nghiên cứu đặc điểm sinh học sinh sản và thử nghiệm ương nuôi ấu trùng loài trùng trục sinonovacula constricta lamarck, 1818

Nghiên cứu một số đặc điểm sinh học sinh sản của trùng trục: Hình thái và sự phát triển tuyến sinh dục; mùa vụ sinh sản, tuổi và kích thước thành thục lần đầu, sức sinh sản, hoạt động s

LỜI CAM ĐOAN

Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi, các thông tin trích dẫn đều có ghi nguồn gốc tài liệu, các số liệu trong luận văn là hoàn toàn trung thực và chưa từng được công bố trong bất kỳ tài liệu nào

Tác giả

Tạ Ngọc Hưng

Xin chân thành cảm ơn sự động viên, khích lệ và giúp đỡ của các thầy cô trong Khoa Nuôi trồng Thủy sản, Trường Đại học Nha Trang Tôi xin cảm ơn TS Nguyễn Hữu Dũng, TS Phạm Quốc Hùng, TS Lê Anh Tuấn, ThS Trần Văn Dũng đã động viên, giúp đỡ đóng góp ý kiến hữu ích cho tôi trong quá trình thực hiện đề tài và viết luận Tôi xin chân thành cảm ơn các kỹ sư, công nhân trại sản xuất giống thủy sản Minh Phú - xã Bạch Long - huyện Giao Thủy - tỉnh Nam Định đã nhiệt tình giúp đỡ tôi về cơ sở vật chất phục vụ nghiên cứu và sinh hoạt trong thời gian hiện đề tài

Tôi xin chân thành cảm ơn tập thể lớp Cao học Nuôi trồng Thuỷ sản 2010 đã luôn cùng Tôi trong suốt khoá học cũng như trong thời gian thực hiện tốt nghiệp

Cuối cùng, tôi xin gửi lời cảm ơn đến gia đình đã động viên và giúp đỡ tôi cả về vật chất và tinh thần trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu và hoàn thành luận văn

