Nghiên cứu một số đặc tính hoá sinh của dịch chiết từ loại đương quy (angelica sinensis (oliv) diels)

TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM HÀ NỘI 2 KHOA SINH – KTNN LÊ THỊ ĐƢƠNG NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC TÍNH HÓA SINH CỦA DỊCH CHIẾT TỪ LOÀI ĐƢƠNG QUY (Angelica sinensis (Oliv) Diels) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành : Hóa Sinh học Người hướng dẫn khoa học TS. TRẦN THỊ PHƢƠNG LIÊN HÀ NỘI 2014 LỜI CẢM ƠN Trước hết, tôi xin chân thành cảm ơn Trường đại học sư phạm Hà Nội II, Trung tâm chuyển giao công nghệ - Trường đại học sư phạm Hà Nội II đã giúp đỡ tôi để tôi có thể hoàn thành luận văn này. Tôi cũng xin giành lời cảm ơn chân thành và sâu sắc nhất tới TS. Trần Thị Phƣơng Liên, giảng viên khoa Sinh - KTNN Trường đại học sư phạm Hà Nội II đã tận tình hướng dẫn, truyền đạt kiến thức, những kinh nghiệm quý báu, các phương pháp nghiên cứu khoa học để tôi hoàn thành khóa luận này. Cuối cùng xin gửi lời tri ân đến những người thân trong gia đình, bạn bè đã quan tâm giúp đỡ tôi trong suốt quá trình học tập và rèn luyện để hoàn thành tốt khóa luận tốt nghiệp này. Mặc dù đã rất cố gắng nhưng do thời gian có hạn, khóa luận vẫn không tránh khỏi những thiếu xót. Tôi rất mong được sự đóng góp của quý thầy cô và các bạn để khóa luận của tôi được hoàn thiện hơn. Tôi xin thành cảm ơn! Hà Nội, tháng 05 năm 2014 Lê Thị Đƣơng LỜI CAM ĐOAN Để đảm bảo tính trung thực của khóa luận tôi xin cam đoan:  Khóa luận tốt nghiệp NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC TÍNH HÓA SINH CỦA DỊCH CHIẾT TỪ LOÀI ĐƢƠNG QUY (Angelica sinensis (Oliv) Diels) là công trình nghiên cứu của cá nhân tôi dưới sự hướng dẫn của TS. Trần Thị Phƣơng Liên.  Các số liệu và kết quả nghiên cứu trong khóa luận này là trung thực, nội dung khóa luận không trùng lặp với các đề tài khác. Hà Nội, tháng 05 năm 2014 Sinh viên Lê Thị Đương KÝ HIỆU CÁC CỤM TỪ VIẾT TẮT PĐ Phân đoạn YHCT Y học cổ truyền WHO World health organization (tổ chức y tế thế giới) ĐT Điều trị EtOH Cao cồn tổng số EtOAc Ethylacetat DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1. Bảng các phản ứng định tính đặc trưng. 14 Bảng 3.2. khối lượng mẫu thu được khi chiết qua các phân đoạn và hiệu suất 19 Bảng 3.3. kết quả định tính một số hợp chất tự nhiên trong các PĐ từ dịch chiết cây Đương quy 20 Bảng 3.4. Kết quả đường chuẩn gallic. 23 Bảng 3.5. Kết quả hàm lượng polyphenol tổng số các PĐ dịch chiết 24 DANH MỤC HÌNH Hình 2.1. Cây Đương quy (Angelica sinensis (Oliv) Diels) 12 Hình 3.1. Mô hình chiết rút các phân đoạn hợp chất tự nhiên từ cây Đương quy (Angelica sinensis(Oliv) Diels) 18 Hình 3.2 Sắc ký đồ các phân đoạn 22 Hình 3.3 Đồ thị chuẩn acid gallic……………………………………………… 23 MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 CHƢƠNG I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3 1.1. Hợp chất thứ sinh 