3.2.1. Trên môi trường thạch
3.2.1.1. Tốc độ lan và đặc điểm tơ nấm của 3 đối tượng nghiên cứu
Hình 3.2. Ống nghiệm cấy chuyền từ t rái qua phải : P. cystidiosus ; P. abalonus ; P.blaoensis
Bảng 3.1. Tốc độ lan tơ của 3 loài bào ngư đen trên môi trường thạch
Chiều dài sợi nấm (cm) Thời gian
(ngày) P. cystidiosus P. abalonus P. blaoensis
8 2,9 2,7 2,5 14 5,1 4,8 4,5 17 6,5 6,3 5,8 19 7,6 7,3 6,7 21 8,8 8,4 7,7 26 11 10,5 9,8
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 8 14 17 19 21 26
thời gian (ngày)
tốc độ (cm
)
P. cystidiosus P. abalonus P. blaoensis
Hình 3.3. Sự tăng trưởng sợi nấm của 3 loài bào ngư đen
trên môi trường thạch
Nhận xét:
Sau 3 ngày đầu kể từ khi cấy giống, mẫu cấy chưa bung sợi do chúng vừa bị tổn thương và chưa thích ứng ngay được với môi trường mới. Đến ngày thứ 4-5 các mẫu cấy đồng loạt bung sợi, sợi nấm Pleurotus cystidiosus bung ra mạnh nhất, đạt tới 0,8 cm, và sợi nấm Pleurotus blaoensis bung ra yếu nhất đạt khoảng 0,25 cm, tuy nhiên các sợi nấm chưa bám vào bề mặt của môi trường, sau ngày thứ 5 đến hết ngày thứ 6, sợi nấm tiếp tục phát triển và ăn sâu xuống bề mặt của môi trường, tới ngày thứ 8, sợi nấm của: Pleurotus cystidiosus đã lan được khoảng 2,9 cm, loài
Pleurotus abalonus 2,7 cm và loài Pleurotus blaoensis là 2,5 cm. Về hình thái, sợi nấm rất mảnh và thưa, màu trắng lợt, có hiện tượng có các sợi nấm vươn dài ra phía trước, phân nhánh. Đến hết ngày 14 sợi nấm lan ra thêm được một khoảng đối các loài Pleurotus cystidiosus; Pleurotus abalonus; Pleurotus blaoensis lần lượt là 5,1 cm; 4,8 cm; 4,5 cm. Tốc độ lan tơ của: Pleurotus cystidiosus (152,78 µm/h) gấp 1,1 lần Pleurotusblaoensis (138,89 µm/h) , còn Pleurotus abalonus ( 145,83 µm/h) gấp 1,05 Pleurotus blaoensis.
Tổ chức của sợi nấm chặt chẽ hơn khi sợi nấm đạt độ tuổi 19 ngày, bề mặt khuẩn lạc có màu trắng ngà, ít có sự phân hóa tổ chức sợi nấm như trước, tơ nấm vươn mạnh ra phía trước, Coremia xuất hiện dày đặc (hình 3.2). Lúc này chiều dài sợi nấm của các loài Pleurotus cystidiosus; Pleurotus abalonus; Pleurotus blaoensis lần lượt là 7,6 cm; 7,3cm; 6,7cm. Tuy vậy, khi quan sát kỹ về hình thái hệ sợi tôi thấy rằng hệ sợi của Pleurotus cystidiosus, Pleurotus abalonus rất dày, tơ nấm bung xốp vươn mạnh ra phía trước. Còn tơ nấm của loài Pleurotus blaoensis mỏng hơn, tơ nấm áp sát vào bề mặt môi trường.
