA CÂY MŨI MÁC (DESMODIUM TRIQUETRUM (L.) DC., HỌ ĐẬU (FABACEAE)) MỌC HOANG Ở BẮC KẠN LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI 2013 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN MINH NGỌC NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT, THÀNH PHẦN HOÁ HỌC CỦA CÂY MŨI MÁC (DESMODIUM TRIQUETRUM (L.) DC., HỌ ĐẬU (FABACEAE)) MỌC HOANG Ở BẮC KẠN LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: DƯỢC HỌC CỔ TRUYỀN MÃ SỐ: 60720406 Người hướng dẫn khoa học: TS. NGUYỄN THỊ BÍCH THU HÀ NỘI 2013 LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành bản luận văn này, trong quá trình nghiên cứu tôi đã nhận được rất nhiều sự giúp đỡ quý báu của các thầy, cô giáo, các chuyên gia, các nhà khoa học thuộc nhiều lĩnh vực cùng đồng nghiệp, bạn bè. Trước hết, cho phép tôi được bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới: TS. Nguyễn Thị Bích Thu và ThS. Nông Thị Anh Thư đã trực tiếp hướng dẫn, chỉ bảo, giúp đỡ, động viên tôi rất tận tình và chu đáo . Những lời tiếp theo, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn tới: TS. Phương Thiện Thương và toàn thể cán bộ khoa Hóa Phân tích – Tiêu chuẩn của Viện Dược Liệu đã giúp đỡ và tạo điều kiện cho tôi trong quá trình nghiên cứu hoá thực vật, đặc điểm giải phẫu và vi học của đối tượng nghiên cứu. ThS. Đặng Vũ Lương, KTV. Ngô Văn Quang và các chuyên gia Phòng Cấu trúc, Viện Hoá học, Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam, đã giúp đỡ tôi trong việc đo phổ cũng như giải quyết những vướng mắc trong quá trì nh xác định cấu trúc. Những lời cuối cùng, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn tới toàn thể gia đình, chồng, bạn bè đồng nghiệp đã động viên và tạo điều kiện tốt nhất cho tôi trong quá trình học tập, nghiên cứu và hoàn thành bản luận văn này. Một lần nữa, tôi xin chân thành và trân trọng cảm ơn tất cả những sự giúp đỡ quý báu này. Hà Nội, ngày tháng năm 2013 Tác giả luận văn MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ 1 CHƯƠNG 1. TỔNG QUAN 3 1.1. Đặc điểm chung của họ Đậu (Fabaceae) 3 1.2. Tổng quan về chi Desmodium 3 1.2.1. Vị trí phân loại 3 1.2.2. Đặc điểm thực vật chung của chi Desmodium 4 1.2.3. Đặc điểm một số loài trong chi Desmodium 4 1.3. Những nghiên cứu về cây Mũi mác D. triquetrum (L.) DC 6 1.3.1. Đặc điểm thực vật 6 1.3.2. Phân bố và sinh thái 7 1.3.3. Một số công dụng theo kinh nghiệm dân gian 7 1.3.4. Thành phần hoá học 8 1.3.5. Tác dụng dược lý 9 1.3.6. Một số bài thuốc dân gian 10 CHƯƠNG 2. NGUYÊN VẬT LIỆU, TRANG THIẾT BỊ VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 12 2.1. Đối tượng nghiê n cứu 12 2.2. Phương tiện nghiên cứu 12 2.2.1. Thuốc thử, dung môi, hoá chất 12 2.2.2. Phương tiện và máy móc 12 2.3. Phương pháp nghiên cứu 13 2.3.1. Về thực vật 13 2.3.1.1. Phân tích hình thái thực vật 13 2.3.1.2. Nghiên cứu đặc điểm vi học theo các tài