Nghiên cứu những bất thường nhiễm sắc thể ở cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị tật

Tần số rối loạn nhiễm sắc thể ở những cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị tật bẩm sinh Một trong những nguyên nhân chính dẫn đến hiện tượng sảy thai là do bố mẹ mang rối

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI

TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN

-

TRƯƠNG THỊ THÙY LINH

NGHIÊN CỨU NHỮNG BẤT THƯỜNG NHIỄM SẮC THỂ

Ở CẶP VỢ CHỒNG SẢY THAI LIÊN TIẾP

VÀ SINH CON BỊ DỊ TẬT

LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC

HÀ NộI - 2014

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI

TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN

-

TRƯƠNG THỊ THÙY LINH

NGHIÊN CỨU NHỮNG BẤT THƯỜNG NHIỄM SẮC THỂ

Ở CẶP VỢ CHỒNG SẢY THAI LIÊN TIẾP

VÀ SINH CON BỊ DỊ TẬT

Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm

Mã số: 60420114

LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC

Người hướng dẫn khoa học: TS NGUYỄN VĂN RỰC

HÀ NộI - 2014

Người đã tạo điều kiện giúp đỡ tôi trong quá trình hoàn thành luận văn này

Tôi xin chân thành cảm ơn các thầy cô, các kỹ thuật viên tại Bộ môn Y sinh học – Di truyền, Đại học Y Hà Nội đã chỉ bảo, động viên, tạo điều kiện tốt và giúp

đỡ tôi hoàn thành bản luận văn này

Xin chân thành cảm ơn các thầy cô trong Bộ môn Sinh học tế bào, Đại học Khoa học tự nhiên, Đại học Quốc Gia Hà Nội đã dạy dỗ, tạo nền tảng kiến thức

cơ bản để tôi có thể tiếp cận kiến thức khoa học góp phần rất lớn vào việc học tập

và nghiên cứu

Cuối cùng, tôi xin cảm ơn gia đình và bạn bè những người đã luôn động viên, khuyến khích, ủng hộ tôi, là chỗ dựa tinh thần vững chắc cho tôi trong suốt quá trình học tập để và hoàn thành được bản luận văn này

Hà Nội, tháng 5 năm 2014

Học viên

Trương Thị Thuỳ Linh

MỤC LỤC

MỞ ĐẦU 1

CHƯƠNG 1 - TỔNG QUAN 3

1.1 Lược sử nghiên cứu về nhiễm sắc thể người 3

1.2 Tiêu chuẩn và quy định quốc tế về đặc điểm bộ nhiễm sắc thể người 4

1.2.1 Tiêu chuẩn để xếp loại nhiễm sắc thể trong lập karyotyp 4

1.2.2 Phân loại nhiễm sắc thể 5

1.3 Các rối loạn và cơ chế gây rối loạn nhiễm sắc thể người 6

1.3.1 Rối loạn số lượng nhiễm sắc thể 6

1.3.2 Rối loạn cấu trúc nhiễm sắc thể 7

1.3.3 Hậu quả của các đột biến nhiễm sắc thể lên chất liệu di truyền 11

1.4 Tình hình nghiên cứu bộ nhiễm sắc thể ở những cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị tật bẩm sinh trên thế giới 11

1.4.1 Tần số rối loạn nhiễm sắc thể ở những cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị tật bẩm sinh 11

1.4.2 Tần số rối loạn nhiễm sắc thể giữa người vợ và người chồng ở những cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị tật bẩm sinh 13

1.4.3 Sự phân bố các kiểu rối loạn nhiễm sắc thể ở những cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị tật bẩm sinh 14

1.4.4 Nguy cơ sinh sản của các cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị tật bẩm sinh mang rối loạn nhiễm sắc thể 23

1.5 Tình hình nghiên cứu bộ nhiễm sắc thể ở những cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị tật bẩm sinh ở Việt Nam 28

CHƯƠNG 2 - ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 31

2.1 Đối tượng nghiên cứu 31

2.1.1 Tiêu chuẩn chọn bệnh nhân 31

2.1.2 Tiêu chuẩn loại trừ 31

2.2 Phương pháp nghiên cứu 31

2.2.1 Lập hồ sơ bệnh án di truyền 31

2.2.2 Phương pháp phân tích nhiễm sắc thể và lập karyotyp 31

2.2.3 Xử lý số liệu 34

CHƯƠNG 3 – KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 35

3.1 Biểu hiện rối loạn nhiễm sắc thể ở các cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị tật bẩm sinh 35

3.2 Biểu hiện rối loạn nhiễm sắc thể giữa người vợ và người chồng có tiền sử sảy thai liên tiếp và sinh con dị tật bẩm sinh 37

3.3 Biểu hiện rối loạn nhiễm sắc thể ở các cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị tật bẩm sinh 39

3.3.1 Sự phân bố các kiểu rối loạn do chuyển đoạn tương hỗ ở các cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị tật bẩm sinh 43

3.3.2 Sự phân bố các kiểu chuyển đoạn hòa hợp tâm ở các cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị tật bẩm sinh 45

3.3.3 Biểu hiện rối loạn nhiễm sắc thể kiểu đảo đoạn 48

3.4 Nguy cơ sinh sản của các cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị tật bẩm sinh mang rối loạn nhiễm sắc thể 53

3.4.1 Nguy cơ sinh sản của các cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị tật bẩm sinh mang chuyển đoạn tương hỗ 53

3.4.2 Nguy cơ sinh sản ở các cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị tật bẩm sinh mang chuyển đoạn hoà hợp tâm 55

3.4.3 Nguy cơ sinh sản ở các cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị tật bẩm sinh mang đảo đoạn NST số 9 62

KẾT LUẬN 65

ĐỀ NGHỊ 66 TÀI LIỆU THAM KHẢO

PHỤ LỤC

DANH MỤC BẢNG

Bảng 1 Tỷ lệ rối loạn NST ở các cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị

tật bẩm sinh của một số tác giả 37

Bảng 2 Sự phân bố các kiểu rối loạn nhiễm sắc thể ở các cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị tật bẩm sinh 40

Bảng 3 Sự phân bố các rối loạn số lượng nhiễm sắc thể ở các cặp vợ chồng 41

Bảng 4 Sự phân bố các kiểu karyotyp của chuyển đoạn tương hỗ ở các cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị tật 44

Bảng 5 Sự phân bố các kiểu chuyển đoạn hòa hợp tâm 46

Bảng 6 Biểu hiện rối loạn nhiễm sắc thể kiểu đảo đoạn ở các cặp vợ chồng 48

Bảng 7 Các dạng rối loạn cấu trúc nhiễm sắc thể khác 50

Bảng 8 Nguy cơ sinh sản của các cặp vợ chồng mang chuyển đoạn tương hỗ 54

Bảng 9 Nguy cơ về sinh sản của các cặp vợ chồng mang chuyển đoạn hòa hợp tâm xảy ra giữa các nhiễm sắc thể khác cặp tương đồng 56

Bảng 10 Nguy cơ sinh sản của các cặp vợ chồng mang chuyển đoạn hòa hợp tâm giữa các nhiễm sắc thể cùng cặp tương đồng 57

Bảng 11 Nguy cơ sinh sản của các cặp vợ chồng mang đảo đoạn NST số 9 63

DANH MỤC HÌNH

Hình 1: Sơ đồ hình thành giao tử và hợp tử ở người mang chuyển đoạn tương hỗ

giữa NST số 3 và NST số 21 8 Hình 2: Sơ đồ hình thành giao tử và hợp tử của người mang chuyển đoạn hòa

hợp tâm giữa 2 NST khác cặp tương đồng 9 Hình 3: Sơ đồ hình thành giao tử và hợp tử của người mang chuyển đoạn hòa

hợp tâm giữa 2 NST cùng cặp tương đồng 10 Hình 4: Tỷ lệ rối loạn NST ở những cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp và sinh con

bị dị tật bẩm sinh 35 Hình 5: Tỷ lệ rối loạn NST giữa người vợ và người chồng ở những cặp vợ chồng

sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị tật bẩm sinh 38 Hình 6: Karyotyp của người chồng mang chuyển đoạn tương hỗ 46,XY,t(9;11)(q34;q13) 43 Hình 7: Karyotyp của người chồng mang chuyển đoạn hòa hợp tâm 45,XY,t(13q;14q) 47 Hình 8: Karyotyp của người chồng mang NST đảo đoạn 46,XY,inv(9)(p12;q12) 49 Hình 9: Karyotyp của người vợ mang NST rối loạn phức tạp

46,XX,t(1;16)(q22;p13),t(12;15)(q15;q23) 52 Hình 10: Karyotyp của người vợ mang chuyển đoạn hòa hợp tâm 45,XX,t(13q;13q) 58 Hình 11: Sơ đồ gia hệ cặp vợ chồng có người vợ mang chuyển đoạn hòa hợp tâm

45,XX,t(14q;21q) 61

MỞ ĐẦU

Hiện tượng các cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp, sinh con bị dị tật bẩm sinh là vấn đề ngày càng được quan tâm theo dõi và điều trị trên các cơ sở y tế ở Việt Nam nói riêng và trên thế giới nói chung Sảy thai liên tiếp, sinh con dị tật cũng như những vấn đề liên quan đến hiếm muộn, vô sinh đã và đang là nỗi đau, nỗi lo của mỗi gia đình và xã hội, gây ra nhiều tổn thất về mặt tinh thần và vật chất Tại Việt Nam, song song với sự phát triển kinh tế - xã hội, những vấn để về sức khỏe sinh sản đang ngày càng được quan tâm và cần có những nghiên cứu sâu rộng để đưa ra các biện pháp cải thiện, trong đó tư vấn di truyền đối với những cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp, sinh con dị tật hay hiếm muộn là một trong những biện pháp cần thiết Sảy thai liên tiếp và sinh con dị tật bẩm sinh có thể do nhiều nguyên nhân như nhiễm trùng, hoocmon, các bệnh mãn tính, bất thường tử cung, bất thường NST… đặc biệt với sảy thai sớm (dưới 3 tháng trong thời kì mang thai) thì phôi mang rối loạn NST đóng vai trò chủ yếu [10] Đối với các trường hợp sinh con bị dị tật bẩm sinh mang rối loạn NST nguyên nhân có thể do bố hoặc mẹ mang rối loạn NST tạo nên những hợp tử mang NST rối loạn Ở những cặp vợ chồng mang rối loạn NST cân bằng có nguy cơ mang thai bất thường rất cao có thể chết trong thời kì bào thai hoặc sinh ra những đứa trẻ bị dị tật hoặc chậm phát triển trí tuệ

Với sự phát triển của khoa học nói chung và di truyền y học nói riêng, những nguyên nhân dẫn đến hiện tượng sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị tật bẩm sinh ngày càng được đánh giá một cách sâu rộng hơn ở mức độ di truyền tế bào và di truyền phân tử với những rối loạn NST hay rối loạn về gen Ở mức độ di truyền tế bào, bộ NST được quan sát, đánh giá và phân tích về số lượng, cấu trúc bao gồm các chuyển đoạn, đứt đoạn, lặp đoạn và đảo đoạn

Xét nghiệm và phân tích NST ở những cặp vợ chồng có tiền sử sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị tật bẩm sinh nhằm tìm ra nguyên nhân đồng thời đưa ra tư vấn

di truyền để lựa chọn phương pháp công nghệ hỗ trợ sinh sản cần thiết hoặc lựa chọn có sinh con nữa hay không?

