Nghiên cứu nuôi trồng một số chủng nấm Bào ngư đen Pleurotus cystidiosus sub. abalonus nhập nội và bản địa Việt Nam

Đây là hai loài trong phân chi Coremiopleurotus Hillber 1982 và đặc biệt là vào năm 1999 tại Bảo Lộc-Lâm Đồng PGS.TS Lê Xuân Thám đã phát hiện được một loài nấm bào ngư đen lạ, có kích

để tôi thực hiện đề tài và làm tốt công việc sau này

Thầy PGS.TS Lê Xuân Thám, thầy đã tận tình hướng dẫn và cung cấp cho tôi những tư liệu quý giá

Anh Phạm Ngọc Dương, Cử Nhân Công Nghệ Sinh Học, Đại học Nha Trang đang công tác trên Vườn Quốc Gia Cát Tiên đã giúp đỡ tôi rất nhiều trong đợt thực tập giáo trình

Bà Trần Lê Thu Thảo, giám đốc công ty TNHH TM DONA cùng anh chị em nhân viên công ty đã tạo điều kiện tốt nhất để tôi hoàn thành đợt thực tập

Các bạn trong tập thể lớp 45 CNSH, đã động viên giúp đỡ tôi trong suốt khóa học

Tôi xin ghi nhận những sự giúp đỡ đó

Nha Trang, tháng 11 năm 2007

Bùi Văn Dích

MỤC LỤC

Trang

Trang bìa phụ

Lời cám ơn

Mục lục

Danh mục các bảng i

Danh mục các hình ii

Mở đầu 1

Chương 1 Tổng quan tài liệu tài nguyên và công nghệ nấm bào ngư pleurotus spp 3

1.1 Hệ thống học chi nấm bào ngư Pleurotus (Fr.) Kummer 3

1.2 Hệ thống học phân chi Coremiopleurotus Hilber-Đặc điểm lịch sử lưỡng danh cho thể hữu tính Teleomorph và thể vô tính Anamorph của các loài 11

1.3 Thành phần dinh dưỡng của 3 loài nấm Bào ngư đen 15

1.4 Vai trò của công nghệ nấm Bào ngư ở Việt nam 17

Chương 2 Vật liệu và phương pháp nghiên cứu 21

2.1 Đối tượng nghiên cứu 21

2.2 Vật liệu, hoá chất và thiết bị 21

2.2.1 Dụng cụ và trang thiết bị 21

2.2.2 Nguyên vật liệu và hoá chất 22

2.3 Phương pháp nghiên cứu 22

2.3.1 Khảo sát tốc độ lan, đặc điểm của tơ nấm và hình thái Coremia của 3 đối tượng nghiên cứu trên môi trường thạch 22

2.3.2 Khảo sát tốc độ lan và đặc điểm tơ nấm cuả 3 đối tượng nghiên cứu trên môi trường hạt 23

2.3.3 Quá trình nuôi trồng khảo nghiệm 24

2.3.3.1 Xây dựng quy trình nuôi trồng 24

2.3.3.2 Tính hiệu suất sinh học của 3 loài nấm Bào ngư đen tại vùng Củ Chi –Tp.HCM 25

2.3.4 Phương pháp thu nhận kết quả 25

2.3.5 Phương pháp xử lý kết quả 25

Chương 3 Kết quả và thảo luận 26

3.1 Kết quả phân tích hình thái giải phẫu và bào tử 26

3.1.1 Loài chuẩn Pleurotus cystidiosus O.K Miller(1969) 26

3.1.2 Loài Pleurotus abalonus Han, Chen & Cheng(1974) 26

3.1.3 Loài Pleurotus blaoensis Thám sp.nov(1999) 27

3.2 Kết quả nhân giống và nuôi trồng 29

3.2.1 Trên môi trường thạch 29

3.2.1.1 Tốc độ lan và đặc điểm tơ nấm của 3 đối tượng nghiên cứu 29

3.2.1.2 Hình thái đại thể Coremia của 3 đối tượng nghiên cứu 32

3.2.2 Tốc độ lan và đặc điểm tơ nấm trên môi trường hạt 34

3.2.3 Kết quả nuôi trồng khảo nghiệm 37

3.2.3.1 Sự phát triển của tơ nấm trong môi trường cơ chất mùn cưa cao su và quy trình nuôi trồng 37

3.2.3.2 Hiệu suất sinh học của 3 đối tượng nghiên cứu 45

Chương 4: Kết luận và kiến nghị 46

4.1 Kết luận 46

4.2 Kiến nghị 47

Tài liệu tham khảo

DANH MỤC CÁC BẢNG

Trang

Bảng 1.1 Thành phần dinh dưỡng của nấm Bào ngư (%) 16 Bảng 1.2 Thành phần giá trị dinh dưỡng của 3 loài nấm bào ngư đen

thuộc phân chi Coremiopleurotus (%) 16

Bảng 3.1 Tốc độ lan tơ của 3 loài bào ngư đen trên môi trường thạch .28 Bảng 3.2 Tốc độ lan của tơ nấm với 3 đối tượng nghiên cứu trên môi trường hạt,

có bổ xung cám gạo 33 Bảng 3.3 Tốc độ lan tơ của 3 đối tượng nghiên cứu trên môi trường cơ chất tổng

hợp 38

Bảng 3.4 Hiệu suất sinh học của 3 đối tượng nghiên cứu 44

DANH MỤC CÁC HÌNH

Trang

Hình 1.1 Sơ đồ quan hệ chủng loại phát sinh hệ thống của chi Pleurotus

(Hilber 1982) 5

Hình 3.1 Nấm P blaoensis thu hái từ tự nhiên 26

Hình 3.2 Ống nghiệm cấy chuyền từ t rái qua phải :

P cystidiosus ; P abalonus ; P.blaoensis 28

Hình 3.3 Sự tăng trưởng sợi nấm của 3 loài bào ngư đen trên môi trường thạch 29

Hình 3.4 Thể Anamorph (pha bất toàn) của 3 đối tượng nghiên cứu 32

Hình 3.5 Sự lan của tơ của 3 loài bào ngư đen trong môi trường hạt 34

Hình 3.6 Tơ nấm của 3 loài trong môi trường hạt 34

Hình 3.7 Bịch phôi loài P cystidiosus 36

Hình 3.8 Bịch phôi loài P abalonus 37

Hình 3.9 Bịch phôi loài P blaoensis .37

Hình 3.10 Sự lan tơ của 3 loài bào ngư đen trên môi trường cơ chất tổng hợp 38

Hình 3.11 Thể quả loài P cystidiosus .40

Hình 3.12 Thể quả loài P abalonus .40

Hình 3.13 Thể quả loài P blaoensis còn non 41

Hình 3.14 Thể quả loài P blaoensis trưởng thành 42

Hình 3.15 Quy trình nuôi trồng nấm 43

Mở Đầu

Trong những năm gần đây, việc nghiên cứu nuôi trồng nấm ăn có bước phát triển nhảy vọt ở nhiều nước trong đó có Việt Nam Nước ta là một nước nông nghiệp với nguồn phụ phế phẩm giàu chất xơ (cellulose) và chất gỗ (lignin) hết sức phong phú Tỷ lệ nông dân chiếm phần lớn dân số lại có nhiều thời gian nông nhàn

và rất muốn có thêm nghề phụ để nâng cao thu nhập Nước ta lại có nhiều vùng khí hậu không giống nhau và vì vậy có thể trồng nấm quanh năm với nhiều loại nấm ăn

và nấm dược liệu khác nhau

Sản phẩm nấm ăn và nấm dược liệu là những mặt hàng xuất khẩu có thị trường rộng lớn ít bị cạnh tranh và nhu cầu tiêu thụ ở tất cả các nước ngày càng tăng , trong khi các phụ phẩm nông-lâm nghiệp ngày càng khan hiếm ở các nước công nghiệp hóa và các nước có mùa đông giá lạnh kéo dài

