1. Trang chủ
  2. » Luận Văn - Báo Cáo

Khảo sát ảnh hưởng của một số chất thuộc nhóm auxin đến khả năng tạo mô sẹo phôi hóa phục vụ chuyển gen của một số giống sắn (manihot esculenta crantz)

55 628 0

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

THÔNG TIN TÀI LIỆU

Thông tin cơ bản

Định dạng
Số trang 55
Dung lượng 0,92 MB

Nội dung

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM NGUYỄN THỊ HUYỀN Tên đề tài: KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ CHẤT THUỘC NHÓM AUXIN ĐẾN KHẢ NĂNG TẠO MÔ SẸO PHÔI HÓA PHỤC VỤ CHUYỂN GEN CỦA M

Trang 1

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN

TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM

NGUYỄN THỊ HUYỀN

Tên đề tài:

KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ CHẤT THUỘC NHÓM AUXIN ĐẾN KHẢ NĂNG TẠO MÔ SẸO PHÔI HÓA PHỤC VỤ CHUYỂN GEN

CỦA MỘT SỐ GIỐNG SẮN (Manihot esculenta Crantz)

KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC

Viện Di truyền Nông nghiệp Việt Nam

Khoa CNSH – CNTP, Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên

Thái Nguyên, năm 2014

Trang 2

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN

TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM

NGUYỄN THỊ HUYỀN

Tên đề tài:

KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ CHẤT THUỘC NHÓM AUXIN ĐẾN KHẢ NĂNG TẠO MÔ SẸO PHÔI HÓA PHỤC VỤ CHUYỂN GEN

CỦA MỘT SỐ GIỐNG SẮN (Manihot esculenta Crantz)

KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC

Viện Di truyền Nông nghiệp Việt Nam

Khoa CNSH – CNTP, Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên

Thái Nguyên, năm 2014

Trang 3

LỜI CẢM ƠN Với tấm lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc, tôi xin cảm ơn PGS TS Nguyễn Văn Đồng (Giám đốc Phòng Thí nghiệm Trọng điểm Công nghệ Tế bào Thực vật, Viện Di truyền Nông nghiệp), TS Nguyễn Anh Vũ người đã tận tình chỉ bảo và tạo

điều kiện giúp tôi hoàn thành quá trình thực tập

Tôi xin chân thành cảm ơn KS Lê Ngọc Quỳnh cùng toàn thể cán bộ và nhân viên phòng Thí nghiệm Trọng điểm Quốc gia Công nghệ Tế bào Thực vật đã hết lòng giúp đỡ tôi trong suốt quá trình thực tập

Tôi cũng xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành, lời tri ân tới ThS Lương Thị Thu Hường đã tận chỉ bảo, hướng dẫn tôi trong thời gian qua

Cuối cùng, tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới gia đình, người thân và bạn bè, những người luôn dành cho tôi những tình cảm tốt đẹp nhất, luôn hỗ trợ, giúp đỡ tôi trong suốt thời gian học tập và nghiên cứu

Do thời gian thực hiện đề tài có giới hạn nên đề tài không tránh khỏi những sai sót Em rất mong nhận được sự đóng góp kiến của thầy cô và các bạn để đề tài của tôi được hoàn thiện hơn

Tôi xin chân thành cảm ơn!

Hà Nội, tháng 5 năm 2014

Sinh viên

Nguyễn Thị Huyền

Trang 4

DANH MỤC CÁC BẢNG

Trang

Bảng 2.1 Diện tích, năng suất và sản lượng sắn của thế giới từ năm 2000-2011 13

Bảng 2.2 Diện tích, sản lượng và năng suất trồng sắn của Việt Nam qua các năm 2000-2013 14

Bảng 2.3 Các quốc gia phát triển nhiên liệu sinh học với quy mô lớn 16

Bảng 2.4 Tám nhà máy sản xuất Ethanol và rượu 17

từ sắn của Việt Nam năm 2010 17

Bảng 3.1 Các môi trường sử dụng trong quá trình nghiên cứu 24

Bảng 4.1 Kết quả ảnh hưởng của NAA tới khả năng tạo mô sẹo sau 28 ngày 32

Bảng 4.2 Kết quả ảnh hưởng của 2,4D tới khả năng tạo mô sẹo sau 28 ngày 34

Bảng 4.3 Kết quả ảnh hưởng của picloram tới khả năng tạo mô sẹo sau quá trình nuôi cấy 35

Bảng 4.4 Kết quả ảnh hưởng của NAA tới khả năng tạo mô sẹo phôi hóa sau quá trình nuôi cấy 37

Bảng 4.5 Kết quả ảnh hưởng của 2,4D tới khả năng tạo mô sẹo phôi hóa sau quá trình nuôi cấy 38

Bảng 4.6 Kết quả ảnh hưởng của picloram tới khả năng tạo mô sẹo phôi hóa sau quá trình nuôi cấy 39

Trang 5

DANH MỤC CÁC HÌNH

Trang

Hình 2.1 Biểu đồ sản lượng trồng sắn của Việt Nam từ năm 2000 - 2013 15

Hình 3.1 Cây sắn trong ống nghiệm 24

Hình 3.3 Sơ đồ khảo sát ảnh hưởng của NAA tới khả năng tạo mô sẹo phôi hóa 27

Hình 4.1 Ảnh hưởng của NAA tới khả năng tạo mô sẹo 33

Hình 4.2 Ảnh hưởng của 2,4D tới khả năng tạo mô sẹo 34

Hình 4.3 Ảnh hưởng của picloram tới khả năng tạo mô sẹo 36

Hình 4.4 Biểu đồ so sánh ảnh hưởng của các auxin ở công thức tối ưu tới khả năng tạo mô sẹo 37

Hình 4.5 Biểu đồ so sánh ảnh hưởng của các auxin ở công thức tối ưu tới khả năng tạo mô sẹo phôi hóa 40

Hình 4.6 Giống TMS60444 sau 2 lần cấy chuyển trong môi trường MMS 41

Hình 4.7 Giống KM98 – 7 sau 2 lần cấy chuyển trong môi trường 41

Hình 4.8 Giống sắn sau 4 lần cấy chuyển trong môi trường MMS 42

Trang 6

DANH MỤC TỪ, CỤM TỪ VIẾT TẮT

2,4D : Axit 2,4 dicloro-phenoxiaxetic(2,4D)