Thái Bình, tháng 05 năm 2013

Tác giả

Tạ Ngọc Hưng

MỤC LỤC

MỤC LỤC i

DANH MỤC BẢNG v

DANH MỤC HÌNH vi

MỞ ĐẦU 1

CHƯƠNG I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3

1.1 Một số đặc điểm sinh học của trùng trục 3

1.1.1 Vị trí phân loại 3

1.1.2 Đặc điểm hình thái 4

1.1.3 Đặc điểm sinh thái phân bố 5

1.1.4 Tập tính sống 5

1.1.5 Đặc điểm sinh trưởng 7

1.1.6 Đặc điểm dinh dưỡng 8

1.1.7 Đặc điểm sinh sản và phát triển 9

1.1.7.1 Hình dạng và cấu tạo của cơ quan sinh dục 9

1.1.7.2 Mùa sinh sản và sức sinh sản 10

1.1.7.3 Các giai đoạn phát triển của tuyên sinh dục 11

1.1.7.4 Phương thức sinh sản và sự thụ tinh 14

1.1.7.5 Các giai đoạn phát triển của ấu trùng trùng trục 15

1.2 Các nghiên cứu về sản xuất giống trùng trục trên thế giới và Việt Nam 15

CHƯƠNG 2: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18

2.1 Địa điểm, thời gian và đối tượng nghiên cứu 18

2.1.1 Địa điểm nghiên cứu 18

2.1.2 Thời gian nghiên cứu 18

2.1.3 Đối tượng nghiên cứu 18

2.2 Sơ đồ khối nội dung nghiên cứu 18

2.3 Phương pháp thu thập và xử lý mẫu 19

2.3.1 Thu mẫu 19

2.3.2 Xác định các giai đoạn phát triển của tuyến sinh dục 19

2.3.3 Cắt mô tuyến sinh dục và phân tích tiêu bản 19

2.3.4 Xác định mùa vụ sinh sản 20

2.3.5 Tuổi và kích thước thành thục lần đầu 20

2.3.6 Sức sinh sản 20

2.3.7 Tập tính sinh sản, sự phát triển phôi và biến thái của ấu trùng 21

2.3.8 Xác định tốc độ tăng trưởng của ấu trùng 22

2.3.9 Mối quan hệ giữa kích thước trùng trục mẹ và sức sinh sản hữu hiệu 22

2.4 Bố trí thí nghiệm ương nuôi ấu trùng trùng trục 22

2.4.1 Quản lý và chăm sóc bể ương 23

2.4.2 Thức ăn và phương pháp cho ăn 24

2.4.3 Thu và ương nuôi ấu trùng xuống đáy (Spat) 24

2.5 Phương pháp phân tích và xử lý số liệu 25

CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 26

3.1 Một số đặc điểm sinh học sinh sản của trùng trục 26

3.1.1 Đặc điểm hình thái và sự phát triển tuyến sinh dục 26

3.1.1.1 Hình thái ngoài 26

3.1.1.2 Các giai đoạn phát triển tuyến sinh dục 26

3.1.2 Chu kỳ sinh dục và mùa vụ sinh sản 29

3.1.3 Tuổi và kích thước sinh sản lần đầu 33

3.1.4 Sức sinh sản 34

3.1.4.1 Sức sinh sản tuyệt đối và tương đối 34

3.1.4.2 Sức sinh sản thực tế 36

3.1.4.3 Sức sinh sản hiệu quả 37

3.1.5 Hoạt động sinh sản, sự phát triển phôi và biến thái ấu trùng trùng trục 38

3.1.5.1 Tập tính đẻ 38

3.1.5.2 Thụ tinh và phân cắt 38

3.1.5.3 Các giai đoạn phát triển của ấu trùng 39

3.2 Thí nghiệm ương nuôi ấu trùng trùng trục 43

3.2.1 Biến động môi trường thí nghiệm 43

3.2.2 Sinh trưởng của ấu trùng 43

3.2.3 Năng suất và tỷ lệ sống của ấu trùng 44

CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 46

4.1 Kết luận 46

4.2 Đề xuất ý kiến 46

TÀI LIỆU THAM KHẢO 48

DANH MỤC BẢNG

Bảng 1.1 Sức sinh sản hiệu quả của trùng trùc theo chiều dài vỏ 11

Bảng 1.2 Thời gian phát triển của các giai đoạn ấu trùng trùng trục [32] 15

Bảng 3.1 Tỷ lệ thành thục sinh dục trùng trục theo nhóm kích thước 33

Bảng 3.2 Sức sinh sản tương đối của các nhóm cá thể theo kích thước 34

Bảng 3.3: Sức sinh sản của trùng trục so với một số động vậy thân mềm khác 35

Bảng 3.4: Số lượng trứng của mỗi cá thể trùng trục trên một lần đẻ 36

Bảng 3.5: Thống kê kết quả của 4 đợt cho trùng trục đẻ 38

Bảng 3.6: Các giai đoạn phát triển của ấu trùng trùng trục 42

Bảng 3.7: Tốc độ sinh trưởng của ấu trùng trùng trục theo thời gian 43

Bảng 3.8: Tỷ lệ sống của ấu trùng qua các giai đoạn biến thái 45

DANH MỤC HÌNH

Hình 1.1: Hình thái ngoài của trùng trục 3

Hình 1.2 Hình thái của vỏ trùng trục [32] 4

Hình 1.3 Hình vị trí và hoạt đông cơ khép vỏ của trùng trục [32] 4

Hình 1.4 Cấu tạo trong cơ thể trùng trục [32] 5

Hình 1.5 Vùng biển phân bố trùng trục 5

Hình 1.6 Hoạt động chân của trùng trục [32] 6

Hình 1.7 Trạng thái dưới hang của trùng trục [32] 6

Hình 1.8 Vị trí của trùng trục theo thủy triều [32] 7

Hình 1.9 Các hình ảnh mô tả hoạt động lọc nước của trùng trục [32] 9

Hình 1.10 Hình cắt ngang tuyến sinh dục cái của trùng trục [32] 10

Hình 1.11: Vị trí của miệng ống sinh dục 10

Hình 2.1 Sơ đồ khối nội dung nghiên cứu 19

Hình 2.2: Sơ đồ thí nghiệm ương nuôi ấu trùng trùng trục 23

Hình 2.3: Bể ương nuôi ấu trùng trùng trục 23

Hình 2.4 Các loài tảo sử dụng trong ương nuôi ấu trùng trùng trục 24

Hình 3.1: Hình thái ngoài cơ quan sinh sản của trùng trục 26

Hình 3.2 Tinh sào (trái) và buồng trứng (phải) giai đoạn 0 27

Hình 3.3 Tinh sào (trái) và buồng trứng (phải) giai đoạn I 27

Hình 3.4 Tinh sào (trái) và buồng trứng (phải) giai đoạn II 27

Hình 3.5 Tinh sào (trái) và buồng trứng (phải) giai đoạn IIIA 28

Hình 3.6 Tinh sào (trái) và buồng trứng (phải) giai đoạn IIIB 28

Hình 3.7 Tinh sào (trái) và buồng trứng (phải) giai đoạn IIIC 29

Hình 3.8 Tinh sào (trái) và buồng trứng (phải) giai đoạn IV 29

Hình 3.9: Tỷ lệ các giai đoạn phát triển tuyến sinh dục theo thời gian thu mẫu (n = 100) 30

Hình 3.10 Tỷ lệ % trùng trục thành thục sinh dục ở giai đoạn III, IV 31

Hình 3.11: Biến thiên hệ số GSI của trùng trục theo các tháng 32

Hình 3.12 Hệ số sinh dục của trùng trục đực và cái theo các tháng trong năm 32

Hình 3.13 Biến thiên tỷ lệ thành thục của trùng trục theo kích thước 34

Hình 3.14 Tuyến sinh dục của trùng trục khi thành thục sinh dục 35

Hình 3.15 Mối tương quan giữa chiều dài vỏ và sức sinh sản thực tế (n = 21) 37

Hình 3.16: Trứng và phôi nang 39

Hình 3.17: Giai đoạn ấu trùng bánh xe 39

Hình 3.18: Giai đoạn ấu trùng chữ D 40

Hình 3.19: Giai đoạn ấu trùng đỉnh vỏ 40

Hình 3.20: Giai đoạn ấu trùng chân bò 41

Hình 3.21: Trùng trục giống 42

Hình 3.22: Trùng trục giống cấp 1 sau 15 ngày xuống đáy 43

Hình 3.23: Sinh trưởng của ấu trùng trùng trục theo thời gian 44

MỞ ĐẦU

Trùng trục Sinonovacula constricta (Lamarck, 1818) là một loài thân mềm thuộc

họ ngao Solecrutidae, bộ Veneroida, lớp hai mảnh vỏ Bivalvia, ngành động vật thân mềm Mollusca Các nghiên cứu về thành phần sinh hóa của loài trùng trục cho thấy chúng là loài có giá trị dinh dưỡng cao Thành phần các chất chính trong phần thân mềm được xác định theo khối lượng khô gồm protein 60%, lipid 9,1%, glucid 25%, tro 10,8%, canxi 1,1% và các loại axít amin không thay thế Đây là một đối tượng có giá trị kinh tế cao, với giá thị trường từ 80.000 - 100.000 đồng/kg

Trùng trục phân bố ở vùng biển phía Tây Thái Bình Dương từ Trung Quốc, Nhật Bản, Hàn Quốc đến Việt Nam Trùng trục là một đối tượng nuôi tại các bãi triều ở Trung Quốc từ 500 năm trước và chủ yếu được nuôi ở khu vực phía Đông Nam Trong những năm gần đây, ngư dân từ tỉnh Sơn Đông quan tâm đến loài hai mảnh vỏ này và

đã thiết lập các hình thức nuôi Hiện nay có hơn 21.000 ha phục vụ cho nghề nuôi trùng trục ở Trung Quốc Năm 1988, sản lượng trùng trục thu hoạch được hơn 140.000 tấn đến năm 2003 thu được 672.402 tấn

Ở nước ta trùng trục phân bố tự nhiên ở các bãi triều cửa sông, rừng ngập mặn, các vịnh có nước ngọt chảy vào, nơi ít sóng gió có nền đáy cát bùn, bùn cát, bùn nhuyễn dọc theo các tỉnh ven biển từ Quảng Ninh, Hải Phòng, Thái Bình, Nam Định, Thanh Hóa, Nghệ An, Bình Thuận, Vung Tàu, Cà Mau…

Trùng trục có những đặc tính ưu việt hơn các loài thân mềm hai mảnh vỏ khác

đang được nuôi ở nước ta như tốc độ tăng trưởng nhanh, thời gian nuôi ngắn 8 - 10 tháng Điều này giúp giảm được chi phí bảo vệ và ảnh hưởng xấu của thời tiết, khí hậu

và bệnh dịch Tỷ lệ phần thịt cao đạt từ 50 - 70% khối lượng cơ thể Sức sinh sản của trùng trục bố mẹ lớn, ấu trùng sinh trưởng và phát triển tốt trong điều kiện nhiệt độ từ

10 - 32oC và độ mặn từ 4 - 28‰

Nhu cầu về trùng trục của thị trường trong những năm qua là rất lớn, sản lượng trùng trục khai thác từ tự nhiên mới chỉ cung cấp được phần nhỏ nhu cầu hiện tại Tuy nhiên, cho đến nay vẫn chưa có một công trình nghiên cứu sinh sản nhân tạo nào về loài trùng trục được thực hiện ở nước ta Chính vì vậy, việc nghiên cứu đặc điểm sinh học sinh sản làm cơ sở cho việc sinh sản nhân tạo trùng trục, giúp chủ động nguồn giống, tạo điều kiện cho việc thúc đẩy phong trào nuôi trùng trục ở Việt Nam là rất cần

thiết Bên cạnh đó nghiên cứu về trùng trục sẽ góp phần đa dạng hóa đối tượng nuôi có giá trị kinh tế cao ở Việt Nam

Xuất phát từ những những vấn đề trên, "Nghiên cứu đặc điểm sinh học sinh

sản và thử nghiệm ương nuôi ấu trùng loài Trùng trục Sinonovacula constricta

Lamarck, 1818" được thực hiện nhằm làm tiền đề cho việc sinh sản nhân tạo thành

công đối tường này ở nước ta

Mục tiêu của đề tài:

Xác định một số đặc điểm sinh học sinh sản của trùng trục làm cơ sở khoa học sản xuất giống nhân tạo trùng trục, góp phần đa dạng hóa giống loài động vật thân mềm nuôi tại Việt Nam

Nội dung nghiên cứu:

i Nghiên cứu một số đặc điểm sinh học sinh sản của trùng trục: Hình thái và

sự phát triển tuyến sinh dục; mùa vụ sinh sản, tuổi và kích thước thành thục lần đầu, sức sinh sản, hoạt động sinh sản, sự phát triển của phôi và ấu trùng

ii Thử nghiệm ương nuôi ấu trùng trùng trục quy mô sản xuất

Ý nghĩa khoa học thực tiễn của đề tài:

- Cung cấp các thông tin mới về đặc điểm sinh học sinh sản của trùng trục, một đối tượng thủy sản có giá trị kinh tế cao ở vùng biển Việt Nam