Rõ ràng chúng ta có nhiều lợi thế về nghề nấm, tuy nhiên để lựa chọn được giống nấm có chất lượng tốt, hiệu quả kinh tế cao và phù hợp với đặc điểm khí hậu từng vùng miền của đất nước vẫn là một nhiệm vụ đối với các nhà khoa học

Nấm Bào ngư hay nấm Sò (Abalone, Oyster Mushroom)-Hiratake, Houbitake hay Houbiko (theo tiếng Nhật) là loại nấm ăn ngon nổi tiếng, gồm nhiều

loài trong chi Pleurotus ( viết tắt (P) (Fr) Kummer, họ Pleurotaceae Kuhner et

Romagn.: Kuhner 1980 Lịch sử nuôi trồng các loài nấm bào ngư có thể tính từ

khoảng 1900 (theo Chang, 1993) khi Falk thành công với loài đầu tiên: Pleurotus ostreatus Trong nhóm có Coremia thì lần đầu tiên P cystidiosus O.K Miller được

công bố là loài mới và được nuôi trồng thành công cách đây gần 40 năm (1969) và

P abalonus Han, Chen et Chang được xác định là loài mới cách đây hơn 30 năm

(1974) và được nuôi trồng thành công Đây là hai loài trong phân chi

Coremiopleurotus Hillber (1982) và đặc biệt là vào năm 1999 tại Bảo Lộc-Lâm

Đồng PGS.TS Lê Xuân Thám đã phát hiện được một loài nấm bào ngư đen lạ, có

kích thước vào loại khổng lồ, giám định thuộc phân chi Coremiopleurotus Hillber

(1982) Trên cơ sở tổng hợp các tài liệu và giám định mẫu chuẩn, đã xác định nấm bào ngư đen khổng lồ trên có những nét tương đồng và khác biệt với các loài khác

trong cùng phân chi, xác nhận đây là một loài nấm bào ngư mới cho khoa học:

Pleurotus blaoensis Thám, sp Nov (Lê Xuân Thám,1999) Các loài trong phân chi Coremiopleurotus thường ưa nhiệt rất thích hợp cho việc trồng quanh năm ở miền

Nam và mùa ấm ở miền Bắc, hơn nữa các loài trong phân chi này cho năng suất cao, hương vị thơm ngon khi nấu ăn, do vậy thường được người tiêu dùng ưa chuộng

Gần đây một số cá nhân, trại nấm tư nhân ở nước ta đã trồng thành công các

loài Pleurotus cystidiosus, Pleurotus abalonus, tuy nhiên đây là các loài nhập nội

với nguồn giống có xuất xứ không rõ ràng, không có chứng nhận giống chuẩn nên chất lượng không đảm bảo Điều này tiềm ẩn mối nguy rất lớn, đó là khi chúng ta xuất khẩu ra thế giới rất dễ bị các công ty nước ngoài kiện về “bản quyền” giống nấm, hay không đáp ứng chất lượng bị trả về Khi đó sẽ dẫn đến phá sản gây thiệt hại nặng nề về kinh tế cũng như niềm tin vào nghề trồng nấm

Vậy để khắc phục được điều này, chúng ta nên mua được giống chuẩn từ tổ chức khoa học có uy tín, có giấy cam kết rõ ràng và tốt hơn cả chúng ta phải tự mình xây dựng giống chuẩn các giống nấm nói chung và giống nấm Bào ngư đen nói riêng

Được sự đồng ý của Ban chủ nhiệm khoa Chế Biến, bộ môn Công Nghệ Sinh Học và thầy PGS.TS Lê Xuân Thám hướng dẫn, tôi thực hiện đề tài: “ Nghiên cứu nuôi trồng một số chủng nấm Bào ngư đen Pleurotus cystidiosus sub abalonus nhập nội và bản địa Việt Nam”

Do thời gian và kiến thức của bản thân còn hạn chế, đề tài không thể tránh được những thiếu sót nên tôi rất mong nhận được mọi ý kiến góp ý để đề tài được hoàn

chỉnh hơn

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU TÀI NGUYÊN

VÀ CÔNG NGHỆ NẤM BÀO NGƯ PLEUROTUS SPP

1.1 Hệ thống học chi nấm bào ngư Pleurotus (Fr.) Kummer

Chi Pleurotus (Fr.) Kummer, theo hệ thống của Julich (1981), là chi chuẩn

của Họ Bào ngư Pleurotaceae Kuhner et Romagnesi: Kuhner, 1980, thuộc về Bộ nấm nhiều lỗ Polyporales Gauman (1926) rất rộng, trái ngược với hệ thống của Singer (1986) để trong Họ Polyporaceae (Fr.) Fr., thuộc Bộ nấm tán Agaricales Clements (1909) cũng rất lớn Thực ra mối quan hệ chặt chẽ giữa hai taxon lớn này

đã được thừa nhận rộng rãi Trong khi Singer cho rằng Agaricales phát sinh từ Aphyllophorales (trong đó đã bao hàm cả Polyporales), thì Julich cũng cho rằng Họ Pleurotaceae thể hiện như một khâu chuyển tiếp trung gian giữa Polyporales và Agaricales Điều đó có nghĩa là các tác giả về thực chất không mâu thuẫn nhau, mà thống nhất coi nấm Bào ngư nằm ở miền ranh giới giữa nhóm nấm lỗ (polyporoid)

và nấm tán (agaricoid), với chi chuẩn dưới đây

Pleurotus (Fr.) Kummer, Fuhr Pilzk p 24, 1871

Tuy nhiên Singer (1986) vẫn đề nghị dùng tên bảo tồn:

Pleurotus (Fr.) Quél.,

Champ Jura Vosg p 62, 1872 em., nomen conservandum

Agaricus trib Pleurotus Fr., Syst Mycol 1: 178, 1821

Crepidotus Nees: S.F Gray, Nat Arr Brit Pl 1: 616, 1821 (đề nghị bỏ) Cyclopleuropus Van Hasselt, Alg Konst en Letter-Bode 15: (23), 1824

(công bố không hiệu lực; chuẩn: “Merulius cyclopleuropus ”

= P dactyliophorus Lév.-L)

Pleurotus Quél., Enchir., p 147, 1886 (homonym & synonym)

Dendrosarcus Paulet ex Kunze, Rev Gen Pl 2: 462, 1889 nom nud

Antromycopsis Pat & Trabut, Bull Soc Myc Fr 13: 215, 1897

(thể bất toàn của Sect Coremiopleurotus, xem Pollack & Miller, Mem

N.Y Bot Gard 28: 174-178, 1976)

Lentodiopsis Bubák, Hedwigia 43: 169, 1904

(chuẩn: L albida Bubák, l.c.)

Lentodiellum Murr., Mycologia 7: 216, 1915

(chuẩn: Panus concavus Berk.)

Nothopanus Sing., Mycologia 36: 364, 1944

?Pterophyllus Lév., Ann Sc Nat III 2: 178, 1844 (chuẩn: P bovei Lév.)

Như vậy có đến trên 10 lần tên chi được hiệu chỉnh, trong đó giữa 2 tên ưu tiên được xét chỉ đề nghị cách nhau 1 năm (1871 bởi Kummer, nhà nấm học người Đức và 1872 bởi Quélet, nhà nấm học người Pháp) Nếu theo tiến trình lịch sử thì tổ

hợp danh pháp Pleurotus (Fr.) Kummer tỏ ra hợp lý hơn

Đây là chi phân bố toàn thế giới (cosmopolitan), có mối quan hệ rất chặt chẽ

với các chi gần gũi Lentinus và Panus Tuy nhiên ranh giới hình thái giải phẫu giữa

chúng rất khó vạch ra rõ ràng được, do đó gần đây các nhà nấm học Hoa kỳ, Anh và Nhật bản đã vận dụng các dẫn liệu cấu trúc gen (DNA), các đặc trưng sinh học-di truyền và hệ izozymes, allozymes, đặc biệt là laccase ngoại bào cho khảo cứu đánh giá lại hệ thống học các nhóm này (Bresinsky et al., 1987; May & Royse, 1988; Magae et al., 1990; Petersen, 1993; Hibbett et al., 1993, 1997, 1998) Gần đây, bắt đầu từ thập niên 90, nhóm nghiên cứu của Vilgalys ở Đại học Duke, USA đang đi

sâu phân tích quá trình phân hóa phân tử và đặc tính của các nhóm loài Pleurotus

Đã có 2 cách tiếp cận cổ điển cho vấn đề này: hoặc dựa vào sự có mặt hay

vắng mặt metuloid làm đặc trưng chính để phân định Pleurotus với Panus, và Lentinus được duy trì trên cơ sở những sai biệt đại thể theo các phương thức truyền

thống; hoặc dựa vào cấu trúc của lớp mô bất thụ trên thể sinh sản mà phân định các chi Sau khi kiểm tra lại toàn bộ các khóa phân loại loài với rất nhiều mẫu chuẩn bổ sung, Singer (1986) đã ngả sang hướng thứ hai, vì rằng ông nhận thấy đặc điểm metuloid tỏ ra không ổn định

Hiện trạng hiểu biết về Pleurotus còn chưa đầy đủ, chưa có một chuyên khảo

hiện đại toàn thế giới, dù rằng Hilber đã công bố một cuốn sách tuyệt vời (1982), song chủ yếu mô tả các loài châu Âu, thêm vào một số taxon châu Á, châu Mỹ, tập

trung trong “Pleurotus eryngii complex” với khoảng 15 loài Trên cơ sở đó, ông đề

nghị một hệ thống chủng loại phát sinh 3 phân chi (subgenus): Lentodiopsis, Coremiopleurotus và Pleurotus, trong đó không bao gồm Section Lentodiellum với

các mối quan hệ phác họa như trên Hình 1

Hình 1.1 Sơ đồ quan hệ chủng loại phát sinh hệ thống của

chi Pleurotus (Hilber 1982)

Theo đó, các loài thuộc phân chi Pleurotus và Coremiopleurotus không có bao (ohne Velum) rõ ràng, và các loài trong Lentodiopsis có bao rõ (mit Velum) Cũng theo đó, các loài Lentodiopsis được coi là tiến hóa hơn với hệ sợi luôn là dimitic Các loài Coremiopleurotus, theo nhận định của chúng tôi, có lẽ nguyên

thủy hơn cả bởi chỉ là monomitic (đặc điểm này không phải luôn luôn ổn định), và quan trọng hơn chúng luôn có thể quả vô tính, bởi đặc tính xen kẽ của pha bất toàn

trong vòng đời Các loài thuộc phân chi chuẩn Pleurotus (chiếm tỷ lệ cao nhất) thì

dàn trải trong một khoảng rộng, không có thể quả vô tính

Việc nhiều tác giả xác lập các loài mới mà về sau kiểm tra lại thường trùng

với loài P cystidiosus, P eryngii, P dryinus, và do đó có khá nhiều synonym cho

thấy mối quan hệ chặt chẽ giữa các tổ hợp loài trong cả 3 phân chi, và bởi thế có cơ

sở để tán thành quan điểm của Hilber cho rằng Coremiopleurotus là khâu trung gian trong quá trình phân hóa của toàn bộ chi Pleurotus Theo nhận định của chúng tôi, thậm chí Coremiopleurotus có thể còn là nhóm khởi sinh của toàn bộ chi Pleurotus

Điều này đòi hỏi phải khảo sát kỹ hơn nữa các loài trong phân chi

Coremiopleurotus, mà nội dung cơ bản của luận văn này là một đóng góp khởi đầu Tuy nhiên, giới hạn khối lượng của chi Pleurotus chưa được thừa nhận rộng

rãi Singer không đồng ý với Hilber và tiếp tục khẳng định vị trí của Section

Lentodiellum trong chi Pleurotus, giám định hiệu chỉnh ít nhất 38 loài của riêng cá

nhân ông khảo cứu kỹ lưỡng, sắp xếp trong 6 Section sau đây:

Sect 1 Lepiotarii (Fr.) Pilát, in: Kaviná & Pilát, 1935, tức là chi Lentodiopsis

Bubák, hay phân chi Lentodiopsis (Bubák) Hilber, 1981 Các loài đều có bao và

cuống tách biệt rõ Không tạo thể bó Synnematoid Hệ sợi ở thể quả trưởng thành là dimitic

1 Loài chuẩn (Type species):

P dryinus (Pers.: Fr.) Kummer

P corticatus (Fr.: Fr.) Quél

P pometi (Fr.) Quél var tephrotrichus (Fr.: Secr.) Gill

P albertinii (Fr.) Quél (Lentodiopsis albida Bubák)

2 P rickii Bres

3 P lindquistii Sing

Sect 2 Calyptrati Sing (1962): Tán nấm có bao; cuống tiêu giảm mạnh; trama

dạng phiến bất thường, phần lớn hệ sợi thành dày, có sợi cứng dimitic không phân nhánh (theo Stankvicová), cũng có các sợi cứng dạng cành cây (buộc kết lại?) (theo Hilber)

4 Loài chuẩn duy nhất:

P calyptratus (Lindb in Fr.) Sacc (Agaricus, Fr.; Tectella, Sing 1943) Sect 3 Pleurotus: không có bao rõ nhưng thường thì có cuống rõ ràng Không

tạo thể bó Synnematoid Hệ sợi ở thể quả trưởng thành là monomitic hoặc dimitic (có nhiều loài còn chưa rõ) Bụi bào tử màu trắng đến trắng ngà hoặc tím nhợt, thường là màu trắng rồi ngả sang tím bầm nhợt hoặc nhợt xám, ít khi có màu hồng

5 Loài chuẩn:

P ostreatus (Jacq.: Fr.) Kummer

*Các loài có hệ sợi monomitic:

P ostreatus (Jacq.: Fr.) Kummer var ostreatus và var columbinus

(Quél apud Bres.) Quél

6 P pulmonarius (Fr.) Quél

7 P citrinopileatus Sing

8 P flabellatus (Berk & Br.) Sacc

9 P eugrammus (Mont.) Dennis

10 P eryngii (D.C.: Fr.) Quél

11 P subsapidus (Murr.) Murr

*Các loài có hệ sợi dimitic:

