Đồ án chuyên ngành công nghệ thực phẩm Tìm hiểu về enzyme lysozyme

Đồ án chun ngành cơng nghệ thực phẩm Tìm hiểu enzyme lysozyme LỜI MỞ ĐẦU Enzyme chất xúc tác sinh học khơng có ý nghĩa cho q trình sinh trưởng, sinh sản sinh vật mà cịn đóng vai trị quan trọng cơng nghệ chế biến thực phẩm, y học, kỹ thuật phân tích, cơng nghệ gen bảo vệ môi trường Nghiên cứu, sản xuất enzyme ứng dụng enzyme phát triển mạnh từ đầu kỷ 20 đến Công nghệ sản xuất enzyme đem lại lợi nhuận lớn cho nhiều nước Việt Nam nhiều nước có nhiều nghiên cứu ứng dụng enzyme Tuy nhiên, công nghiệp enzyme ta chưa thực phát triển Lysozyme loại enzyme có nhiều tiềm ứng dụng công nghệ thực phẩm y học Đồ án nhằm tìm hiểu enzyme lysozyme, tính chất chế tác dụng enzyme với chất phương pháp tinh ứng dụng Đây đồ án mang nhìn tổng quát enzyme lysozyme Trong trình thực đồ án này, em xin chân thành cám ơn hướng dẫn tận tình Đống Thị Anh Đào, với giúp đỡ bạn việc tìm chia sẻ tài liệu Sinh viên thực Phạm Thị Bích Ngọc I Giới thiệu lysozyme Đồ án chun ngành cơng nghệ thực phẩm Tìm hiểu enzyme lysozyme Lysozyme (ký hiệu E.C.3.2.1.17) enzyme thủy phân liên kết β – 1,4 glycosidic N – acetylmuraminic acid N – acetylglucosamine polysaccharide, thành phần chủ yếu thành tế bào số vi khuẩn Lysozyme thủy phân liên kết β – 1,4 glycosidic N – acetylglucosamine chitin, polymer N – acetylglucosamine Lysozyme cịn có tên khác như: 1,4-N-acetylmuramidase, L-7001, N,Odiacetylmuramidase, GlobulinG1, GlobulinG, Mucopeptide N-acetylmuramoylhydrolase, Mucopeptide glucohydrolase Muramidase Lysozyme phân bố rộng rãi hầu hết lồi động vật thực vật Trong đó, lysozyme lòng trắng trứng gà nghiên cứu nhiều (lysozyme “c”) Một loại lysozyme khác có lịng trắng trứng ngỗng ni lysozyme “g” (Prager cộng 1974) Lysozyme tìm thấy chất tiết mơ lồi động vật có vú, nước bọt, nước mắt, sữa, đờm, bạch cầu, cật … Ở thực vật, lysozyme tìm thấy mủ sung đu đủ có tính chất hóa học khác với lysozyme lịng trắng trứng (Meyer cộng 1956) Trong virus (hay bacteriophase), lysozyme tác nhân để xâm nhập vào tế bào vi khuẩn vật chủ Lysozyme có virus (hay bacteriophase) phá hủy peptidoglycan thành tế bào vi khuẩn tiêm ADN vào Khi vi khuẩn nguyên phân, nhiều phân tử lysozyme tạo thành để phá hủy thành tế bào vi khuẩn giải phóng nhiều virus Lịch sử lysozyme Lysozyme Alexvàer Fleming phát năm 1922 cách tình cờ phịng thí nghiệm ơng Ơng vơ tình bị chảy nước mũi vào đĩa petre có canh trường vi khuẩn ông thấy vi khuẩn bị phân giải Hiện tượng ông nghiên cứu cẩn thận enzyme lysozyme xác định Năm 1965, David Chilton Phillips khám phá cấu trúc lysozyme cách phân tích X quang độ phân giải angstrom Trong nhiều năm, phân tích X quang phương pháp phân tích lysozyme tốt tính chất đặc biệt loại enzyme Thứ nhất, lysozyme dễ tinh từ lòng trắng trứng Thứ hai, lysozyme dễ kết tinh, không giống hầu hết lại protein khác Người ta dựa vào tính chất lysozyme để tinh enzyme Và cuối cùng, tinh thể lysozyme làm nhiễu xạ tia X với độ phân giải cao, loại cấu trúc protein có độ phân giải cao nhất: 0,94 angstrom Phân loại lysozyme Đồ án chuyên ngành cơng nghệ thực phẩm Tìm hiểu enzyme lysozyme Lysozyme lấy từ nhiều nguồn: vi sinh vật, virus, côn trùng, cây, động vật Người ta phân loại lysozyme thành nhóm nhỏ dựa nguồn gốc, thứ tự acid amin chiều dài Lòng trắng trứng nguồn giàu lysozyme nhất, chứa khoảng 0,3 – 0,4 g lysozyme trứng Lysozyme lòng trắng trứng đại diện cho họ lysozyme gọi lysozyme type-c Những nghiên cứu cho thấy lớp biểu bì vỏ trứng chứa lysozyme màng ngồi màng nhiều lysozyme Lysozyme type-g có mặt lồi chim Lysozyme type-c lysozyme type-g có khối lượng phân tử khác trạng thái khác Lysozyme có mặt mô động vật, huyết quan Lá lách gia súc chứa lượng lysozyme lớn Lysozyme sữa bị có khối lượng phân tử với lysozyme lịng trắng trứng hoạt độ gấp lần Lysozyme type-v (viral) lysozyme virus, xác định khác với lysozyme khác chỗ loại transglycosidase Lysozyme từ thực vật lysozyme type-h type-b tùy thuộc vào nguồn gốc lysozyme Bảng 1: Các loại lysozyme Loại lysozyme Nguồn Tài liệu tham khảo type-c (chicken) Lòng trắng trứng gà Chipman Sharon, 1969 type-g (goose) Các loài chim Prager Jolles, 1996 type-h (hevamine) Thực vật Beintema cộng sự,1996 type-b (barley) Thực vật Beintema cộng sự,1996 type-i (invertebrate) Động vật thân mềm, côn trùng Jolles Jolles, 1975 Bảng 2: Hàm lượng lysozyme nguồn khác Loại lysozyme Hàm lượng Tài liệu tham khảo Đồ án chun ngành cơng nghệ thực phẩm Tìm hiểu enzyme lysozyme Lysozyme chất lỏng thể  Nước mắt  Nước bọt  Nước tiểu  Sữa người Grossowicz Ariel, 1983 Lysozyme trái rau:  Bông cải  Đu đủ  Bắp cải  Củ dền  Củ cải  Bông cải xanh 2,6 mg/l 0,13 mg/ml Vết 0,2 – 0,4 mg/ml Ereifej Markakis, 1980 27,6 µg/ml 7,9 µg/ml 2,3 µg/ml 3,3 µg/ml 1,8 µg/ml 8,1 µg/ml II Cấu trúc, đặc tính hóa lý Lysozyme polypeptide dạng hình cầu có 129 acid amin với cầu nối disulfure hỗn hợp globulin G1, G2 G3, chủ yếu loại G1 có trọng lượng phân tử khoảng 14,7 kDa vị trí Cys6-Cys127, Cys30-Cys115, Cys64-Cys80 Cys76-Cys94 Khi cầu nối disulfure bị cắt, lysozyme hoạt tính để trì hoạt tính phải cịn cầu nối disulfure Phân tử lysozyme chia làm phần: α β, nối với đường xoắn ốc α chứa trung tâm hoạt động lysozyme Đồ án chun ngành cơng nghệ thực phẩm Tìm hiểu enzyme lysozyme Hình 1: Cấu tạo lysozyme Chuỗi acid amin đánh dấu từ đầu N đến đầu C Đường chấm gạch thể cầu nối disulfure Lysozyme phá vỡ liên kết C1 N-acetylmuramic acid (NAM) C4 Nacetylglucosamine (NAG) Hình 2: Cơ chất lysozyme (Liên kết β 1,4 