I. NGUYÊN TẮC 1. SALMONELLA SPP. Salmonella là vi khuẩn thuộc họ Enterobacteriaceae, có hình que, Gram âm, không sinh bào tử, sống hiếu khí tùy tiện nhưng phát triển tốt trong điều kiện hiếu khí. Hầu hết chúng có khả năng di động nhờ tiên mao và có khả năng tạo H2S (trừ S. Typhi). Chúng có khả năng lên men sinh acid từ glucose, mannitol, không lên men lactose, sucrose, không tạo Indol; có khả năng tạo enzyme lysine decarboxylase. Chúng có mặt trong nhiều loại thực phẩm, gây ngộ độc với mật độ thấp (khoảng 1 triệu tế bàog). Trong hầu hết các loại thực phẩm, chỉ số Salmonella luôn luôn bằng 0. 2. NGUYÊN TẮC Quá trình phân tích Samonella gồm 4 bước: tăng sinh, tăng sinh chọn lọc, phân lập, và khẳng định. Bước tăng sinh chọn lọc thường dùng các loại môi trường chuyên biệt tùy vào nguồn mẫu thu nhận. Bước khẳng định nhằm xác nhận các khuẩn lạc đặc trưng cho Samonella xuất hiện trên môi trường phân lập. Bước này dựa trên việc sử dụng các thử nghiệm sinh hóa và thử nghiệm huyết thanh đặc trưng cho Samonella. II. DỤNG CỤ, MÔI TRƯỜNG, HÓA CHẤT Dụng cụ phòng thí nghiệm Các loại môi trường: • Dung dịch BPW • Môi trường SCB • Môi trường XLD • Môi trường KIA • Môi trường SS Agar • Môi trường thạch Mac Conkey Nước muối sinh lý 0.9% Nước cất vô trùng Mẫu nguyên liệu .... III. TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM QUY TRÌNH:
Trang 1BÁO CÁO TH C HÀNH ỰC HÀNH VI SINH ĐẠI CƯƠNG
BÀI 20
SALMONELLA SPP.
I NGUYÊN T C ẮC
1 SALMONELLA SPP.
Salmonella là vi khu n thu c h ẩn thuộc họ ộc họ ọ Enterobacteriaceae, có hình que, Gram âm,
không sinh bào t , s ng hi u khí tùy ti n nh ng phát tri n t t trong đi u ki nử, sống hiếu khí tùy tiện nhưng phát triển tốt trong điều kiện ống hiếu khí tùy tiện nhưng phát triển tốt trong điều kiện ếu khí tùy tiện nhưng phát triển tốt trong điều kiện ện nhưng phát triển tốt trong điều kiện ưng phát triển tốt trong điều kiện ển tốt trong điều kiện ống hiếu khí tùy tiện nhưng phát triển tốt trong điều kiện ều kiện ện nhưng phát triển tốt trong điều kiện
hi u khí H u h t chúng có kh năng di đ ng nh tiên mao và có kh năng t oếu khí tùy tiện nhưng phát triển tốt trong điều kiện ếu khí tùy tiện nhưng phát triển tốt trong điều kiện ả năng di động nhờ tiên mao và có khả năng tạo ộc họ ờ tiên mao và có khả năng tạo ả năng di động nhờ tiên mao và có khả năng tạo ạo H2S (tr ừ S Typhi) Chúng có kh năng lên men sinh acid t glucose, mannitol,ả năng di động nhờ tiên mao và có khả năng tạo ừ không lên men lactose, sucrose, không t o Indol; có kh năng t o enzyme lysineạo ả năng di động nhờ tiên mao và có khả năng tạo ạo decarboxylase
Chúng có m t trong nhi u lo i th c ph m, gây ng đ c v i m t đ th pặt trong nhiều loại thực phẩm, gây ngộ độc với mật độ thấp ều kiện ạo ực phẩm, gây ngộ độc với mật độ thấp ẩn thuộc họ ộc họ ộc họ ới mật độ thấp ật độ thấp ộc họ ấp (kho ng 1 tri u t bào/g) Trong h u h t các lo i th c ph m, ch s Salmonellaả năng di động nhờ tiên mao và có khả năng tạo ện nhưng phát triển tốt trong điều kiện ếu khí tùy tiện nhưng phát triển tốt trong điều kiện ếu khí tùy tiện nhưng phát triển tốt trong điều kiện ạo ực phẩm, gây ngộ độc với mật độ thấp ẩn thuộc họ ỉ số Salmonella ống hiếu khí tùy tiện nhưng phát triển tốt trong điều kiện luôn luôn b ng 0.ằng 0