3 1.1.1. Các hợp chất phenolic 3 1.1.2. Alkaloid thực vật 4 1.1.3. Tanin thực vật. 5 1.1.4. Steroid 6 1.1.5. Glycosid trợ tim 7 1.1.6. Coumarin 8 1.1.7. Terpenoid 8 1.1.8. Saponin 9 1.2. Tìm hiểu về cây Đương quy( Angelica sinensis (Oliv) Diel) 9 1.2.1. Đặc điểm thực vật học 9 1.2.2. Phân bố, sinh thái 10 1.2.3. Thành phần hóa học 11 1.2.4. Tác dụng của cây Đương quy ( Angelica sinensis (Oliv) Diel 11 CHƢƠNG II: ĐỐI TƢỢNG - PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 12 2. 1. Đối tượng nghiên cứu 12 2.2. Phương pháp nghiên cứu 12 2.2.1. Phương pháp hóa lý: 12 2.2.2. Phương pháp hóa sinh: 15 CHƢƠNG III: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 17 3.1. Quy trình tách các phân đoạn dịch chiết từ cây Đương quy (Angelica sinensis (Oliv) Diels) 17 3.2. Định tính một số nhóm hợp chất tự nhiên 19 3.3. Phân tích thành phần các hợp chất tự nhiên trong các phân đoạn dịch chiết cây Đương quy bằng sắc ký lớp mỏng 21 3.4. Định lượng polyphenol tổng số theo phương pháp Folin – Ciocalteau 3.4.1. Kết quả xây dựng đường chuẩn acid gallic. 3.4.2. Kết quả xác định hàm lượng polyphenol tổng số. 24 KẾT LUẬN 25 KIẾN NGHỊ 26 TÀI LIỆU THAM KHẢO 27 Khóa luận tốt nghiệp đại học Trường Đại học sư phạm Hà Nội 2 Lê Thị Đương 1 K36B – Sinh MỞ ĐẦU 1. Lý do chọn đề tài: Sự phát triển của xã hội theo từng ngày và từng giờ, đi kèm với nó là cuộc sống của con người ngày càng được nâng cao, y học cũng phát triển không ngừng để đáp ứng nhu cầu của con người. Sự phát triển của y học hiện đại cho ta thấy được hàng ngàn loại bệnh, mà những bệnh này không hề đơn giản và khó có phương pháp hay loại thuốc chữa trị hiệu quả như AIDS, ung thư, tim mạch, béo phì,…, hoặc chưa có thuốc điều trị đặc hiệu hay có lý do khác nữa là giá thành khá cao nếu như không muốn nói là đắt. Cũng vì những lý do này, WHO khuyến cáo nghiên cứu phát triển các loại thuốc có nguồn gốc thảo dược, với ưu điểm là nguồn dược liệu có sẵn, dễ sử dụng, giá thành rẻ, ít tác dụng phụ, dễ được cộng đồng công nhận, đặc biệt là ở các nước kém phát triển và đang phát triển. Thực tế có nhiều loại thảo dược có nguồn gốc thiên nhiên, quen thuộc với người dân có khả năng chữa nhiều loại bệnh như Mướp đắng, Thổ Phục Linh, Bạch truật,… không chỉ dừng lại ở những nghiên cứu sàng lọc tác dụng của các hoạt chất trên động vật dùng làm thí nghiệm, nhiều nghiên cứu đã đi vào tách chiết các hợp chất chữa nhiều bệnh. Đương quy tên khoa học Angelica sinensis (Oliv) Diels, Thuộc họ Hoa tán apraceae (Umbelliferaea). Rễ chứa tinh dầu 0,2%. Tinh dầu gồm có các thành phần chủ yếu sau: Ligustilide, n-butyliden phthalide, o-valerophenon carboxylic acid, n.butyl- phtalide, bergapten, sesquiterpen, dodecanol, tetradecanol, safrol, p-cymen, carvacrol, cadinen, vitamin B12 0,25-0,40%, acid folinic, boitin, coumarin. Đương quy là loài cây của Trung Quốc phát triển ở vùng cao 2000- 3000m, nơi khí