Hiện nay trên thế giới đã có nhiều công trình nghiên cứu NST và báo cáo về những cặp vợ chồng có tiền sử sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị tật bẩm sinh mang rối loạn NST Ở Việt Nam trong những năm gần đây đã có nhiều phòng xét nghiệm di truyền tế bào như Viện nhi Trung ương, Viện Sản Trung ương, phòng Di truyền tế bào bệnh viện Từ Dũ, bộ môn Y Sinh học – Di truyền trường Đại học Y Hà Nội làm xét nghiệm và phân tích NST ở những cặp vợ chồng có tiền sử sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị tật bẩm sinh góp phần trong chẩn đoán

và đưa ra những lời khuyên di truyền

Sử dụng phương pháp xét nghiệm và phân tích bộ NST, chúng tôi thực hiện đề

tài: “Nghiên cứu những bất thường NST ở cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị tật” với mục tiêu:

Phát hiện những bất thường của bộ nhiễm sắc thể ở những cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị tật bẩm sinh

Đưa ra những nguy cơ về sinh sản ở một số trường hợp rối loạn NST ở những cặp vợ chồng này

CHƯƠNG 1 - TỔNG QUAN

1.1 Lược sử nghiên cứu về nhiễm sắc thể người

Bộ NST người là đối tượng chính trong các nghiên cứu tế bào di truyền học loài người Các nhà khoa học đã bắt đầu nghiên cứu NST người từ cuối thế kỷ XIX

và được đánh dấu bằng công trình mở đầu của Walther Flemming (1882) [33] Ông

đã quan sát NST của người ở các kỳ phân bào trên tiêu bản tươi, cắt mảnh lấy từ tinh hoàn Trong thời gian đó, NST của người là vấn đề được các nhà di truyền học quan tâm, nghiên cứu và cũng là đề tài được đem ra tranh luận nhiều lần Tuy nhiên

ở thời kỳ ấy do những hạn chế về kỹ thuật làm tiêu bản, mẫu vật không đáp ứng và không phù hợp cho việc nghiên cứu chi tiết NST Ở người, số lượng NST nhiều, kích thước nhỏ và thường tập trung thành từng đám, với những kỹ thuật cắt mảnh,

cố định và nhuộm thông thường, các nhà di truyền tế bào chưa thể đếm chính xác nên đã cho rằng trong nhân của tế bào người có 48 NST, gồm 23 cặp NST thường

và 1 cặp NST giới tính (Winiwarter V, 1912; Painter, T.S, 1923) [102,73]

Những năm thuộc thập kỉ 50 của thế kỉ XX có những phát hiện quan trọng khai sinh ra chuyên ngành di truyền tế bào người, bằng việc xử lý tế bào bằng sốc nhược trương của Hsu T.C (1952), Ford C.E và Hamerton J.L (1956) tiền xử lý tế bào nuôi cấy bằng colchicine để tích lũy nhiều cụm kì giữa Công trình của Tjio và Levan (1956) kết hợp xử lý nhược trương và colchicine đã công bố nghiên cứu xác định lại bộ NST 2n của người là 46 NST chứ không phải là 48 NST và công trình này đã được Ford và Hamerton khẳng định [35]

Từ năm 1956 có nhiều phòng thí nghiệm tế bào di truyền được xây dựng để nghiên cứu NST Các công trình đầu tiên công bố các rối loạn NST liên quan với bệnh là công trình của Lejeune (1958-1959) về hội chứng Down do thừa một NST

21 dạng trisomi 21, hội chứng Turner do tế bào cơ thể chỉ có 45 NST dạng 45,X thiếu một NST giới tính X (Ford, 1959), hội chứng Klinefelter ở nam với 47 NST trong đó có ba NST giới tính XXY (Jacobs và Strong, 1959) [48]

Từ năm 1956 đến năm 1960 là thời kỳ còn khó khăn của nghiên cứu tế bào di truyền học người các nghiên cứu đều mới chỉ phân biệt được các rối loạn số lượng

và rối loạn cấu trúc lớn gây bất thường ở người do mới chỉ sử dụng phương pháp nhuộm bình thường bằng Giemsa, nhuộm đồng đều các NST

Năm 1960, Moorhead và cs công bố phương pháp làm tiêu bản NST từ lympho bào nuôi cấy ngắn hạn với việc dùng PHA (phytohemagglutinin) để kích thích phân bào[64]

Năm 1960, Nowell và Hungerford đã mô tả NST Philadelphia (mất đoạn nhánh dài của NST 22) trong bệnh bạch cầu thể tủy mãn tính (Chronic myeloid leukemia) [72]

Năm 1963, hội chứng mèo kêu, một hội chứng do bị mất đoạn nhánh ngắn của NST số 5 (5p-), lần đầu tiên được phát hiện bởi Lejeune và cs [101]

Từ năm 1968 đến năm 1970, sự ra đời của các kỹ thuật nhuộm băng cho phép các nhà di truyền học đánh giá chính xác tới từng chiếc NST trong bộ NST và phát hiện rối loạn cấu trúc NST Từ sau 1970 trở đi, lần lượt với các kỹ thuật nhuộm băng Q, băng G, băng R, băng C, băng T, N và nhuộm băng có độ phân giải cao NST, dùng BrdU (Bromodeoxyuridin) gắn vào ADN trên NST và nhuộm phân biệt chromatit chị em đã mở ra thời kỳ phát triển mạnh mẽ của tế bào di truyền học người ứng dụng các kỹ thuật băng để phát hiện các bất thường đặc trưng trên từng NST ứng với các bệnh, tật, các hội chứng trong lâm sàng

Từ năm 1980 đặc biệt là sau năm 1985 là thời kỳ phát triển mạnh mẽ, vượt bậc của di truyền tế bào và di truyền phân tử ứng dụng trong nghiên cứu bộ gen loài người Trong di truyền tế bào thì việc nghiên cứu NST chủ yếu vẫn áp dụng các phương pháp nhuộm băng NST

1.2 Tiêu chuẩn và quy định quốc tế về đặc điểm bộ nhiễm sắc thể người

1.2.1 Tiêu chuẩn để xếp loại nhiễm sắc thể trong lập karyotyp

Lúc đầu người ta chỉ căn cứ vào chiều dài của NST để đặt tên cho chúng từ 1 đến 23 theo thứ tự từ dài đến ngắn (công ước Denver 1960), nhưng ngay sau đó cũng năm 1960 Patau không đồng ý và đề xuất thêm tiêu chuẩn vị trí phần tâm, sau này được quốc tế chính thức chấp nhận

Chiều dài tương đối của NST: là tỷ lệ giữa chiều dài của một NST so với chiều dài trung bình của cả bộ NST, tức chiều dài tổng cộng tất cả các NST của bộ đơn bội có chứa NST X tính theo phần nghìn trong cùng một tế bào Vị trí của phần tâm được biểu hiện bằng chỉ số phần tâm, tức là tỷ lệ giữa chiều dài nhánh ngắn trên tổng chiều dài của cả NST

Ngoài ra còn có một số tiêu chuẩn chi tiết khác vận dụng cho các NST có nhánh ngắn rất ngắn (NST tâm đầu) và các vệ tinh của chúng, NST Y có đặc thù riêng

1.2.2 Phân loại nhiễm sắc thể

Ở người bộ NST 2n = 46 trong đó có 22 cặp NST thường (autochromosome)

và 1 cặp NST giới tính (sex chromosome) Dựa vào đặc điểm hình thái như độ dài,

vị trí tâm động người ta sắp xếp các NST thành từng nhóm 46 NST được chia thành 7 nhóm, kí hiệu là A, B, C, D, E, F và G trên nguyên tắc dài trước ngắn sau, nếu các NST bằng nhau thì tâm giữa đặt trước, tâm lệch đặt sau

 Nhóm A có 3 cặp NST có kích thước lớn nhất, gọi tên từ số 1 đến 3, cặp số 1 tâm giữa, cặp số 2 tâm lệch, cặp số 3 tâm giữa

 Nhóm B có 2 cặp NST số 4 và 5 Các NST này có kích thước lớn và đều có tâm lệch

 Nhóm C có 7 cặp từ số 6 đến 12 có chiều dài trung bình NST X cũng được xếp vào nhóm này Tất cả đều tâm gần giữa và khó phân biệt

 Nhóm D có 3 cặp từ số 13 đến 15 gồm các NST có nhánh ngắn rất ngắn, gần như không đáng kể gọi là các NST tâm đầu (acrocentric) Tất cả 3 cặp NST này đều

1.3 Các rối loạn và cơ chế gây rối loạn nhiễm sắc thể người

1.3.1 Rối loạn số lượng nhiễm sắc thể

Rối loạn số lượng NST gồm hai dạng: đa bội (polyploidy) và lệch bội (aneuploidy)

* Đa bội thể: là hiện tượng tăng chẵn hoặc tăng lẻ cả bộ NST Ví dụ: ở người

3n = 69 NST = thể tam bội (3n) thuộc dạng thể đa bội lẻ, 4n = 96 NST = thể tứ bội (4n) thuộc dạng thể đa bội chẵn

Ở người, các trường hợp đa bội phần lớn phôi thai chết ở giai đoạn trước sinh, một vài trường hợp sống đến khi sinh hoặc sau sinh nhưng hầu hết là các trẻ sơ sinh bị dị tật

Một số trường hợp đa bội thể ở người:

- Đa bội thể ở người hầu hết quan sát thấy ở những thai sảy tự nhiên hoặc ở một số thai sống sót vài giờ sau khi sinh hoặc ở phần lớn các khối u

- Thể tam bội (3n) thuần (69,XXY hoặc 69,XYY) đã quan sát ở những thai sảy

tự nhiên hoặc ở một số thai sống sót vài giờ sau khi sinh

- Thể khảm (3n/2n) hoặc (4n/2n) đứa trẻ có thể sống được vài năm nhưng chậm phát triển trí tuệ và nhiều dị tật bẩm sinh khác: dị dạng mắt, thoát vị màng tủy, dị tật tim, dị tật cơ quan sinh dục…