glucosidic N-acetylmuramic acid N-acetylglucosamin khoanh trịn.) Quan sát hình chế hoạt động lysozyme (hình 3) Phản ứng thủy phân diễn khe có chứa nhóm hoạt động lysozyme Các nhóm hoạt động lysozyme mạch nhánh –COOH glutamic acid 35 (Glu35) Đồ án chun ngành cơng nghệ thực phẩm Tìm hiểu enzyme lysozyme –COO– aspartate 52 (Asp52) Nhóm đường thành tế bào nằm acid amin Phản ứng bắt đầu Glu35 cho Oxy nhóm glycoside proton, làm biến dạng phân tử đường D từ dạng ghế thông thường bền vững thành dạng nguyên tử carbon 2, nguyên tử oxy mặt phẳng, gây biến dạng cấu tạo chất làm cho liên kết bị yếu đưa đến cắt đứt liên kết glycosidic oxy nguyên tử carbon đường, tạo C+ C+ ổn định cách kết hợp với điện tích âm Asp52 để tạo thành sản phẩm trung gian Sản phẩm trung gian sau phản ứng với phân tử nước tạo sản phẩm phản ứng thủy phân giải phóng enzyme Các monosaccharide ký hiệu C, D, E Các mạch nhánh đường ký hiệu như: R1 –CH2OH, R2 –NH–C–CH2 || O Đồ án chun ngành cơng nghệ thực phẩm Tìm hiểu enzyme lysozyme Hình 3: Cơ chế tác dụng lysozyme q trình thủy phân polysaccharide Tính chất lysozyme có lịng trắng trứng gà Đồ án chun ngành cơng nghệ thực phẩm Tìm hiểu enzyme lysozyme Khối lượng phân tử: 14 388 (Jollés 1969) Gồm: 129 acid amin (21 aspartic acid, glutamic acid, 12 alanine, 11 arginine, cysteine, phenylalanine, 12 glycine, isoleucine, histidine, leucine, lysine, proline, methionine, 12 serine, tyrosine, threnonine, tryptophan valine pH tối ưu: 6,2 (Davies cộng 1969) Điểm đẳng điện: pH 11 (Alderton cộng 1945) Nét đặc trưng: Chất ức chế: chất hoạt động bề mặt dodecyl sulfate, cồn acid béo, dẫn xuất nhóm imidazole indole Độ bền: lysozyme bảo quản điều kiện khô lạnh hay dạng bột tinh thể nhiệt độ – o C bền vịng năm Dạng dung dịch pH – để nhiệt độ lạnh bền vịng nhiều tuần, để nhiệt độ mơi trường bền vài ngày Tính chất ức chế vi khuẩn lysozyme lòng trắng trứng gà Cơ chất tự nhiên lysozyme màng peptidoglycan thành tế bào, thành tế bào có vai trị tạo hình dáng tế bào, bảo vệ tế bào chống lại áp suất thẩm thấu Vì thế, thủy phân màng peptidoglycan dẫn đến phân giải tế bào Thành phần hóa học thành tế bào vi khuẩn Gram âm khác với vi khuẩn Gram dương Thành tế bào vi khuẩn Gram dương có cấu tạo lớp peptidoglycan dày với teichoic acid lipoteichoic acid Thành tế bào vi khuẩn Gram âm cấu tạo lớp, lớp lớp peptidoglycan đơn khơng có teichoic acid lớp lớp lipopolysaccharide dày Lớp vi khuẩn Gram âm ngăn cản tiếp xúc lysozyme peptidoglycan, vi khuẩn Gram âm mẫn cảm với lysozyme (Salton, 1958) Tuy nhiên, nghiên cứu cho chế tiêu diệt vi khuẩn Gram dương độc lập với hoạt động enzyme mà chủ yếu tính chất kỵ nước tích điện dương lysozyme (Pellegrini cộng sự, 1992) Những nghiên cứu cho thấy hoạt động enzyme hoạt động dung