Tiếp tục theo dõi thì tôi nhận thấy rằng đến ngày 21, sợi nấm của 3 loài lan nhanh nhất, thể hiện ở tốc độ sinh trưởng của các loài Pleurotus cystidiosus; Pleurotus abalonus; Pleurotus blaoensis lần lượt là 250,00 µm/h; 229,17 µm/h; 208,33 µm/h. Điều này cũng chỉ ra ở bảng 3.1 và hình 3.3 trên, vì vậy chúng tôi đề nghị nên dùng giống nấm của 3 loài trên là Pleurotus cystidiosus; Pleurotus abalonus; Pleurotus blaoensis tại thời điểm lần lượt là 21 ngày; 23 ngày; 25 ngày trên môi trường thạch để cấy chuyền giữ giống hoặc làm giống cho sản xuất. Đến ngày 26 thì tơ nấm loài Pleurotus cystidiosus và loài Pleurotus abalonus đã lan đầy ống nghiệm, trong khi đó tơ nấm của loài Pleurotus blaoensis chỉ đạt 9,8 cm so với 11cm ở loài Pleurotus cystidiosus.
Cần chú ý rằng nấm phát triển trong pha sợi rất kỵ ánh sáng, và tính chất này thể hiện đặc biệt rõ trên nấm bào ngư đen, khi cho các bình tam giác có sợi nấm phát triển ra ngoài ánh sáng đặc biệt là ánh sáng trực tiếp từ mặt trời thì sợi nấm ngả vàng rất nhanh, đây là một hình thức tự bảo vệ của sợi nấm trước các bức xạ của ánh sáng mặt trời. Từ đó chúng tôi đề nghị rằng khi nhân giống nấm bào ngư đen trên môi trường thạch thì phải tuyệt đối để trong môi trường có ánh sáng khuếch tán nhẹ.
Như vậy sợi nấm loài Pleurotus cystidiosus vẫn lan nhanh nhất, và loài
Pleurotus blaoensis vẫn lan chậm nhất, tuy nhiên giữa chúng không có sự cách biệt quá lớn, tổ chức sợi nấm của loài Pleurotus blaoensis cũng khá chặt chẽ, tốc độ lan tơ đạt yêu cầu. Tơ nấm 3 loài phát triển tốt trên môi trường PGA cải tiến.
Một điều rất đặc biệt khi quan sát sự phát triển tơ nấm của 3 đối tượng nghiên cứu trên môi trường thạch là khi tơ nấm lan ra thì cũng đồng thời xuất hiện các Coremia cách đỉnh của tơ nấm khoảng 1 cm với những đặc điểm rất đặc trưng được mô tả kỹ ở phần dưới đây.
3.2.1.2. Hình thái đại thể Coremia của 3 đối tượng nghiên cứu
Theo phương pháp của các tác giả nghiên cứu thể Anamorph từ việc tách phân lập mô sợi của thể Telemorph: Pollack & Miller (1976), chúng tôi tách phân lập mô sợi của 3 loài nấm bào ngư trên, nuôi cấy hệ sợi của các loài trên môi trường PGA ở nhiệt độ 28±20C, sau khi hệ sợi phát triển và hình thành các Coremia chúng tôi quan sát hình thái đại thể Coremia của từng loài và nhận thấy rằng:
- Ở loài Pleurotus cystidiosus, Coremia có dạng dùi nhỏ, màu trắng, mảnh, không dài quá 5mm, đôi khi phân thành 2-3 nhánh, có mang một khối dịch đen hình cầu trên đỉnh và trên các Coremia lớn vượt lên lại phát sinh các Coremia nhỏ mọc chi chít hình dùi trống.
- Cuống các loài Coremia ở loài Pleurotus abalonus có màu trắng kem, trên đỉnh có mang các giọt dịch màu đen, kích thước của các Coremia khoảng 0,2-0,3 cm.
- Coremia của loài Pleurotus blaoensis có dạng dùi nhỏ, dài 2-6 mm, mảnh, màu trắng trên đỉnh mang giọt đen chứa bào tử vô tính. Trên các búi có các Coremia lớn vượt lên, màu trắng xám-xám nâu, có dạng chùy dài 6,5-39 mm, chắc mập.
- Hình thái Coremia ở 3 loài trên tương đối giống nhau:đều có dạng dùi trống mang giọt dịch đen trên đỉnh chứa các bào tử vô tính và các giọt dịch đen này dễ dàng tràn vào nhau, dính lại và tuột xuống, phát tán các bào tử vô tính vào môi trường; ngoài các Coremia sơ cấp còn hình thành các Coremia thứ cấp trong quá trình nuôi cấy.