Karyotyp ở những đứa trẻ này là: 46,XY/69,XXY hoặc 46,XX/92,XXYY…

* Lệch bội: là hiện tượng số lượng NST của tế bào tăng lên hoặc giảm đi một

hoặc vài NST so với bộ NST lưỡng bội

Những dòng tế bào hoặc hợp tử monosomi NST thường, nhìn chung không có khả năng phát triển và thường chết ở giai đoạn sớm của phôi thai

* Lệch bội NST giới tính

Trường hợp trisomi thuần NST giới tính, thai nhi có thể phát triển được đến tuổi trưởng thành, nhưng thường có các dị tật ở cơ quan sinh dục và một số dị tật khác Chỉ có trường hợp monosomi NST giới X là có khả năng sống đến tuổi trưởng thành nhưng có những biểu hiện rối loạn phát triển hình thái của cơ thể, về cơ quan sinh dục và có thể chậm phát triển trí tuệ

* Thể khảm lệch bội: NST thường và NST giới tính tức là cá thể có từ hai hoặc

nhiều dòng tế bào, hay gặp nhất là một dòng tế bào lưỡng bội và một dòng tế bào lệch bội hoặc là thừa một NST (trisomi) hoặc là thiếu một NST (monosomi)

* Lệch bội phức tạp – (lệch bội kép): trong tế bào của cơ thể có dư 2 NST ở

hai cặp tương đồng khác nhau (thông thường là một cặp NST thường và một cặp NST giới tính)

1.3.2 Rối loạn cấu trúc nhiễm sắc thể

Rối loạn cấu trúc nhiễm sắc thể bao gồm vật liệu di truyền bị mất, thêm, hoặc đảo ngược trong cùng 1 NST hoặc trao đổi giữa các đoạn của các NST khác nhau (translocations) Rối loạn NST là cân bằng nếu vật liệu di truyền không bị mất (đảo đoạn và chuyển đoạn NST cân bằng) và không cân bằng nếu thừa, thiếu vật liệu di truyền (trong trường hợp lặp đoạn hoặc mất đoạn NST) [56]

* Mất đoạn (deletion): là hiện tượng NST bị đứt rời ra một hoặc nhiều đoạn,

đoạn bị đứt rời ra không có tâm sẽ tiêu biến đi hoặc gắn sang NST khác, phần còn lại mang tâm trở lên ngắn hơn bình thường

Sự mất đoạn NST tức là sự mất đi vật liệu di truyền và tùy theo mức độ tổn thương nhiều hay ít mà ảnh hưởng xấu tới sự phát triển của phôi thai, hoặc thai nhi sinh ra với nhiều dị tật Ở người tần số gặp mất đoạn rất hiếm Ví dụ: hội chứng mèo kêu: 46, XX(XY), del (5p)… đã được mô tả bởi Lejeune và cs năm 1963 Một

số trường hợp có biểu hiện chậm phát triển trí tuệ và rối loạn cơ quan sinh dục, hay gặp trong số đó là NST X hình vòng Ví dụ: Hội chứng Turner: 46,Xr(Xq)

* Chuyển đoạn (Translocation): Chuyển đoạn là hiện tượng trao đổi các đoạn

của NST Chuyển đoạn NST đã được xác định là hay gặp nhất trong rối loạn cấu trúc của NST [86] Có hai kiểu chuyển đoạn là chuyển đoạn tương hỗ (reciprocal translocation) và chuyển đoạn hòa hợp tâm (Robertsonian translocation)

- Chuyển đoạn tương hỗ (reciprocal translocation): là hiện tượng trao đổi

đoạn giữa hai NST Mỗi NST đứt một chỗ, trao đổi đoạn đứt cho nhau và hình thành hai NST mới Cả hai đều thay đổi hình thái nếu những đoạn trao đổi khác nhau về kích thước Người mang NST chuyển đoạn tương hỗ có kiểu hình bình thường và trong bộ NST chứa 46 chiếc với 2 NST bất thường [30] Trong quá trình hình thành giao tử, hợp tử và sinh ra những đứa con hoặc là monosomi (thường chết) hoặc trisomi hoặc có karyotype bình thường hoặc mang chuyển đoạn cân bằng giống bố mẹ Dưới đây là sơ đồ mô tả quá trình hình thành giao tử và hợp tử ở những người mang chuyển đoạn tương hỗ giữa NST số 3 và NST số 21 Các trường hợp chuyển đoạn tương hỗ khác cũng tương tự

Hình 1: Sơ đồ hình thành giao tử và hợp tử ở người mang chuyển đoạn tương

hỗ giữa NST số 3 và NST số 21

- Chuyển đoạn hòa hợp tâm (Robertsonian translocation): Chuyển đoạn hòa hợp

tâm là do phần tâm của hai NST hợp nhất hình thành và hay gặp nhất là sự chuyển đoạn giữa các NST tâm đầu số 13,14,15 (nhóm D), số 21,22 (nhóm G) bao gồm là sự

chuyển đoạn giữa các NST nhóm D với nhóm D (D/D) hoặc giữa nhóm D với nhóm G (D/G) hoặc giữa nhóm G với nhóm G (G/G) Nhìn chung trong quần thể, chuyển đoạn hòa hợp tâm chiếm tỷ lệ khoảng 1,23% ở trẻ sơ sinh còn sống [15]

Ở những người mang chuyển đoạn hòa hợp tâm trong bộ NST có 45 chiếc thiếu 2 NST tâm đầu và thay vào đó 1 NST tâm giữa có kích thước lớn nếu là sự chuyển đoạn giữa các NST nhóm D với nhóm D (D/D) hoặc 1 NST có kích thước trung bình tâm lệch nếu là sự chuyển đoạn giữa các NST nhóm D với các NST nhóm G (D/G) hoặc 1 NST kích thước nhỏ tâm giữa nếu là sự chuyển đoạn giữa các NST nhóm G với các NST nhóm G (G/G)

Những người đàn ông mang chuyển đoạn hoà hợp tâm, các đoạn chuyển có thể can thiệp vào sự sản sinh tinh trùng (số lượng tinh trùng thấp hoặc tinh trùng mang NST rối loạn) Bố hoặc mẹ mang chuyển đoạn hoà hợp tâm có thể sinh ra con cái dị tật bẩm sinh sau: hội chứng Down khi con thừa hưởng 3 nhánh dài của NST 21 Hội chứng Patau khi thừa hưởng 3 nhánh dài của NST 13… Nếu cả bố và mẹ đều mang chuyển đoạn hoà hợp tâm thì việc có một đứa con bình thường là rất khó do sự hình thành nên hợp tử mang NST không cân bằng [94]

Có 2 dạng chuyển đoạn hòa hợp tâm đó là sự chuyển đoạn hòa hợp tâm giữa các NST trong cùng cặp NST tương đồng và chuyển đoạn hòa hợp tâm giữa các NST khác cặp tương đồng Dưới đây là sơ đồ hình thành giao tử và hợp tử của các cặp vợ chồng (người vợ hoặc người chồng) mang chuyển đoạn hòa hợp tâm

Hình 2: Sơ đồ hình thành giao tử và hợp tử của người mang chuyển đoạn hòa

hợp tâm giữa 2 NST khác cặp tương đồng t(14q;21q)

Hình 3: Sơ đồ hình thành giao tử và hợp tử của người mang chuyển đoạn hòa

hợp tâm giữa 2 NST cùng cặp tương đồng t(21q;21q)

* Lặp đoạn (duplication) là hiện tượng một đoạn nào đó của NST được nhân

đôi lên Lặp đoạn xảy ra khi 2 NST tương đồng ghép đôi với nhau không tương xứng trong kỳ đầu của phân bào giảm phân, có sự đứt của 2 NST và trao đổi đoạn giữa 2 đoạn khác nhau của 2 NST trong cặp tương đồng Trong trường hợp này có 2 NST bị thay đổi cấu trúc, nhưng không mất đi hoặc tăng thêm vật liệu di truyền trong tế bào Khi các NST trong cặp tương đồng này phân ly nhau trong giảm phân

sẽ tạo ra hợp tử mang NST lặp đoạn (trisomi từng phần) hoặc NST thiếu một đoạn

có liên quan (monosomi từng phần)….Ở người hay gặp trisomi một phần nhánh dài hoặc monosomi một phần nhánh dài hoặc nhánh ngắn của NST số 18 (nhóm E)

Đảo đoạn (Inversion): Kết quả đảo đoạn khi hai điểm đứt gãy xảy ra trong

một nhiễm sắc thể và mảnh đứt gãy quay ngược 1800 trước khi được chèn trở lại Đảo đoạn mang tâm động (pericentric) nếu nó liên quan đến tâm động Đảo đoạn không mang tâm động (paracentric) chỉ liên quan đến một nhánh của một nhiễm sắc thể, hay ngoài tâm động Đảo đoạn là tái sắp xếp cân bằng, nhưng người mang đảo đoạn quanh tâm và ngoài tâm động đều có nguy cơ tạo giao tử với nhiễm sắc thể không cân bằng bổ sung [5]

Đảo đoạn có thể ở trạng thái đồng hợp tử hoặc dị hợp tử Khi ở trạng thái đồng hợp tử thì đảo đoạn thường gây ảnh hưởng chết cho cơ thể do làm thay đổi vị trí của các gen (hiệu ứng vị trí) và đứt gãy nhiễm sắc thể sẽ dẫn tới gây chết Khi ở trạng thái dị hợp tử thì đảo đoạn gây nên một số thay đổi về di truyền và tế bào, do đó người ta có thể dễ dàng phát hiện ra đoạn đảo Khi có đảo đoạn ngoại tâm sẽ không làm thay đổi vị trí hai vế, còn khi có đảo đoạn quanh tâm sẽ dẫn đến thay đổi vế của nhiễm sắc thể, có thể biến nhiễm sắc thể tâm cận mút (acrocentrric chromosome) thành nhiễm sắc thể cân tâm (metacentric chromosome) và ngược lại [3]

1.3.3 Hậu quả của các đột biến nhiễm sắc thể lên chất liệu di truyền

Căn cứ vào sự biến đổi chất liệu di truyền trong các loại đột biến NST người ta chia làm hai loại:

Đột biến cân bằng (balanced mutation): Đột biến NST không làm mất

hoặc thêm chất liệu di truyền như các trường hợp chuyển đoạn, đảo đoạn Do không làm mất hoặc thêm chất liệu di truyền nên những đột biến này thường không ảnh hưởng lên kiểu hình [98]

Đột biến không cân bằng (unbalanced mutation): Bao gồm các đột biến

NST làm mất chất liệu di truyền như thể đơn nhiễm, đột biến mất đoạn hoặc làm tăng chất liệu di truyền như thể tam nhiễm, thể tam bội, nhân đoạn Đây là những đột biến gây ra những hậu quả trên kiểu hình [99]