giải khơng liên quan với lysozyme biến tính ức chế sinh trưởng vi khuẩn (Pellegrini cộng sự, 1992; Ibrahim cộng sự, 1996; Ibrahim công sự, 2001) a Hoạt động ức chế vi khuẩn Gram dương Lysozyme lịng trắng trứng có hoạt động hiệu số loài vi khuẩn thực phẩm (Proctor Cunningham, 1998) Lysozyme dung giải tế bào vi khuẩn cách thay đổi tính chất cấu trúc bề mặt thành tế bào Những quan sát kính hiển vi cho thấy có phồng tế bào trước tế bào bị dung giải nguyên nhân phồng thay đổi cấu trúc thành tế bào (Salton, 1957) Cơ chế hoạt động lysozyme nghiên cứu Salton năm 1957 Ông sử dụng ba vi khuẩn Gram dương lysozyme hoàn toàn dung giải thành tế bào chúng Khi Đồ án chuyên ngành cơng nghệ thực phẩm Tìm hiểu enzyme lysozyme Micrococcus lysodeikticus, Sarcina lutea, Bacillus megaterium bị dung giải lysozyme, có giải phóng đường acetyl amio Hoạt động lysozyme xác định cách đo giảm mật độ thành tế bào cách ước tính lượng chất mạch ngắn giải phóng Những chất hỗn hợp phức tạp gồm nhiều chất có kích thước phân tử khác nhau, tính chất điện khác Chất hỗn hợp disaccharide acetlyglucosamine acetyl muramic acid Acid amin thành tế bào đường đơn không tìm thấy hỗn hợp (Salton, 1958) Điều chứng tỏ lysozyme cắt đứt liên kết glycoside đường amino thành tế bào, giải phóng disaccharides acetylglucosamine acetylmuramic acid (Salton, 1958) b Hoạt động ức chế vi khuẩn Gram âm Những nghiên cứu gần số vi khuẩn Gram âm định cho thấy tách thành tế bào vi khuẩn để ủ với lysozyme, mật độ thành tế bào chúng giảm Dung dịch thu gồm chất chủ yếu alanine, acid glytamic, diaminopimelic acid (DAP), glycosamine lượng nhỏ acid muramic vài acid amin khác (Salton, 1958) Những nghiên cứu gần cho thấy hoạt động lysozyme vi khuẩn Gram âm không phụ thuộc vào hoạt động enzyme mà phụ thuộc vào chuyển pha cấu trúc (Ibrahim cộng sự, 2001) Có chứng phần chống vi sinh vật đặc biết gọi phần 98-112 có liên quan đến hoạt động chống vi sinh vật Gram dương Gram âm lysozyme (Ibrahim cộng sự, 2001) Hoạt động chống vi sinh vật lysozyme độc lập với hoạt động enzyme Lysozyme lịng trắng trứng biến tính nhiệt dùng để nghiên cứu khả chống vi sinh vật lysozyme người ta tìm sau bị biến tính lysozyme chống lại vi khuẩn Gram âm mạnh với phần mạch đuỗi ra, hoạt tính enzyme bị vơ hoạt cấu trúc kỵ nước (During cộng sự, 1999) Người ta giải thích điều lồng cấu trúc đối xứng bên lysozyme vào màng tế bào dẫn đến phá vỡ màng III Các yếu tố ảnh hưởng đến hoạt tính Có nhiều yếu tố ảnh hưởng đến hoạt tính lysozyme, ví dụ như: pH, nhiệt độ, ion, khả tiếp cận với liên kết để phá hủy thành tế bào vi khuẩn… pH Đối với lysozyme lịng trắng trứng, thí nghiệm tiến hành dung dịch trung tính dung dịch acid, hoạt động lysozyme dung dịch acid luôn mạnh so với môi trường trung tính