12 P ostreatoroseus Sing

13 P opuntiae (Dur & Lév.) Sacc

14 P macropus Bgl

(đây có lẽ là P cornucopiae (Paulet: Fr.) Rolland sensu Kuhn & Rom.,

Hilber vix Paulet, Fr.) *Các loài có hệ sợi chưa rõ:

15 P laciniatocrematus (Speg.) Speg

16 P euosmus (Berk apud Hussey) Sacc

17 P phellodendri Sing

18 P araucariicola Sing

19 P pantoleucus (Fr.) Gillet

20 P prometheus (Berk & Curt.) Sacc

21 P yuccae Maire (có thể)

22 P convivarum Dunal & Delille apud Lagarde

23 P parthenopeius (Comes) Sacc

24 P salignus (Pers.: Fr.) Kummer

(tuy nhiên 4 loài nêu trên trong đó đặc biệt là loài sau có thể đồng nhất với P ostreatus)

Cũng tương tự thế có thể bao gồm cả: P importatus Henn và P gemellarii

(Inz.) Sacc

25 P lobulatus (Lév.) Sacc., đây lại có thể tên cũ hơn của P flabellatus

(Sect 4 Coremiopleurotus Hilber) st.n (subgen Coremiopleurotus Hilber,

Gattung Pleurotus, p 215, 1982): Không có bao rõ, có cuống phía bên hoặc gần vào

tâm, hoàn chỉnh hoặc phân nhánh Tạo thể quả vô tính dạng thể bó Synnematoid và

có bào tử vô tính màng dày (Chlamydospores) Hệ sợi là monomitic Bụi bào tử màu trắng hoặc nhợt, màu kem, không bao giờ có màu bầm sẫm hay hồng Cheilocystidia và dermatocystidia rất phát triển.120

26 Loài chuẩn:

P cystidiosus O.K Miller

27 P abalonus Han, Chen & Cheng

Có lẽ đây chỉ là một chủng địa lý của loài chuẩn mà thôi

Sect 5 Lentodiellum (Murr.) Sing (chi Lentodiellum Murr.): Có hoặc không

có bao gốc, nếu có thì có cả lông cứng và màu trắng (hơi ngả vàng), có hệ sợi kép

Hệ sợi không bao giờ là monomitic, đa số là amphimitic (hệ sợi kép), có sợi bện cứng, hoặc dimitic Có hoặc không có cuống tách biệt Không tạo thể bó Synnematoid Bụi bào tử màu trắng kem, không bầm sẫm và cũng không nâu hồng Tán và cuống về cơ bản màu trắng, song đôi khi có màu hừng đỏ quế, màu nâu, nâu vàng hay nâu rỉ Cuống đôi khi phân nhánh trên một gốc chung

28 Loài chuẩn:

*Các loài không có metuloid:

P concavus (Berk.) Sing (= Panus concavus Berk.; Panus, Berk.;

Lentodiellum, Murr.; Clitocybe augustinensis Sing acc to Corner)

29 P levis (Berk & Curt.) Sing (Panus, B & C.)

30 P strigosus (Berk & Curt.) Sing (cũng rất gần với loài đầu)

31 P hirtus (Fr.) Sing (Agaricus Fr non Secr nec Wallr.; Panus, Fr.)

32 P fockei (Miquel) Sing (Lentinus Miquel; L striatulus Lév non

Pleurotus striatulus (Pers.: Fr.) Quél.; L calvescens Berk.)

33 P calyx (Speg.) Sing (Clitocybe, Speg.)

34 P sajor-caju (Fr.) Sing (Agaricus, Fr.; Lentinus, Fr.; L exilis Klotzsch:

Fr.; L murrayi Kalchbr & MacOwan)

35 P squarrosulus (Mont.) Sing

(Lentinus, Mont.; L subnudus Berk.; L curreyanus Sacc & Cub.; L manipularis Berk & Br.;

L cretaceus Berk & Br.; L lobatus Berk & Br.; L multiformis Berk & Br.;

L inconspicuus Berk.;L bavianus Pat.)

?(36) P dactyliophorus (Lév as Lentinus) và

?(37) P leucochrous (Lév as Lentinus) thuộc Section này, song rất có thể đồng

nhất với

P sajor-caju hoặc P squarrosulus

*Các loài có nhiều metuloid rõ ràng:

(38) 36 P floridanus Sing

(39) 37 P subtilis (Berk.) Sing

(Lentinus, Berk., J Linn Soc (Bot.) 15: 50, 1876)

Sect 6 Tuberregium Sing (1961): Tán nấm có sắc tố rõ và đậm hơn các loài ở

Sect 5; bao mỏng mảnh; cuống rõ ràng ở lệch bên hoặc ít nhiều gần tâm Không tạo thể bó Synnematoid Hệ sợi là dimitic, có sợi cứng Nấm mọc trồi lên từ thể hạch Pachyma

Đồng thời chúng tôi cũng đề nghị đưa thêm vào Coremiopleurotus một loài

mới tìm thấy ở Bảo lộc (Blao), Lâm đồng, Việt nam:

40 P blaoensis Thám, sp nov (1999)

Nếu tính đến công trình của Corner (1981), Pegler (1976, 1981, 1983), có thể trên 10 loài nữa của khu hệ Malaysia, Pakistan, Đông Phi, cần được kiểm tra lại

và bổ sung thêm vào chi Pleurotus Thực vậy, danh mục các loài mới do Corner

(1983) đề nghị khá lớn, đặc biệt đó mới chỉ là các loài tìm thấy ở Malaysia, nghĩa là vùng Đông Nam Á vẫn còn tiềm tàng:

1 Pleurotus cyatheicolus sp nov

13 P alocasiae sp nov

14 P armeniacus sp nov

15 P omnivagus sp nov

Ngoài ra ông còn ghi chú thêm các loài giả định là mới: Pleurotus A, B, C, D

và rất nhiều thứ (varietas) mới cho nhiều loài khác nữa Tiếc rằng công trình này đã không được Singer (1986) xem xét kiểm tra đối chiếu trong hệ thống kinh điển của ông Nghĩa là số lượng nấm Bào ngư còn có thể vượt trên 50 loài trên thế giới và

vấn đề hệ thống phân loại cho toàn bộ chi Pleurotus sẽ phải điều chỉnh thêm nữa

Điều này rất có ý nghĩa vì rằng chúng ta biết khu hệ nấm Bào ngư ở Việt nam còn chưa được khảo cứu cơ bản

1.2 Hệ thống học phân chi Coremiopleurotus Hilber - Đặc điểm lịch sử lưỡng

danh cho thể hữu tính Teleomorph và thể vô tính Anamorph của các loài

Nấm Bào ngư thuộc chi Pleurotus (Fr.) Kummer có một số loài thường tạo

các cấu trúc sinh sản đặc biệt gọi là thể bó (Coremia) mang bào tử trần vô tính (Conidia) trong giọt dịch đen, được Oswald Hilber xác lập thành một phân chi

(subgenus) mới: Coremiopleurotus Hilber 1982, khi ấy mới bao gồm 2 loài: loài chuẩn (typus): Pleurotus cystidiosus O.K Miller (1969) và P abalonus Han, Chen

