Kích thích trùng trục sinh sản sau đó lựa chọn trứng và ấu trùng có chất lượng tốt bố trí thí nghiệm ương nuôi ấu trùng trong bể 10 m3, mật độ ấu trùng chữ D Veliger 15-20 con/ml. Thí nghiệm được thực hiện với 3 lần lặp.
Hình 2.2: Sơ đồ thí nghiệm ương nuôi ấu trùng trùng trục 2.4.1. Quản lý và chăm sóc bể ương
Bể ương nuôi ấu trùng: Sử dụng bể 10 m3, bố trí 5 vòi khí sục 24/24 giờ, đảm bảo nước xáo trộn đều, tránh hiện tượng ấu trùng lắng đáy trong quá trình ương nuôi, hàm lượng ô xy duy trì 4 - 6 mg O2/l.
- Chuẩn bị nước: Nước có độ mặn 12 - 20‰ được xử lý qua ao lắng, lọc thô, lọc tinh 1 - 5 µm.
- Chế độ thay nước:
+ Từ ngày 1 - 3 không cần thay nước trong bể ương nuôi.
+ Từ ngày thứ 3 - 5 thay 30 - 40% thể tích nước trong bể ương mỗi ngày. + Từ ngày thứ 5 - 8 thay 40 - 50% thể tích nước trong bể ương mỗi ngày.
Ngày thứ 9 tiến hành lọc ấu trùng chuyển qua bể ương nuôi ấu trùng xuống đáy.
Hình 2.3: Bể ương nuôi ấu trùng trùng trục
- Mật độ ương nuôi
+ 5 ngày đầu ương nuôi với mật độ từ 10 - 15 ấu trùng/ml. + 6 - 8 ngày tiếp theo ương với mật độ 7 - 10 ấu trùng/ml.
+ Giai đoạn chuyển giai đoạn xuống đáy ương với mật độ 5 - 7 ấu trùng/ml.
Nuôi vỗ, cho đẻ và thu trứng ấp
Thu ấu trùng chữ D nuôi trong bể đến giai đoạn hậu kỳ
đỉnh vỏ Thu ấu trùng hậu kỳ đỉnh
vỏ nuôi trong bể đáy bùn non có độ dày 3-5 mm ương nuôi xuống đáy (bò lê) Các loài vi tảo: Nannochloropsis oculata Chlorella sp Isochrysis galbana Chatoceros gracilis Tetraselmis chui
Thu ấu trùng sống đáy nuôi trong bể ngoài trời thành con giống nhỏ
+ Giai đoạn xuống đáy ương với mật độ 500.000 - 700.000 ấu trùng/m2
đáy bể.
2.4.2. Thức ăn và phương pháp cho ăn
Thức ăn sử dụng trong ương nuôi ấu trùng gồm 5 loài tảo: Nannochloropsis oculata, Chlorella sp, Isochrysis galbana, Chaetoceros gracilis, Tetraselmis chuii.
Hình 2.4. Các loài tảo sử dụng trong ương nuôi ấu trùng trùng trục
Sau khi nở 1 ngày, quan sát thấy ấu trùng đã phát triển tốt, các cơ quan nội quan đã hình thành đầy đủ tiến hành cho ăn lần đầu.
Trong 3 ngày đầu, sử dụng tảo Nannochlonopsis oculata, Cholorenla sp. Nước nuôi tảo lọc qua lưới để loại bỏ động vậy phù du và xác tảo chết sau đó mới cho ấu trùng ăn. Ngày cho ăn 2-3 lần. Mật độ thức ăn 100.000 - 150.000 tế bào/ml.
Từ ngày thứ 3, cho ăn thêm tảo Isochrysis galbana. Khi ấu trùng đã phát triển đến giai đoạn đỉnh vỏ lồi (sau 5 - 6 ngày) cho ăn thêm tảo Chaetoceros gracilis với mật độ tảo từ 150.000-200.000 tb/ml.
Từ ngày thứ 7, cho ăn thêm tảo Tetraselmis chuii.
2.4.3. Thu và ương nuôi ấu trùng xuống đáy (Spat)
Khi ấu trùng chuyển giai đoạn Spat đạt đến kích thước 350 – 400 µm, ấu trùng không còn bơi thường xuyên mà có khả năng bò trên bề mặt các vật thể trong nước, chúng đang chuyển dần từ phương thức sống phù du sang phương thức sống đáy. Dùng lưới lọc có mắt lưới 200 µm lọc thu ấu trùng, chuyển qua bể nuôi ấu trùng xuống đáy. Bùn non được dùng làm nền đáy để ương nuôi ấu trùng đáy. Bùn sau khi phơi khô, được lọc qua lưới có kích cỡ mắt lưới 100 µm, nấu chín để khử trùng sau đó đưa vào bể với lượng 1,5 kg/10m2
tạo nền đáy có độ dày 3-5 mm. Định kỳ 3-5 ngày thay đáy, lọc rửa ấu trùng 1 lần. Sau 10-15 ngày xuống đáy trùng trục có cỡ 2-3 mm. Ở giai đoạn tiếp theo, chuyển trùng trục nuôi ngoài ao trong khoảng 1 tháng để đạt
kích thước con giống cỡ 1 cm.
2.5. Phương pháp phân tích và xử lý số liệu (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Sử dụng phương pháp phân tích hồi quy tuyến tính (Linear regression) để xác định mối quan hệ giữa kích thước trùng trục mẹ với sức sinh sản hữu hiệu với mức ý nghĩa (P < 0,05).