Sự ức chế hoạt động lysozyme bắt đầu pH 5,7, pH tối ưu lysozyme khoảng 6,2 khả dung giải tốt pH 6,07,0 (Boasson, 1938; Smolelis Hartsell, 1949) Đối với lysozyme hào, pH tối ưu 5,5-6,0 (Xue cộng sự, 2004) Đồ án chuyên ngành công nghệ thực phẩm Tìm hiểu enzyme lysozyme Nhiệt độ Sự dung giải tế bào vi khuẩn lysozyme lòng trắng trứng tăng tăng nhiệt độ đến o 60 C (Smolelis Hartsell, 1949) Hoạt động lysozyme tinh từ huyết tương hào tăng với tăng nhiệt độ từ – 45oC sau giảm nhiệt độ lớn 55oC Sự có mặt chất điện ly Hoạt động dung giải lysozyme lịng trắng trứng tốt có có mặt muối Ka với lực ion khoảng 0,1 (Salton, 1957) Lysozyme dung giải dung dịch muối Mg hay Ca so với dung dịch muối K Na (Smolelis Hartsell, 1949) Đối với lysozyme hào, lực ion khoảng 0,18 – 0,2 (Xue cộng sự, 2004) Điều kiện canh trường Sự dung giải tế bào vi khuẩn bao gồm phá vỡ cấu trúc bề mặt tế bào Vì thế, yếu tố ảnh hưởng đến bền cấu trúc bề mặt tế bào hay chất ngăn cản tiếp xúc lysozyme chất ảnh hưởng đến hoạt động dung giải lysozyme (Salton, 1957) IV Phương pháp xác định hoạt tính lysozyme Tính chất xúc tác lysozyme xác nhận lysozyme thỏa mãn tính chất sau: a Lysozyme làm giảm tính dày đặc cấu trúc thành tế bào phân lập b Lysozyme dung giải tế bào vi khuẩn c Lysozyme giải phóng phức đường acetylamino glucosamine acidic hexosamine acid muramic Nồng độ protein đo phương pháp Micro BCA Protein Assay (Pierce Biotechnology, Rockford, IL) Tất phép đo tiến hành lần Hoạt tính lysozyme đo phương pháp quang phổ (Xue cộng sự, 2004) 20µL mẫu trộn với 180µL Micrococcus lysodeikticus làm yếu 0,2M acetate buffer pH 5,8 đĩa micro để nhiệt độ phòng Đo độ hấp thu hỗn hợp bước sóng 450nm microtiter plate reader (Dynatec, Chantilly, VA.) Sự hấp thu đo sau đọc ban đầu phút giảm độ hấp thu bước sóng 450nm phút tính tốn Lysozyme cho có chất lượng đơn vị lysozyme gây giảm độ hấp thu hỗn hợp 0,001/phút V Cách tinh chế, tinh 10 Đồ án chuyên ngành cơng nghệ thực phẩm Tìm hiểu enzyme lysozyme hệ thống gradient, kẹp ống chích mẫu lại để ngăn chặn dòng chảy miệng ống, gắn ống vào đỉnh cột 12 Chuẩn bị 25 thí nghiệm có nắp đậy Lấy ml nước vào ống đánh dấu mực nước Đánh dấu tất ống mức Xếp ống thành hàng cho ống số nhận chất rửa cột Mở ống nối phận khuấy trộn cột Mở van đáy cột thu chất rửa cột ống thí nghiệm số Khi ống chứa đầy 3ml, chuyển sang ống 13 Cho buffer A từ phận khuấy trộn chảy qua cột vào erlen thu phần Nếu dịng chảy q khó mở nắp cột khấy nhẹ khoảng 1cm đỉnh cột Sau thu phần, ngừng dịng chảy cách khóa van đáy cột lại 14 Cho thêm buffer A vào phận khuấy trộn cho thể tích 25ml Mở van phận khuấy trộn đủ để buffer A chảy qua ống chích mẫu vào phận trộn mẫu hết khí ống Sau đóng van chặt lại Khơng có bọt khí ống chích mẫu Tiếp theo, đổ 25ml