ADN : Axit deoxyribonucleic

BAP :6-benzylaminopurineCIAT :International Center for Tropical Agriculture

CV : Coeficient of Variation

Đ/C : Đối chứng FAO : Food and Agriculture Organization HCN : Hidro xyanua

LSD : Least Significant Difference

MS : Murashige and Skoog’s NAA : α- Naphlene axetic axit

TN : Thí nghiệm

Trang 7

MỤC LỤC

Trang

MỞ ĐẦU 1

1.1 Đặt vấn đề 9

1.2 Mục đích và mục tiêu nghiên cứu 10

1.2.1 Mục đích 10

1.2.2 Yêu cầu 10

1.3 Ý nghĩa của đề tài 10

1.3.1 Ý nghĩa khoa học 10

1.3.2 Ý nghĩa thực tiễn 10

Phần 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 11

2.1 Tổng quan chung về cây sắn 11

2.1.1 Nguồn gốc và phân loại 11

2.1.2 Đặc điểm thực vật học 11

2.1.3 Đặc điểm một số giống sắn nghiên cứu 12

2.1.4 Thành phần dinh dưỡng và giá trị sử dụng 12

2.1.4 Tình hình sản xuất và tiêu thụ 13

2.1.5 Nhu cầu sắn cho nhiên liệu sinh học 16

2.2 Auxin và vai trò của auxin trong quá trình tạo mô sẹo 18

2.3 Tình hình nghiên cứu chuyển gen sắn 19

2.3.1 Trên thế giới 19

2.3.2 Tại Việt Nam 23

Phần 3: ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24

3.1 Đối tượng và vật liệu nghiên cứu 24

3.2 Môi trường nuôi cấy 24

3.3 Dụng cụ, thiết bị và hóa chất 24

3.4 Địa điểm và thời gian tiến hành nghiên cứu 25

3.5 Nội dung nghiên cứu 25

3.6 Phương pháp nghiên cứu 25

3.6.1 Nội dung 1: Nghiên cứu sự ảnh hưởng của auxin (NAA, 2,4-D, picloram) tới khả năng tạo mô sẹo 27

3.6.2 Nội dung 2: Nghiên cứu sự ảnh hưởng của auxin (NAA, 2,4-D, picloram) tới khả năng tạo mô sẹo phôi hóa 29

Phần 4: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 32

Trang 8

4.1 Kết quả ảnh hưởng của auxin (NAA, 2,4-D, picloram) tới khả năng tạo mô sẹo 32

4.2 Kết quả ảnh hưởng của auxin (NAA, 2,4-D, picloram) tới khả năng tạo mô sẹo phôi hóa 37

4.2.3 Kết quả ảnh hưởng của picroram tới khả năng tạo mô sẹo phôi hóa 39

Phần 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 43

5.1 Kết luận 43

5.2 Kiến nghị 43

TÀI LIỆU THAM KHẢO 45

I Tài liệu tiếng Việt 45

II Tài liệu tiếng anh 45

Trang 9

MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề

Sắn (Manihot esculenta Crantz) hiện được trồng trên hơn 100 nước có khí

hậu nhiệt đới và cận nhiệt đới thuộc ba châu: châu Á, châu Phi và châu Mỹ La Tinh

Tổ chức Nông lương thế giới (FAO) xếp sắn là cây lương thực quan trọng ở các nước đang phát triển sau lúa gạo, ngô và lúa mì Tinh bột sắn là một thành phần quan trọng trong chế độ ăn của hơn một tỷ người trên thế giới [17]

Ở Việt Nam, cây sắn được xác định là loài cây nhiên liệu sinh học thích

hợp duy nhất trong thời gian tới Ngoài ra, sắn đã trở thành một trong 10 mặt hàng xuất khẩu quan trọng của Việt Nam với kim ngạch năm 2012 đạt tới 1,2 tỷ USD (FAO, 2013) [18] Tuy nhiên, năng xuất và sản lượng sắn của nước ta còn

ở mức thấp, chất lượng tinh bột trong sắn cũng không cao do canh tác không đúng kỹ thuật, khả năng kháng virus và sâu bệnh thấp, diện tích trồng không quy

mô, tập chung Do vậy, chúng ta cần tạo ra giống sắn mới cho năng xuất và chất lượng cao đáp ứng đủ nhu cầu thực tế [21]

Ngày nay trong công tác chọn tạo giống sắn, kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào được

áp dụng để nhân nhanh, tạo giống sạch bệnh và kỹ thuật di truyền, chuyển gen tạo giống mới mang các đặc tính mong muốn một cách nhanh chóng và hiệu quả được nghiên cứu [20] Tạo mô sẹo phôi hóa là khâu quan trọng để tạo vật liệu phục vụ chuyển gen vào sắn Mô sẹo phôi hóa đã được sử dụng nhiều trong các nghiên cứu như tạo giống sạch bệnh, nghiên cứu chuyển gen và bảo quản nguồn gen Tạo mô sẹo phôi hóa có ý nghĩa quan trọng cho nghiên cứu khả năng tiếp nhận gen của các giống sắn, làm cơ sở tiến tới chuyển gen (tổng hợp tinh bột, gen kháng virus, ) nâng cao năng xuất, hàm lượng tinh bột phục vụ sản xuất nhiên liệu sinh học [29]

Việc sử dụng một số các chất kích thích sinh trưởng đã nâng cao hiệu quả rõ rệt vì nó kích thích sự phân chia tế bào của mô phân sinh thượng tầng để hình thành

mô sẹo (callus) [11] Các chất thuộc nhóm auxin đều có hiệu quả trong việc cảm ứng

để duy trì mô hoặc để cảm ứng mô sẹo có khả năng sinh phôi Tuy nhiên các chất

khác nhau (2,4-D, NAA, picloram…) và được sử dụng ở những nồng độ khác nhau thì hiệu quả tạo mô sẹo không giống nhau trên các giống sắn Chúng có thể kích thích cũng có thể ức chế quá trình tạo mô sẹo [16] Trong một nghiên cứu tạo mô sẹo của

E Sofiari và cộng sự, 2,4D cho kết quả cao hơn so với NAA trên giống TMS90853[16] Ông cho rằng nên sử dụng 2,4D để tạo mô sẹo trong quá trình nuôi

Trang 10

cấy Trong khi đó Jiu Liu và cộng sự lại sử dụng piclroram cho quá trình tạo mô sẹo

và mô sẹo phôi hóa và cho kết quả khá tốt trên giông TMS 60444 [24] Các giống sắn

ở Việt Nam rất đa dạng và có nhiều giống tốt nhưng quá trình nghiên cứu về sắn liên

quan tới tạo mô sẹo hay chuyển gen còn rất nhiều khó khăn, hạn chế [1]

Do vậy vấn đề đặt ra hiện nay là cần tìm ra loại auxin cho hiệu quả tạo mô sẹo, mô sẹo phôi hóa cao nhất phục vụ chuyển gen trên các giống sắn Việt Nam

Xuất phát từ thực tiễn trên tiến hành thực hiện đề tài: “Khảo sát ảnh hưởng của

một số chất thuộc nhóm auxin đến khả năng tạo mô sẹo phôi hóa phục vụ chuyển gen của một số giống sắn (Manihot esculenta Crantz)”

1.2 Mục đích và mục tiêu nghiên cứu

Trang 11

Phần 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan chung về cây sắn

2.1.1 Nguồn gốc và phân loại

Sắn thuộc họ Euphobiaceae, phân họ Crtonoideae, tông Manihoteae, chi Manihot, loài M Esculenta, tên khoa học là Manihot Esculenta Crantz Sắn còn