1.4 Tình hình nghiên cứu bộ nhiễm sắc thể ở những cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị tật bẩm sinh trên thế giới

1.4.1 Tần số rối loạn nhiễm sắc thể ở những cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị tật bẩm sinh

Một trong những nguyên nhân chính dẫn đến hiện tượng sảy thai là do bố

mẹ mang rối loạn NST, đặc biệt là những trường hợp sảy thai sớm Khoảng 60% trường hợp sảy thai liên tiếp trước tuần thứ 20 của thai là do rối loạn NST ở phôi thai [22] Các cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị tật bẩm sinh có tỷ lệ mang rối loạn NST lớn hơn so với tỉ lệ rối loạn NST trong dân số nói chung

(khoảng <0,55%) [16,37,52,53,17,78] Sau đây là một số ghi nhận về nghiên cứu tần số rối loạn NST ở các cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp và sinh con dị tật:

CU Diedrich và cs (1983) khi phân tích truyền tế bào ở 136 cặp vợ chồng có tiền sử sảy thai hai lần trở lên đã phát hiện 15 trường hợp (chiếm tỷ lệ 11%) có rối loạn NST [28]

Báo cáo của J.P Fryns và cs (1984) trong 1068 cặp vợ chồng có tiền sử sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị tật bẩm sinh được phân tích NST có 59 trường hợp mang rối loạn NST (chiếm 5,5%) [40]

Một nghiên cứu khác của Kroshikina VG và cs (1984) trong 202 cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp được xét nghiệm NST thì tỷ lệ các cặp mà một trong hai người có rối loạn NST là 2,5% [51]

Năm 1998 Fryns JP và cs khi phân tích NST của 1743 cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp đã phát hiện 5,34% trong số họ mang rối loạn NST [39]

Khi tiến hành làm xét nghiệm NST cho 61 cặp vợ chồng có tiền sử sảy thai liên tiếp từ hai lần trở lên Jiang J và cs (2001) đã phát hiện 7 cặp vợ chồng có một trong hai người bị rối loạn NST (chiếm tỷ lệ 11,5%) [49]

M Azim (2003) sử dụng kỹ thuật nhuộm băng G phân tích NST của 300 cặp vợ chồng có tiền sử sảy thai từ 2 lần trở lên Kết quả cho thấy có 16 cặp (vợ hoặc chồng) mang rối loạn NST (chiếm tỷ lệ 5,3%) [17]

Nghiên cứu NST ở 742 cặp vợ chồng (1484 trường hợp) có tiền sử sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị tật bẩm sinh, Dubey và cs (2005) đã phát hiện được 31 trường hợp có rối loạn NST (chiếm tỷ lệ 2%) [30]

Lakshmi Rao và cs (2005) sử dụng kỹ thuật nhuộm băng G để phân tích NST cho 160 cặp vợ chồng có tiền sử sảy thai liên tiếp Kết quả phát hiện 18 trường hợp mang rối loạn NST chiếm 11,25% tổng số các cặp nghiên cứu [53]

Năm 2006 Figen Celepa và cs đã phân tích NST của 645 cặp vợ chồng (1290 trường hợp) có tiền sử sảy thai liên tiếp Kết quả tìm thấy có 25 trường hợp mang rối loạn NST (chiếm tỷ lệ 3,86%) [32]

Razied Dehghani Firoozabadi và cs (2006) phân tích NST của 88 cặp vợ chồng có tiền sử sảy thai liên tiếp Kết quả cho thấy 12.5% trong số họ mang rối loạn NST [75]

Nghiên cứu của Mary D.Stephenson và Sony Sierra thuộc Đại học Chicago (Mỹ) và Đại học Colombia (Anh) năm 2006 khi phân tích kết quả sinh sản của các cặp vợ chồng có tiền sử sảy thai liên tiếp đã phát hiện 51 người mang rối loạn NST trong 1853 cặp vợ chồng (2.7 %) [85]

L.V.Tavokina và cs (2007) đã phát hiện 46 trường hợp (10,95%) rối loạn NST khi phân tích NST của 210 cặp vợ chồng có vấn đề về sinh sản [52]

Usha R Dutta (2010) và cs đã phân tích sự bất thường về di truyền tế bào trong 1162 cặp vợ chồng có tiền sử sảy thai liên tiếp ở vùng phía nam Ấn độ đã phát hiện 78 trường hợp rối loạn NST [95]

Faeza Abdel và cs (2011) khi nghiên cứu nguyên nhân sảy thai liên tiếp ở Ai Cập đã phát hiện 9 cặp vợ chồng trong 73 cặp được kiểm tra NST mang rối loạn NST tương ứng với 6.1% [31]

1.4.2 Tần số rối loạn nhiễm sắc thể giữa người vợ và người chồng ở những cặp

vợ chồng sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị tật bẩm sinh

Năm 1983 ALippman-Hand đã phân tích NST của 347 người (trong đó có

170 cặp vợ chồng và 7 người vợ) có tiền sử sảy thai liên tiếp từ hai lần trở lên Kết quả là phát hiện có 8 người vợ và 4 người chồng mang rối loạn NST [14]

Phân tích NST của 391 cặp vợ chồng sinh con mắc bệnh Down, Stoll.C và

cs (1998) đã phát hiện được 7 người (5 người mẹ và 2 người bố) mang NST chuyển đoạn hòa hợp tâm [88]

Năm 2005, Dubey và cs kiểm tra NST của 742 cặp vợ chồng có tiền sử sảy thai liên tiếp 31 trường hợp đã được phát hiện mang rối loạn NST, trong đó 24 nữ

và 7 nam với tỉ lệ nữ: nam là 2,1:1 [30]

Nghiên cứu kết quả sinh sản của 11.971 cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp, Flyn H

và cs (2013) phân tích NST và phát hiện có 278 trường hợp rối loạn NST trong đó 176 người vợ (tương đương 63%) và 102 người chồng (tương đương với 37%) [34]

Cũng trong năm 2013, Ali karaman và Pasa Ulug phân tích NST của 158 cặp

vợ chồng có tiền sử sảy thai liên tiếp đã phát hiện các trường hợp rối loạn NST bao gồm 13 nữ (8,22%) và 7 nam (4,43%) [13]

Ngoài những trường hợp rối loạn NST xảy ra ở người vợ hoặc người chồng ở những cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp và sinh con dị tật, chúng tôi còn ghi nhận một

số kết quả nghiên cứu mà cả hai vợ chồng đều mang rối loạn NST sau:

Khi nghiên cứu cặp vợ chồng 25 tuổi với tiền sử 2 lần sảy thai liên tiếp P.R Scarbrough và cs (1984) với phương pháp nhuộm băng G đã phát hiện sự có mặt của chuyển đoạn NST số 13 (thuộc nhóm D) với NST số 14 (thuộc nhóm D) ở người chồng, karyotyp của người chồng là 45,XY,t(13q;14q) Phân tích NST của người vợ phát hiện chuyển đoạn tương hỗ giữa NST số 7 và NST số 13, karyptyp là 46,XX,t(7;13)(p21;q22) Theo tác giả thì xác suất để cặp vợ chồng này có 1 con mang NST cân bằng hoặc mang NST bình thường là 4/48 Xác suất này có thể được cải thiện trong trường hợp có chọn các tế bào mầm [78]

Ahonadreza Zarifian và cs (2012) đã báo cáo 1 trường hợp cặp vợ chồng với nhiều lần sảy thai không rõ nguyên nhân: khi phân tích NST trên cơ sở kỹ thuật nhuộm băng G ở độ phân giải cao đã cho kết quả người chồng có karyotyp là 46,XY,t(6;16)(p12;q26), karyotyp của người vợ là 46,XX,t(6;16)(p12;q26) Cũng theo báo cáo này thì những cặp vợ chồng mà cả 2 đều mang rối loạn NST cân bằng

có khả năng sản xuất những giao tử bất thường tạo lên các hợp tử bất thường dẫn đến hiện tượng sảy thai, thai lưu hoặc con sinh ra mang dị tật bẩm sinh Về lý thuyết, chỉ có 25% giao tử bình thường mỗi người do đó nguy cơ sinh sản đối với các cặp vợ chồng mà cả hai đều mang rối loạn NST là rất cao [12]

1.4.3 Sự phân bố các kiểu rối loạn nhiễm sắc thể ở những cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị tật bẩm sinh

1.4.3.1 Sự phân bố giữa rối loạn số lượng và cấu trúc nhiễm sắc thể

Năm 1982, Micheles VV và cs phân tích NST của 220 cặp vợ chồng có tiền sử sảy thai từ 2 lần trở lên đã phát hiện có 18 trường hợp mang rối loạn NST trong đó có

13 trường hợp rối loạn cấu trúc NST và 5 trường hợp rối loạn số lượng NST [61]

U Diedrich và cs (1983) khi phân tích NST của 136 cặp vợ chồng có tiền sử sảy thai liên tiếp đã phát hiện 15 trường hợp rối loạn NST trong đó có 11 trường hợp rối loạn cấu trúc và 4 trường hợp rối loạn số lượng NST [28]

Muneera Al Hussain (2000) khi phân tích các rối loạn NST ở các cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp đã phát hiện 15 trường hợp mang rối loạn NST trong đó 13 trường hợp là rối loạn cấu trúc và 2 trường hợp rối loạn số lượng NST [65]

Khi phân tích nguyên nhân của các trường hợp sảy thai liên tiếp, M.zim và cs (2003) nghiên cứu NST của 300 cặp vợ chồng đã phát hiện 16 trường hợp rối loạn NST trong đó có 14 trường hợp là rối loạn cấu trúc và 2 trường hợp rối loạn số lượng NST [17]

Năm 2005 Dubey và cs phân tích NST và lập karyotyp của 742 cặp vợ chồng (1484 trường hợp) có tiền sử sảy thai liên tiếp hoặc sinh con bị dị tật bẩm sinh Các tác giả đã phát hiện có 9 trường hợp rối loạn số lượng NST, 22 trường hợp rối loạn về cấu trúc NST [30]

Raizied Dehghani và cs (2006) khi phân tích di truyền tế bào của các cặp vợ chồng có tiền sử sảy thai tái phát đã phát hiện 6 trường hợp rối loạn số lượng và 5 trường hợp rối loạn cấu trúc NST [75]

Cũng trong năm 2006, Figen Celapa và cs khi phân tích NST của 645 cặp vợ chồng đã phát hiện 25 trường hợp mang rối loạn NST, trong đó rối loạn cấu trúc chiếm 3,7% và rối loạn về số lượng chiếm 0.15% [32]

L.V Tavokina và cs (2007) khi nghiên cứu các bệnh nhân rối loạn sinh sản đã phát hiện 46 trường hợp mang rối loạn NST trong đó rối loạn cấu trúc NST chiếm 89,13%, rối loạn số lượng NST chiếm 10,87% [52]