buffer B (0.050 M Tris/1.0 M NaCl, pH 8.2) phận trộn mẫu Hệ thống rửa giải gradient sẵn sàng 15 Mở van phận trộn mẫu bắt đầu khuấy nhẹ Mở khóa cột, tiếp tục thu 3ml phần hầu hết dung dịch gradient dùng hết Khi dòng buffer nồng độ muối thấp chảy qua phận phối trộn, dòng buffer nồng độ muối cao chảy vào từ phận trộn mẫu trộn với 16 Tiếp tục thu hồi 3ml phần dung dịch gradient hết (tổng cộng có 2025 phần) Phương pháp kết tinh tinh thể lysozyme cạnh Kết tinh lysozyme lịng trắng trứng Có nhiều cách để kết tinh lysozyme lòng trắng trứng Đặc điểm phổ biến của phương pháp đề cập Chú ý: để bảo vệ mẫu thử khỏi bị nhiễm vi khuẩn nấm, phải cho 0,02% (w/v) Sodium azide (NaN3) tất dung dịch sử dụng Lọc tất dung dịch qua giấy lọc 0,22μm.m Có kỹ thuật kết tinh lysozyme chính, khơng sử dụng để kết tinh lysozyme mà sử dụng cho hầu hết loại protein khác là: hanging drop sitting drop Điểm khác kỹ thuật thể tích giọt protein lớn lên tinh thể Đối với hanging drop, thể tích trung bình giọt protein vào khoảng 1-5μm.L, cịn sitting drop thể tích vào khoảng 10-20μm.L 16 Đồ án chuyên ngành cơng nghệ thực phẩm Tìm hiểu enzyme lysozyme  Phương pháp kết tinh lysozyme Những tinh thể thu phương pháp thích hợp cho non-frozen X-Ray data collection Chuẩn bị 75mg/ml mẫu lysozyme NaAc 0,1M pH 4,8 Pha dung dịch gồm 1ml dung dịch NaCl 6,5% (w/v) dung dịch NaAc 0,1M pH 4,8 Cho vào dụng cụ tạo giọt 5-7μm.L dung dịch lysozyme 5-3μm.L dung dịch pha bước Tổng cộng 10μm.L Bịt kín dụng cụ tạo giọt mỡ dầu Tinh thể phát triển vòng 1-2 ngày Nên làm loạt khay kết tinh với nhiều tỷ lệ protein/dung dịch với nồng độ lysozyme từ 50mg/ml 75mg/ml  Phương pháp kết tinh lysozyme Các tinh thể tạo thành theo điều kiện thích hợp với phương pháp thu hồi XRay nhiệt độ thấp (low temperature X-Ray data collection), có mặt hợp chất cryo-protective điều kiện kết tinh lysozyme Chuẩn bị 75mg/ml mẫu lysozyme dung dịch NaAc 0,1M pH=4,8 Dung dịch pha gồm ml dung dịch NaCl 10% (w/v), NaAc pH 4,8 ethylene glycol 25% (w/v) Cho vào dụng cụ tạo giọt 6-7μm.L dung dịch lysozyme 4-3μm.L dung dịch pha bước Tổng cộng 10μm.L Bịt kín dụng cụ tạo giọt mỡ dầu Tinh thể phát triển vòng 1-2 ngày, mang làm lạnh Nếu kích thước tinh thể khơng thích hợp cho phân tích sau này, nên thực loạt khay với nhiều tỷ lệ protein/dung dịch với nồng độ lysozyme từ 50mg/ml 75mg/ml 17 Đồ án chun ngành cơng nghệ thực phẩm Tìm hiểu enzyme lysozyme Hình 4: Tinh thể lysozyme cạnh Bảng 3: Tính chất loại tinh thể lysozyme Name: VI Triclinic Lysozyme Tetragonal Lysozyme Space group: P1 P 21 Length a (Å): 26,5 79,0 Length b (Å): 31,0 79,0 Length c (Å): 33,5 38,0 Alpha (°): 88,0 90,0 Beta (°): 107,0 90,0 Gamma (°): 112,0 90,0 Những quy định sản phẩm Tùy mục đích sử dụng enzyme tùy nước, quy đình