- Tuy nhiên cũng có sự khác biệt giữa các loài trên như sự khác biệt về kích thước của các thể bó hay Coremia (chỉ có Pleurotus blaoensis hình thành các thể bó khổng lồ, có thể phân nhánh lớn tới vài cm, còn ở Pleurotus cystidiosus và
sự phát sinh Coremia ( Coremia ở Pleurotus blaoensis sớm nhất chỉ sau 5 ngày, ở
Pleurotus cystidiosus thì các Coremia mọc chậm nhất).
Chú thích hình 3.4:
A: P. cystidiosus; Coremia dày đặc (A1), có phát sinh thứ cấp và bào tử vô tính (A2).
B: P. abalonus Coremia dày đặc
C: P. blaoensis; thể bó khổng lồ với Coremia thứ cấp (C1 & C2), bào tử vô tính (C3)
3.2.2. Tốc độ lan và đặc điểm tơ nấm trên môi trường hạt
Để biết được tốc độ lan của tơ nấm trên môi trường hạt (cũng là môi trường nhân giống trong sản xuất) chúng tôi tiến hành cấy giống nấm đã phân lập được vào các chai có chứa môi trường hạt lúa và bổ xung dinh dưỡng như trên. Tiến hành theo dõi và thu nhận kết quả.
Bảng 3.2. Tốc độ lan của tơ nấm với 3 đối tượng nghiên cứu trên môi trường hạt, có bổ xung cám gạo
Chiều dài sợi nấm (cm) Thời gian
(ngày) P. cystidiosus P. abalonus P. blaoensis
8 2,5 2 1,7 14 4 3,7 3,1 17 5 4,6 3,9 19 5,7 5,2 4,5 21 6,6 5,9 5,2 26 8,5 7,8 7 29 9,4 8,8 8
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 8 14 17 19 21 26 29
thời gian (ngày)
tốc độ (cm)
P. cystidiosus P. ab alonus P. b laoensis
Hình 3.5. Sự lan của tơ của 3 loài bào ngư đen trong môi trường hạt Nhận xét:
Chúng tôi chọn môi trường hạt lúa để thử nghiệm làm môi trường nhân giống cho 3 loài bào ngư vì những lý do chính sau: Thành phần môi trường dễ kiếm, dễ thực hiện và môi trường này đã được sử dụng để nhân giống thành công cho rất nhiều loại nấm, trong có rất nhiều loài bào ngư khác. Kết quả thu được chỉ ra ở bảng 3.2.
Môi trường này cũng tỏ ra rất thích hợp với 3 đối tượng trên như những số liệu mà chúng tôi đã chỉ ra ở bảng 3.2 và hình 3.5. Chúng tôi nhận thấy rằng sau khi cấy giống từ môi trường thạch vào, sau 3 ngày đầu
quan sát thấy mẫu cấy đứng yên hay chưa bung sợi, có lẽ do tơ nấm chưa thích ứng ngay được với môi trường mới. Đến ngày ngày thứ 6 mẫu cấy bung sợi, tơ nấm từ nhiều phía vươn ra bám vào môi trường. Đến ngày thứ 8 tơ nấm ăn sâu vào môi trường, tơ nấm của: Pleurotus cystidiosus dài 2,5 cm, của Pleurotus abalonus dài 2 cm và loài Pleurotus blaoensis là 1,7 cm. Tơ nấm của 3 loài đều có màu trắng lợt, hệ sợi mảnh, Coremia xuất hiện dày đặc. Sau 19 ngày tuổi, hệ sợi của 3 loài dã trở lên dày hơn, kết cấu chặt chẽ và sợi bện chặt có màu trắng ngà đặc trưng.