- Làm cơ sở khoa học cho sản xuất giống nhân tạo loài trùng trục góp phần đa dạng hóa đối tượng nuôi, bảo tồn nguồn lợi thủy sản

CHƯƠNG I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU

1.1 Một số đặc điểm sinh học của trùng trục

1.1.1 Vị trí phân loại

Trên thế giới nghiên cứu về phân loại động vật thân mềm đã được tiến hành rất sớm Ngay từ thế kỷ thứ IV trước Công nguyên, Aristotle tiến hành nghiên cứu phân loại và đối tượng nghiên cứu phân loại đầu tiên là bào ngư, tiếp theo đến đầu thế kỷ 18 việc nghiên cứu phân loại các đối tượng động vật thân mềm mới được nghiên cứu chi tiết hơn

Vị trí phân loại trùng trục theo Lamarck:

Hình 1.1: Hình thái ngoài của trùng trục

1.1.2 Đặc điểm hình thái

Hình 1.2 Hình thái của vỏ trùng trục [32]

a Hình vẽ mặt ngoài nhìn thẳng, b - nhìn ngang chiều bụng, c - ngang chiều lưng, d - chiều dọc và chiều dày, e – mặt trong của vỏ và nội tạng (PL - màng áo, L - bản lề, U – đỉnh vỏ,

PPM, APM - bản lề, PPR gờ răng, PA, AA - cơ khép vỏ

Hình 1.3 Hình vị trí và hoạt đông cơ khép vỏ của trùng trục [32]

A Mặt ngoài vỏ; B Mặt trong vỏ; C Cơ khép vỏ dãn; D Cơ khép vỏ đóng;

1 Chóp vỏ; 2 Ống thoát nước; 3 Ống hút nước; 4 Chân; 5 Phần trước vỏ; 6 Bản lề ; 7 Cơ khép vỏ; 8 Cơ khép vỏ sau; 9 Răng vỏ; 10 Cơ khép vỏ trước; 11 Mép màng áo; 12 Vịnh

màng áo

Hình thái cấu tạo trong:

Trùng trục có cơ thể dẹp, hai bên và đối xứng Phần đầu tiêu giảm, chân hình lưỡi rìu, khi di chuyển chân thò ra ngoài Xoang màng áo phát triển Vỏ gồm có 2 mảnh, chứa toàn bộ cơ thể Chân có thể thò ra ngoài nhờ hoạt động phối hợp của duỗi cơ chân

và áp suất của dịch trong chân, chân thụt vào nhờ hoạt động của cơ co chân [32]

Hình 1.4 Cấu tạo trong cơ thể trùng trục [32]

PA: Vị trí cơ khép vỏ phía trước, AA: Vị trí của cơ khép vỏ phía sau L: Bản lề của vỏ, H: Tim, F: Chân, PG: Màng áo, MG: Ống tiêu hóa, IS: Ống hút nước, ES: Ống thoát nước,

PPR: Gờ răng, GE: Cơ khép vỏ

1.1.3 Đặc điểm sinh thái phân bố

Trùng trục là loài động vật thân mềm hai mảnh vỏ sống ở biển nơi có độ mặn thấp từ 5-28‰ Trùng trục phân bố ở vùng biển phía tây Thái Bình Dương từ biển Trung Quốc, Nhật Bản, Hàn Quốc đến Việt Nam [32]

Hình 1.5 Vùng biển phân bố trùng trục

Ở Việt Nam chưa có công trình nào nghiên cứu riêng về sự phân bố của trùng trục được công bố Tuy nhiên qua kết quả điều tra về khu hệ động vật đáy ven biển Việt Nam của Viện nghiên cứu Hải sản, trùng trục phân bố dọc theo các bãi triều nơi

có nền đáy bùn nhuyễn hoặc bùn cát, cát bùn, nơi ít bị ảnh hưởng bởi sóng gió, các vụng vịnh, rừng ngập mặn nơi có nguồn nước ngọt chảy vào từ Quảng Ninh đến Cà Mau Trùng trục phân bố chủ yếu ở vùng trung triều và hạ triều, nơi có địa hình bằng phẳng, độ sâu nước từ 0,3-10 m, thậm chí một số cá thể sống ở độ sâu 20 m [7]

1.1.4 Tập tính sống

Vòng đời phát triển của trùng trục cũng giống như đa số các loài động vật thân mềm khác, vòng đời của chúng được chia thành hai giai đoạn sống rõ rệt: giai đoạn sống trôi nổi (giai đoạn ấu trùng phù du) và giai đoạn sống đáy (giai đoạn con giống và giai đoạn con trưởng thành) Giai đoạn ấu trùng được bắt đầu từ ấu trùng Trochophora

(8 giờ 50 phút sau khi thụ tinh) đến tiền Spat, ở giai đoạn này ấu trùng sống trôi nổi, bơi lội tự do trong nước [14]

Hình 1.6 Hoạt động chân của trùng trục [32]

(a) hoạt động duỗi ra của chân; (b) hoạt động co lại của chân

Đến đầu giai đoạn Spat, ấu trùng sẽ di chuyển xuống sống ở nền đáy, chân đào phát triển để đào hang tìm nơi định cư và bắt đầu giai đoạn sống của con trưởng thành, đây là một trong những đặc điểm quan trọng trong việc xác định thời điểm tạo nền đáy thu ấu trùng trong sản xuất giống

Hình 1.7 Trạng thái dưới hang của trùng trục [32]

(a) Trạng thái của trùng trục khi ẩn trong cát; (b) hai miệng ống hút/thoát nước

Trùng trục trưởng thành đào hang sâu, sống trong hang và di chuyển theo chiều dọc trong lớp bề mặt phía trên nhờ vào sự co rút của chân Khi trùng trục di chuyển, chân đào bùn, cát, sau phình to, móc vào đất, kéo phần còn lại của cơ thể Chỉ cần một vài lần co cơ là chúng vùi cơ thể sâu xuống bùn [32]

Khi thủy triều lên trùng trục di chuyển lên trên hang để tìm kiếm thức ăn, lọc thức ăn từ nước biển xung quanh bằng ống hút, thoát nước và các cơ quan bộ lọc của

chúng Khi thủy triều xuống thấp chúng lui sâu xuống hang, đây là cách lẩn tránh kẻ thù Chiều sâu và đường kính của lỗ phụ thuộc vào kích thước của trùng trục, kết cấu của đáy biển và mùa Độ sâu của hang thường gấp 5-8 lần chiều dài của vỏ [32]

Trùng trục không giống các loài hai mảnh vỏ khác như sò, điệp, thường xuyên di chuyển trên một khoảng cách dài, mà trùng trục có xu hướng sống tại một chỗ trong suốt cuộc đời của nó

Hình 1.8 Vị trí của trùng trục theo thủy triều [32]

(A) khi triều cao và (B) thủy triều thấp

1.1.5 Đặc điểm sinh trưởng

Theo nhiệt độ ảnh hưởng đến hoạt động sinh lý và chi phối sinh trưởng đến nhóm động vật thân mềm hai mảnh vỏ, kích thước tối đa và sinh trưởng giảm, tuổi thọ tăng khi đi từ vĩ độ thấp đến vĩ độ cao Nhiệt độ càng thấp thì mùa sinh trưởng càng ngắn, vùng nhiệt độ càng thấp thì chúng càng tiêu tốn nhiều năng lượng cho quá trình hô hấp hơn là năng lượng cho sinh trưởng và ngược lại Điều này được minh chứng bởi Avellanal và ctv (2002) rằng trong điều kiện đầy đủ thức ăn thì tốc độ sinh trưởng nhanh khi nhiệt độ tăng Một nghiên cứu khác của Baron và ctv (2004) cho thấy quần thể sống ở vùng nước sâu có kích cỡ nhỏ hơn vùng nước nông trong cùng thời gian sinh trưởng [15, 16]