được gọi với tên tiếng anh là cassava [25] Ở Việt Nam, sắn hay còn được gọi là cây

khoai mì, cây củ mì…

Chi Manihot bao gồm những cây có hoa, hạt kín, có hai lá mầm, họ thầu dầu

Năm 1776 Crantz công bố một sự mô tả loài với tên Manihot esculenta Ông dùng lại tên loài M esculenta và không còn phân biệt giữa sắn đắng và sắn ngọt Chi Manihot thuộc họ thầu dầu, có tới hơn 300 chi và 8000 loài hầu hết là cây nhiệt đới Chi Manihot thuộc nhóm Manihotae Tất cả các loài trong chi đều có số lượng

nhiễm sắc thể 2n= 36 Rogers và Appan đã xây dựng một bảng phân loại cho 98 loài, phân thành 17 nhóm [29] Sự nhận dạng các loài và các nhóm dựa vào sự phân tích nhiều mặt của nhiều đặc điểm hình thái ở các bộ phận trên mặt đất Nhờ vào bảng phân loại trên người ta đã lập được một bảng nhận dạng các loài trong chi [7]

Sắn có nguồn gốc ở vùng nhiệt đới của châu Mỹ La tinh và được trồng cách đây khoảng 5000 năm Cây sắn đựơc du nhập vào Việt Nam khoảng giữa thế kỷ 18 [19] Sắn được canh tác phổ biến tại hầu hết các tỉnh của Việt Nam Trong đó, diện tích sắn trồng nhiều nhất ở vùng Đông Nam Bộ, vùng Tây Nguyên, vùng núi và trung du phía bắc, vùng ven biển nam Trung Bộ và vùng ven biển bắc Trung Bộ [3]

2.1.2 Đặc điểm thực vật học

Cây sắn cao 2–3 m, lá khía thành nhiều thùy, rễ ngang phát triển thành củ và tích luỹ tinh bột Thời gian sinh trưởng của sắn từ 6 đến 12 tháng, có nơi tới 18 tháng, tùy giống Vụ trồng, địa bàn trồng và mục đích sử dụng, nhiệt độ sinh trưởng 20-30oC [2] Hoa sắn thuộc loại hoa chùm, đơn tính, có cuống dài mọc ra từ chỗ phân cành, ngọn thân Quả sắn có kích thước từ 1-1,5 cm, một quả thường có 3 hạt hạt sắn nặng từ 95-136 mg, màu nâu đen Nhiệt độ thích hợp cho hạt sắn nảy mầm

là từ 25- 30oC [19] Sắn dễ trồng, hợp nhiều loại đất, vốn đầu tư thấp, hợp khả năng kinh tế với nhiều hộ gia đình nông dân nghèo, thiếu lao động tận dụng đất để lấy ngắn nuôi dài Sắn đạt năng suất cao và lợi nhuận khá nếu biết dùng giống tốt và

trồng đúng quy trình canh tác sắn bền vững [3]

Trang 12

Bên cạnh đó, sắn cũng có một số nhược điểm như trồng sắn làm kiệt đất, củ sắn nghèo đạm và vitamin, có độc tố HCN trong sắn củ tươi, chế biến sắn gây ô nhiễm môi trường [3]

2.1.3 Đặc điểm một số giống sắn nghiên cứu

Giống KM98 – 7

Giống KM98 – 7 được cung cấp bởi trung tâm Nghiên cứu và Phát triển Cây Có

Củ - Viện Cây lương thực và Cây thực phẩm, Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam

Giống này là con lai chọn lọc của tổ hợp lai SM 1717 có mẹ là CM321-188, (polycross) có nguồn gốc từ CIAT/Colombia Giống đã được Bộ Nông nghiệp và phát triển nông thôn cho phép đặc cách công nhận giống ngày 02 tháng 10 năm

Giống TMS 60444

TMS 60444 là giống sắn mô hình được nhập từ CIAT Các nghiên cứu trên thế giới đã cho thấy đây là giống sắn có khả năng tạo mô sẹo phôi hóa chất lượng nhất và đã được chuyển gen thành công Vì vậy, chúng tôi sử dụng giống sắn này làm giống mô hình để đánh giá chất lượng mô sẹo của các giống Việt Nam được nghiên cứu

TMS 60444 được thừa nhận vào ngày 01-06-1988 Chiều cao đạt được của giống khi thu hoạch khoảng 215 cm Lá trung tâm có dạng hình ngọn giáo Cuống

lá màu xanh xen kẽ với một ít màu đỏ.Lá trưởng thành có màu xanh đậm và xẻ thành 5 thùy lá Rễ củ có màu trắng

2.1.4 Thành phần dinh dưỡng và giá trị sử dụng

Sắn là cây lương thực quan trọng trong cơ cấu nông nghiệp sau lúa, ngô và

đậu tương [3] Một số thành phần dinh dưỡng trong củ sắn:

- Hydrat cacbon: chiếm 88-91% trọng lượng khô của củ sắn, trong đó:

+ Tinh bột: 84-87%

+ Đường tổng số: 4% (Saccaarose 71%, glucose 13%, fructose 9%, mantose 5%)

- Ngoài ra sắn còn chứa một số chất khác với hàm lượng thấp: protein, chất béo, một số chất khoáng (P, K, Mg, ) và một số Vitamin (B1, B2, )

Trang 13

Sắn là cây trồng có nhiều công dụng trong chế biến công nghiệp, thức ăn gia súc

và lương thực thực phẩm như bột ngọt, rượu cồn, mì ăn liền, gluco, xiro, bánh kẹo, mạch nha, kỹ nghệ chất dính (hồ vải, dán gỗ), bún, miến, mì ống, mì sợi, bột khoai, bánh tráng, hạt trân châu (tapioca), phụ gia thực phẩm, phụ gia dược phẩm [7] Hiện tại, sản phẩm sắn ngày càng thông dụng trong buôn bán, trao đổi thương mại quốc tế

2.1.4 Tình hình sản xuất và tiêu thụ

2.1.4.1 Trên thế giới

Hiện nay, sắn được trồng trên hơn 100 quốc gia trên toàn thế giới với các quy mô canh tác rất khác nhau Sản lượng sắn toàn thế giới trong nhiều năm trở lại

đây duy trì tương đối ổn định ở mức sản lượng trên 200 triệu tấn [18]

Bảng 2.1 Diản tích, năng suảt và sản lảảng sản cảa thả giải tả năm 2000-2011 Năm Diện tích (triệu ha) Năng suất (tấn/ha) Sản lượng (triệu tấn)

2.1.4.2 Việt Nam

Ở Việt Nam, sắn là cây lương thực quan trọng đứng hàng thứ ba sau lúa và

ngô Cây sắn hiện nay đã chuyển đổi vai trò từ cây lương thực, thực phẩm thành cây

Trang 14

công nghiệp hàng hóa có lợi thế cạnh tranh cao Sản xuất sắn là nguồn thu nhập quan trọng của các hộ nông dân nghèo do sắn dễ trồng, ít kén đất, ít vốn đầu tư, phù hợp sinh thái và điều kiện kinh tế nông hộ [4]

Bảng 2.2 Diản tích, sản lảảng và năng suảt trảng sản cảa Viảt Nam qua các năm

2000-2013

(nghìn ha)

Năng suất (tấn/ha)

Sản lượng (triệu tấn)

và hàng trăm cấ sấ chấ biấn thấ công (Tấng cấc thấng kê, 2013) [9]