liệu 13 2.3.1.3. Giám định tên khoa học của mẫu nghiên cứu. 13 2.3.2. Về hóa học 13 2.3.2.1. Phương pháp định tính bằng phản ứng hoá học kết hợp sắc ký lớp mỏng TLC 13 2.3.2.2. Các phản ứng hóa học thường quy 13 2.3.2.3. Định tính bằng sắc ký lớp mỏng 19 2.3.2.4. Xác định độ ẩm của dược liệu 19 2.3.2.5. Chiết xuất 20 2.3.2.6. Phương pháp phân lập các hợp chất 21 2.3.2.7. Phương pháp xác định cấu trúc hoá học các hợp chất 21 CHƯƠNG 3. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 22 3.1. Nghiên cứu về thực vật 22 3.2. Đặc điểm giải phẫu 23 3.2.1. Vi phẫu rễ Mũi mác 23 3.2.2. Vi phẫu thân Mũi mác 25 3.2.3. Vi phẫu lá cây mũi mác 26 3.2.4. Đặc điểm bột dược liệu 28 3.3. Định tính thành phần hóa học của dược liệu Mũi mác 29 3.3.1. Định tính một số nhóm chất chính t rong dược liệu 29 3.3.2. Chiết xuất và định tí nh cắn các phân đoạn bằng sắc ký lớp mỏng 31 3.3.2.1. Chiết xuất. 31 3.3.2.2. Định tính cắn các phân đoạn bằng sắc ký lớp mỏng 31 3.3.3. Chiết xuất phân lập các chất trong Mũi mác 33 3.3.3.1. Phân lập 33 3.3.3.2. Kiểm tra độ tinh khiết của các chất phân lập được bằng SKLM. 38 3.3.3.3. Kiểm tra độ tinh khiết của các chất phân lập được bằng HPLC: 39 3.3.4. Xác định cấu trúc hóa học của các chất chính phân lập được từ Mũi mác 41 3.3.4.1. Xác định cấu trúc DT3: 41 3.3.4.2. Xác định cấu trúc DT4: 44 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 48 4.1. Về phương pháp: 48 4.2. Về thực vật: 49 4.3. Thành phần hóa học: 49 CHƯƠNG 5. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 51 Kết luận: 51 Kiến nghị: 51 TÀI LIỆU THAM KHẢO 1 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT AST Ánh sáng thường DĐVN Dược điển Việt Nam EtAc Ethylacetat EtOH Ethanol GC - MS Sắc ký khí khối phổ HPLC High performance liquid chromatography (Sắc ký lỏng hiệu năng cao) HPTLC High performance thin layer chromatography (Sắc ký lớp mỏng hiệu năng cao) IR Phổ hồng ngoại MeOH Methanol MS Phổ khối NMR Phổ cộng hưởng từ hạt nhân SKC Sắc ký cột SKLM Sắc ký lớp mỏng TLC Thin layer chromatography (Sắc ký lớp mỏng) TT Thuốc thử UV Ultra vis (quang phổ UV) VKH & CNVN Viện khoa học và công nghệ Việt Nam DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU Bảng Tên bảng Trang Bảng 3.1 Bảng kết quả các phản ứng định tính nhóm chất chính có trong dược liệu Mũi mác 30 Bảng 3.2 Khối lượng các phân đoạn cao 33 Bảng 3.3 Chương trình dung môi rửa giải 39 Bảng 3.4 Số liệu phổ 1 H- và 13 C-NMR chất DT-3 43 Bảng 3.5 Số liệu phổ 1 H- và 13 C-NMR chất DT4-A và DT4-B 46 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình Tên hình Trang Hình 1.1 Cây Mũi mác 6 Hình 1.2 Công thức cấu tạo một số chất đã được phân lập từ cây Mũi mác 9 Hình 2.1 Sơ đồ chiết các phân đoạn cây Mũi mác 20 Hình 3.1 Cây Mũi mác 22 Hình 3.2 Vi phẫu rễ Mũi mác 24 Hình 3.3 Một phần vi phẫu rễ Mũi mác 24 Hình 3.4 Một phần vi phẫu thân Mũi mác 26 