& Cheng (1974) Phân chi này tương ứng chính xác với Section 4 của Singer Hệ thống này vẫn ổn định cho đến nay, song khối lượng của taxon là một vấn đề cần

phải hiệu chỉnh, bổ khuyết

30 năm về trước, sau khi phát hiện loài mới: Pleurotus cystidiosus O.K Miller (1969), Pollack & Miller (1976) đã chứng minh rằng: Antromycopsis broussantiae Pat & Trab chính là A broussonetiae Pat & Trab var minor Penz & Sacc., là thể

vô tính của P corticatus (Fr.: Fr.) Quél., và cũng chính là pha bất toàn (imperfect stage) của P cystidiosus, mà thực ra Jong & Peng đã nêu ra trước đó 1 năm (1975)

song lại không khẳng định rõ Từ khi ấy khái niệm pha bất toàn hay thể vô tính

Anamorph mới được xác lập cho các nấm Bào ngư Pleurotus spp vốn chỉ được coi

là các nấm Đảm (Basidiomycetes) với thể hữu tính Teleomorph tạo ra thể quả đảm điển hình (sexual carpophores, basidiosporophores, basidiocarpus, fruitbodies) Do

vậy các loài thuộc phân chi Coremiopleurotus Hilber có đặc điểm lưỡng danh: tên

nấm đảm (pha hữu tính) và tên nấm bất toàn (pha vô tính) Trong chuyên luận này chúng tôi kiểm tra, phân tích các loài lưỡng thể - luỡng danh đó và bổ sung một tổ

hợp danh pháp mới cho thể Anamorph: Antromycopsis blaoensis Thám, anam nov

- tức là pha bất toàn của loài nấm Bào ngư mới phát hiện được ở thị trấn Bảo Lộc

(Blao), cao nguyên Lâm Đồng: Pleurotus blaoensis Thám, sp nov

Đây là một trong 3 phân chi của chi (genus) nấm Bào ngư Pleurotus (Fr.)

Kummer với số lượng loài ít hơn cả, đặc trưng bởi pha tạo bào tử vô tính (Anamorph) trong một thể đặc biệt có dạng dùi trống (Coremia) Trường hợp loài chuẩn đã được Kendrick & Watling (1979) kiểm tra đầy đủ kể cả kết quả phát hiện bào tử vô tính bởi Kaufert (1935), để khẳng định theo luật ưu tiên chọn danh pháp

A broussonetiae Pat & Trab cho pha bất toàn của nó

Mặc dù Singer (1986) có ý kiến rằng P abalonus Han, Chen & Cheng (1974)

có thể chỉ là chủng địa lý của loài chuẩn, song Hilber (1982, 1989), Buchanan (1993) vẫn ủng hộ các tác giả Đài loan cho đây là loài riêng, bởi những khác biệt hình thái thể quả, bởi đáp ứng nhiệt của hệ sợi và bởi pileocystidia có các dải vằn dày sẫm màu trên thành tế bào, theo đó pha bất toàn của loài này cũng phải có danh

pháp hiệu lực tương ứng, mà chúng tôi đề nghị sau đây: A abalonus (Han, Chen &

Cheng) Thám?

Năm 1975, Guzmán tìm được loài thứ ba ở Mexico bổ sung vào phân chi này:

P smithii Guzmán, đến 1980 cùng các cộng sự ông nghiên cứu thể Anamorph

khổng lồ (giantic synnemata) và đến 1991 thì xác lập tổ hợp danh pháp cho pha bất

toàn của nó: A smithii (Guzmán) Guzmán & Valenzuela, anam nov Các công

trình trên đã không được Singer (1986) và Hilber (1982, 1989) xem xét đến, nay cần phải khẳng định để xếp đúng vào phân chi này

Năm 1980, Nair & Kaul phát hiện ra pha bất toàn của P sajor-caju (Fr.)

Singer với sự phát sinh các Coremia phân nhánh, có hình thái rất phong phú, đáp

ứng các yêu cầu để xác lập tổ hợp danh pháp cho thể Anamorph: A sajor-caju Nair

& Kaul, anam nov Phát hiện này đã không được Hilber và Singer tham khảo để

đưa P sajor-caju vào phân chi Coremiopleurotus Hilber 1982 (chúng tôi cũng

không tìm thấy pha bất toàn của loài này, do đó không thấy có cơ sở để công nhận)

Điều lý thú là cũng trong công trình đó, Nair & Kaul còn xác định P gemellarii (Inzeng.) Sacc có pha bất toàn chính là A broussonetiae Pat & Trab var minor Penz & Sacc., nghĩa là P gemmellarii có thể chỉ là synonym của P cystidiosus mà thôi Do đó, nghi ngờ của Hilber (1982) khi có ý xếp P gemellarii vào phân chi Coremiopleurotus là có cơ sở Thêm nữa, Pollack & Miller (1976) đã nêu rõ rằng thể Anamorph của P corticatus (Fr.: Fr.) Quél do Kaufert (1935) tìm được chính là

A broussonetiae Pat & Trab., và P corticatus ss Kaufert là synonym của P cystidiosus Như thế, xét về phương diện lịch sử, lần đầu tiên hai nhà nấm học người Pháp Patouillard và Trabut tìm ra pha bất toàn của nấm Bào ngư Pleurotus,

cụ thể là của loài chuẩn P cystidiosus, cách nay hơn 100 năm (1897), song khi ấy

họ không biết, không có khái niệm lưỡng danh, lưỡng thể, họ chỉ coi đó là nấm bất

toàn thuần túy, thuộc chi Antromycopsis Pat & Trab (Bull Soc Mycol Fr., 13:

215, 1897) Chính Bùi Xuân Đồng (1972) đã kiểm tra đối chiếu nhiều tác giả kinh điển và xác định vị trí hệ thống trong nhóm nấm Bất toàn Hyphomycetes cho loài chuẩn này: thuộc Nhóm phụ Arthrohyphomycetidae, Tổ chi Arthroconidiae Sau đó gần 40 năm, Kaufert (1935), người Hoa kỳ phát hiện lại thể vô tính này ở một loài

mà ông cho là mới (P corticatus), thực chất lại chính là loài chuẩn P cystidiosus

Hơn 40 năm sau nữa Pollack & Miller (1976) mới kiểm tra khẳng định và điều chỉnh chính xác vấn đề này trên cơ sở xác lập đặc điểm lưỡng danh lưỡng thể của loài chuẩn Cần lưu ý rằng chính Miller là tác giả của loài chuẩn Có thể nói chính Miller và Pollack lần đầu tiên đã xác lập tính thống nhất giữa nấm đảm và nấm bất toàn ở nhóm nấm bào ngư, mà sau này Nair & Kaul (1980) và Guzmán et al (1991)

và kể cả các tác giả Việt nam (Lê Xuân Thám, 1999) chỉ là những người kế tục Cần lưu ý rằng Moore (1984) khi nghiên cứu hệ thống nấm bất toàn, kiểm tra 8

taxon thuộc Antromycopsis đã cho rằng chỉ có A broussonetiae và A smithii là

hai loài rõ rệt

Do vậy, nội dung của đề tài là tập trung kiểm tra đối chiếu lại toàn bộ các mô

tả gốc của các tác giả cho các loài thuộc phân chi Coremiopleurotus Hilber, 1982

(tức là Section 4 của Singer, 1986), đặc biệt đi sâu so sánh loài chuẩn với loài mới phát hiện, nhằm làm rõ hơn giới hạn của phân chi này Cũng cần nhấn mạnh rằng các loài thuộc phân chi này thường tạo hương vị thơm ngon khi nấu ăn, do vậy thường được ưa chuộng hơn ở các vùng châu Á Do vậy trong chuyên luận chúng tôi cũng dành một phần quan trọng cho nhóm nấm này

Như vậy, cho đến nay trong phân chi này, nếu tính cả loài mới do chúng tôi

phát hiện, và nếu tính cả P sajor-caju, tạm thời có 5 loài cần và phải được chỉnh lý

như dưới đây

Subgenus: Coremiopleurotus Hilber

Pha đảm (thể hữu tính) Pha bất toàn (thể vô tính - Imperfect stage) Teleomorph Anamorph

1 Pleurotus cystidiosus O.K Miller Antromycopsis broussonetiae Pat & Trab

2 P abalonus Han, Chen & Cheng A abalonus (Han, Chen & Cheng) Thám,

anam nov ?