hậu ẩm mát. Việt Nam nhập trồng vào đầu những năm 60 hiện nay phát triển trồng ở Sapa (Lào Cai), Ngọc Lĩnh (Kontum), Buôn Mê Thuột (Đắc Lắc) và Đà Lạt (Lâm Đồng). Khóa luận tốt nghiệp đại học Trường Đại học sư phạm Hà Nội 2 Lê Thị Đương 2 K36B – Sinh Ở nước ta, cây Đương quy được sử dụng nhiều trong đông y làm thuốc chữa bệnh. Tuy nhiên, việc nghiên cứu đặc tính hóa sinh, y dược của các hoạt chất thiên nhiên từ cây này chưa được nghiên cứu một cách bài bản. Chính vì vậy chúng tôi tiến hành đề tài “Nghiên cứu một số đặc tính hóa sinh của dịch chiết từ loài Đương quy (Angelica sinensis (Oliv) Diels)” . 2. Mục tiêu: Nghiên cứu một số đặc tính hóa sinh của dịch chiết từ loài Đương quy (Angelica sinensis (Oliv) Diels). 3.Nội dung nghiên cứu: - Cung cấp một số thông tin về dịch chiết cây Đương quy (Angelica sinensis (Oliv) Diels) - Định tính, định lượng một số hợp chất có trong dịch chiết cây Đương quy (Angelica sinensis (Oliv) Diels). [...]... formic) Lê Thị Đương 16 K36B – Sinh Khóa luận tốt nghiệp đại học Trường Đại học sư phạm Hà Nội 2 CHƢƠNG III: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN KẾT QUẢ TÁCH CHIẾT VÀ MỘT SỐ ĐẶC TÍNH HÓA SINH CỦA PHÂN ĐOẠN DỊCH CHIẾT TỪ CÂY ĐƢƠNG QUY (Angelica sinensis (Oliv) Diels) 3.1 Quy trình tách các phân đoạn dịch chiết từ cây Đƣơng quy (Angelica sinensis (Oliv) Diels) Để khảo sát thành phần hóa học của cây Đương quy, chúng tôi... Đƣơng quy (Angelica sinensis (Oliv) Diels) 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu: 2.2.1 Phương pháp hóa lý: Sử dụng các hệ dung môi có độ phân cực khác nhau để tách một số phân đoạn dịch chiết từ các hoạt chất thiên nhiên từ cây Đương quy (Angelica Lê Thị Đương 12 K36B – Sinh Khóa luận tốt nghiệp đại học Trường Đại học sư phạm Hà Nội 2 sinensis (Oliv) Diels) Ngâm 3kg cây Đương quy (Angelica sinensis (Oliv) Diels). .. bằng n –hexan Bã sau khi chiết bằng n –hexan 58.5g Cao n –hexan Chiết bằng ethylacetate 40g Cao ethylacetate Bã sau khi chiết bằng ethylacetate Hình 3.1 Mô hình chiết rút các phân đoạn hợp chất tự nhiên từ cây Đƣơng quy (Angelica sinensis( Oliv) Diels) Ngâm 3kg cây Đương quy (Angelica sinensis( Oliv) Diels) đã sấy khô trong 10L ethanol 96% trong thời gian 7 ngày rồi đổ lượng dịch thu được ra bình và... polyphenol cao hơn cả Lê Thị Đương 25 K36B – Sinh Khóa luận tốt nghiệp đại học Trường Đại học sư phạm Hà Nội 2 KIẾN NGHỊ Tiếp tục nghiên cứu thành phần và xác định cấu trúc hóa học của một số chất trong phân đoạn dịch chiết từ cây Đương quy (Angelica sinensis( Oliv) Diels) để có ứng dụng cho thực tiễn trong phòng và điều trị các bệnh Lê Thị Đương 26 K36B – Sinh Khóa luận tốt nghiệp đại học Trường Đại... mà nó có thể chịu đựng được là -700C Có thể nói Đương quy là một loại thuốc quý có rất nhiều giá trị về y học nó là một vị thuốc không thể thiếu trong đông y Tuy nhiên ở Việt Nam hiện nay việc trồng cây Đương quy chưa đáp ứng được nhu cầu trong nước Qua việc nghiên cứu tìm hiểu về cây Đương quy chúng tôi hi vọng rằng một ngày không xa Đương quy sẽ là một cây trồng mang lại thu nhập lớn cho nông dân... ăn ngon cơm.