Trang 15

Hình 2.1 Biảu đả sản lảảng trảng sản cảa Viảt Nam tả năm 2000 - 2013

Sấn là mất hàng xuất khấu hấn tấ USD mấi năm, năm 2013 xuất khấu sấn

và sấn phấm thu vấ 1,1 tấ USD vấi 3,1 triấu tấn Trong đó sấn xuất khấu 1,5 triấu tấn, trấ giá 385,5 triấu USD, giấm 32,9% vấ lấấng và giấm 31,2% vấ trấ giá so vấi năm 2012 Viất Nam xuất khấu sấn và sấn phấm chấ biấn tấ sấn sang 5 thấ trấấng chính trên thấ giấi, trong đó Trung Quấc vấn là thấ trấấng xuất khấu chính, vấi 2,6 triấu tấn Ngoài ra, Viất Nam còn xuất khấu sấn và sấn phấm sang thấ trấấng khác nhấ Hàn Quấc, Philippin, Đài Loan, Malaixia, Nhất Bấn vấi lấấng xuất đất lấn lấất 237,6 nghìn tấn, 62,8 nghìn tấn, 41,3 nghìn tấn, 28,8 nghìn tấn và 8,9 nghìn tấn (Tấng cấc thấng kê, 2013) [9] Có đấấc nhấng kất quấ này là do nhiấu yấu tấ, nhấng quan trấng hấn cấ là trong sấn xuất ngấấi trấng sấn đã chấn giấng mấi và áp dấng các biấn pháp kấ thuất Tuy nhiên, trong sấn xuất sấn hiấn nay cũng còn gấp

Trang 16

nhiấu khó khăn nhấ: diấn tích sấn bấ thu hấp do cấnh tranh bấi các cây trấng khác; năng suất sấn còn thấp hấn so vấi tiấm năng cấa cây sấn (45 – 50 tấn/ha) [4]

Như vậy, nếu như diện tích sắn của Việt Nam khó có khả năng gia tăng trong những năm tới do sự cạnh tranh của các loại cây khác cũng như do quy hoạch sử dụng đất thì chúng ta vẫn còn triển vọng tăng trưởng sản lượng nhờ gia tăng năng suất nếu được

đầu tư đúng hướng về công tác chọn tạo giống và kỹ thuật canh tác sắn bền vững

2.1.5 Nhu cầu sắn cho nhiên liệu sinh học

Tinh bột sắn góp phần giải quyết vấn đề an ninh lương thực toàn cầu, là nguồn nguyên liệu có giá trị cho các ngành công nghiệp: thực phẩm, hóa chất, dược phẩm, dệt may, sản xuất giấy và đặc biệt là nguồn nhiên liệu sinh học [12] Toàn cầu hóa nền kinh tế và tăng giá xăng dầu đã mở ra cơ hội mới cho tinh bột sắn, trở thành nguồn nguyên liệu thay thế cho nhiều ngành công nghiệp khác nhau

Tại Đông Nam Á, sắn được sử dụng làm ethanol làm nhiên liệu sinh học phục

vụ giao thông vận tải [29] Từ 1 tấn sắn với hàm lượng tinh bột 30% có thể sản xuất

ra khoảng 280 lít ethanol 96% [13] Trong nhiều trường hợp, khí hậu trở thành nhân

tố quyết định cho việc lựa chọn cây trồng tiềm năng cho sản xuất nhiên liệu sinh học [15] Điều này giải thích lý do tại sao Mỹ sử dụng nguồn tinh bột ngô Canada, Úc và New Zealand chủ yếu sử dụng tinh bột từ bột mì Châu Âu sử dụng tinh bột từ khoai tây và ngô Vùng có khí hậu nhiệt đới như Brazil và các nước Châu Á sử dụng nguồn tinh bột từ sắn và các cây trồng khác [23, 27, 37] Brazil là nước tiên phong về nhiên liệu sinh học với lịch sử sản xuất trong 40 năm qua và cho đến nay đã hoàn toàn tự cung cấp nhiên liệu trong nước Có 5 quốc gia đã phát triển nhiên liệu sinh học chương trình quy mô lớn là Hoa Kỳ, Brazil, Trung Quốc, Ấn Độ và Pháp (Bảng 2.3) Trên thế giới, 17 quốc gia đã phát triển nhiên liệu sinh học Sắn sử dụng làm nhiên liệu sinh học có lợi thế cao ở nhiều nước châu Á đặc biệt là ở Việt Nam

Bảng 2.3 Các quảc gia phát triản nhiên liảu sinh hảc vải quy mô lản

Trang 17

Ở Việt Nam, cây sắn đã và đang là cây trồng được ưu tiên nghiên cứu phát triển

trong tầm nhìn chiến lược đến năm 2020 của Bộ Nông nghiệp & Phát triển Nông thôn Nghiên cứu và phát triển cây sắn theo hướng sử dụng đất nghèo dinh dưỡng, đất khó khăn là hướng hỗ trợ chính cho việc thực hiện “Đề án phát triển nhiên liệu sinh học đến năm 2015, tầm nhìn đến năm 2025” đã được Thủ tướng Chính phủ phê duyệt tại quyết

định số 177/2007/ QĐ-TT ngày 20 tháng 11 năm 2007 [8]

Theo đề án phát triển, đến năm 2015, Việt Nam cần 4,2 triệu tấn sắn lát để sản xuất ra 750 triệu lít ethanol Tám nhà máy nhiên liệu sinh học đã được cấp phép với nhu cầu tiêu thụ mỗi năm khoảng 1,2 triệu tấn sắn lát PetroVietnam đã triển khai công tác đầu tư xây dựng 3 nhà máy sản xuất cồn sinh học đặt tại 3 miền Bắc, Trung, Nam với công suất mỗi nhà máy là 100.000 m³ cồn/năm tương đương khoảng 230 nghìn tấn sắn lát khô/năm hoặc 575 nghìn tấn củ tươi/năm Ngoài ra, nhà máy ethanol Đại Tân, huyện Đại Lộc, Quảng Nam do Công ty Cổ phần Đồng Xanh đầu tư với công suất của nhà máy là 125.000 tấn ethanol/năm, nhà máy cần

300.000 tấn sắn khô mỗi năm [21] (Bảng 2.4)

Bảng 2.4 Tám nhà máy sản xuảt Ethanol và rảảu

tả sản cảa Viảt Nam năm 2010

Công suất (triệu lít /năm)

(Hoàng Kim Và Nguyễn Văn Bộ, 2011) [21]

Theo đánh giá của bộ Công thương, trong tương lai gần, thị trường tiêu thụ sắn lát sẽ có cạnh tranh khốc liệt và thiếu hụt nguồn nguyên liệu Tăng năng suất cây trồng dựa vào các thành tựu của công nghệ sinh học là một trong những ưu tiên hàng đầu hiện nay, bao gồm: lai tạo giống, nhân vô tính, gây đột biến và chuyển

Trang 18

gen Trong đó, ứng dụng chuyển gen là một chiến lược quan trọng trong việc tạo ra sản phẩm nông nghiệp chất lượng cao với ưu điểm là phương pháp đơn giản, nhanh chóng và hiệu quả, tìm ra dòng giống năng suất cao, khả năng chống bệnh [34]

2.2 Auxin và vai trò của auxin trong quá trình tạo mô sẹo

Auxin là một hợp chất tương đối đơn giản, có nhân indole, có công thức nguyên là: C10H9O2N, tên của nó là axit β-indol-acetic

Axit

β-Indolyaxetic(AIA) Axit 2,4

dicloro-phenoxiaxetic(2,4D)