Sinh trưởng của động vật thân mềm hai mảnh vỏ là sự tăng trưởng cả phần vỏ và phần mềm Sự tăng trưởng của động vật thân mềm chịu ảnh hưởng của nhiều nhân tố bao gồm nhiệt độ, độ mặn, nguồn thức ăn, điều kiện sinh thái môi trường sống… [33]

Ở các loài khác nhau tốc độ tăng trưởng của chúng khác nhau Tốc độ tăng trưởng tỷ lệ nghịch với tuổi, các cá thể còn non có tốc độ tăng trưởng nhanh hơn các cá thể già

Tốc độ tăng trưởng của trùng trục liên quan chặt chẽ đến các điều kiện kết cấu đáy biển, các loại sinh vật thức ăn, nhiệt độ nước, độ mặn, …vv Các nhiệt độ và độ mặn tối ưu cho sự phát triển của trùng trục tương ứng là 15-25°C và 5-28‰

Tại Phúc Kiến, tỷ lệ tăng trưởng vỏ của trùng trục cao nhất từ tháng 5 đến tháng

7, trong khi tốc độ tăng trưởng cơ thịt nhanh nhất vào khoảng giữa tháng 7 đến tháng

9 Lý do của sự sai khác trên là do sự tích tụ thịt tỷ lệ nghịch với chiều dài vỏ trong suốt thời kỳ sinh sản Từ năm thứ 2 có sự sai khác nhau về sự phát triển chiều dài của

vỏ, năm đầu chiều dài vỏ đạt được khoảng 4-5 cm, trong khi năm hai được khoảng 7

cm Sự tăng trưởng của vỏ vào năm thứ hai có xu hướng chậm lại [32]

1.1.6 Đặc điểm dinh dưỡng

Cũng giống như hầu hết các loài ĐVTM khác thức ăn của trùng trục bao gồm thực vật phù du, động vật phù du, vi khuẩn, vật chất hữu cơ hoà tan trong nước, trong

đó mùn bã và các mảnh vụn hữu cơ lơ lửng trong nước khoảng 75-90%, thực vật phù

du chiếm tỷ lệ thấp khoảng 10-25% về số lượng cũng như tần số bắt gặp, chủ yếu là tảo silic (tảo khuê) Theo Nguyễn Chính (1980) thì nhóm động vật thân mềm hai mảnh

vỏ bắt mồi theo cách lọc nhờ hoạt động của các tấm mang trong quá trình hô hấp hút nước qua mang, quá trình bắt mồi diễn ra một cách thụ động, chỉ có những hạt thức ăn

có kích thước phù hợp được chọn lọc [1]

Nguyễn Thị Xuân Thu (2005) cho rằng thức ăn giai đoạn ấu trùng của nhóm động vật thân mềm hai mảnh vỏ là vi khuẩn, tảo khuê, mùn bã hữu cơ và nguyên sinh động vật có kích thước nhỏ khoảng 10 μm hoặc nhỏ hơn [12]

Phương thức bắt mồi của trùng trục theo hình thức lọc thụ động, thức ăn theo nước biển qua ống hút, thoát nước vào xoang màng áo ngoài đến lọc ở mang Các hạt thức ăn có cỡ thích hợp thì được mang giữ lại đưa qua ống tiêu hóa, những hạt không phù hợp được thải ra ngoài qua xoang màng áo Trùng trục sống trong hang, dựa vào ống hút, thoát nước nhô lên miệng hang để tìm thức ăn Quan sát thức ăn trong dạ dày

của chúng phần lớn là tảo cát Nitzschia sp Coscinodiscus sp, tảo khuê và cả những

mùn bã hữu cơ, hạt bùn cát

Hình 1.9 Các hình ảnh mô tả hoạt động lọc nước của trùng trục [32]

Phương thức bắt mồi của trùng trục theo hình thức lọc thụ động, thức ăn trong nước được lọc qua mang từ đó nhờ sự vận động của các tiêm mao trên tơ mang, thức

ăn được đưa qua miệng và vào dạ dày Trùng trục lọc thức ăn cả ngày, tùy thuộc vào thủy triều khi nước lên trùng trục thò vòi lên hút và lọc thức ăn, khi thủy triều rút nó thụt sâu xuống dưới hang [31] Các yếu tố môi trường như độ mặn, sóng gió và hàm lượng chất hữu cơ lơ lửng là yếu tố chính ảnh hưởng đến sinh trưởng của trùng trục

1.1.7 Đặc điểm sinh sản và phát triển

Trong nghiên cứu sinh sản, tuổi, mùa vụ sinh sản, đặc điểm cơ quan sinh sản và kích cỡ thành thục lần đầu là một trong những chỉ tiêu được nhiều nghiên cứu quan tâm trên các loài động vật thân mềm hai mảnh vỏ

1.1.7.1 Hình dạng và cấu tạo của cơ quan sinh dục

Một số loài động vật thân mềm có hiện tượng phân tính, đực cái riêng rẽ (Dimorphisme), nhưng cũng có một số loài có hiện tượng lưỡng tính, trên cùng một cá thể có cả đực và cái (Hermaphrodisme) và giữa hai loại này có những dạng trung gian

Tuyến sinh dục của trùng trục phân bố xung quanh tuyến tiêu hóa Khi tuyến sinh dục phát triển sẽ phình to chiếm gần hết tuyến tiêu hóa và kéo dài xuống phần chân

Hinh 1.9 Vị trí phân bố tuyến sinh dục

Hình 1.10 Hình cắt ngang tuyến sinh dục cái của trùng trục [32]

Trùng trục là loài phân tính tuy nhiên hai giới tính chỉ có thể phân biệt trong mùa sinh sản khi các cơ quan sinh sản đã chín Tuyến sinh dục đực thường có màu trắng sữa với một bề nhẵn, trong khi tuyến sinh dục cái có bề mặt thô, dạng hạt màu be vàng Tuổi thành thục của trùng trục cỡ một năm tuổi, chiều dài vỏ đạt 2,5 cm Quy luật chung là ở vĩ độ càng cao thì mùa sinh sản càng sớm Những thay đổi đột ngột điều kiện môi trường bên ngoài (mưa to, nhiệt độ, độ mặn thay đổi) đều kích thích nó phóng tinh và đẻ trứng Trong mùa sinh sản, sản phẩm sinh dục được phóng ra ngoài qua ống (GA) của tuyến thận nằm gần với tuyến sinh dục [32]

Hình 1.11: Vị trí của miệng ống sinh dục

1.1.7.2 Mùa sinh sản và sức sinh sản

Sinh sản là phương thức bổ sung các cá thể mới cho quần thể sinh vật, đảm bảo

sự bảo tồn và phát triển nòi giống Đối với động vật thân mềm hai mảnh vỏ thường sinh sản và thụ tinh ngoài môi trường nước nên quần thể mới phụ thuộc rất lớn vào

điều kiện môi trường

Mùa vụ sinh sản của động vật thân mềm nói chung phụ thuộc rất nhiều vào loài

và điều kiện môi trường sống Một số loài có tuyến sinh dục thành thục quanh năm và

do đó có thể tham gia sinh sản quanh năm, nhưng có những loài có tuyến sinh dục thành thục trong những mùa nhất định (Nguyễn Chính, 1980) Mùa vụ sinh sản chịu ảnh hưởng rất lớn bởi các điều kiện môi trường đặc biệt là nhiệt độ và độ mặn Các điều kiện môi trường không chỉ có vai trò trong kích thích thành thục sinh dục, đẻ trứng mà còn đảm bảo cho sự tồn tại của trứng, phôi và ấu trùng [1]