Quá trình phân tích Samonella g m 4 bồm 4 bước: tăng sinh, tăng sinh chọn lọc, phân ưng phát triển tốt trong điều kiệnới mật độ thấpc: tăng sinh, tăng sinh ch n l c, phânọ ọ
l p, và kh ng đ nh Bật độ thấp ịnh Bước tăng sinh chọn lọc thường dùng các loại môi trường ưng phát triển tốt trong điều kiệnới mật độ thấpc tăng sinh ch n l c thọ ọ ưng phát triển tốt trong điều kiệnờ tiên mao và có khả năng tạong dùng các lo i môi trạo ưng phát triển tốt trong điều kiệnờ tiên mao và có khả năng tạong chuyên bi t tùy vào ngu n m u thu nh n Bện nhưng phát triển tốt trong điều kiện ồm 4 bước: tăng sinh, tăng sinh chọn lọc, phân ẫu thu nhận Bước khẳng định nhằm xác nhận các ật độ thấp ưng phát triển tốt trong điều kiệnới mật độ thấpc kh ng đ nh nh m xác nh n cácịnh Bước tăng sinh chọn lọc thường dùng các loại môi trường ằng 0 ật độ thấp khu n l c đ c tr ng cho ẩn thuộc họ ạo ặt trong nhiều loại thực phẩm, gây ngộ độc với mật độ thấp ưng phát triển tốt trong điều kiện Samonella xu t hi n trên môi trấp ện nhưng phát triển tốt trong điều kiện ưng phát triển tốt trong điều kiệnờ tiên mao và có khả năng tạong phân l p Bật độ thấp ưng phát triển tốt trong điều kiệnới mật độ thấpc này d a trên vi c s d ng các th nghi m sinh hóa và th nghi m huy t thanhực phẩm, gây ngộ độc với mật độ thấp ện nhưng phát triển tốt trong điều kiện ử, sống hiếu khí tùy tiện nhưng phát triển tốt trong điều kiện ụng các thử nghiệm sinh hóa và thử nghiệm huyết thanh ử, sống hiếu khí tùy tiện nhưng phát triển tốt trong điều kiện ện nhưng phát triển tốt trong điều kiện ử, sống hiếu khí tùy tiện nhưng phát triển tốt trong điều kiện ện nhưng phát triển tốt trong điều kiện ếu khí tùy tiện nhưng phát triển tốt trong điều kiện
đ c tr ng cho ặt trong nhiều loại thực phẩm, gây ngộ độc với mật độ thấp ưng phát triển tốt trong điều kiện Samonella.
II D NG C , MÔI TR ỤNG CỤ, MÔI TRƯỜNG, HÓA CHẤT ỤNG CỤ, MÔI TRƯỜNG, HÓA CHẤT ƯỜNG, HÓA CHẤT NG, HÓA CH T ẤT
D ng c phòng thí nghi mụng các thử nghiệm sinh hóa và thử nghiệm huyết thanh ụng các thử nghiệm sinh hóa và thử nghiệm huyết thanh ện nhưng phát triển tốt trong điều kiện
Các lo i môi trạo ưng phát triển tốt trong điều kiệnờ tiên mao và có khả năng tạong:
Trang 2Nưng phát triển tốt trong điều kiệnới mật độ thấp ấpc c t vô trùng
M u nguyên li uẫu thu nhận Bước khẳng định nhằm xác nhận các ện nhưng phát triển tốt trong điều kiện
III TI N HÀNH THÍ NGHI M ẾN HÀNH THÍ NGHIỆM ỆM
SPW (saline peptone water)
24h, 37 o C
RV
XLD
Selenite
SS Agar
Khẳng định (chọn 5 khuẩn lạc điển hình)
thanh đa giá O, H
Trang 3Đ C K T QU TH NGHI M SINH HÓA XÁC Đ NH SALMONELLA ỌC KẾT QUẢ THỬ NGHIỆM SINH HÓA XÁC ĐỊNH SALMONELLA ẾT QUẢ THỬ NGHIỆM SINH HÓA XÁC ĐỊNH SALMONELLA Ả THỬ NGHIỆM SINH HÓA XÁC ĐỊNH SALMONELLA Ử NGHIỆM SINH HÓA XÁC ĐỊNH SALMONELLA ỆM SINH HÓA XÁC ĐỊNH SALMONELLA ỊNH SALMONELLA
M u có ẫu thu nhận Bước khẳng định nhằm xác nhận các Salmonella khi:
Làm đ c môi trụng các thử nghiệm sinh hóa và thử nghiệm huyết thanh ưng phát triển tốt trong điều kiệnờ tiên mao và có khả năng tạong tăng sinh