Axit naphtylaxetic(αANA)

α-Auxin là một loại hormon kích thích sinh trưởng, có tác dụng sinh lý đến quá trình sinh trưởng của tế bào, hoạt động của tầng phát sinh, sự hình thành rễ, hiện tượng ưu thế ngọn, tính hướng của thực vật, sự sinh trưởng của quả và tạo quả không hạt

Auxin được tổng hợp sử dụng trong nuôi cấy mô nhưng nó dễ bị biến tính trong môi trường nuôi cấy và nhanh chóng thoái biến ở trong mô Tuy nhiên những

đặc tính này có thể trở nên hữu dụng bởi vì trong cây, (cùng với cytokinin) sau khi

cảm ứng hình thành mô sẹo sẽ kích thích sự tạo chồi hoặc phôi khi hàm lượng của

nó trong mô giảm dần Chính vì vậy auxin dùng trong nuôi cấy mô là dạng auxin tổng hợp, không phải auxin tự nhiên, nên độ bền cao hơn Auxin thường được sử dung phối hợp với các chất điều hoà sinh trưởng khác để kích thích sự phát sinh hình thái trực tiếp (sự tạo rễ của cành giâm in vitro) và trong nuôi cấy đỉnh sinh trưởng và chồi Tuy nhiên, tuỳ theo mục đích thí nghiệm mà người ta có thể sử dụng các hợp chất giống auxin khác được tổng hợp và nó có những hoạt động hơi khác với auxin như: NAA, 2,4D, picloram…

2.2.1 NAA (Naphtylaxetic axit)

Công thức hóa học: C12H9O2Na; phân tử khối: 186,21 g/mol

Trang 19

NAA là chất kích thích sinh trưởng được tổng hợp bằng con đường hóa học, thuộc nhóm chất auxin nên nó có đầy đủ các tính chất và tác dụng sinh lý của nhóm chất này Đặc biệt là khả năng cảm ứng, tạo mô sẹo

2.2.2 2,4-D (axit 2,4,5-dichlorophenoxyacetic)

Công thức hóa học: C8H6Cl 12O3; phân tử khối: 221,04 g/mol

2,4-D là một chất kích thích sinh trưởng ở thực vật, thường được sử dụng phối hợp với cytokinin để cảm ứng tạo mô sẹo và huyền phù tế bào và nó sẽ được thay thế bởi IBA hay NAA để kích thích sự phát sinh hình thái IBA và NAA là loại auxin thích hợp trong nuôi cấy chồi

2.2.3 Picloram ( axit 4 - amino-3, 5,6 - trichloro-2 – Acid)

Công thức hóa học: C6H3Cl 3N 2O2; phân tử khối: 241,46 g/mol

Picloram thường được sử dụng để cảm ứng và duy trì mô sẹo hoặc huyền phù tế bào của các loại cây lá rộng hoặc để cảm ứng sự tạo mô sẹo có khả năng sinh phôi Picloram có hiệu quả đối với biên độ các kiểu di truyền rộng hơn Chỉ trong một số rất ít trường hợp cá biệt, loại auxin này được dùng trong nuôi cấy đỉnh sinh trưởng và nuôi cấy đoạn thân và được dùng với nồng độ rất thấp (0,012 ÷ 0,4 µM) khi phối hợp với một cytokinin

2.3 Tình hình nghiên cứu chuyển gen sắn

2.3.1 Trên thế giới

Bản chất của cây trồng chuyển gen là sự biến đổi vật chất di truyền, tiếp nhận thêm những gen mới, kết quả là xuất hiện những tính trạng mới dưới sự tác

động của môi trường Thông qua phương pháp chuyển gen cho phép nhà chọn

giống tích hợp được các gen có lợi vào một loài, một sản phẩm cây trồng nhất định,

đây là phương thức tạo ra các tính trạng ưu việt mới cho cây trồng trên cơ sở kết

hợp với phương pháp chọn tạo truyền thống [34]

Chuyển gen sắn đã và đang được nghiên cứu rộng rãi trên toàn thế giới Việc

đưa các gen quan tâm vào cây sắn đã và đang tạo ra những cây sắn mang đặc điểm

nông học quan tâm như khả năng kháng bệnh virut, kháng côn trùng, cải thiện thành phần dinh dưỡng, biến đổi và tăng chuyển hóa tổng hợp tinh bột, giảm hàm lượng cyanogenic trong củ sắn [30]

Trên thế giới các công trình nghiên cứu về chuyển gen sắn được tiến hành từ những năm cuối thế kỉ 20 [28] Năm 1996, những quy trình chuyển gen sắn đầu tiên

đã được báo cáo độc lập cùng một lúc bởi hai nhóm nghiên cứu khác nhau Li và

cộng sự đã chuyển gen vào lá mầm sắn sau đó tạo chồi, từ chồi đã được chuyển gen

Trang 20

tái sinh thành cây hoàn chỉnh [22] Trong quy trình chuyển gen của Schöpke, chuyển gen dựa trên việc thực hiện một quy trình để tạo ra các cụm tế bào được gọi

là mô sẹo phôi hóa, gen mục tiêu sẽ được chuyển vào mô sẹo phôi hóa, sau đó tái sinh chúng thành cây hoàn chỉnh từ phôi trưởng thành [31] Đây là một mốc quan trọng đánh dấu trong quá trình chọn tạo giống sắn bằng phương pháp phân tử Sau nhiều năm phát triển, công nghệ chuyển gen đã từng bước trưởng thành và tiến bộ

đáng kể , đã xác nhận được gen chức năng và giống chuyển gen

Trong chuyển gen, chuyển gen sắn thường chuyển gen trung gian nhờ vi

khuẩn agrobacterium hoặc dùng súng bắn gen Các mẫu thường sử dụng để chuyển

gen là lá mầm soma hoặc mô sẹo phôi hóa [24]

Trang 21

2.3.1.1 Chuyển gen gián tiếp thông qua vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens

Agrobacterium tumefaciens được sử dụng như một vector tự nhiên để mang

các gen ngoại lai vào mô tế bào thực vật [6] Khi xâm nhiễm vào tế bào, chúng gắn

đoạn T-DNA vào bộ máy di truyền của tế bào thực vật, dẫn đến sự rối loạn các chất

sinh trưởng nội sinh, tạo ra khối u (trường hợp A tumefaciens) Khả năng chuyển

gen này đã được khai thác để chuyển gen ngoại lai vào bộ máy di truyền của tế bào thực vật theo ý muốn [5, 26]