Hình 3.5 Vi phẫu lá Mũi mác 27 Hình 3.6 Vi phẫu phiến lá Mũi mác 28 Hình 3.7 Đặc điểm vi phẫu dược liệu Mũi mác 29 Hình 3.8 Sắc ký đồ cắn dịch chiết toàn phần ở AST, UV 254 , UV 365 32 Hình 3.9 Sắc ký đồ cắn dịch chiết phân đoạn ethylacetat ở UV 254 , UV 365 , AST/TT 32 Hình 3.10 Sắc ký đồ cắn dịch chiết phân đoạn buthanol ở UV 254 , UV 365 và AST/TT 33 Hình 3.11 Sơ đồ phân lập các chất từ phân đoạn Ethylacetat 35 Hình 3.12 Sắc ký đồ đối chiếu phân đoạn có chứa DT1 và β- sitosterol chuẩn 37 Hình 3.13 Sắc ký đồ SKLM kiểm tra độ tinh khiết của DT3/ 254nm, AST/ sau thuốc thử. 38 Hình 3.14 Sắc ký đồ SKLM kiểm tra độ tinh khiết của DT4/ 254nm, AST/ sau thuốc thử. 39 Hình 3.15 Sắc ký đồ HPLC của DT3 40 Hình 3.16 Sắc ký đồ HPLC của DT4 40 Hình 3.17 Công thức cấu tạo của DT3 (Kaempferol) 44 Hình 3.18 Công thức cấu tạo của DT4 - B (Quercetin) 47 Hình 3.19 Công thức cấu tạo của DT4 – A (Luteolin) 47 [...]... điểm thực vật và thành phần hóa học của cây Mũi mác (Desmodium triquetrum (L. ) DC. , họ Đậu (Fabaceae )) mọc hoang ở Bắc Kạn với các mục tiêu: 1 Mô tả đặc điểm hình thái, nghiên cứu đặc điểm vi phẫu l , thân, r , đặc điểm bột dược liệu từ cây Mũi mác và giám định tên khoa học mẫu nghiên cứu 2 Định tính các nhóm chất đối với cắn toàn phần và cắn các phân đoạn của mẫu nghiên cứu; Chiết xuất, phân lập... Trong cây có chứa friedelin, epifriedelinol, stigmasterol, lá chứa 7,1 % – 8,6 % tanin [3] Cho đến nay chưa có công trình nghiên cứu nào công bố đầy 1 đủ về đặc điểm thực vật, thành phần hóa học, tác dụng sinh học của cây Mũi mác (Desmodium triquetrum (L. ) DC .) mọc ở Việt Nam Nhằm tạo cơ sở khoa học cho việc khai thác và sử dụng dược liệu có hiệu quả hơn, chúng tôi tiến hành đề tài "Nghiên cứu đặc điểm thực. .. cùng lớn hơn các lá bên, có lá kèm nhỏ Cụm hoa ngắn và thưa mọc ở kẽ l , hoa nhỏ màu tím hồng, đài 5 răng có lông, tràng 5 cánh, cánh cờ hình bầu dục, cánh bên thuôn, cánh thìa không có tai, bộ nhị hai b , bầu có lông 5 Quả loại đậu nh , thuôn, có từ 4 đến 5 hạt 1.3 Những nghiên cứu về cây Mũi mác D triquetrum (L. ) DC 1.3.1 Đặc điểm thực vật Cây Mũi mác là cây thảo cứng, cao 1 - 1,5 m Thân có 3 cạnh Lá... học các cây thuốc có ý nghĩa quan trọng cho việc sử dụng một cách hợp lý và có hiệu quả nhất nguồn tài nguyên thiên nhiên này Cây Mũi mác (Desmodium triquetrum (L. ) DC .) hay Tadehagi triquetrum (Linnaeus) H Ohashi, còn gọi là cây Thóc lép, cây Cổ bình Cây phân bố ở Ấn Đ , Mianma, Trung Quốc tới Philippin Ở nước ta, cây mọc hoang ở rìa rừng, rừng thưa Khi dùng làm dược liệu, cây được thu hái toàn cây vào... thảo) 4 Cây thảo mọc b , sau đứng thẳng, cao 0,3 – 0,5 m Ngọn non dẹt, có khía và lông tơ trắng Lá mọc so le, gồm 1 hoặc 3 lá chét hình tròn, dài 1,5 – 3,4 cm, rộng 2 – 3,5 cm, gốc bằng hoặc hơi hình tim, đầu tù hoặc hơi lõm, mặt trên màu lục xám nhạt, có gân rất r , mặt dưới phủ lông