?3 P sajor-caju (Fr.) Sing ?A sajor-caju Nair & Kaul, anam nov.?

(trường hợp này chính Buchanan, 1993 đã cho rằng các tác giả bị nhầm lẫn mẫu vật!?)

4 P smithii Guzmán, sp nov A smithii (Guzmán) Guzmán & Valenzuela,

anam nov

5 P var blaoensis Thám, sp nov A blaoensis Thám, anam nov

Nếu như pha bất toàn hay thể vô tính Anamorph mà tìm thấy được ở các loài

Pleurotus khác nữa, thì đó sẽ là đặc trưng quan trọng Nấm Bào ngư xám Pleurotus ostreatus (Jacq et Fr.) Kummer đã từng được báo cáo cũng tạo ra bào tử vô tính

trong dịch đen (oidia) (Corner, 1983; Lê Duy Thắng, 1999), mặc dù chúng tôi đã

kiểm tra song không thấy (cũng như trường hợp của P sajor-caju vậy, theo

Buchanan, 1993 thì có lẽ Nair & Kaul, 1980 đã bị nhầm mẫu) Vấn đề hình thành

hậu bào tử (oidia) ở các loài Pleurotus đã từng được các tác giả kinh điển ghi nhận

(chẳng hạn Patouillard, 1897; Corner, 1932-1983), cần phải xem xét kỹ lại chúng có tương đồng với sự hình thành dạng thể bó (synnemata, coremia) hay không Đương

nhiên phân chi Coremiopleurotus Hilber có thể sẽ lại được mở rộng hơn và nấm

Bào ngư trở thành là một trong những minh chứng rõ ràng cho mối quan hệ hết sức chặt chẽ của nấm Bất toàn (Fungi Imperfecti) và nấm Đảm (Basidiomycetes) cũng như tính thống nhất của toàn bộ thế giới nấm

1.3 Thành phần dinh dưỡng của 3 loài nấm Bào ngư đen

Nấm ăn nói chung và nấm Bào ngư nói riêng là loại thực phẩm có giá trị dinh dưỡng cao Hàm lượng protein chỉ đứng sau thịt, cá, giàu các chất khoáng và các acid amin tan trong nước, các acid amin không thay thế như lyzin, tryptophan, các acid amin chứa nhóm lưu huỳnh Ngoài ra chúng còn chứa một lượng lớn các vitamin quan trọng

Thành phần các chất dinh dưỡng chính của một số loài nấm Bào ngư bao gồm: carbonhydrate, protein, amino acid, chất béo, khoáng chất, hoạt chất và các vitamin được nhiều nhà dinh dưỡng học quan tâm nghiên cứu, nhằm đánh giá vai trò của nấm như nguồn thực phẩm cho con người Các thành phần quan trọng được dẫn ra ở bảng 1.1

Carbonhydrate và protein là thành phần chính, chiếm từ 70 đến 90% trọng lượng khô quả thể, tro ~ 10% chứa nhiều loại chất khoáng Chất béo có hàm lượng

thấp trong hầu hết các loài, dao động trong khoảng 1 - 2%, ngoại trừ P limpidus

(9,4%)

Giá trị về mặt năng lượng được đánh giá trên cơ sở thành phần protein thô, chất béo và carbohydrate, trị số này thấp khoảng từ 261-367 Kcal/100g chất khô

Bảng 1.1 Thành phần dinh dưỡng của nấm Bào ngư (%)

Còn theo Cao Ngọc Minh Trang (Đà Lạt, 2002) trong một chuyên luận nghiên

cứu phân chi Coremiopleurotus thực hiện tại Đà Lạt thì thành phần của 3 đối tượng

nghiên cứu được dẫn ra ở bảng 1.2

Bảng 1.2 Thành phần giá trị dinh dưỡng của 3 loài nấm bào ngư đen

thuộc phân chi Coremiopleurotus (%)

Tên loài Nước Protein thô Chất béo Đường

trung bình 25-32%, trị số này có ý nghĩa về mặt dinh dưỡng Trong đó Pleurotus abalonus có hàm lượng đạm cao nhất 32% và thấp nhất là ở Pleurotus blaoensis điều này có thể do Pleurotus blaoensis là loài hoang dại mới được đưa vào nuôi

trồng chủ động so với 2 loài còn lại đã được thuần hóa sớm hơn

Hàm lượng chất béo nhìn chung là khá thấp, trị số này cao nhất ở loài chuẩn

Pleurotus cystidiosus (9 %) và bằng nhau ở Pleurotus abalonus và Pleurotus blaoensis

Hàm lượng carbonhydrat cao nhất ở Pleurotus abalonus và thấp nhất là ở Pleurotus blaoensis ; hơn nữa, hàm lượng chất xơ trong Pleurotus abalonus là thấp nhất, do vậy mà về mặt cảm quan cho thấy nấm Pleurotus abalonus có mùi vị tơm ngon nhất trong 3 loài, tiếp đến là Pleurotus cystidiosus

Hàm lượng nước của 3 loài trên dao động trong khoảng 89-91.7% nghĩa là lượng sinh khối khô chỉ vào khoảng 10% song tỷ lệ chất dinh dưỡng rất đáng kể và cân đối, vượt hơn hẳn các loại rau quả Do đó quan niệm trước đây coi nấm như là một loại rau là không chính xác Hàm lượng protein thô của nấm Bào ngư trong đó

có 3 đối tượng nghiên cứu không cao, nếu như so với các loại thịt cá, ngoại trừ loài

P limpidus lượng protein đạt xấp xỉ 40% trọng lượng khô, trị số sinh năng lượng

khá thấp, chỉ cung cấp năng lượng ở mức tối thiểu, đây là một trong những ưu điểm của loài nấm ăn này, thích hợp cho người ăn kiêng

1.4 Vai trò của công nghệ nấm Bào ngư ở Việt nam

Ở Việt Nam, cho đến nay đã ghi nhận khoảng 15 loài nấm bào ngư (Trịnh

Tam Kiệt, 1998; Lê Duy Thắng, 1999; Trần Hữu Độ, 1999): P abalonus, P cornucopiae, P cytidiosus, P djamor, P eryngii, P floridanus, P globulifer, P limpidus, P ostreatus, P pulmonarius, P sajor-caju, P salmoneostramineus, P

spicilifer, P versiformis Nếu tính cả loài vừa phát hiện: P blaoensis (Lê Xuân

Thám, 1999), được khảo cứu kỹ trong nghiên cứu này, và một số loài đang xếp trong các chi gần gũi khác thì số loài nấm Bào ngư ở Việt nam có thể vượt quá 15 Tuy nhiên số loài có mẫu lưu giữ thực rất ít, không quá 9 loài (ngay phòng thí

nghiệm của chúng tôi có nhiều nhất ở Việt nam cũng mới giữ giống nguyên chủng của 7 loài) Hầu hết các cơ sở khác chỉ có 2-3 loài mà thôi Không thấy ghi nhận

loài nào độc cả, trái lại hầu hết các loài Pleurotus được Singer cho là có thể ăn