Với mục đích chung là làm tăng năng xuất và sản lượng sắn, rất nhiều các

công trình nghiên cứu chuyển gen sắn nhờ vi khuẩn A tumefaciens được công bố

thành công trong những năm gần đây như kháng virus [36], cải thiện hàm lượng tinh bột [35], giảm lượng cyanogen [33], kháng thuốc trừ cỏ [30], Cải thiện dựa trên những đặc điểm này sẽ là xu hướng chính trong chọn lọc giống sắn nhờ kỹ thuật sinh học phân tử trong tương lai [24] Năm 2004, một công trình nghiên cứu chuyển gen kháng virus khảm sắn (geminiviruses) đã được công bố Chellappan đã tiến hành tách chiết gen AC1 từ chính tác nhân gây bệnh là virus khảm sắn châu Phi Sau đó ông tiến hành chuyển gen này vào giống TMS60444 Giống sắn này sau khi được chuyển gen AC1 đã có khả năng kháng được geminiviruses[14] Sắn là cây trồng có hàm lượng cyanogen rất cao, thường thì chỉ có thể làm giảm hàm lượng sau khi chế biến, hiện nay cũng có thể giảm bằng cách ức chế tổng hợp cyanogen Năm 2007, Mayague đã công bố chuyển gen thành công giúp giảm hàm lượng độc tố cyanogen trong sắn bằng cách tăng thúc đẩy cyanogen bay hơi nhanh chóng [37] Bệnh khảm virus trên cây sắn rất phổ biến ở châu Phi gây ảnh hưởng không nhỏ tới năng xuất, chất lượng sắn Với mong muốn khắc phục tình trạng này, công trình nghiên cứu chuyển gen kháng với virus (geminiviruse) gây bệnh khảm trên sắn đã được tiến hành Vanderschuren đã chuyển gen có chứa cấu trúc kẹp tóc của RNAs Cấu trúc đã tạo một mối liên quan giữa sự biểu hiện của RNA nhỏ và khả năng miễn dịch với bệnh khảm virus Phương pháp này mở ra hướng phân lập virus với cấu trúc kẹp tóc bổ sung [36]

Trung tâm Nông nghiệp nhiệt đới quốc tế (CIAT) cũng đã tập trung nghiên

cứu chuyển gene vào sắn thông qua Agrobacterium tumefaciens Họ đã thực hiện

chuyển gen đã đạt được nhiều thành tựu đáng kể như chuyển gen kháng côn trùng

Erinnyis ello trú ngụ trong cây sắn, và tạo ra các giống kháng được thuốc trừ cỏ như

Basta, gần đây họ đã nghiên cứu phát triển các giống sắn với thành phần tinh bột khác nhau [30] Năm 2006 các nhà khoa học Mỹ đã thành công trong việc chuyển

Trang 22

gen glgC làm tăng khả năng tổng hợp tinh bột trong sắn [35] glgC là gen mã hóa

cho enzym ADP-glucose pyrophosphorylase (AGPase) giúp tăng cường hoạt động tổng hợp tinh bột ở sắn Cây chuyển gen thể hiện gen glgC có AGPase hoạt động cao hơn 70% so với cây đối chứng khi khảo nghiệm trong điều kiện tối ưu cho các giống sắn khi không có vi khuẩn AGPase hoạt động [35]

Hiện nay, nhiều kỹ thuật chuyển gen khác nhau vào tế bào nhưng chuyển gen

thông qua vi khuẩn A tumefaciens có nhiều ưu điểm như hiệu quả chuyển gen cao,

yêu cầu trang thiết bị đơn giản, số lượng bản sao thấp và ổn định ở thế hệ con cháu Do

đó, đây là phương pháp sử dụng rộng rãi nhất cho kỹ thuật di truyền sắn [24]

2.3.1.2 Chuyển gen thông qua nguồn nguyên liệu mô sẹo phôi hóa

Chuyển gen vào phôi soma gặp nhiều trở ngại và khó khăn đặc biệt là tần số cây con tái sinh thấp [11], tỉ lệ tạo thể khảm cao [31] Chuyển gen thông qua mô sẹo phôi hóa sẽ khắc phục được tình trạng này, hạn chế được thời gian công sức mà hiệu quả chuyển gen lại cao hơn [39]

Năm 1998, Gonzalez và cộng sự đã thành công trong việc chuyển gen vào

mô sẹo phôi hóa giống TMS 60444 [20], đánh dấu một bước tiến mới cho việc áp dụng các kỹ thuật công nghệ sinh học trên đối tượng cây sắn Sau gần 5 năm phát triển kể từ khi phương pháp chuyển gen từ mô sẹo phôi hóa vào giống TMS60444

được giới thiệu, phương pháp chuyển gen qua Agrobacterium từ mô sẹo phôi hóa đã

được tiến hành thành công ở một số phòng thí nghiệm [24]

Phương pháp chuyển gen sắn từ mô sẹo phôi hóa ngày càng phổ biến, từ năm

2005 đã được sử dụng thường xuyên trong phòng thí nghiệm tạo sắn chuyển gen kháng virus khảm [11, 38] Năm 2009, quy trình chuyển gen vào cây sắn từ mô sẹo phôi hóa và tái sinh thành cây hoàn chỉnh của Bull và cộng sự đã cho thấy cụ thể các giai đoạn khác nhau trong quy trình, họ cũng đưa ra một số cải tiến góp phần hoàn thiện quy trình chuyển gen hiện nay [29]

Chuyển gen vào sắn nhờ vi khuẩn A tumefaciens từ mô sẹo phôi hóa, việc

chuyển gen trở lên dễ dàng do mô sẹo phôi hóa có thể tăng sinh tạo ra số lượng lớn trong thời gian ngắn Đặc biệt chuyển gen từ những tế bào đang phân chia nên khi biến nạp vi khuẩn sẽ dễ dàng xâm nhập vào tế bào thực vật nên hiệu quả chuyển gen sẽ cao hơn và khả năng tái sinh tạo cây hoàn chỉnh cũng cao hơn mô sẹo thông thường Vì vậy mà ngày nay phương pháp này được sử dụng rất phổ biến và thành công [39]

Trang 23

Cùng với sự phát triển của công nghệ sinh học, việc sử dụng các gen chức năng và kỹ thuật di truyền để giải quyết các vấn đề liên quan đến chọn tạo các giống sắn đóng một vai trò quan trọng trong việc thúc đẩy trồng sắn và ứng dụng trên toàn thế giới Cho đến nay, cải thiện đặc điểm nông học của sắn đạt được bằng công nghệ biến đổi gen như kháng virus, cải thiện chất lượng dinh dưỡng, giảm lượng cyanogen, cải thiện sinh khối, tăng hàm lượng protein Cải thiện dựa trên những

đặc điểm này sẽ là xu hướng chính trong chọn lọc giống sắn nhờ kỹ thuật sinh học

phân tử trong tương lai [24]

2.3.2 Tại Việt Nam

Ở Việt Nam, tình hình chuyển gen trên cây sắn mới ở giai đoạn bước đầu

Năm 2008, bước đầu biến nạp thành công gen Bar – gen kháng thuốc diệt cỏ

Phosphinonothricin (PPT) vào chồi non cây sắn bằng phương pháp bắn gen [1] Tỉ

lệ chồi non chuyển gen thu nhận được là 20% Chồi non sau khi được kiểm tra bằng

phương pháp PCR với mồi đặc hiệu cho thấy sự xuất hiện của gen bar trong các

mẫu DNA của bộ gen sắn [1] Tuy nhiên cần phải thực hiện thêm nhiều nghiên cứu khác như trồng thử nghiệm, lai phân tích tính trạng, quan sát…để cho ra một dòng sắn mới, hoàn chỉnh.Các trung tâm nghiên cứu lớn ở Việt Nam như: Viện Công nghệ sinh học, viện Sinh học Nhiệt đới, Viện Di truyền Nông nghiệp… đã có những nghiên cứu ban đầu về nuôi cấy mô và chuyển gen trên cây sắn