Năm 2008, Hossem Mozdarani và cs khi phân tích NST của các cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị tật bẩm sinh đã phát hiện có 21 trường hợp mang rối loạn NST trong đó có 4 trường hợp là rối loạn số lượng, 17 trường hợp là rối loạn về cấu trúc [46]

Feaza Abdel Mogib và cs (2011) phân tích tế bào các cặp vợ chồng có tiền

sử sảy thai ít nhất 2 lần ở bệnh viện Nhi, đại học Mansoura, Ai Cập đã phát hiện 9

trong 73 cặp vợ chồng mang rối loạn NST, trong đó 7 trường hợp là rối loạn cấu trúc và 2 trường hợp là rối loạn về số lượng NST [31]

1.4.3.2 Sự phân bố các kiểu rối loạn nhiễm sắc thể về cấu trúc

Năm 1982, Micheles VV, Medrano C và cs nghiên cứu bất thường NST ở

220 cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp đã phát hiện các trường hợp rối loạn cấu trúc NST, trong đó chủ yếu là chuyển đoạn hòa hợp tâm 8 trường hợp (3,6%), đảo đoạn

Muneera Al Hussain và cs (2000) khi phân tích NST của các cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp đã ghi nhận 13 trường hợp rối loạn cấu trúc NST bao gồm: 10 trường hợp chuyển đoạn tương hỗ, 2 trường hợp đảo đoạn và 1 trường hợp chuyển đoạn hòa hợp tâm [65]

Khi tiến hành xét nghiệm NST của 61 cặp vợ chồng có tiển sử sảy thai liên tiếp từ 2 lần trở lên, Jiang Jing và cs (2001) đã phát hiện 7 cặp vợ chồng có 1 trong

2 người mang rối loạn NST, trong đó có 6 người mang chuyển đoạn và 1 người mang NST đảo đoạn quanh tâm [49]

Kết quả nghiên cứu của M Azim và cs (2003) khi phân tích NST ở 300 cặp

vợ chồng phát hiện 14 cặp mang rối loạn cấu trúc NST, trong đó 7 trường hợp chuyển đoạn, 5 trường hợp đảo đoạn và 2 trường hợp mất đoạn [17]

Kết quả nghiên cứu của Dubey và cs năm 2005 trong số 22 người mang rối loạn cấu trúc NST có 19 trường hợp là chuyển đoạn và 3 trường hợp là mất đoạn NST [30]

Năm 2006, Razied Dehghani Firoozabadi và cs đã phân tích NST của 165 cặp vợ chồng có tiền sử sảy thai liên tiếp đã phát hiện các trường hợp rối loạn cấu trúc NST sau: 2 trường hợp chuyển đoạn, 1 trường hợp mất đoạn và 2 trường hợp lặp đoạn NST [75]

Năm 2008, Hossein Mozdra và cs khi phân tích NST của các cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp đã phát hiện 16 trường hợp mang rối loạn NST cấu trúc gồm các dạng rối loạn: đảo đoạn 5 trường hợp, chuyển đoạn 3 trường hợp, lặp đoạn 7 trường hợp [46]

Usha R.Dutta và cs (2010) khi phân tích NST của 1162 cặp vợ chồng có tiền

sử sảy thai liên tiếp ở vùng phía nam Ấn Độ đã phát hiện 78 trường hợp mang rối loạn NST, phần lớn là chuyển đoạn tương hỗ cân bằng [95]

Năm 2012, Feaza Abdel Mogib và cs đã phát hiện 7 trường hợp mang rối loạn NST về cấu trúc trong 73 cặp vợ chồng có tiền sử sảy thai ít nhất 2 lần Trong

đó có 3 trường hợp là chuyển đoạn tương hỗ, 1 trường hợp chuyển đoạn hòa hợp tâm, 2 trường hợp đảo đoạn và 1 trường hợp mất đoạn [31]

Ali karaman và Pasa Ulug (2013) khi phân tích NST của 158 cặp vợ chồng

có tiền sử sảy thai liên tiếp đã phát hiện 20 trường hợp rối loạn cấu trúc NST bao gồm: 7 trường hợp chuyển đoạn tương hỗ, 7 trường hợp chuyển đoạn hòa hợp tâm,

4 trường hợp đảo đoạn gồm tâm động, 2 trường hợp đảo đoạn ngoài tâm [13]

Theo báo cáo của Flyn H và cs (2013) thì từ 1/1992 đến 1/2001 đã có 11.971 cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp được phân tích NST Trong nghiên cứu này, các tác giả đã ghi nhận 278 trường hợp rối loạn cấu trúc NST Trong đó các kiểu rối loạn được phân bố như sau: 177 trường hợp mang chuyển đoạn tương hỗ (chiếm 64%),

43 trường hợp mang chuyển đoạn hòa hợp tâm (chiếm 15%), 21 trường hợp đảo đoạn NST gồm tâm động (chiếm 8%), 21 trường hợp đảo đoạn NST không gồm tâm động (chiếm 8%), và 16 trường hợp rối loạn khác [34]

1.4.3.3 Sự phân bố các kiểu chuyển đoạn tương hỗ

Theo Zarina A L và cs thì chuyển đoạn tương hỗ chiếm 0.2% trong dân số Tuy nhiên ở những cặp vợ chồng sảy thai trên 3 lần ở 3 tháng đầu thì tỉ lệ này có thể tăng tới 9.2% [99]

Kết quả nghiên cứu của Claude Stoll và cs (1981) khi phân tích NST của 122 cặp vợ chồng có tiền sử sảy thai liên tiếp từ 3 lần trở lên phát hiện 4 trường hợp mang chuyển đoạn tương hỗ ở các cặp NST bao gồm t(2;17), t(11;12), t(17;22), t(5;9) [24]

Năm 1983, khi phân tích NST của 170 cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp, Alippman –Hand và cs đã phát hiện 6 trường hợp mang chuyển đoạn tương hỗ bao gồm: t(4;6), t(6;8), t(1;21), t(7;13), t(16;20), t(18;21) [14]

Nghiên cứu của J.P.Fryns và cs (1984) phân tích NST của 1068 cặp vợ chồng phát hiện 33 trường hợp mang chuyển đoạn tương hỗ (chiếm 3.08%) [45]

Phân tích NST và lập Karyotype của 445 cặp vợ chồng có tiền sử sảy thai liên tiếp Fortuny và cs (1988) đã phát hiện 16 cặp mang chuyển đoạn tương hỗ (3,6%) [36]

Năm 2007, khi nghiên cứu về vai trò của chuyển đoạn NST đối với các trường hợp sảy thai liên tiếp, Simona Farcas đã phát hiện 9 trường hợp mang NST chuyển đoạn tương hỗ bao gồm có các dạng chuyển đoạn giữa các NST t(4;21), t(X;4), t(7;13), t(4;16) [86]

Usha R.Dutta và cs (2010) khi phân tích NST của 1162 cặp vợ chồng có tiền

sử sảy thai liên tiếp ở vùng Nam Ấn Độ đã chỉ ra rằng phần lớn các trường hợp rối loạn NST được tìm thấy là chuyển đoạn tương hỗ Trong 78 trường hợp mang chuyển đoạn tương hỗ có 3 loại chuyển đoạn giữa các cặp NST lần đầu tiên được phát hiện bao gồm (3;14), (18;22), (X;22) [95]

Ali karaman và Pasa Ulug (2013) khi phân tích NST của 158 cặp vợ chồng

có tiền sử sảy thai liên tiếp đã phát hiện 7 trường hợp mang NST chuyển đoạn tương hỗ bao gồm các dạng chuyển đoạn t(1;18), t(3;8), t(5;8), t(5;11), t(11;12), t(14;17), t(16;22) [13]

1.4.3.4 Sự phân bố các kiểu chuyển đoạn hòa hợp tâm

Chuyển đoạn hoà hợp tâm được công nhận là rối loạn NST phổ biến nhất trong dân số chiếm 1.23/1000 trẻ sống và đặc biệt ở các cặp vợ chồng có tiền sử sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị tật thì tỷ lệ này tăng lên (Nielsen et al, 1991) [71]

Dưới đây là một số nghiên cứu về chuyển đoạn hòa hợp tâm ở những cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị tật bẩm sinh:

Michels và cs (1982) đã phân tích NST của 200 cặp vợ chồng có tiền sử sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị tật phát hiện số lượng lớn các trường hợp mang chuyển đoạn hòa hợp tâm giữa NST số 13 và NST số 14 [61]

Năm 1983, khi phân tích NST của 170 cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp, Alippman – Hand và cs đã phát hiện 4 trường hợp rối loạn NST kiểu chuyển đoạn hòa hợp tâm bao gồm: 2 trường hợp chuyển đoạn giữa NST số 13 (nhóm D) và NST số 14 (nhóm D); t(13q;14q), 1 trường hợp mang chuyển đoạn giữa NST số 14 (nhóm D) và NST số 15 (nhóm D); t(14q;15q), 1 trường hợp mang chuyển đoạn giữa NST số 15 (nhóm D) và NST số 15 (nhóm D); t(15q;15q) [14]

Năm 1989, Therman và cs đã phát hiện các trường hợp mang chuyển đoạn hòa hợp tâm ở các cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp Trong đó chuyển đoạn giữa NST

số 13 và 14 và NST số 14 và 21 là hay gặp nhất (tương ứng với 73% và 10% trong tất cả các dạng chuyển đoạn HHT) Chuyển đoạn giữa NST số 13 và 21, giữa NST

số 13 và 22 đều là những dạng hiếm gặp [91]

391 cặp vợ chồng có con mắc bệnh Down được Stoll.C và cs (1998) phân tích NST Các tác giả đã phát hiện được 7 cặp vợ chồng mang NST chuyển đoạn hòa hợp tâm giữa NST số 14 (nhuộc nhóm D) và NST số 21 (thuộc nhóm G) Karyotyp ở những người vợ là 45,XX,t(14q;21q) và ở những người chồng là 45,XY,t(14q;21q) [88]

Năm 2003, M Azim và cs khi nghiên cứu 300 cặp vợ chồng có tiền sử sảy thai liên tiếp đã phát hiện 16 cặp vợ chồng mang rối loạn NST trong đó chuyển đoạn hoà hợp tâm gặp nhiều nhất chiếm 2.3% [17]

Dubey S và cs (2005) nghiên cứu 742 cặp vợ chồng có tiền sử sảy thai liên tiếp và sinh con dị tật đã phát hiện 4 trường hợp mang chuyển đoạn hòa hợp tâm trong đó: 2 trường hợp chuyển đoạn nhóm D/D giữa NST số 13 và 14, 2 trường hợp chuyển đoạn nhóm G/G gồm 1 chuyển đoạn giữa NST số 21 với 22 và 1 chuyển đoạn giữa NST số 22 và 22 [30]