Mùa sinh sản của trùng trục có liên quan chặt chẽ với nhiệt độ nước và do đó ở các địa phương khác nhau trùng trục có xu hướng sinh sản vào những thời điểm khác nhau Ở tỉnh Phúc Kiến ,Trung Quốc, mùa sinh sản của trùng trục kéo dài một thời gian dài từ cuối tháng 9 đến tháng 1 năm sau với thời kỳ đỉnh điểm diễn ra từ giữa tháng 10 và giữa tháng 11, trong khi ở tỉnh Liêu Ninh, ở phía bắc, bắt đầu sinh sản vào cuối tháng 6 Các cá thể trưởng thành có thể đẻ trứng 3-4 lần trong một mùa sinh sản, khoảng thời gian đẻ trong 1 kỳ nước là 15 ngày, mỗi lần đẻ kéo dài 2- 3 ngày

Một cá thể trùng trục trung bình đẻ khoảng 193.000 trứng mỗi lần sinh sản Bảng 1: Thống kê sức sinh sản hiệu quả của 10 cá thể cái trùng trục khác nhau theo chiều dài vỏ từ 44-53mm [32]

Bảng 1.1 Sức sinh sản hiệu quả của trùng trùc theo chiều dài vỏ

STT Chiều dài vỏ (mm) Lượng trứng

1.1.7.3 Các giai đoạn phát triển của tuyên sinh dục

Tuyến sinh dục của động vật thân mềm hai mảnh vỏ thường phân tính, cũng có một số trường hợp lưỡng tính Nghiên cứu của Newell và ctv (1982) trên đối tượng

Mytilus edulis từ 25 quần thể khác nhau cho thấy tỉ lệ đực là 48% và cái là 52% Đối

với động vật thân mềm hai mảnh vỏ thì nhìn hình dạng bên ngoài rất khó xác định được giới tính, chỉ có thể phân biệt được đực cái khi quan sát tuyến sinh dục của chúng Khi thành thục sinh dục tuyến sinh dục cái thường có màu vàng nhạt hay màu cam nhạt, tuyến sinh dục đực có màu trắng đục [26]

Nghiên cứu của Hà Đức Thắng (2004a) trên vẹm xanh (Perna viridis) cho thấy

khi thành thục sinh dục con cái có tuyến sinh dục cái màu vàng hay màu cam, con đực

có màu trắng đục [9] Trong khi đó sò huyết (Anadara granosa), khi thành thục con

đực tuyến sinh dục có màu vàng nhạt, con cái có màu đỏ hồng [3] Tuy nhiên, quan sát bằng mắt thường chỉ có thể xác định giới tính nhưng không thể đánh giá mức độ thành thục, để đánh giá chính xác cần quan sát tế bào sinh dục (trứng và tinh trùng) và quan

sát tiêu bản lát cắt [13] Khi nghiên cứu tiêu bản lát cắt trên đối tượng như Chlamys, Lima, Crassostrea, Pinctada… Nguyễn Chính (1999), Hoàng Thị Bích Đào (2001), Broom (1983), Lodeiros và Himmelman (1999) đều phân chia sự phát triển của tuyến sinh dục thành 5 giai đoạn (từ giai đoạn 0 đến giai đoạn IV) [2, 3, 17, 24] Các giai đoạn phát triển của tuyến sinh dục có thể tóm tắt như sau:

Giai đoạn 0 (Không xác định)

Tuyến sinh dục không rõ ràng, chưa có sự hiện diện của nang follicule, ở giai đoạn này không xác định được giới tính Mô leydig chiếm toàn bộ tuyến sinh dục

Giai đoạn I (Tiền giao tử)

Quá trình tạo giao tử bắt đầu với sự xuất hiện của các nang follicule chen lẫn trong các mô leydig Tế bào sinh dục phát triển trên vách nang

Giai đoạn II (Phát triển tích cực, sắp chín)

Nang follicule phình to chiếm gần hết khối nội tạng, mô leydig giảm nhanh, các giao tử hình thành nhưng chưa chín Noãn bào gia tăng kích thước và sắp chín

Giai đoạn III (Chín, sinh sản)

Nang tinh phồng lên và hầu hết chứa trứng và tinh trùng, vách nang mỏng dần, tuyến sinh dục ở trạng thái chín Trứng sẵn sàng thụ tinh và tinh trùng có khả năng hoạt động

Giai đoạn IV (Giai đoạn nghỉ)

Sau khi sinh sản, vách nang bị rách, bên trong còn sót lại một ít tinh trùng và trứng Giai đoạn này mô sinh dục bị thay thế dần bởi mô leydig

Mùa vụ sinh sản của các loài Bivalvia có liên quan đến các yếu tố môi trường như: nồng độ mặn, thủy triều, dòng chảy… đặc biệt là nhiệt độ Vùng ôn đới mùa sinh sản thường là mùa xuân Trong thủy vực vùng ôn đới chu kỳ phát triển tuyến sinh dục theo sự gia tăng nhiệt độ vào mùa xuân, tuyến sinh dục hoàn toàn chín khi nhiệt độ đạt đến ngưỡng sinh sản Ở vùng nhiệt đới độ mặn biến động lớn, sự biến đổi này kích thích quá trình sinh sản Bivalvia ở vùng nhiệt đới có mùa sinh sản kéo dài và kém tập trung hơn so với vùng ôn đới (Nguyễn Chính, 1980) [1] Jayabal và Kalyani (1986)

theo dõi chu kỳ sinh sản của 3 loài kinh tế: Meretrix meretrix (L.), M casta và Katelysia opima ở cửa sông Vellar (Ấn Độ) Kết quả cho thấy mùa sinh sản của 3 loài

kể trên kéo dài từ tháng 2-9 Tỉ lệ con đực nhiều hơn con cái nhưng cả 3 thành thục cùng thời gian và ấu trùng Veliger xuất hiện từ tháng 3-5 [22]

Khi thành thục sinh dục Bivalvia đẻ trứng và tinh trùng vào môi trường nước, sự thụ tinh xảy ra trong nước Sự sinh sản có thể xảy ra một hoặc nhiều lần, thời gian có thể ngắn hoặc dài (một ngày hoặc nhiều tuần) tùy theo loài, độ chín của tuyến sinh dục

và điều kiện môi trường [28]

Nghiên cứu của Kalyanasumdaram & Ramamoorthi (1987) cho thấy trứng của

Meretrix meretrix có đường kính khoảng 60-70 µm Sau khi thụ tinh 15-20 phút cực

cầu xuất hiện, phân chia thành 2 tế bào không đều nhau trong 1 giờ, lần phân chia thứ

2 và 3 cách nhau sau mỗi 10 phút Sáu đến tám giờ sau thụ tinh, phôi phát triển thành

ấu trùng Trochophore sống phù du và sau 10 giờ sau đó ấu trùng Trochophore phát triển thành ấu trùng dạng chữ D, dài khoảng 80 µm (cao 60 µm) và chúng tiếp tục sinh trưởng 90-100 µm Vào ngày thứ năm đỉnh vỏ được hình thành (umbo stage) lúc này