được, hoặc ăn ngon; thực tế quá nửa số loài trên đã được nuôi trồng thành công khá

phổ biến ở nước ta Đáng lưu ý trong số đó, P abalonus được nuôi trồng xuất khẩu,

và nói chung các loài thuộc phân chi Coremiopleurotus có hương vị rất được ưa

chuộng, được thị trường khu vực và thế giới coi trọng

Các nấm Bào ngư Pleurotus spp có khả năng chuyển hoá các chất xơ sợi giàu

cellulose và lignin Đây chính là ưu điểm cơ bản của công nghệ nuôi trồng nấm Bào ngư, đúng như đánh giá của Uỷ ban Cộng đồng chung châu Âu tại Hội nghị Braunschweig (Cộng hòa Liên bang Đức) năm 1986 (Zadrazil và Reiniger,1988) Chính nhờ các hệ enzyme ngoại bào phong phú, nấm Bào ngư còn có nhiều khả năng chuyển hóa đặc biệt Chỉ riêng rơm rạ, trấu, thân lõi ngô, thân cành đậu đỗ, bã mía, mùn cưa, lá, cành, cỏ, hàng năm ở nước ta đã lên đến hàng trăm triệu tấn Trong đó một phần không nhỏ chỉ là đốt bỏ lấy nhiệt lượng và tro khoáng, gây nên

ô nhiễm môi trường và góp phần vào biến đổi khí hậu Nếu được xử lý phối trộn dinh dưỡng phù hợp, các nguồn phế liệu này sẽ trở thành cơ chất rất thích hợp cho nuôi trồng nấm Bào ngư Công nghệ nuôi trồng có thể ở nhiều mức độ đầu tư: các

hộ, trang trại nhỏ và vừa, cụm dân cư (nông, lâm trường, tổ hợp, ) theo lao động thủ công, bán công nghiệp, công nghiệp và tự động hóa Giá thành sản xuất nấm ở nước ta vào loại rất thấp trong khu vực và trên thế giới Vì vậy, nếu tổ chức nuôi trồng và chế biến tốt, công nghệ nấm nói chung và nấm Bào ngư nói riêng có đầy

đủ khả năng trở thành ngành sản xuất quan trọng, góp phần xóa đói giảm nghèo, triệt hạ các loại cây sản ra ma túy, công nghiệp hóa và hiện đại hóa nông thôn, miền núi Đây có lẽ là một trong những hướng tiếp cận của công nghệ sinh học hiện đại, góp phần thích đáng trong thiên niên kỷ tới - thiên niên kỷ của cơ chế phát triển sạch (CDM: Clean Development Mechanism) - một nguyên lý cơ bản xuất phát từ Hội nghị thượng đỉnh về môi trường (Công ước Sao Paolo, Brasil 1992), được hầu hết các quốc gia chuẩn thuận và xác lập các nguyên tắc chủ đạo với Công ước

Kyoto (Kyoto, Japan 1997) Hội thảo Quốc tế mới đây tại Hà nội (11-12/10/1999)

do Cơ quan Năng lượng Nguyên tử Quốc tế (IAEA) và Ủy ban Năng lượng Nguyên

tử Việt nam (VAEC) phối hợp tổ chức đã phân tích những nguyên tắc này và vạch

ra những định hướng áp dụng ở Việt nam, nhằm vận dụng tài trợ quốc tế, mà trước hết có thể lựa chọn công nghệ điện hạt nhân trong thế kỷ tới (2015-2020?) Hội nghị Quốc tế về Môi trường qui tụ đại biểu từ 150 Quốc gia đang thảo luận sôi động các công nghệ phát triển sạch tại Bonn, Cộng hòa Liên bang Đức, trong 2 tuần (10/1999) Trong đó công nghệ sinh học và công nghệ nấm nói riêng có thể là những định hướng quan trọng Thực vậy, công nghệ dựa trên quá trình chuyển hóa bởi nấm phá gỗ (Wood - Decaying - Rotting Fungal Fermentation) về cơ bản là phân hủy từ từ các polysaccharides - thành tố cơ bản của thực vật - các phế liệu giàu xơ: lignocellulose Nhờ đó quá trình giải phóng CO2 diễn ra tuần tự (không ồ ạt như quá trình đốt bỏ rất phổ biến ở các nước đang phát triển), khép kín chuỗi chuyển hóa của tự nhiên, đồng thời tạo ra nguồn sinh khối có giá trị cao, nghĩa là giảm bớt mức phát thải khí tạo ra hiệu ứng nhà kính Chính vì thế mà nhóm các nhà nấm học Nhật bản thuộc Đại học Tokyo đã giành được chương trình tài trợ của Viện Nghiên cứu Môi trường toàn cầu Kyoto RITE với một Dự án phát triển công nghệ chuyển hóa nấm, mà cơ bản là nấm Bào ngư

Ngoài ra, nấm Bào ngư đã được thử nghiệm có hiệu quả để xử lý một số phế liệu công nghiệp chế biến latex (Kume et al., 1998; Lê Xuân Thám et al., 1999), công nghiệp lên men ở Việt nam (Trần Hữu Độ, 1999) Cần lưu ý rằng công nghệ lên men ở Việt nam đã có những đầu tư khổng lồ cho hệ thống lên men lớn nhất thế giới (tổng dung tích các fermentor của Công ty Vedan Taiwan, Vũng tàu lên tới 700.000 lít), hàng tuần xả ra một lượng khổng lồ dịch thải đòi hỏi phải có công nghệ giải quyết triệt để (chứ không phải chỉ là những giải pháp tình thế như hiện nay) Các thành tựu tái lên men nấm mở ra một thời kỳ mới nghiên cứu những khả năng đặc biệt của tài nguyên nấm Bào ngư mà các nghiên cứu trong chuyên luận này mới chỉ là một bước khởi đầu

CHƯƠNG 2 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP

NGHIÊN CỨU

2.1 Đối tượng nghiên cứu

Đối tượng nghiên cứu của chúng tôi gồm 3 loài nấm bào ngư [Pleurotus(Fr) Kummer] thuộc phân chi Coremiopleurotus đã được thuần khiết và lưu trữ tại

phòng Công Nghệ Sinh Học thuộc Viện Nghiên cứu Hạt Nhân Đà Lạt

Pleurotus cystidiosus O.K.Miller (loài chuẩn)

Pleurotus abalonus Han, Chen & Cheng

nhận từ giống gốc Đài Loan

Riêng loài Pleurotus blaoensis Thám được thầy PGS.TS Lê Xuân Thám

phát hiện tại vùng Bảo Lộc-Lâm Đồng, Việt Nam và mô tả lần đầu tiên ở Việt Nam năm 1999

2.2 Vật liệu, hoá chất và thiết bị

2.2.2 Nguyên vật liệu và hoá chất

- Môi truờng PGA cải tiến (môi trường phân lập và nhân giống cấp 1): nước chiết (*), Glucose, cao nấm men , Agar

- (*) Nước chiết gồm có: Giá đỗ, khoai tây, cà rốt

- Môi trường hạt lúa (môi trường nhân giống cấp hai): Thóc, cám gạo, CaCO3.