Phân tích NST trong một gia đình có tiền sử thai sản: lần đầu sinh được một

bé gái bình thường, lần 2 bị sảy và lần 3 sinh được một trẻ trai mắc bệnh Down Cyril cyrus và cs (2006) phát hiện ở người vợ có karyotyp bình thường là 46,XX, nhưng chồng mang NST chuyển đoạn hòa hợp tâm giữa NST số 13 (thuộc nhóm D) với NST số 21 (thuộc nhóm G), karyotyp của chồng là 45,XY,t(13q;21q) [25]

Simona Farcas và cs (2007) phân tích NST và lập karyotype của 260 cặp vợ chồng có tiền sử sảy thai liên tiếp và sinh con dị tật phát hiện 17 trường hợp rối loạn NST dạng chuyển đoạn, trong đó chuyển đoạn hòa hợp tâm có 6 trường hợp bao gồm: 4 trường hợp chuyển đoạn giữa NST nhóm D (trong đó, 3 trường hợp là chuyển đoạn giữa NST số 13 và 14 và 1 trường hợp chuyển đoạn giữa NST số 13 và 15), 1 trường hợp mang chuyển đoạn NST nhóm D với nhóm G ở NST số 14 và NST số 21, 1 trường hợp mang chuyển đoạn giữa NST trong nhóm G giữa NST số

Turleau và cs khi nghiên cứu 413 cặp vợ chồng có tiển sử sảy thai liên tiếp

đã phát hiện tỉ lệ cao nhất trong các rối loạn NST là đảo đoạn NST số 9 [92]

Năm 2003, M Azim và cs khi nghiên cứu nguyên nhân của sảy thai tái phát đã phân tích NST của 300 cặp vợ chồng có tiền sử sảy thai đã phát hiện 5 trường hợp mang đảo đoạn NST trong đó 4 trường hợp đảo đoạn quanh tâm NST số 9 [17]

Báo cáo của Lakshmi Rao và cs (2005) khi phân tích NST của 160 cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp Các tác giả đã phát hiện đảo đoạn NST chiếm tỷ lệ phổ biến trong các trường hợp rối loạn NST [54]

Năm 2007, Simona Farcas và cs đã nghiên cứu 354 cặp vợ chồng có tiền sử sảy thai liên tiếp đã phát hiện 10 nữ và 6 nam mang đảo đoạn NST số 9 Theo báo cáo này thì các đoạn đảo có nguy cơ bị mất hoặc sắp xếp lại trong quá trình giảm phân [86]

Nasrin Ghasemi và cs năm 2007 cũng đã báo cáo trường hợp của hai cặp vợ chồng trong đó 1 người mang đảo đoạn NST số 9 Trường hợp đầu tiên là cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp (trong ba tháng đầu), xét nghiệm NST cho thấy người vợ có karyotyp là 46 XX,inv(9)(p11q13) và NST của người chồng bình thường (46XY) Cặp đôi thứ hai vô sinh không rõ nguyên nhân: NST của người vợ bình thường (46XX ), karyotyp của chồng là 46XY,inv(9)(p11;q13) [68]

1.4.3.6 Sự phân bố các rối loạn phức tạp nhiễm sắc thể ở các cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị tật bẩm sinh

Rối loạn phức tạp NST là một dạng rối loạn cấu trúc rất hiếm liên quan đến ít nhất 3 NST hoặc nhiều hơn 3 điểm đứt trên NST Rối loạn phức tạp cũng có thể chia thành 2 loại: rối loạn cân bằng và rối loạn không cân bằng Trong đó rối loạn cân bằng thường không làm thay đổi kiểu hình nhưng có nguy cơ cao trong sinh sản như vô sinh, sảy thai hoặc sinh con dị tật Theo kinh nghiệm của Madan và cs ở các cặp vợ chồng mà 1 người mang rối loạn phức tạp thì nguy cơ sảy thai là 50%, nguy

cơ sinh con dị tật là 20% [59] Những người mang rối loạn phức tạp không cân bằng thường có nguy cơ cao chậm phát triển trí tuệ và mang nhiều dị tật khác [70]

Ulrike A Mau và cs (2000) đã báo cáo kết quả phân tích NST trong một gia đình có một trẻ mắc bệnh Down do mang NST chuyển đoạn với karyotyp là 46,XY,t(15q;21q) Người bố có karyotyp bình thường 46,XY, người mẹ mang NST chuyển đoạn hòa hợp tâm giữa NST số 15 (nhóm D) với NST số 21 (nhóm G) và đảo đoạn quanh tâm NST số 21, karyotyp là 45,XX,t(15q;21q),inv(21)(q21.1;q22.1) [93]

Trường hợp rối loạn phức tạp gồm NST số 9, 14 và 13 ở người phụ nữ với tiền sử sảy thai liên tiếp được Sei Kwang Kim và cs (2001) nghiên cứu Phân tích NST cho thấy karyotyp của chồng bình thường, karyotyp của vợ mang rối loạn NST cân bằng phức tạp bao gồm NST 9, 14 và 13, có 3 điểm đứt: 9p21.2, 14q21 và 13q12.2, karyotyp của vợ là 46,XX,t(9;14;13)(p21.2,q21;q12.2) [82]

Năm 2009 Priya A.Iyer và cs đã báo cáo về một trường hợp ở người phụ nữ

25 tuổi với tiền sử sảy thai liên tiếp ba lần Khi phân tích NST phát hiện karyotyp của người phụ nữ này mang chuyển đoạn phức tạp bao gồm NST số 7, 13 và 15,

karyotyp là 46,XX,t(7;15;13)(p15;q21;q31) Trong khi đó karyotyp của bố mẹ và của chồng là hoàn toàn bình thường [74]

Năm 2011, Ngim CF, Keng WT, Ariffin R đã báo một trường hợp rối loạn phức tạp NST ảnh hưởng tới 3 thế hệ: đối tượng nghiên cứu là một bé trai có những

dị tật về kiểu hình: mặt phẳng, mắt lồi, tai nhỏ và thấp, quẹo chân, chậm nói, khi bé được 2 năm 9 tháng thì qua đời sau cơn viêm phổi Bố mẹ cậu bé có tiền sử 4 lần sảy thai liên tiếp, phân tích NST cho thấy người bố có karyotyp bình thường, người

mẹ mang rối loạn phức tạp liên quan đến NST số 7, 12 và 14, karyotyp của người

mẹ là 46,XX,t(7;12;14)(q21.2;q24.2;q13) Phân tích NST của ông bà ngoại cậu bé phát hiện ông ngoại mang rối loạn phức tạp tương tự như người mẹ và có karyotyp

là 46,XY,t(7;12;14)(q21.2;q24.2;q13) và bà ngoại cậu bé có NST bình thường Phân tích hồi cứu gia đình ông bà ngoại cậu bé có 3 lần sảy thai và có 4 người con trong

đó người anh của mẹ cậu bé vô sinh và 2 người em còn lại bình thường Như vậy rối loạn NST phức tạp cân bằng không làm thay đổi kiểu hình nhưng có thể dẫn đến giảm khả năng sinh sản của người mang nó [70]

1.4.3.7 Sự phân bố các kiểu rối loạn nhiễm sắc thể về số lượng

Năm 1982, Micheles VV, Medrano C và cs nghiên cứu NST ở 220 cặp

vợ chồng sảy thai liên tiếp đã phát hiện 5 người vợ rối loạn NST giới tính ở thể khảm có karyotyp: 45,X/46,XX/47,XXX(1/27/1);

Năm 2007 L.V.Tavokina và cs đã phân tích NST của 210 cặp vợ chồng có tiền sử thai sản khó khăn Các tác giả cũng tìm thấy 19 trường hợp rối loạn số lượng NST X và Y ở thể khảm [52]

Năm 2008, Hossem Mozdarani và cs khi phân tích NST của các cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị tật bẩm sinh đã phát hiện có 4 trường hợp mang rối loạn số lượng NST bao gồm: 1 trường hợp Klinefelter (47,XXY), 1 trường hợp mắc hội chứng XXX, 2 trường hợp đơn nhiễm NST X ở thể khảm [46]

Năm 2012, Feaza Abdel Mogib và cs đã phát hiện 2 trường hợp mang rối loạn NST về số lượng trong 73 cặp vợ chồng có tiền sử sảy thai ít nhất 2 lần: 1 trường hợp mang NST X đơn nhiễm ở thể khảm, 1 trường hợp mang NST X tam nhiễm [31]

1.4.4 Nguy cơ sinh sản của các cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị tật bẩm sinh mang rối loạn nhiễm sắc thể

Khi nghiên cứu vai trò của rối loạn NST đến sảy thai liên tiếp và sinh con bị

dị tật một số tác giả đã nhật xét rằng: rối loạn NST làm giảm khả năng sinh sản ở cả nam giới và nữ giới Bố mẹ mang rối loạn NST sẽ có nguy cơ cao sinh ra những đứa trẻ dị tật Rối loạn NST được công nhận là nguyên nhân chính dẫn đến sảy thai sớm Ở các cặp vợ chồng có tiền sử sảy thai liên tiếp có khả năng mang rối loạn NST cao hơn so với các cặp vợ chồng sinh con bình thường [19,44,57,58,66,90] Khoảng 7% các cặp vợ chồng sảy thai trên 2 lần có 1 trong 2 người mang rối loạn NST cân bằng Nếu người vợ hoặc người chồng mang rối loạn NST thì NST khó có thể ghép cặp và phân ly trong quá trình giảm phân hình thành giao tử Kết quả là giao tử mang NST rối loạn khi thụ tinh sẽ tạo ra hợp tử có bộ NST không cân bằng

Sự rối loạn NST này sẽ làm chết phôi hoặc bào thai đang phát triển đây là lý do dẫn đến hiện tượng sảy thai tự nhiên liên tiếp Tuy nhiên một vài trường hợp bào thai mang NST không cân bằng tiếp tục phát triển cho đến khi sinh thì đứa trẻ mang nhiều dị tật bẩm sinh hoặc chậm phát triển trí tuệ [86]

Theo M Azim và cs (2003), những cặp vợ chồng mang bất thường NST có nguy cơ cao có con mang rối loạn NST và là nguyên nhân chính dẫn đến sảy thai [17]

Trong một nghiên cứu của Maureen và cs (2006) khi phân tích kết quả sinh sản của các cặp vợ chồng có tiền sử sảy thai từ 2 lần trở lên (đã phân tích NST) cho thấy: 120/247 (49%) số lần sảy thai ở các cặp vợ chồng mang rối loạn NST trong khi đó tỉ lệ này là 122/409 (30%) ở các cặp vợ chồng không mang rối loạn NST Cơ hội để có một đứa con khoẻ mạnh ở những cặp vợ chồng mang rối loạn NST và không mang rối loạn NST là như nhau mặc dù nguy cơ sảy thai ở những cặp vợ chồng mang rối loạn NST cao hơn [60]