Một điều mà chúng ta đều nhận thấy là tốc độ lan tơ của 3 đối tượng trên môi trường lúa chậm hơn trên môi trường thạch. Điều này thể hiện khi so sánh bảng 3.1 và bảng 3.2, tại thời cùng thời điểm 14 ngày tuổi chiều dài của tơ nấm trên môi trường hạt đối với Pleurotus cystidiosus; Pleurotus abalonus; Pleurotus blaoensis lần lượt là 4cm; 3,7 cm; 3,1 cm. Còn tại thời điểm 14 ngày tuổi chiều dài của tơ nấm trên môi trường thạch đối với Pleurotus cystidiosus; Pleurotus abalonus; Pleurotus blaoensis lần lượt là 5,1 cm; 4,8 cm; 4,5 cm. Khi tôi so sánh tại nhiều thời điểm khác, các đối tượng khác cũng thu được kết quả tương tự. Điều này có thể được giải thích là do môi trường thạch có nhiều chất dinh dưỡng, các chất ở dạng đơn chất dễ hấp thụ như acid amin; đường đơn (glucose) hơn nhiều môi trường hạt.
Tuy nhiên môi trường hạt rẻ tiền hơn (là môi trường nhân giống trong sản xuất) và sợi nấm phát triển cũng khá tốt. Quan sát đến 29 ngày tuổi sợi nấm của các đối tượng trên đã lan dược một khoảng khá lớn, với các loài Pleurotus cystidiosus; Pleurotus abalonus; Pleurotus blaoensis lần lượt là 9,4 cm; 8,8 cm; 8 cm.
Từ những kết quả thu được chúng tôi đi đến kết luận rằng môi trường hạt lúa có bổ sung thêm cám là môi trường thích hợp cho việc nhân giống 3 loài nấm trên. Thời gian nhân giống tương đối nhanh, chúng ta có thể sử dụng giống của loài
Pleurotus cystidiosus; Pleurotus abalonus; Pleurotus blaoensis lần lượt sau ngày thứ 30; 35; 40 (khi tốc độ phát triển của sợi nấm mạnh nhất và ổn định, đồng thời tổ chức của sợi nấm cũng kết cấu chặt chẽ, sợi nấm bện dầy) để cấy vào các bịch cơ chất tổng hợp có chứa mùn cưa cao su bổ sung dinh dưỡng để tiến hành nuôi trồng ra thể quả.
3.2.3. Kết quả nuôi trồng khảo nghiệm
3.2.3.1. Sự phát triển của tơ nấm trong môi trường cơ chất mùn cưa cao su và quy trình nuôi trồng su và quy trình nuôi trồng
Để tìm ra và bước đầu hoàn thiện quy trình nuôi trồng 3 loài trên và tính hiệu suất sinh học của từng loài trong phân chi Coremiopleurotus, chúng tôi tiến hành trồng thử nghiệm nấm trên bịch cơ chất mùn cưa cao su với công thức môi trường trong phần phương pháp.
Lượng giống cấy vào khoảng 4 -5% so với khối lượng cơ chất.
Hình 3.8. Bịch phôi loài P. abalonus
Bảng 3.3. Tốc độ lan tơ của 3 đối tượng nghiên cứu
trong môi trường cơ chất tổng hợp
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 8 14 19 26 36 45
Thời gian (ngày)
tốc độ (cm
)
P. cystidiosus P. abalonus P. blaoensis
Hình 3.10. Sự lan tơ của 3 loài bào ngư đen trên môi trường
cơ chất tổng hợp
Chiều dài sợi nấm (cm)
Thời gian (ngày) P. cystidiosus P. abalonus P. blaoensis
8 2,6 2,3 1,5 14 6,9 6,7 5,5 19 10,1 9,7 8,8 26 15,1 14,8 13,7 36 19 18,5 17,4 45 19
Nhận xét:
Theo kết quả thực tế được chỉ ra ở bảng và biểu đồ ta thấy: Sau 8 ngày cấy giống thì tơ nấm của 3 loài đã thích nghi với nguồn cơ chất mới, tơ nấm ăn từ trong ra ngoài tạo lên một lớp có màu trắng lợt ở phía ngoài bịch. Loài Pleurotus cystidiosus vẫn chiếm ưu thế như ở môi trường thạch và môi trường cọng khi tơ nấm đã lan được 2,6 cm; tiếp đó là loài Pleurotus abalonus; Pleurotus blaoensis tơ nấm lần lượt lan được 2,3 cm; 1,5 cm. Đến ngày thứ 14 thì tơ nấm đã hoàn toàn thích nghi với môi trường cơ chất mới, biểu hiện là sự lan tơ khá mạnh. Tuy nhiên, lúc này hệ sợi còn thưa mảnh, chưa có sự bện kết.