sử dụng enzyme chế biến thực phẩm, đặc biệt sử dụng phụ gia thực phẩm phức tạp nhất, chặt chẽ sử dụng enzyme q trình cơng nghiệp khác Đối với enzyme tách từ thể biến đổi di truyền (GMO), cịn có thêm quy định bổ sung khác Ví dụ: mơ tả cách thiết kế gen, sản phẩm phải khơng có GMO 18 Đồ án chun ngành cơng nghệ thực phẩm Tìm hiểu enzyme lysozyme Độ chế phẩm enzyme dùng thực phẩm quy định nghiêm ngặt Ví dụ: Luật Pháp quy định hàm lượng chất, vi sinh vật, kim loại nặng chế phẩm sau Bảng 4: Quy định Pháp chế phẩm enzyme Cadmium, thủy ngân < 0,5 mg/kg Arsen < mg/kg Chì < 10 mg/kg Aflatoxin < 0,005 mg/kg Tổng số vi sinh vật < 50 000/g Samonella Khơng có 25g Coliforms < 30/g Staphylococcus aureus Khơng có 1g Hoạt tính kháng sinh Khơng có Bảng 5: Chỉ tiêu chất lượng lysozyme Nguồn Cảm quan Lòng trắng trứng gà Bột vơ định hình Tro ≤ 2% Độ ẩm ≤ 8% pH Độ tan Bulk Density 3,0 – 4,5 ≥ 95% ≥ 0,34g/ml Chloride ≤ 3,5% Tổng số vi khuẩn hiếu khí ≤ 100/g Tổng nấm men, mốc ≤ 10/g 19 Đồ án chuyên ngành công nghệ thực phẩm Hoạt độ Tìm hiểu enzyme lysozyme ≥ 95%  Một số sản phẩm lysozyme từ lòng trắng trứng Số hiệu sản phẩm L6876 (thẩm tách, làm khô lạnh, hoạt độ 50000 un/mg) Đặc điểm vật lý Bột khô lạnh Khối lượng phân tử Mạch đơn 14,7 kDa Thành phần Protein ≥90% Nhiệt độ bảo quản -20oC Hình dạng Tinh thể chiều Ứng dụng Phá hủy thành tế bào vi khuẩn, dùng để tạo tế bào trần Xác định hoạt tính Một đơn vị hoạt độ tạo thay đổi độ hấp thu hỗn hợp gồm Micrococcus lysodeikticus đình hoạt động 2,6ml hỗn hợp phản ứng bước sóng 450nm 0,001/phút Độ tinh Được thẩm tách làm lạnh khơ, có chứa muối Natri acetate Natri chloride Số hiệu sản phẩm L7651 (rây phân tử, làm khô lạnh, hoạt độ 50000 un/mg) Đặc điểm vật lý Bột khô lạnh Khối lượng phân tử Mạch đơn 14,7 kDa Thành phần Protein ≥90% Nhiệt độ bảo quản -20oC Hình dạng Tinh thể chiều Ứng dụng Phá hủy thành tế bào vi khuẩn, dùng để tạo tế bào trần Xác định hoạt tính Một đơn vị hoạt độ tạo thay đổi độ hấp thu hỗn hợp gồm Micrococcus lysodeikticus đình hoạt động 2,6ml hỗn hợp phản ứng pH 6,24 nhiệt độ 25 oC bước sóng 450nm 0,001/phút Độ tinh Có độ tinh cao kết tinh thẩm tách nhiều lần 20 ... || O Đồ án chuyên ngành cơng nghệ thực phẩm Tìm hiểu enzyme lysozyme Hình 3: Cơ chế tác dụng lysozyme trình thủy phân polysaccharide Tính chất lysozyme có lòng trắng trứng gà Đồ án chuyên ngành. .. này, nên thực loạt khay với nhiều tỷ lệ protein/dung dịch với nồng độ lysozyme từ 50mg/ml 75mg/ml 17 Đồ án chuyên ngành công nghệ thực phẩm Tìm hiểu enzyme lysozyme Hình 4: Tinh thể lysozyme. .. hoạt động lysozyme nghiên cứu Salton năm 1957 Ông sử dụng ba vi khuẩn Gram dương lysozyme hoàn toàn dung giải thành tế bào chúng Khi Đồ án chuyên ngành công nghệ thực phẩm Tìm hiểu enzyme lysozyme