Cũng nghiên cứu về kết quả sinh sản của các cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp, Flynn H và cs năm 2013 đã cho thấy: trong 795 cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp có

28 cặp (3.52%) mang rối loạn NST, và tỉ lệ sảy thai ở nhóm này là 55.6% trong khi nhóm không mang rối loạn NST là 28.1% Trong 28 cặp vợ chồng mang rối loạn NST có 159 ca mang thai và 36 ca sống Như vậy nghiên cứu này cũng cho thấy tỷ

lệ sinh được một đứa con khoẻ mạnh ở những cặp vợ chồng mang rối loạn NST là thấp và tỷ lệ sảy thai rất cao [34]

Tuy nhiên ảnh hưởng của các rối loạn NST lên khả năng sinh sản còn phụ thuộc vào người vợ hay người chồng mang rối loạn và kiểu rối loạn, hơn nữa còn phụ thuộc vào sự kết hợp giữa người vợ và người chồng [94] Sau đây là một số nghiên cứu của các tác giả trên thế giới về nguy cơ sinh sản của các cặp vợ chồng mang rối loạn NST

1.4.4.1 Nguy cơ sinh sản ở các cặp vợ chồng mang rối loạn nhiễm sắc thể chuyển đoạn tương hỗ

Khi nghiên cứu khả năng sinh sản của các cặp vợ chồng mang chuyển đoạn cân bằng Nair SB và cs đã chỉ ra có đến 80% thai kì bị sảy và chỉ có 16% dẫn đến

sự ra đời của một trẻ sơ sinh khỏe mạnh [67]

Phân tích NST của 136 cặp vợ chồng có tiền sử sảy thai trên 2 lần U Diedrich và cs (1983) đã chỉ ra rằng chuyển đoạn NST số 1, 7 hoặc 22 có nhiều khả năng dẫn đến sảy thai trong khi đó chuyển đoạn ở các NST khác ví dụ NST số 5, 9,

14, 21 có nhiều khả năng sinh ra trẻ bị dị tật [28]

Theo A L Zarina và cs (2006) sảy thai tự nhiên là hiện tượng phổ biến chiếm tỉ lệ 1/8 các trường hợp mang thai Các tác giả cũng cho biết gần 5% các trường hợp sảy thai là do bố mẹ mang rối loạn NST chuyển đoạn cân bằng [99]

Yaliwal Laxmi V và cs đã báo cáo một trường hợp người vợ mang NST chuyển đoạn tương hỗ giữa NST số 4 và số 13 có tiền sử 2 lần sảy ở 3 tháng đầu, lần thứ 3 sinh được một bé trai dị tật qua đời sau 1 tháng, lần thứ 4 sinh được bé gái

dị tật, lần thứ 5 chấm dứt thai ở tuần 13 do phát hiện bất thường ở thai, lần thứ 6 sinh được bé gái bình thường Tác giả cho rằng việc mang NST chuyển đoạn cân bằng không gây thay đổi kiểu hình nhưng có thể làm tăng nguy cơ sảy thai và sinh

Bố mẹ mang chuyển đoạn hoà hợp tâm có thể sinh ra con cái mang dị tật sau: hội chứng Down, hội chứng Patau hoặc các dị tật khác Nếu cả bố và mẹ đều mang chuyển đoạn hoà hợp tâm thì việc có một đứa con bình thường là rất khó do tỷ lệ hình thành lên NST không cân bằng rất cao [94]

Năm 2003, M Azim và cs đã phát hiện 16 cặp vợ chồng mang chuyển đoạn hoà hợp tâm Theo nhóm nghiên cứu thì những cặp vợ chồng mang chuyển đoạn hoà hợp tâm có nguy cơ sinh con mang rối loạn NST cao và cũng là nguyên nhân chính dẫn đến sảy thai [17]

Một cặp vợ chồng có tiền sử 11 lần sảy thai liên tiếp được Anil Biricik và cs (2004) phân tích NST và lập karyotyp Kết quả người chồng mang NST chuyển đoạn hòa hợp tâm giữa NST số 15 (thuộc nhóm D) với NST số 15 (thuộc nhóm D), karyotype là 45,XY,t(15q;15q), người vợ có karyotype bình thường 46,XX Khi phân

tích tinh trùng thấy dạng n+1 và n-1 và dẫn tới hình thành hợp tử lệch bội Sự bất thường của giao tử và hình thành hợp tử lệch bội có lẽ là nguyên nhân chính dẫn đến sảy thai Trong trường hợp này không có biện pháp hỗ trợ nào để có thể sinh con bình thường và lựa chọn duy nhất là đề nghị xin tinh trùng hoặc nhận con nuôi [15]

Trong nghiên cứu của Dubey và cs năm 2005 nhóm nghiên cứu đã phát hiện

4 trường hợp chuyển đoạn hoà hợp tâm Nghiên cứu này cũng chỉ ra rằng khi chuyển đoạn hoà hợp tâm ở người mẹ thì có nguy cơ sinh sản cao hơn ở người bố Cũng trong nghiên cứu này tác giả đã ước tính nguy cơ sảy thai ở các cặp vợ chồng mang chuyển đoạn hoà hợp tâm là 25 % [30]

Selim và cs năm 2013 phân tích khả năng sinh sản của 17 cặp vợ chồng mang chuyển đoạn hoà hợp tâm đã cho thấy nguy cơ sinh sản rất cao của các cặp vợ chồng này Có tới 80% thai bị sảy, 11,1 % trẻ sinh ra còn sống và 8,9% thai chết lưu [83]

Nghiên cứu của Usha R.Dutta và cs năm 2010 cho thấy nguy cơ sinh sản trung bình là 12% nếu người vợ mang chuyển đoạn còn người chồng mang thì nguy cơ là 5% [97] Simona cũng kết luận rằng khi 1 cặp vợ chồng mang chuyển đoạn NST cân bằng thì nguy cơ sảy thai hay sinh con bị dị tật thường khoảng từ 1- 15% [86]

Các nghiên cứu được công bố trên tờ Unique 2005 cho biết: nếu người vợ mang chuyển đoạn hòa hợp tâm thì nguy cơ sinh con mang dị tật bẩm sinh là khoảng 1%, nguy cơ sảy thai hoặc thai lưu khoảng 10 – 15% và phụ thuộc vào kiểu chuyển đoạn hòa hợp tâm Trong khi đó nếu người chồng mang chuyển đoạn hòa hợp tâm thì nguy cơ cho con thấp hơn khoảng dưới 1% [94]

Các kiểu chuyển đoạn hoà hợp tâm khác nhau có nguy cơ sinh sản khác nhau Mức độ rủi ro phụ thuộc vào NST có liên quan và phụ thuộc vào việc người chồng hay người vợ mang chuyển đoạn Rủi ro cao hơn đối với trường hợp chuyển đoạn hoà hợp tâm xảy ra ở các NST tương đồng do sự hình thành lên các giao tử không cân bằng [79]

Mang chuyển đoạn hoà hợp tâm ở NST tương đồng số 13 (13q;13q) hoặc 21 (21q;21q) chỉ có cơ hội sinh con nhưng bị dị tật với hội chứng Patau hoặc hội chứng

Down mà không thể cho ra đời những đứa con bình thường [50,89] Mang chuyển đoạn hoà hợp tâm ở NST tương đồng số 14 (14q;14q) hoặc 15 (15q;15q) mang rủi

ro rất cao và họ không thể tạo ra được bất kì một đứa trẻ sống nào do giao tử không cân bằng và những phôi tạo ra có những khiếm khuyết NST không thể tương thích với cuộc sống trong tử cung Trong trường hợp này nguy cơ sinh sản cao tương tự cho cả hai giới [18]

1.4.4.3 Nguy cơ sinh sản ở các cặp vợ chồng mang rối loạn nhiễm sắc thể kiểu đảo đoạn

Đảo đoạn NST được coi là hình thức sắp xếp nhỏ trên NST không ảnh hưởng đến kiểu hình nhưng nhiều báo cáo đã đưa ra quan điểm rằng nó liên quan đến vô sinh, sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị tật [27] Một số tác giả đã quan sát thấy nguy cơ cao sinh con mắc tam nhiễm NST 21 của những người mang đảo đoạn NST số 9 [43,69]

Husslin P Huber J.Wagenbiehler P đã đưa ra nhận xét: đảo đoạn NST số 9 rất hay xảy ra trong các dạng rối loạn cấu trúc NST, tuy nhiên tác giả coi đó là một biến đổi thông thường [47]

Theo nghiên cứu của Gardner và Sultherland vào năm 1996 thì những cặp vợ chồng (người vợ hoặc người chồng) mang rối loạn NST số 9 có nguy cơ cao sinh ra con cái mang NST không cân bằng 1 – 10% [41]

Năm 2007, Farcas và cs nghiên cứu 354 cặp vợ chồng có tiền sử sảy thai liên tiếp đã phát hiện 10 nữ và 6 nam mang đảo đoạn NST số 9 Theo báo cáo này thì các đảo đoạn NST có thể bị mất hoặc sắp xếp lại trong quá trình giảm phân dẫn tới

sự hình thành các giao tử và hợp tử không cân bằng có thể dẫn tới sảy thai hoặc sinh con mang NST không cân bằng [86]

Nasrin Ghasemi và cs năm 2007 báo cáo trường hợp của hai cặp vợ chồng trong đó 1 người mang đảo đoạn NST số 9 Trường hợp đầu tiên là cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp (trong ba tháng đầu), xét nghiệm NST của người vợ cho kết quả là

46 XX,inv(9)(p11;q13) và NST của người chồng bình thường (46,XY) Cặp đôi thứ hai vô sinh không rõ nguyên nhân: NST của người vợ bình thường (46XX), NST

của chồng là 46XY,inv(9)(p11;q13) Nghiên cứu này cho biết các đảo đoạn nhỏ có thể dẫn tới sự tái tổ hợp gây chết hoặc bổ sung đoạn lớn đối với các trường hợp sảy thai không được phát hiện ở đầu thai kì Nhiều trường hợp phôi mang NST cân bằng nhưng không phát triển được có thể chỉ tồn tại trong thời gian ngắn trước khi thử thai dương tính [68]

Mikelsen M và cs (1986) [62], Daniel A và cs (1989) [26] khi nghiên cứu nguy cơ mang thai không cân bằng đã đưa ra nguy cơ sắp xếp lại NST không cân bằng ở thai 3 tháng đối với các trường hợp bố hoặc mẹ mang NST cân bằng Trong

đó, nguy cơ thai mang NST không cân bằng nếu người vợ mang đảo đoạn là 3,3% trong khi người chồng mang đảo đoạn thì tỉ lệ này là 0% nhưng tỉ lệ thai mang đột biến NST cân bằng là 74-79%