Một đặc điểm rất dễ nhận biết những bịch phôi của 3 loài này với những loài bào ngư hay linh chi khác đó là dịch đen hình cầu trên đầu các Coremia pha lẫn với hệ sợi trắng tạo nên những điểm lấm tấm đen rất đặc trưng mà các loài khác không có.
Đến ngày thứ 26 thì hệ sợi của 3 loài nuôi cấy đã dày hơn, kết cấu chặt chẽ, các Coremia xuất hiện dày đặc, cách đỉnh sợi nấm 1 cm. Lúc này kích thước sợi nấm các loài Pleurotus cystidiosus; Pleurotus abalonus; Pleurotus blaoensis lần lượt là 15,1cm; 14,8 cm; 13,7 cm.
Khi so sánh hệ sợi của loài Pleurotus blaoensis với hệ sợi của 2 loài kia trên bịch cơ chất mùn cưa cao su tôi thấy hệ sợi của loài Pleurotus blaoensis khá dày, kết bện chặt thể hiện rất rõ trên bản ảnh 3.9. Có thể đây chính là nguyên nhân khiến cho thể quả Pleurotus blaoensis to hơn hẳn so với 2 loài kia.
Đến ngày thứ 36 thì bịch phôi của loài Pleurotus cystidiosus, và Pleurotus abalonus tơ đã lan kín, trong khi đó loài Pleurotus blaoensis lan được 17,4 cm. Phải đến ngày thứ 45 thì bịch phôi của loài Pleurotus blaoensis mới lan kín.
Khi bịch phôi của 3 loài đã đầy chúng tôi chuyển ra nhà chăm sóc ra thể quả, tắm bịch thật sạch sau đó mới tháo nút bông để đón nấm. Nhà nuôi nấm phải thường xuyên duy trì ẩm độ khoảng 80-85%.
Các loài Pleurotus cystidiosus, Pleurotus abalonus và Pleurotus blaoensis ra thể quả lần lượt sau 4-5 ngày, 3-5 ngày và 6-8 ngày. Qua quá trình nuôi trồng,
chúng tôi nhận thấy 3 loài nấm trên thuộc nhóm nấm ưa nhiệt nên khi nuôi trồng ở Tp.Hồ Chí Minh (t 0=26-290C) cho năng suất khá cao trên cơ chất mùn cưa cao su với công nghệ nuôi trồng khá đơn giản.
Hình 3.11. Thể quả loài P. cystidiosus
Quy trình nuôi trồng được tóm tắt dưới đây:
Hình 3.15. Quy trình nuôi trồng nấm
Các bước và thông số của quy trình tiến hành đúng theo phần phương pháp đã dẫn.
Khử trùng Giá thể được cấy giống Nguyên liệu Đóng vào bịch PE hoặc PP Hình thành thể quả Ủ tơ nấm Thu hái Giống cấp 2 -độ ẩm: 80-85% -ánh sáng khuếch tán nhẹ -t0 =23-29 0C
3.2.3.2. Hiệu suất sinh học của 3 đối tượng nghiên cứu
Khi thu hoạch nấm chúng tôi tiến hành cân thể quả của từng loài, sau đó tính theo công thức đã nêu trong phần phương pháp. Kết quả thu được như sau:
Loài nấm P. cystidiosus P. abalonus P. blaoensis
Hiệu suất sinh học (%)
48 62 55
Bảng 3.4.Hiệu suất sinh học của 3 đối tượng nghiên cứu
Như vậy 3 đối tượng trên cho hiệu suất sinh học khá cao trong đó loài mới P. blaoensis cũng đạt hiệu suất sinh học tới 55% còn cao hơn cả loài chuẩn P. cystidiosus. Đó là điều rất đáng mừng vì nó khẳng định giống của chúng ta nếu được nghiên cứu chọn lọc kỹ thì chất lượng giống cũng không hề kém giống của nước ngoài.
CHƯƠNG 4. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1. Kết luận
Qua quá trình nghiên cứu về 3 đối tượng trên chúng tôi đi đến những kết