T o khu n l c đ c tr ng trên môi trạo ẩn thuộc họ ạo ặt trong nhiều loại thực phẩm, gây ngộ độc với mật độ thấp ưng phát triển tốt trong điều kiện ưng phát triển tốt trong điều kiệnờ tiên mao và có khả năng tạong phân l pật độ thấp
Tr c khu n Gram âmực phẩm, gây ngộ độc với mật độ thấp ẩn thuộc họ
Có tính di đ ngộc họ
Lactose (-), Saccharose (-)
Dextrose ho c Glucose (+)ặt trong nhiều loại thực phẩm, gây ngộ độc với mật độ thấp
Dihydrosunfua (+)
Urease (-)
Indol (-)
Manitol (+)
VP (-)
IV NH NG ĐI M C N L U Ý ỮNG ĐIỂM CẦN LƯU Ý ỂM CẦN LƯU Ý ẦN THANH TÙNG – MSSV: 10243221| Ư
Salmonella là nhóm vi sinh v t nguy h i, c n h t s c c n th n khi phân tích.ật độ thấp ạo ếu khí tùy tiện nhưng phát triển tốt trong điều kiện ức cẩn thận khi phân tích ẩn thuộc họ ật độ thấp Mang găng tay, kh u trang trong quá trình làm thí nghi m.ẩn thuộc họ ện nhưng phát triển tốt trong điều kiện
Các môi trưng phát triển tốt trong điều kiệnờ tiên mao và có khả năng tạong tăng sinh ch n l c, môi trọ ọ ưng phát triển tốt trong điều kiệnờ tiên mao và có khả năng tạong phân l p ật độ thấp Salmonella có các thành
ph n d bi n tính nhi t đ cao, do đó, không đ! ếu khí tùy tiện nhưng phát triển tốt trong điều kiện ở nhiệt độ cao, do đó, không được hấp tiệt trùng khi pha chế ện nhưng phát triển tốt trong điều kiện ộc họ ưng phát triển tốt trong điều kiệnợc hấp tiệt trùng khi pha chế.c h p ti t trùng khi pha ch ấp ện nhưng phát triển tốt trong điều kiện ếu khí tùy tiện nhưng phát triển tốt trong điều kiện
V BÁO CÁO TH C T P ỰC PHẨM ẬP
T i sao khi phân tích Salmonella trong th c ph m, ch c n phân tích đ nh ực phẩm, chỉ cần phân tích định ẩm, chỉ cần phân tích định ỉ cần phân tích định ần phân tích định ịnh tính
Ch tiêu Samonella là 1 trong nh ng ch tiêu r t quan tr ng trong ki m đ nh cácỉ số Salmonella ững chỉ tiêu rất quan trọng trong kiểm định các ỉ số Salmonella ấp ọ ển tốt trong điều kiện ịnh Bước tăng sinh chọn lọc thường dùng các loại môi trường
lo i h i s n nh cá, m c, tôm…theo nh ng tiêu chu n VN quy đ nh v s có m tạo ả năng di động nhờ tiên mao và có khả năng tạo ả năng di động nhờ tiên mao và có khả năng tạo ưng phát triển tốt trong điều kiện ực phẩm, gây ngộ độc với mật độ thấp ững chỉ tiêu rất quan trọng trong kiểm định các ẩn thuộc họ ịnh Bước tăng sinh chọn lọc thường dùng các loại môi trường ều kiện ực phẩm, gây ngộ độc với mật độ thấp ặt trong nhiều loại thực phẩm, gây ngộ độc với mật độ thấp
c a Samonella trong 25gam các lo i này là 0, nghĩa là không cho phép s có m t% ạo ực phẩm, gây ngộ độc với mật độ thấp ặt trong nhiều loại thực phẩm, gây ngộ độc với mật độ thấp
c a nó trong th c ph m này Nên chúng ta ch c n phát hi n s có m t c a% ực phẩm, gây ngộ độc với mật độ thấp ẩn thuộc họ ỉ số Salmonella ện nhưng phát triển tốt trong điều kiện ực phẩm, gây ngộ độc với mật độ thấp ặt trong nhiều loại thực phẩm, gây ngộ độc với mật độ thấp % Samonella không c n phân tích đ nh lịnh Bước tăng sinh chọn lọc thường dùng các loại môi trường ưng phát triển tốt trong điều kiệnợc hấp tiệt trùng khi pha chế.ng
Trang 4QUY TRÌNH: Mẫu
SPW (saline peptone water)
24h, 37 o C
RV
XLD
Selenite
SS Agar
Khẳng định (chọn 5 khuẩn lạc điển hình)
thanh đa giá O, H