Trang 24

Phần 3 ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

3.1 Đối tượng và vật liệu nghiên cứu

Đối tượng nghiên cứu: Giống sắn KM98 – 7 và giống TMS 60444

Hình 3.1 Cây sản trong ảng nghiảm

Vật liệu nghiên cứu: Chồi mọc ra từ mắt ngủ trên đoạn thân cây sắn

3.2 Môi trường nuôi cấy

Bảng 3.1 Các môi trảảng sả dảng trong quá trình nghiên cảu

STT Môi trường Hormone

Tạo mô sẹo

Trang 25

- Parafilm, cling film

- Đầu lọc xi-lanh vô trùng (0.22 µm)

- Đầu côn vô trùng 1 ml

- Panh, dao, kéo, thìa xúc

- Buồng nuôi cây kiểm soát điều kiện môi trường (28°C, 16 giờ sáng/8 giờ tối)

- Bốc cấy vô trùng với đèn cồn

- Các muối đa lượng và vi lượng, các vitamins, đường, agar, các chất điều hòa

sinh trưởng, các kháng sinh, …vv

3.4 Địa điểm và thời gian tiến hành nghiên cứu

Địa điểm nghiên cứu: Phòng thí nghiệm Trọng điểm Quốc gia Công nghệ tế bào

thực vật thuộc viện Di truyền Nông nghiệp Việt Nam

Thời gian tiến hành: 12/2013 đến 05/2014

3.5 Nội dung nghiên cứu

- Nội dung 1: Nghiên cứu sự ảnh hưởng của auxin (NAA, 2,4-D, picloram) tới khả năng tạo mô sẹo

- Nội dung 2: Nghiên cứu sự ảnh hưởng của auxin (NAA, 2,4-D, picloram) tới khả năng tạo mô sẹo phôi hóa

3.6 Phương pháp nghiên cứu

Cách thức tiến hành:

Tạo vật liệu khởi đầu

Từ hom sắn ngoài thực nghiệm, trồng trên nền đất sẽ mọc ra các chồi, khi chồi dài khoảng 20 cm thì ngắt lấy chồi và tiến hành vào mẫu sau 2 tuần cấy chuyển sang môi trường MS

Trang 26

Mẫu được nuôi cấy trên môi trường MS ở 280C, trong 2~4 tuần (đủ rễ, thân

Tạo mô sẹo và mô sẹo phôi hóa

Các mẫu được nuôi cấy trên môi trường CAM bắt đầu quá trình nghiên cứu

Tấo

mô sấo

14 ngày

14 ngày

Tấo

mô sấo phôi

Trang 27

Hình 3.3 Sả đả khảo sát ảnh hảảng cảa NAA tải khả năng tảo mô sảo phôi hóa

Thí nghiệm cũng làm tương tự như vậy với 2,4D (nồng độ 0; 6; 8; 9; 10 mg/l) và picloram (nồng độ 0; 8; 9; 10; 12 mg/l)

Tương ứng bổ sung một trong 3 chất trên vào các môi trường với mục đích cuối cùng là tạo được mô sẹo phôi hóa phục vụ chuyển gen

Điều kiện nuôi cấy: Các đĩa nuôi cấy in vitro được đặt trong phòng nuôi cấy

với các điều kiện như sau:

Sau khi 14 ngày nuôi cấy, sử dụng kính hiển vi để chọn các callus tốt, cấy chuyển trên môi trường DKW có bổ sung NAA theo các công thức trong bố trí thí nghiệm Nuôi cấy ở 280C, trong 14 ngày