ấu trùng dài 110µm, ngày thứ 9 ấu trùng đạt 150 µm Ngày thứ 10, chân ấu trùng phát triển và hình thành ấu trùng Veliger dài 160 µm (cao 140 µm) Ngày thứ 12 ấu trùng Veliger biến thành ấu trùng bám (spat) và chuyển sang sống đáy Trong quá trình biến thái, vòm miệng của ấu trùng bị thoái hóa, mang và chân phát triển hoàn thiện [23] Theo Nguyễn Thị Xuân Thu (1998) thì sự phân chia các giai đoạn phát triển của tuyến sinh dục dựa vào sự phát triển của tinh sào và buồng trứng [11] Dựa vào những thay đổi của tuyến sinh dục mà đã có nhiều tác giả đưa ra các cách phân chia khác nhau như Nash và ctv (1988), Rinyod và ctv (2011) quá trình phát triển tuyến sinh dục của động vật thân mềm có thể được chia thành 5 giai đoạn với các đặc điểm như sau [25, 29]:

Giai đoạn I: Tuyến sinh dục còn non, chưa phát triển, gồm những ống nhỏ có cấu tạo màng liên kết và dinh dưỡng tích lũy cho quá trình tạo trứng và sinh tinh Giai đoạn này chưa có sự hiện diện của nang trứng và nang tinh Màu sắc tuyến sinh dục trong suốt

Giai đoạn II: Giai đoạn phát dục Tuyến sinh dục bắt đầu phát triển Số lượng tế bào sinh trứng và sinh tinh phát triển nhanh, mô liên kết giảm đi rõ rệt Màu sắc tuyến sinh dục trong mờ

Giai đoạn III: Giai đoạn thành thục Tuyến sinh dục mở rộng thành khối Tinh trùng tấp trung thành từng bó Trứng bắt đầu rời thành vách Tế bào trứng hình đa diện méo mó đường kính 60-70 µm Túi tinh và buồng trứng màu trắng sữa

Giai đoạn IV: Giai đoạn chín muồi sinh dục túi tinh chứa đầy những bó nang hình bầu dục và dày đặc tinh trùng Tinh trùng hoạt động mạnh Buồng trứng chứa những bao nang, các bao nang xen kẽ với nhau Trong các bao nang là các tế bào trứng, mỗi bao nang chứa vài chục tế bào trứng Trứng có dạng hình cầu, đường kính 60-80 µm Nhân bên trong trứng tròn Tuyến sinh dục căng phồng và bóng bẩy Túi tinh màu trắng đục, buồng trứng màu trắng be vàng

Giai đoạn V: Sau khi đẻ Các sản phẩm đã thoát ra ngoài, chỉ còn sót lại một ít noãn bào ở giai đoạn chín muồi nhưng không thoát ra ngoài được Nang trứng và nang tinh trống rỗng.,tuyến sinh dục co nhỏ lại

1.1.7.4 Phương thức sinh sản và sự thụ tinh

Sự thụ tinh và hình thành giao tử, phát triển phôi của trùng trục diễn ra trong môi trường nước biển Vào mùa sinh sản, sự thay đổi đột ngột của các yếu tố môi trường như: nhiệt độ, độ mặn, chế độ thuỷ triều sẽ kích thích các cá thể trùng trục đực thành thục sinh dục phóng tinh trùng vào môi trường nước, kích thích con cái thành thục sinh dục phóng trứng ngay sau đó để tiến hành thụ tinh trong nước Quá trình sinh sản kéo dài khoảng 15-20 phút và thường diễn ra vào ban đêm, Tuy nhiên, một số cá thể

có thể sinh sản cả ban ngày [32]

Đặc điểm của trứng và tinh trùng: Trứng chưa thụ tinh có kích thước từ 60-80

m, khi còn trong tuyến sinh dục, trứng có hình dạng không cân xứng, khi thoát ra khỏi tuyến sinh dục vào môi trường nước trứng có dạng hình cầu hoặc gần giống hình

cầu, trong tế bào trứng có chứa rất nhiều các hạt noãn hoàng Tinh trùng có kích thước

rất nhỏ và có khả năng bơi tự do trong nước biển, trong điều kiện nhiệt độ 16-190

C

chúng có thể tồn tại trong môi trường nước biển khoảng 6 giờ [32]

1.1.7.5 Các giai đoạn phát triển của ấu trùng trùng trục

Các giai đoạn phát triển khác nhau của ấu trùng trùng trục trong điều kiện môi trường 22-24°C, pH 8,5 được thể hiện trong Bảng 1.2

Bảng 1.2 Thời gian phát triển của các giai đoạn ấu trùng trùng trục [32]

Ấu trùng bánh xe (Trochophore) 08 giờ 50 phút

Nghiên cứu quan sát đã chỉ ra rằng tốc độ phát triển của một trứng được thụ tinh

là chặt chẽ liên quan đến nhiệt độ nước biển Ví dụ, trứng thụ tinh phải mất 5-6 ngày

để phát triển thành một Spat non ở 25-26°C Tuy nhiên, ở nhiệt độ nước biển 18-20°C thì thời gian cần thiết để phát triển thành Spat non phải mất 9-10 ngày Thông tin trên

có thể dự báo thời gian thích hợp để thu thập Spat cho quá trình nuôi tiếp theo [30]

1.2 Các nghiên cứu về sản xuất giống trùng trục trên thế giới và Việt Nam

Trùng trục được Viện nghiên cứu nuôi trồng thuỷ sản Hoàng Hải, Trung Quốc nghiên cứu quy trình sản xuất giống thành công từ năm 2000, cùng với nhiều công trình nghiên cứu về đặc điểm sinh học, sinh sản, dinh dưỡng, phân bố của trùng trục của nhiều trường đại học, viện nghiên cứu khác của Hồng Kông, Trung Quốc, Hàn Quốc, Nhật Bản

Nghiên cứu về chu kỳ sinh sản của trùng trục tại Quảng Đông, Trung Quốc cho thấy, mùa vụ sinh sản của trùng trục có sự biến đổi theo mùa, phụ thuộc vào nhiều yếu

tố, đặc biệt là nhiệt độ trong khi ít chịu ảnh hưởng của độ mặn Về mùa vụ sinh sản trong năm, tuyến sinh dục bắt đầu phát triển từ tháng 6 – 7 khi nhiệt độ nước khoảng

22 – 28 oC Đỉnh cao thành thục sinh dục của trùng trục diễn ra vào tháng 9 đến tháng

10, đặc biệt là tháng 10, trùng trục sinh sản đồng loạt khi nhiệt độ nước bắt đầu giảm Nghiên cứu cũng kết luận, nhiệt độ nước và sự sẵn có của thức ăn là hai yếu tố cơ bản ảnh hưởng đến sự thành thục sinh dục của trùng trục Kích thước trứng có sự khác biệt theo mùa vụ, tăng từ 22,6 μm vào tháng 6 lên 66,3 μm vào tháng 11 và giảm mạnh sau sinh sản chỉ còn 29.7 μm vào tháng 1 Kích thước tế bào trứng có sự thay đổi lớn phụ thuộc vào giai đoạn thành thục và các yếu tố môi trường, đặc biệt là thức ăn [21] Nghiên cứu sản xuất giống các đối tượng động vật thân mềm có giá trị kinh tế là điều kiện cần thiết để bổ sung nguồn giống ngoài tự nhiên bị mất đi do khai thác đồng thời cung cấp giống cho người nuôi, phục vụ xuất khẩu, giải quyết công ăn việc làm, góp phần xoá đói giảm nghèo cho ngư dân ven biển đảo [12] Trên thế giới cũng như

ở Việt Nam, nghiên cứu về sản xuất giống nhân tạo các đối tượng động vật thân mềm được khá nhiều tác giả quan tâm và đã nghiên cứu thành công, xây dựng nên quy trình sản xuất giống cho nhiều đối tượng động vật thân mềm có giá trị kinh tế cao