màu trắng bạc, mềm như nhung, lá kèm có lông, có khía, cuống lá dài 1 – 2,5 cm, có lông Cụm hoa mọc ở kẽ lá hoặc đầu ngọn thành. .. (1H- và 13C-NMR) của hãng Bruker (500MHz ), Viện Hóa học, VAST 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.1 Về thực vật 2.3.1.1 Phân tích hình thái thực vật: Mô tả đặc điểm hình thái theo phương pháp ghi trong tài liệu [7] 2.3.1.2 Nghiên cứu đặc điểm vi học theo các tài liệu [6 ], [7] 2.3.1.3 Giám định tên khoa học của mẫu nghiên cứu [7 ], [8] - Sử dụng khóa phân loại tới h , chi và loài trong tài liệu - Đối chiếu... mẫu nghiên cứu trên là Desmodium triquetrum (L. ) DC. , thuộc họ Đậu (Fabaceae) còn có tên khoa học là Tadehagi triquetrum (Linnaeus) H Ohashi 3.2 Đặc điểm giải phẫu 3.2.1 Vi phẫu rễ Mũi mác Mặt cắt rễ hình tròn, vùng vỏ chiếm 1/4 diện tích, vùng trụ giữa chiếm 3/4 Rễ cây có cấu tạo đối xứng tỏa tròn gồm các phần sau: - Vùng vỏ: Lớp bần ( 1) gồm 4-10 lớp tế bào hình bầu dục dẹt, méo m , vách mỏng, xếp thành. .. tần, lá chè tươi mỗi thứ 30g, sắc lấy nước uống + Chữa họng sưng đau: Dùng Mũi mác 60g, sắc lấy nước, chia ra ngậm, nuốt dần, nhiều lần trong ngày + Chữa viêm họng, ho: Dùng Mũi mác 50g, trần bì 15g, húng chanh ( tần dày l ) 30g, gừng 5g, sắc uống + Chữa ho ra máu: Dùng Mũi mác 75g, sắc nước uống + Chữa nôn ra máu: Dùng Mũi mác (thái nh , sao vàng) 8-12g, sắc đặc, chắt lấy nước, hòa thêm chút mật ong vào... PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu Mẫu (cây tươi mang hoa) thu hái tháng 10 năm 2011 tại Bắc Kạn, mã số tiêu bản là AT01 lưu tại phòng tiêu bản của phòng Sinh học - Viện Khoa học và công nghệ Dược liệu là phần trên mặt đất của cây, được rửa sạch, thái nhỏ phơi, sấy khô trước khi nghiên cứu 2.2 Phương tiện nghiên cứu 2.2.1 Thuốc th , dung môi, hoá chất - Các thuốc th , dung môi, hoá chất... Tadehagi triquetrum (Linnaeus) H Ohashi, ngoài ra còn có các tên Desmodium triquetrum L DC. , , Hedysarum triquetrum L ., Pteroloma triquetrum (L. ) Desv ex Benth… 6 1.3.2 Phân bố và sinh thái [3] Phân bố chủ yếu ở vùng nhiệt đới châu Á từ Ấn Đ , Srilanca đến Mianma, Trung Quốc, Philippin Ở nước ta, cây mọc hoang ở rìa rừng, rừng thưa Cây ưa bóng và có thể hơi chịu bóng, có khả năng chịu hạn và sống được cả ở . " ;Nghiên cứu đặc điểm thực vật và thành phần hóa học của cây Mũi mác (Desmodium triquetrum (L. ) DC. , họ Đậu (Fabaceae )) mọc hoang ở Bắc Kạn với các mục tiêu: 1. Mô tả đặc điểm hình thái, nghiên. TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN MINH NGỌC NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT, THÀNH PHẦN HOÁ HỌC CỦA CÂY MŨI MÁC (DESMODIUM TRIQUETRUM (L. ) DC. , HỌ ĐẬU (FABACEAE )) MỌC HOANG Ở BẮC KẠN . (DESMODIUM TRIQUETRUM (L. ) DC. , HỌ ĐẬU (FABACEAE )) MỌC HOANG Ở BẮC KẠN LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: DƯỢC HỌC CỔ TRUYỀN MÃ SỐ: 60720406 Người hướng dẫn khoa học: TS.