[13], [14] Lê Thị Đương 11 K36B – Sinh Khóa luận tốt nghiệp đại học Trường Đại học sư phạm Hà Nội 2 CHƢƠNG II: ĐỐI TƢỢNG - PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2 1 Đối tƣợng nghiên cứu Mẫu thực vật: cây Đương quy (Angelica sinensis (Oliv) Diels) thu hái tại Lai Châu- Việt Nam Sau đó được ngâm trong etanol, ethyl acetate, nhexan, thu dịch cao phục vụ cho các bước nghiên cứu + Bộ phận sử dụng: Lá, thân,... nguồn gốc thiên nhiên như: hợp chất digitalis, và các tiền chất của một số loại vitamine nhất định Steroid rất đa dạng và phong phú, bao gồm các hình thức của một số loại vitamine D, digitalis, sterol (ví dụ : cholesterol) và các axit mật Các sterol là các dạng đặc biệt của các steroid, với một nhóm hydroxyl tại vị trí-3 và một khung lấy từ cholestane Hàng trăm steroid riêng biệt được tìm thấy ở thực... về cây Đƣơng quy (Angelica sinensis (Oliv) Diel) 1.2.1 Đặc điểm thực vật học Đương quy còn được gọi là Tần quy, Can quy tên khoa học Angelica sinensis (Oliv) Diels, thuộc chi Angelica - bạch chỉ, họ Hoa tán apraceae (Umbelliferaea) Rễ rất phát triển Thân hình trụ, có rãnh dọc màu tím Rễ dài 10 - 20 cm, gồm nhiều nhánh, thường phân biệt 3 phần: Phần đầu gọi là quy đầu, phần giữa gọi là quy thân, phần... xuất hiện màu vàng Phản ứng dương tính nếu xuất hiện màu lục, xanh, đen 2.2.2 Phương pháp hóa sinh: Tiến hành định tính định lượng, sắc ký lớp mỏng để nghiên cứu đặc tính hóa sinh của các phân đoạn dịch chiết 2.2.2.1 Định lượng polyphenol tổng số theo phương pháp Folin – Ciocalteau Nguyên tắc: dựa trên phản ứng của các hợp chất polyphenol (trong mẫu) với thuốc thử Folin-Ciocalteau cho sản phẩm màu xanh... Trong Đương quy có chứa tinh dầu chiếm 0.2%, có tỉ trọng là 0.955 ở t0 = 150C, có màu vàng sẫm Tỷ lệ axit tự do trong tinh dầu chiếm tới 40%.[5] Thành phần chủ yếu của tinh dầu Đương quy chủ yếu gồm có: • N butyliden phtalit C12H12O2 • N valerophenon O – cacboxyaxit C12H14O3 • N butylphtalit C12H14O2 • Bergapten C12H8O4, seoquyteepen, safrola và một số Vitamin B12 [9] 1.2.4 Tác dụng của cây Đương quy . Nghiên cứu một số đặc tính hóa sinh của dịch chiết từ loài Đương quy (Angelica sinensis (Oliv) Diels). 3.Nội dung nghiên cứu: - Cung cấp một số thông tin về dịch chiết cây Đương quy (Angelica. này chưa được nghiên cứu một cách bài bản. Chính vì vậy chúng tôi tiến hành đề tài Nghiên cứu một số đặc tính hóa sinh của dịch chiết từ loài Đương quy (Angelica sinensis (Oliv) Diels) . . thực của khóa luận tôi xin cam đoan:  Khóa luận tốt nghiệp NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC TÍNH HÓA SINH CỦA DỊCH CHIẾT TỪ LOÀI ĐƢƠNG QUY (Angelica sinensis (Oliv) Diels) là công trình nghiên cứu của