Trong sản xuất giống nhân tạo, xác định được mùa vụ sinh sản, phương pháp kích thích đẻ trứng, phóng tinh, ương nuôi và phương pháp quản lý bể ương ấu trùng

là những vấn đề mấu chốt [14] Bên cạnh đó mật độ ương, thành phần và chất lượng thức ăn cho ấu trùng là những yếu tố ảnh hưởng rất lớn đến sự phát triển của chúng Việt Nam là một trong những nước có sản lượng nuôi động vật thân mềm lớn, đến năm 2010 nuôi động vật thân mềm với diện tích 20.000 ha, năng suất 17 tấn/ha, đạt sản lượng 380.000 tấn, đạt giá trị xuất khẩu 350 triệu USD và tạo việc làm cho 15.000 người Động vật thân mềm đang được xem là đối tượng ưu thế trong chiến lược phát triển nuôi biển của nước ta hiện nay

Với vai trò quan trọng như vậy nên trong một số năm gần đây nghiên cứu về động vật thân mềm được nhiều tác giả quan tâm Trong đó nghiên cứu về sản xuất giống nhân tạo và phương pháp ương nuôi ấu trùng được quan tâm nhiều nhất Một số công trình nghiên cứu sâu về đặc điểm sinh học sinh sản của các đối tượng động vật

thân mềm có thể kể đến như [3, 4]; tu hài (Lutraria philippinarum, Reeve, 1854) [5, 10], ngao dầu (Meretrix meretrix Linaeus, 1758) [6], bào ngư (Haliotis spp.) [8], vẹm xanh (Perna viridis ) [9], điệp quạt (Chlamys nobilis Reeve, 1852) [11], và điệp seo (Comptopallium radul, Linene, 1758) [13]… Tuy nhiên, cho đến nay ở Việt Nam chưa

có công trình nghiên cứu nghiên cứu về trùng trục nào được công bố

Tuy nhiên, cho đến nay, vẫn chưa có công trình nghiên cứu nào về đặc điểm sinh

học sinh sản của trùng trục được công bố tại Việt Nam Chỉ có một số ít các nghiên cứu đề cập đến sự phân bố, thành phần loài của các loài động vật thân mềm trên một

số vùng biển nước ta [7] Nghiên cứu này cũng chỉ ra rằng, trùng trục được tìm thấy ở một số vùng ven biển nước ta, tuy nhiên chưa có nghiên cứu định lượng nào xác định

về mật độ quần thể, sinh lượng

Chính vì vậy, nghiên cứu về đặc điểm sinh học sinh sản của trùng trục là rất cần thiết nhằm cung cấp các thông tin về đặc điểm sinh học sinh sản của loài này tại Việt Nam Đồng thời, đánh giá khả năng sinh sản nhân tạo và ương nuôi loài trùng trục nhằm hoàn thiện quy trình, đa dạng hóa đối tượng nuôi và bào vệ nguồn lợi tự nhiên

CHƯƠNG 2: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 Địa điểm, thời gian và đối tượng nghiên cứu

2.1.1 Địa điểm nghiên cứu

Địa điểm thu mẫu nghiên cứu đặc điểm sinh học sinh sản của trùng trục tại vùng bãi triều tỉnh Thái Bình, Nam Định

Địa điểm phân tích mẫu: Tiến hành cân đo, giải phẫu trùng trục xác định sức sinh sản tương đối, tuyệt đối tại trại sản xuất giống Cty TNHH Minh Phú - xã Bạch Long - huyện Giao Thủy - tỉnh Nam Định

Tiến hành cho sinh sản nhân tạo, xác định sức sinh sản thực tế, sức sinh sản hiệu quả tại trại sản xuất giống Cty TNHH Minh Phú - xã Bạch Long - huyện Giao Thủy - tỉnh Nam Định

Tiến hành đúc mẫu, cắt tiêu bản, xác định các giai đoạn phát triển của tuyến sinh dục tại Trung tâm mẫu bệnh học Đại học Y Thái Bình

Bố trí ương nuôi ấu trùng trùng trục từ thụ tinh đến cỡ giống tại trại sản xuất giống Cty TNHH Minh Phú - xã Bạch Long - huyện Giao Thủy - tỉnh Nam Định

2.1.2 Thời gian nghiên cứu

Từ tháng 11 năm 2011 đến tháng 11 năm 2012

2.1.3 Đối tượng nghiên cứu

Loài trùng trục, tên khoa học là Sinonovacula constricta (Lamarck, 1818), tên

tiếng Anh là Razor clam

2.2 Sơ đồ khối nội dung nghiên cứu

Hình 2.1 Sơ đồ khối nội dung nghiên cứu

2.3 Phương pháp thu thập và xử lý mẫu

2.3.1 Thu mẫu

Mẫu nghiên cứu được thu thập hàng tháng (từ 11/2011 đến 11/2012) tại vùng triều biển Thái Bình, Nam Định Xác định các chỉ tiêu về kích thước, khối lượng toàn thân, khối lượng thân mềm và khối lượng tuyến sinh dục Thu mẫu tuyến sinh dục theo từng giai đoạn phát triển, cố định trong dung dịch Buoin để làm tiêu bản nghiên cứu sự phát triển tuyến sinh dục

Mẫu nghiên cứu sinh học ấu trùng trùng trục được thu định kỳ tại thí nghiệm ương nuôi ấu trùng Thu trứng, các giai đoạn phát triển phôi, ấu trùng cố định trong dung dịch Buoin

2.3.2 Xác định các giai đoạn phát triển của tuyến sinh dục

Các giai đoạn phát triển tuyến sinh dục được đánh giá theo thang 5 bậc của Darriba và ctv (2004) [20]

2.3.3 Cắt mô tuyến sinh dục và phân tích tiêu bản

Mẫu phân tích mô tuyến sinh dục các cá thể đực, cái được thu thập theo giai đoạn phát triển tuyến sinh dục, làm tiêu bản tuyến sinh dục theo phương pháp của Oie

Nghiên cứu đặc điểm sinh học sinh sản Thử nghiệm ương nuôi ấu trùng

- Sinh trưởng, phát triển của ấu trùng

- Tỷ lệ chuyển giai đoạn của ấu trùng

- Tỷ lệ sống của ấu trùng

NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC SINH SẢN VÀ THỬ NGHIỆM ƯƠNG NUÔI ẤU TRÙNG

TRÙNG TRỤC Sinonovacula constricta (Lamarck, 1818)

- Hoạt động sinh sản, sự phát triển phôi và biến thái ấu trùng

- Các giai đoạn phát triển của ấu trùng

- Tốc độ tăng trưởng của ấu trùng

- Mối quan hệ giữa kích thước trùng trục mẹ và sức sinh sản

hữu hiệu

Phân tích số liệu, kết luận và đề xuất ý kiến

C trong 6-8 giờ, đúc thành khối và dùng máy cắt lát mô độ dày 2-4 µm Làm trong, sạch lát cắt mô trong dung dịch xylene

Nhuộm mẫu: Theo phương pháp của Carson (1980) dùng thuốc nhuộm Hematoxyline và Eosine (H&E) [18]

Quan sát và đọc kết quả dưới kính hiển vi có độ phóng đại 100-400 lần

2.3.4 Xác định mùa vụ sinh sản

Mùa vụ sinh sản trong năm được xác định theo diễn biến tỷ lệ % hàng tháng số

cá thể ở giai đoạn thành thục và biến thiên của hệ số sinh dục

- Hệ số sinh dục được xác định theo Ngô Anh Tuấn [13]:

W sd *100

GI =

W tm

Trong đó: - GI: Là hệ số sinh dục

- Wsd: Khối lượng tuyến sinh dục (g)

2.3.6 Sức sinh sản

Sức sinh sản tuyệt đối (F a ): Là số lượng trứng phát triển sớm nhất trước khi sinh

sản Xác định bằng cách đếm số lượng trứng trong các cá thể ở giai đoạn thành thục

bằng buồng đếm động vật phù du Tổng số mẫu kiểm tra là 20 chia thành 5 nhóm kích thước ≤ 40 mm, 41-60 mm, 61-80 mm, 81-100 mm, > 100 mm

Lấy tuyến sinh dục của trùng trục cho vào trong nước mặn 25‰ và tách nhẹ toàn

bộ tế bào trứng ra khỏi tuyến sinh dục Sau đó chuyển qua ống chia độ xác định thể tích V (tính theo ml) Định lượng được n số lượng tế bào trứng/1ml Sức sinh sản tuyệt đối của một cá thể được tính là:

F a = n x V

Sức sinh sản tương đối (F rg ): Là tỷ số giữa số lượng trứng trung bình của một cá

thể trưởng thành trên khối lượng toàn thân(W), khối lượng thân mềm (W tm) và khối

lượng buồng trứng (W sd)

F rg 1 = Fa/W

F rg 2 = Fa/W tm

F rg 3 = Fa/W sd Sức sinh sản thực tế: Xác định bằng tổng số lượng trứng thu được trên một cá

thể mẹ trong một lần sinh sản Tiến hành cho 30 cá thể trùng trục đã thành thục sinh dục trong mùa sinh sản sinh sản nhân tạo trong 30 xô 10 lít, đếm số lượng trứng trong một lần sinh sản của mỗi cá thể theo phương pháp thể tích

Sức sinh sản hiệu quả: Được xác định bằng số lượng ấu trùng chữ D khỏe mạnh,

đủ tiêu chuẩn đưa vào bể ương trên một cá thể bố mẹ trong một lần sinh sản Dùng phương pháp cho sinh sản nhân tạo trong phòng thí nghiệm để tính toán

2.3.7 Tập tính sinh sản, sự phát triển phôi và biến thái của ấu trùng

Tập tính sinh sản trùng trục thông qua việc cho sinh sản nhân tạo trong bể kính Quan sát, ghi chép và mô tả hình thái cấu tạo, thời gian biến thái, phát triển phôi và các giai đoạn ấu trùng Chụp hình và đo kích thước qua kính hiển vi Định lượng ấu trùng theo phương pháp thể tích

Phương pháp kích thích đẻ trứng và phóng tinh: Kích thích trùng trục sinh sản bằng phương pháp phơi khô kết hợp sốc nhiệt, dùng NH4OH 1M

Lựa chọn các cá thể trùng trục bố mẹ có tuyến sinh dục thành thục tốt để làm thí nghiệm Trùng trục bố mẹ sau khi thu từ bãi tự nhiên, vệ sinh sạch sẽ và để khô từ 30-

45 phút sau đó cho vào bể sục khí để kích thích cho sinh sản

Phương pháp sốc nhiệt: Sau khi để khô ta có thể kết hợp phương pháp sốc nhiệt bằng cách thay đổi nhiệt độ nước (tăng hoặc giảm 5-7oC so với nhiệt độ môi trường

nước) để tiếp tục kích thích trùng trục sinh sản

Quan sát quá trình phát triển của phôi và thời gian biến thái của ấu trùng qua các giai đoạn

Thử nghiệm cho sinh sản nhân tạo trùng trục sau đó lựa chọn các trứng và ấu trùng có chất lượng tốt để bố trí thí nghiệm

Theo dõi sự phát triển của phôi bằng cách thu mẫu và cố định trong Formalin 4- 5%, sau 20-30 phút thu mẫu một lần

Theo dõi các giai đoạn biến thái của ấu trùng bằng cách: Sau khi phôi phân cắt xong ta tiến hành thu mẫu và cố định trong dung dịch Formalin, Buoin sau 1-12 h thu mẫu một lần (sau khi kết thúc mỗi giai đoạn phát triển, có thể định giờ thu mẫu tiếp theo cho phù hợp)

Chụp hình các giai đoạn phát triển và đo kích thước trên kính hiển vi với độ phóng đại 100-400 lần

2.3.8 Xác định tốc độ tăng trưởng của ấu trùng

Đo kích thước 20 ấu trùng theo từng giai đoạn và theo thời gian định 2 ngày/lần Tốc độ tăng trưởng của trùng trục được tính theo công thức:

Trong đó:

Mld: Tốc độ tăng trưởng bình quân ngày

L1: Chiều dài lúc bắt đầu thí nghiệm

L2: Chiều dài vỏ lúc kết thúc thí nghiệm n: Số ngày thí nghiệm

2.3.9 Mối quan hệ giữa kích thước trùng trục mẹ và sức sinh sản hữu hiệu

Sử dụng phương pháp phân tích hồi quy tuyến tính (Linear regression) để xác định mối quan hệ giữa kích thước tôm mẹ với sức sinh sản hữu hiệu và chiều dài của

ấu trùng với mức ý nghĩa (P < 0,05)

2.4 Bố trí thí nghiệm ương nuôi ấu trùng trùng trục

Kích thích trùng trục sinh sản sau đó lựa chọn trứng và ấu trùng có chất lượng tốt

bố trí thí nghiệm ương nuôi ấu trùng trong bể 10 m3, mật độ ấu trùng chữ D Veliger 15-20 con/ml Thí nghiệm được thực hiện với 3 lần lặp

Hình 2.2: Sơ đồ thí nghiệm ương nuôi ấu trùng trùng trục 2.4.1 Quản lý và chăm sóc bể ương

Bể ương nuôi ấu trùng: Sử dụng bể 10 m3, bố trí 5 vòi khí sục 24/24 giờ, đảm bảo nước xáo trộn đều, tránh hiện tượng ấu trùng lắng đáy trong quá trình ương nuôi, hàm lượng ô xy duy trì 4 - 6 mg O2/l

- Chuẩn bị nước: Nước có độ mặn 12 - 20‰ được xử lý qua ao lắng, lọc thô, lọc tinh 1 - 5 µm

- Chế độ thay nước:

+ Từ ngày 1 - 3 không cần thay nước trong bể ương nuôi

+ Từ ngày thứ 3 - 5 thay 30 - 40% thể tích nước trong bể ương mỗi ngày

+ Từ ngày thứ 5 - 8 thay 40 - 50% thể tích nước trong bể ương mỗi ngày

Ngày thứ 9 tiến hành lọc ấu trùng chuyển qua bể ương nuôi ấu trùng xuống đáy

Hình 2.3: Bể ương nuôi ấu trùng trùng trục

- Mật độ ương nuôi

+ 5 ngày đầu ương nuôi với mật độ từ 10 - 15 ấu trùng/ml

+ 6 - 8 ngày tiếp theo ương với mật độ 7 - 10 ấu trùng/ml

+ Giai đoạn chuyển giai đoạn xuống đáy ương với mật độ 5 - 7 ấu trùng/ml

Nuôi vỗ, cho đẻ

và thu trứng ấp

Thu ấu trùng chữ D nuôi trong bể đến giai đoạn hậu kỳ

vỏ nuôi trong bể đáy bùn non có độ dày 3-5 mm ương nuôi xuống đáy (bò lê)

C ác loài vi tảo:

Nannochloropsis oculata Chlorella sp

Isochrysis galbana Chatoceros gracilis Tetraselmis chui

Thu ấu trùng sống đáy nuôi trong bể ngoài trời thành con giống nhỏ