hóa

Cấy chuyấn

Ngày đăng: 23/07/2015, 19:47

Nguồn tham khảo

Tài liệu tham khảo Loại Chi tiết
1. Bùi Lan Anh, Nguyễn Phan Cẩm Tú, Trần Nguyên Vũ, Bùi Văn Lệ (2008), Xây dựng quy trình biến nạp gen bar – gen kháng thuốc diệt cỏ vào cây khoai mì (manihot esculenta crantz) bằng phương pháp bắn gen, Science & Technology Development Sách, tạp chí
Tiêu đề: Xây dựng quy trình biến nạp gen bar – gen kháng thuốc diệt cỏ vào cây khoai mì (manihot esculenta "crantz") bằng phương pháp bắn gen
Tác giả: Bùi Lan Anh, Nguyễn Phan Cẩm Tú, Trần Nguyên Vũ, Bùi Văn Lệ
Năm: 2008
2. Phạm Văn Biên, Hoàng Kim (1995), Cây sắn, Nhà xuất bản Nông nghiệp, thành phố Hồ Chí Minh Phạm Sỹ Tiệp (1999), Nghiên cứu giá trị dinh dưỡng của một số giống sắn ở Trung du và miền núi phía Bắc, ảnh hưởng của phương pháp chế biến đến thành phần hóa học của củ, lá và khả năng sử dụng bột sắn để vỗ béo lợn F 1 (ĐB x MC), Luận án Tiến sĩ Nông nghiệp, Viện Chăn nuôi Sách, tạp chí
Tiêu đề: ), Cây sắn", Nhà xuất bản Nông nghiệp, thành phố Hồ Chí Minh Phạm Sỹ Tiệp (1999), "Nghiên cứu giá trị dinh dưỡng của một số giống sắn ở Trung du và miền núi phía Bắc, ảnh hưởng của phương pháp chế biến đến thành phần hóa học của củ, lá và khả năng sử dụng bột sắn để vỗ béo lợn F"1" (ĐB x MC)
Tác giả: Phạm Văn Biên, Hoàng Kim (1995), Cây sắn, Nhà xuất bản Nông nghiệp, thành phố Hồ Chí Minh Phạm Sỹ Tiệp
Nhà XB: Nhà xuất bản Nông nghiệp
Năm: 1999
3. Đường Hồng Dật (2004), Cây sắn từ cây lương thực chuyển thành cây công nghiệp, Nhà xuất bản Lao động - Xã hội, Hà Nội Sách, tạp chí
Tiêu đề: Cây sắn từ cây lương thực chuyển thành cây công nghiệp
Tác giả: Đường Hồng Dật
Nhà XB: Nhà xuất bản Lao động - Xã hội
Năm: 2004
4. Hoàng Kim (2013), Báo cáo Tổng kết Dự án: “Xây dựng mô hình sản xuất sắn theo hướng bền vững tại tỉnh Đắc Lăk”, Sở Nông nghiệp &PTNT Đăk Lak, 68 trang Sách, tạp chí
Tiêu đề: Xây dựng mô hình sản xuất sắn theo hướng bền vững tại tỉnh Đắc Lăk
Tác giả: Hoàng Kim
Năm: 2013
5. Nguyễn Hoàng Lộc (2007), Giáo trình Nhập môn Công nghệ sinh học, Nhà xuất bản Đại học Huế Sách, tạp chí
Tiêu đề: Giáo trình Nhập môn Công nghệ sinh học
Tác giả: Nguyễn Hoàng Lộc
Nhà XB: Nhà xuất bản Đại học Huế
Năm: 2007
6. Trần Thị Lệ, Nguyễn Hoàng Lộc, Trần Quốc Dũng (2007), Giáo trình Công nghệ gen trong nông nghiệp, Nhà xuất bản Nông nghiệp, Hà Nội Sách, tạp chí
Tiêu đề: Giáo trình Công nghệ gen trong nông nghiệp
Tác giả: Trần Thị Lệ, Nguyễn Hoàng Lộc, Trần Quốc Dũng
Nhà XB: Nhà xuất bản Nông nghiệp
Năm: 2007
8. Phạm Thị Nhạn, Đinh Văn Cường, Nguyễn Hữu Hỷ (2013), “Một số kết quả nghiên cứu sắn giai đoạn 2007- 2012” Sách, tạp chí
Tiêu đề: Một số kết quả nghiên cứu sắn giai đoạn 2007- 2012
Tác giả: Phạm Thị Nhạn, Đinh Văn Cường, Nguyễn Hữu Hỷ
Năm: 2013
10. Abhary M1, Siritunga D, Stevens G, Taylor NJ, Fauquet CM. (2011), “Transgenic biofortification of the starchy staple cassava (Manihot esculenta) generates a novel sink for protein”, PLoS One, 6(1), 16256 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Transgenic biofortification of the starchy staple cassava (Manihot esculenta) generates a novel sink for protein”, "PLoS One
Tác giả: Abhary M1, Siritunga D, Stevens G, Taylor NJ, Fauquet CM
Năm: 2011
11. Baba, A.I. Abdulrazak I. Baba a, Fabio C.S. Nogueira b, Camila B. Pinheiro b, Juliana N. Brasil, Emmanuel S. Jereissati, Thiago L. Juca, Arlete A. Soares, Marise F. Santos, Gilberto B. Domont , Francisco A.P. Campos, (2008),“Proteome analysis of secondary somatic embryogenesis in cassava (Manihot esculenta)”, Plant Science, 175, 717–723 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Proteome analysis of secondary somatic embryogenesis in cassava (Manihot esculenta)”, "Plant Science
Tác giả: Baba, A.I. Abdulrazak I. Baba a, Fabio C.S. Nogueira b, Camila B. Pinheiro b, Juliana N. Brasil, Emmanuel S. Jereissati, Thiago L. Juca, Arlete A. Soares, Marise F. Santos, Gilberto B. Domont , Francisco A.P. Campos
Năm: 2008
12. Balagopalan, C., G., Padmaja, S. K., Nanda and S. N. Moorthy. (1998), “Cassava in Food, Feed and industry”, Science Public, New Delhi, 3-12 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Cassava in Food, Feed and industry”, "Science Public, New Delhi
Tác giả: Balagopalan, C., G., Padmaja, S. K., Nanda and S. N. Moorthy
Năm: 1998
13. Balat, M., Balat, H. (2009), “Recent trends in global production and utilization of bio-ethanol fuel”, Plant Cell Rep. , (86), 2273–2282 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Recent trends in global production and utilization of bio-ethanol fuel”," Plant Cell Rep
Tác giả: Balat, M., Balat, H
Năm: 2009
14. Chellappan P, Masona MV, Vanitharani R, Taylor NJ, Fauquet CM. (2004), "Broad spectrum resistance to ssDNA viruses associated with transgene- induced gene silencing in cassava", Plant Molecular Biology, 56(4), 601-611 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Broad spectrum resistance to ssDNA viruses associated with transgene-induced gene silencing in cassava
Tác giả: Chellappan P, Masona MV, Vanitharani R, Taylor NJ, Fauquet CM
Năm: 2004
18. FAO Statistical Yearbook (2013), "World food and agriculture", Food and Agriculture organization of the United nations Rome 2013 Sách, tạp chí
Tiêu đề: World food and agriculture
Tác giả: FAO Statistical Yearbook
Năm: 2013
19. Ghosh S. P., Ramanujam T., Jos J. S. N., and Nair R. G. (1988), “Tuber Crops”, Oxford & IBH Publishing Co., New Delhi, 3-146 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Tuber Crops”, "Oxford & IBH Publishing Co., New Delhi
Tác giả: Ghosh S. P., Ramanujam T., Jos J. S. N., and Nair R. G
Năm: 1988
20. Gonzalez AE, Schopke C, Taylor NJ, Beachy RN, Fauquet CM (1998), “Regeneration of transgenic cassava plants (Manihot esculenta Crantz) through Agrobacterium-mediated transformation of embryogenic suspension cultures, Plant Cell Rep. 17, 827–831 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Regeneration of transgenic cassava plants (Manihot esculenta Crantz) through Agrobacterium-mediated transformation of embryogenic suspension cultures, "Plant Cell Rep
Tác giả: Gonzalez AE, Schopke C, Taylor NJ, Beachy RN, Fauquet CM
Năm: 1998
21. Hoàng Kim và Nguyễn Văn Bộ (2011), Cassava for biofuel in Vietnam. Final meeting : linking the poor to global markets : Pro-poor development of biofuel supply chains in Ho Chi Minh city, 14-14 April 2011 Sách, tạp chí
Tiêu đề: 2011)
Tác giả: Hoàng Kim và Nguyễn Văn Bộ
Năm: 2011
22. Hong-Qing Li, christof sautter, Ingo Potrykus and Johanna Puonti-Kaerlas (1996), “Genetic transformation of cassava (Manihot esculenta Crantz”), Nature Biotechnology, 14, 736-740 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Genetic transformation of cassava ("Manihot esculenta" Crantz”), "Nature Biotechnology
Tác giả: Hong-Qing Li, christof sautter, Ingo Potrykus and Johanna Puonti-Kaerlas
Năm: 1996
24. Jia Liu, Qijie Zheng, Qiuxiang Ma, Kranthi Kumar Gadidasu and Peng Zhang (2011), “Cassava Genetic Transformation and its Application in Breeding”, Journal of Integrative Plant Biology, 53 (7), 552–569 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Cassava Genetic Transformation and its Application in Breeding”, "Journal of Integrative Plant Biology
Tác giả: Jia Liu, Qijie Zheng, Qiuxiang Ma, Kranthi Kumar Gadidasu and Peng Zhang
Năm: 2011
25. Jos. J. S. (1969), “Cytological aspects of cassava”, Cassava Production Technologies, Central Tuber Research Institute, Trivandrum, India, 10-14 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Cytological aspects of cassava”, "Cassava Production Technologies
Tác giả: Jos. J. S
Năm: 1969
26. Mary Dell Chilton, Randall K. saiki, Narendra Yadavt, Milton P. Gordon and Francis Quetieri (1980), “T-DNA from Agrobacterium Ti plasmid is in the nuclear DNA fraction of crown gall tumor cells”, Proc. Nati. Acad. Sci. USA, Vol. 77 (7), 4060-4064 Sách, tạp chí
Tiêu đề: T-DNA from "Agrobacterium" Ti plasmid is in the nuclear DNA fraction of crown gall tumor cells”, "Proc. Nati. Acad. Sci
Tác giả: Mary Dell Chilton, Randall K. saiki, Narendra Yadavt, Milton P. Gordon and Francis Quetieri
Năm: 1980

TỪ KHÓA LIÊN QUAN

TRÍCH ĐOẠN

TÀI LIỆU CÙNG NGƯỜI DÙNG

TÀI LIỆU LIÊN QUAN

w