1.5 Tình hình nghiên cứu bộ nhiễm sắc thể ở những cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị tật bẩm sinh ở Việt Nam

Nghiên cứu NST hiện nay là một mảng nghiên cứu quan trọng của ngành Y học di truyền và đang phát triển mạnh mẽ ở nước ta Những nghiên cứu về NST vừa

có ý nghĩa khoa học vừa có ý nghĩa thực tiễn nhằm xác định những rối loạn về số lượng và cấu trúc NST liên quan đến các hiện tượng di truyền đang ngày càng được tiến hành rộng rãi

Trong những năm gần đây, sự xuất hiện của các phòng xét nghiệm NST tại nhiều trung tâm tư vấn di truyền và các bệnh viên giúp cho việc chẩn đoán trước, trong và sau khi sinh những bệnh, hội chứng có liên quan đến rối loạn NST được thực hiện dễ dàng hơn

Năm 2002 Nguyễn Văn Rực và cs sử dụng phương pháp nhuộm băng G đã phân tích NST ở 30 cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị tật bẩm sinh, kết quả đã phát hiện 8 trường hợp mang NST chuyển đoạn cân bằng [5]

Trịnh Văn Bảo và cs (2002) phân tích NST và lập karyotyp của 195 cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị tật Kết quả các tác giả đã phát hiện 4 trường hợp mang NST chuyển đoạn hòa hợp tâm bao gồm 1 người vợ mang chuyển đoạn giữa NTS số 13 (thuộc nhóm D) với NST số 13 (thuộc nhóm D), karyotyp là

45,XX, t(13q;13q); 2 trường hợp người chồng cũng mang NST chuyển đoạn giữa NST

số 13 (thuộc nhóm D) với NST số 13 (thuộc nhóm D), karyotyp là 45, XY, t(13q;13q);

1 trường hợp người chồng mang NST chuyển đoạn giữa NST số 13 (thuộc nhóm D) với NST số 21 (thuộc nhóm G), karyotyp là 45, XY, t(13q;21q) [1]

Nguyễn Văn Rực (2004) khi phân tích NST và lập karyotyp ở 100 cặp vợ chồng có con mắc hội chứng Down đã phát hiện 1 cặp vợ chồng, trong đó người

vợ có karyotyp bình thường (46, XX); người chồng mang NST chuyển đoạn hòa hợp tâm giữa NTS 21 (thuộc nhóm G) với NST 21 (thuộc nhóm G), karyotyp là

45, XY, t(21q;21q) Tác giả cũng cho biết nguy cơ của cặp vợ chồng này là 100% sinh con Down [6]

Nguyễn Nam Thắng và cs (2004) đã báo cáo về tình hình sảy thai, thai chết lưu ở một số xã của tỉnh Thái Bình và đặc điểm NST của một số cặp vợ chồng sảy thai, thai chết lưu Khi phân tích NST bằng kỹ thuật nhuộm băng G cho 34 người vợ

và 33 người chồng có tiền sử bị sảy thai Trong số đó đã phát hiện có 3 người mang NST chuyển đoạn hòa hợp tâm dạng cân bằng (2 nữ, 1 nam), 64 trường hợp còn lại

có karyotype bình thường [11]

Phan Thị Hoan (2005) khi phân tích karyotyp của 2 cặp vợ chồng sinh 2 con mắc hội chứng Down Kết quả: 1 cặp vợ chồng có karyotyp bình thường người chồng là 46, XY, người vợ là 46, XX; 1 cặp vợ chồng sinh con Down do chuyển đoạn hòa hợp tâm giữa NST số 13 với NST số 21 thì người vợ mang NST chuyển đoạn có karyotyp là 45, XX, t(13q;21q), người chồng có karyotyp bình thường 46, XY [3]

Nguyễn Văn Rực và cs (2006) phân tích NST ở 69 cặp vợ chồng (138 trường hợp) sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị tật bẩm sinh Kết quả thu được có 7 trường hợp bị rối loạn NST cân bằng chiếm 5,07% bao gồm 3 nữ và 4 nam Trong đó có 6 trường hợp là rối loạn về cấu trúc (3 chuyển đoạn tương hỗ và 3 chuyển đoạn hòa hợp tâm), 1 trường hợp mang rối loạn về số lượng NST [7]

Cũng trong năm 2006 Nguyễn Văn Rực đã báo cáo nguy cơ bất thường về sinh sản ở một số cặp vợ chồng mang NST chuyển đoạn cân bằng Trong số 9 cặp

vợ chồng có tiền sử sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị tật bẩm sinh đã được phát hiện là mang NST chuyển đoạn cân bằng Trong đó có 4 trường hợp gặp ở người vợ

và 5 trường hợp gặp ở người chồng Trong 9 trường hợp mang NST chuyển đoạn này có 8 trường hợp là kiểu chuyển đoạn hòa hợp tâm và 1 trường hợp là kiểu chuyển đoạn tương hỗ [8]

Nguyễn Văn Rực (2008) phân tích NST ở 157 cặp vợ chồng sinh con Down

đã phát hiện 3 cặp vợ chồng (chiếm tỷ lệ 1,9%) có karyotyp bất thường mang NST chuyển đoạn hòa hợp tâm Một cặp mang NST chuyển đoạn hòa hợp tâm giữa NST

số 14 với NST số 21, 2 cặp (người chồng hoặc người vợ) mang NST chuyển đoạn hòa hợp tâm giữa NST số 21 với NST số 21 [9]

Nguyễn Thị Nhâm (2011) phân tích bộ NST ở 350 cặp vợ chồng sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị tật bẩm sinh đã phát hiện 24 cặp vợ chồng (chiếm tỉ lệ 6,86%)

có biểu hiện rối loạn NST trong đó 19 trường hợp mang NST chuyển đoạn, 1 trường hợp mất đoạn , 1 trường hợp đảo đoạn NST số 9, 3 trường hợp rối loạn số lượng NST giới tính [4]

CHƯƠNG 2 - ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 Đối tượng nghiên cứu

Từ tháng 10 năm 2008 đến tháng 10 năm 2013, tổng số 1847 cặp vợ chồng có tiền sử sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị tật bẩm sinh từ các bệnh viện Phụ sản Trung Ương, bệnh viện Phụ sản Hà Nội, Khoa sản bệnh viện Bạch Mai… đã gửi đến bộ môn Y sinh học – Di truyền , trường Đại học Y Hà Nội yêu cầu xét nghiệm NST

2.1.1 Tiêu chuẩn chọn bệnh nhân

Những cặp vợ chồng có tiền sử sảy thai liên tiếp ít nhất từ hai lần trở lên hoặc sảy thai và sinh con bị dị tật bẩm sinh

2.1.2 Tiêu chuẩn loại trừ

Những cặp vợ chồng có tiền sử mắc các bệnh mãn tính (viêm gan siêu vi trùng, bệnh đái đường…) hoặc có tiếp xúc với các loại hóa chất độc, thuốc bảo vệ thực vật, nghiện rượu hoặc thuốc lá… hoặc những cặp vợ chồng bị sảy thai do tai nạn lao động hoặc giao thông v v.…

2.2 Phương pháp nghiên cứu

2.2.1 Lập hồ sơ bệnh án di truyền

Những cặp vợ chồng có tiền sử sảy thai liên tiếp và sinh con bị dị tật bẩm sinh đã được thăm khám lâm sàng, khai thác về tiền sử gia đình, tiền sử bản thân bao gồm: tuổi, nghề nghiệp, các bệnh mãn tính (bệnh đái tháo đường, các bệnh về tuyến giáp…), các bệnh nhiễm trùng (viêm gan siêu vi trùng, các bệnh phụ khoa…),

có tiếp xúc với các hóa chất độc, thuốc bảo vệ thực vật, có nghiện rượu, thuốc lá…

và tiền sử về sản khoa…

2.2.2 Phương pháp phân tích nhiễm sắc thể và lập karyotyp

2.2.2.1 Nuôi cấy tế bào bạch cầu lympho máu ngoại vi theo phương pháp của Hungerford D.A (1965) có cải tiến [72]

Lấy 2ml máu tĩnh mạch cho vào ống li tâm đã được tráng bằng heparin đậy nút cao su kín và để vào phòng vô trùng

Các bước nuôi cấy phải được thực hiện trong buồng cấy tế bào trong điều kiện

vô trùng

Dùng ống hút nhỏ giọt pipet Pasteur cho 6 – 8 giọt máu toàn phần vào túyp nuôi cấy có chứa 6ml môi trường nuôi cấy PB – max (F12, huyết thanh bê và PHA - Phytohemagglutinin) Đậy nắp rồi để túyp nuôi cấy trong tủ ấm 37oC thời gian 72 giờ Đến giờ thứ 70 bổ sung vào túyp nuôi cấy 1ml dung dịch Colcemid (2 giọt) nồng độ 1µg/1ml để tích lũy nhiều cụm kỳ giữa và thu hoạch tế bào ở giờ thứ 72

2.2.2.2 Thu hoạch tế bào

- Túyp nuôi cấy được lấy ở tủ ấm 37oC được li tâm với tốc độ 800 – 1000 vòng/phút trong 10 phút

- Loại bỏ dịch phía trên giữ lại phần cặn lắng chứa các tế bào, 30ml dung dịch nhược trương KCl 0,075 M cho vào túyp nuôi cấy và để trong tủ ấm 37oC thời gian khoảng 30 - 45 phút để phá vỡ màng tế bào

- Li tâm, loại bỏ phần dịch phía trên, giữ lại phần cặn chứa nhân tế bào và các cụm NST ở kỳ giữa

- Định hình tế bào bằng 10 ml dung dịch Carnoy (3 methanol : 1 acid acetic ) rồi li tâm loại bỏ dịch nổi ở phía trên (3 lần)

- Lần cuối cùng khi mẫu vật đã sạch, sau khi li tâm loại bỏ dịch ở phía trên, dùng ống hút nhỏ giọt pipet Pasteur hút lấy phần cặn chứa nhân tế bào và các cụm

kỳ giữa và dàn đều lên lam kính sạch đã được để lạnh

- Để tiêu bản khô tự nhiên rồi tiến hành nhuộm tiêu bản

2.2.2.3 Phương pháp nhuộm tiêu bản bằng băng G theo Seabright M (1975) [80]

- Nhuộm tiêu bản bằng phương pháp nhuộm băng G theo phương pháp của Seabright M (1975)

Chuẩn bị dụng cụ và hóa chất:

Dụng cụ: 5 cốc thủy tinh loại 100ml để đựng hóa chất và thuốc nhuộm, 2 cốc

mỏ thủy tinh loại 500ml đựng nước rửa tiêu bản

Hóa chất: NaCl (0,15N), Trypsin 1: 250 (Difco) KH2PO4, Na2HPO4.2H2O, Giemsa