- Môi trường nuôi trồng ra quả thể: Mùn cưa cao su, cám gạo, vôi bột, vi lượng (KH2PO4, MgSO4…)

2.3 Phương pháp nghiên cứu

2.3.1 Khảo sát tốc độ lan, đặc điểm củ a tơ nấm v à hình thái Coremia của 3 đối tượng nghiên cứu trên môi trường thạch

Môi trường thạch là môi trường dùng để nhân giống cấp một trong sản xuất và cũng là môi trường dùng để giữ giống, ở đây là môi trường PGA cải tiến

Công thức môi trường PGA cải tiến:

- Nước chiết (*) 1 lít

- Glucose 20 g

- Cao nấm men 1g, Agar 20g

(*) Nước chiết gồm có: 75g giá đỗ, 300g khoai tây, 100g cà rốt

Môi trường PGA cải tiến được thực hiện như sau:

Khoai tây, cà rốt, giá đỗ được gọt vỏ rửa cắt lát, cho vào nồi đun chung với giá đỗ, nước, đun sôi khoảng 20 phút, lọc lấy nước chiết và bổ xung nước cất cho

đủ 1 lít Sau đó bổ xung thêm Agar và cao nấm men, đun cho các chất này hòa tan đều vào nhau sau đó đợi nguội đến khoảng 500C (áp vào má có thể chịu được) đem rót vào trong các ống nghiệm, đĩa Petri và bình tam giác, dùng để phân lập, cấy chuyền giống nấm và khảo sát tốc độ lan tơ của nấm Với ống nghiệm rót 1/3 ống chiều dài ống nghiệm, còn với bình tam giác và đĩa Petri thì đổ dày khoảng 1 cm Không đổ môi trường vào các dụng cụ trên khi đang quá nóng vì hơi nước sẽ đọng lại trên thành, nắp sau đó rơi xuống làm ướt bề mặt thạch Cũng không đổ môi trường khi đã nguội vì đang đổ có thể môi trường đã bị đông vón lại Sau đó khử trùng ở nhiệt độ 121,1oC (2500F) , 1at trong 25 phút hấp xong để nguội

Để khảo sát tốc độ lan tơ nấm và mô tả hình thái Coremia của 3 đối tượng nghiên cứu trên môi truờng thạch chúng tôi tiến hành làm như sau:

- Cấy các giống đã phân lập được từ ống giống thuần chủng sang các bình tam giác, đĩa Petri hoặc ống nghiệm đã chuẩn bị sẵn

- Ủ cho tơ nấm phát triển trong điều kiện nhiệt độ phòng 26 – 30oC, quá trình

ủ tiến hành trong môi trường ánh sáng khuếch tán nhẹ 500-1000 lux

- Tiến hành quan sát và ghi nhận kết quả sau mỗi ngày kể từ khi sợi nấm bắt đầu bám vào bề mặt môi trường

- Vẽ biểu đồ, nhận xét kết quả

Thu bào tử vô tính: Nuôi cấy hệ sợi của mỗi loài trên môi trường agar để thu các Coremia-dịch đen, quan sát dưới kính hiển vi để mô tả hình thái Coremia của 3 đối tượng nghiên cứu

2.3.2 Khảo sát tốc độ lan và đặc điểm tơ nấm cuả 3 đối tượng nghiên cứu trên môi trường hạt

Môi trường hạt lúa có bổ sung cám gạo cũng là môi trường chúng tôi chọn để

nhân giống cấp hai đối với 3 đối tượng trên

Công thức môi trường hạt:

Để khảo sát tốc độ lan tơ chúng tôi tiến hành như sau:

- Cấy các giống từ trong môi trường thạch vào trong chai có môi trường hạt

- Nuôi ủ tơ ở nhiệt độ phòng

- Thu nhận kết quả kể từ khi tơ nấm bung ra và bám vào môi trường đến khi

ăn trắng toàn bộ chai, đo ngẫu nhiên với thời gian ≥2 ngày

- Nhận xét đặc điểm phát triển

- Xử lí số liệu vẽ biểu đồ mô tả

2.3.3 Quá trình nuôi trồng khảo nghiệm

2.3.3.1.Xây dựng quy trình nuôi trồng

Sau khi đã nhân giống thành công 3 đối tượng trên với số lượng khá nhiều, chúng tôi tiến hành nuôi trồng thử nghiệm trên môi trường cơ chất mùn cưa cây cao

su Quá trình nuôi trồng được tiến hành ở trại nấm DONA (thuộc công ty TNHH thương mại DONA, 11 đường Vườn Thuốc, ấp Cây Da, xã Tân Phú Trung, huyện

- Nước bổ xung cho đến khi cơ chất đạt độ ẩm 65-70%

Qúa trình chuẩn bị giá thể như sau:

- Ủ mùn cưa thành đống phủ kín bằng bao tải khoảng 2 -3 ngày để phân giải một phần các hợp chất khó hấp thụ như (cellulose, hemicellulose, lignin…) thành các chất dễ hấp thụ hơn như glucose, đồng thời cũng để cơ chất mềm ra, nấm dễ sử dụng

-Bổ sung dinh dưỡng với tỷ lệ như trên, tiến hành đảo trộn đủ ẩm

- Cho cơ chất vào các bịch PP hoặc PE khoảng 1.2 -1.5 kg cơ chất ( khoảng

300 g cơ chất khô, quá trình đóng bịch có thể thực hiện bằng tay hoặc bằng máy đóng bịch như ở trại nấm DONA đã làm)

- Thanh trùng bịch cơ chất theo phương pháp Tyndall (khử trùng gián đoạn) trong các nồi hơi ở 100oC trong 4 giờ, sau đó để nguội 24 giờ cho bào tử tạp nhiễm (như mốc cam, mốc xanh) phát triển rồi khử trùng lại với chế độ như trên

-Để nguội cấy giống

Sau khi cấy giống tiến hành ủ tơ nấm trong phòng có ánh sáng khuếch tán nhẹ ở nhiệt độ phòng 23-260C, tiến hành quan sát và nhận xét về quá trình phát triển của tơ nấm của các đối tượng trên

Khi tơ nấm đã lan kín bịch môi trường tiến hành cho nấm vào khu vực chăm sóc ra thể quả, dùng vòi xịt thẳng vào bịch để tắm bịch (rửa sạch bịch) sau đó tháo nút bông, duy trì độ ẩm thích hợp 80-85%, thu nhận kết quả và tiến hành xây dựng

quy trình nuôi trồng 3 loài nấm bào ngư đen trên

2.3.3.2 Tính hiệu suất sinh học của 3 loài nấm Bào ngư đen tại vùng

2.3.4 Phương pháp thu nhận kết quả

Tốc độ lan tơ của tơ nấm được đo 3 lần bằng thước, đơn vị cm Lấy giá trị trung bình

Quan sát hình thái bên ngoài, cắt ngang quả thể, quan sát bào tử, Coremia trên vật kính dầu với độ phóng đại 100, mô tả và chụp hình

2.3.5 Phương pháp xử lý số liệu

Tất cả số liệu thực nghiệm được đo 3 lần, lấy giá trị trung bình Số liệu được

xử lí bằng bảng tính Excel