Số liệu được trình bày trong báo cáo được thể hiện dưới dạng giá trị trung bình (TB) ± sai số chuẩn (SE).
CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN
3.1. Một số đặc điểm sinh học sinh sản của trùng trục
3.1.1. Đặc điểm hình thái và sự phát triển tuyến sinh dục
3.1.1.1. Hình thái ngoài
Trùng trục có cơ quan sinh sản nằm xung quanh tuyến tiêu hóa, xen kẽ với khối nội tạng bên trong là dạ dày và mở rộng vào chân khi tuyến sinh dục phát triển. Khi trùng trục mở vỏ và thò chân ra ngoài có thể quan sát thấy 1 phần tuyến sinh dục. Tuyến sinh dục đực và cái có hình dạng giống nhau, chỉ phân biệt được ở giai đoạn thành thục dựa vào màu sắc vì con đực có tuyến sinh dục màu trắng sữa, con cái có tuyến sinh dục màu be vàng, bề mặt thô dạng hạt.
Hình 3.1: Hình thái ngoài cơ quan sinh sản của trùng trục
3.1.1.2. Các giai đoạn phát triển tuyến sinh dục
Việc phân chia các giai đoạn phát triển của tuyến sinh dục trùng trục chủ yếu dựa vào việc quan sát các tế bào sinh dục thông qua các lát cắt mô và mẫu soi tươi tuyến sinh dục.
Thông qua việc quan sát lát cắt mô và soi tươi mẫu mô tuyến sinh dục trùng trục từ tháng 11 năm 2011 đến tháng 11 năm 2012, đặc điểm của tế bào sinh dục trùng trục qua các giai đoạn phát triển của tuyến sinh dục theo đánh giá về các giai đoạn phát triển tuyến sinh dục của động vật thân mềm của Darriba và ctv. (2004) [20] quá trình phát triển tuyến sinh dục trùng trục được chia thành 5 giai đoạn với các đặc điểm được mô tả như sau:
Giai đoạn 0 (Không xác định)
Tuyến sinh dục không rõ ràng, chưa có sự hiện diện của nang follicule. Giai đoạn này chưa xác định được giới tính. Mô liên kết (leydig) chiếm toàn bộ tuyến sinh dục.
Hình 3.2. Tinh sào (trái) và buồng trứng (phải) giai đoạn 0
Giai đoạn I (Tiền giao tử)
Quá trình tạo giao tử bắt đầu với sự xuất hiện của các nang follicule chen lẫn trong các mô liên kết (leydig). Tế bào sinh dục phát triển trên vách nang.
Hình 3.3. Tinh sào (trái) và buồng trứng (phải) giai đoạn I
Giai đoạn II (Phát triển tích cực, sắp chín)
Nang follicule, nang bao tinh phình to chiếm gần hết khối nội tạng, mô liên kết (leydig) giảm nhanh, các giao tử hình thành nhưng chưa chín. Noãn bào gia tăng kích thước và đạt kích thước giai đoạn chín. Ở giai đoạn này tinh trùng được sắp xếp tỏa tròn với phần đuôi hướng về trung tâm của nang bao tinh. Quan sát thấy tế bào trứng méo mó trong các nang trứng, bắt đầu tách rời vách.
Hình 3.4. Tinh sào (trái) và buồng trứng (phải) giai đoạn II
Nang trứng và nang tinh phồng lên, hầu hết chứa trứng và tinh trùng, vách nang mỏng dần, tuyến sinh dục ở trạng thái chín. Trứng sẵn sàng thụ tinh và tinh trùng có khả năng hoạt động. Giai đoạn này chia ra làm 3 giai đoạn phụ:
Giai đoạn III A (Chín): Tuyến sinh dục căng phồng chiếm toàn bộ không gian của tuyến tiêu hóa và mở rộng xuống phần chân. Nang trứng và nang tinh chứa phần lớn các giao tử đã trưởng thành. Khi giải phẫu tuyến sinh dục thấy có sự xuất hiện của giao tử. Tế bào trứng hình đa giác chứa trong các nang trứng. Tinh trùng chảy ra tạo thành vệt.
Hình 3.5. Tinh sào (trái) và buồng trứng (phải) giai đoạn IIIA
Giai đoạn III B (Bắt đầu sinh sản): Xuất hiện sự giải phóng tinh ở tuyến sinh dục đực. Quan sát thấy có những khoảng trống trong các nang trứng và mật độ trứng chín trong các nang giảm.
Hình 3.6. Tinh sào (trái) và buồng trứng (phải) giai đoạn IIIB
Giai đoạn III C (Phục hồi): Quan sát thấy sự xuất hiện trở lại của trứng và tinh trùng. Tăng lượng tinh trùng trưởng thành trong tuyến sinh dục đực. Trong các bao nang có sự xuất hiện của trứng đã chín và trứng non.
Hình 3.7. Tinh sào (trái) và buồng trứng (phải) giai đoạn IIIC
Giai đoạn IV (Giai đoạn nghỉ)
Sau khi sinh sản, vách nang bị rách, bên trong còn sót lại một ít tinh trùng và trứng. Trứng và tinh trùng còn sót lại sẽ được hấp thu lại bởi vách của các tế bào lân cận. Giai đoạn này mô sinh dục bị thay thế dần bởi mô liên kết.
Hình 3.8. Tinh sào (trái) và buồng trứng (phải) giai đoạn IV 3.1.2. Chu kỳ sinh dục và mùa vụ sinh sản (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Trong thời gian thực hiện đề tài từ tháng 11 năm 2011 đến tháng 12 năm 2012. Kết quả theo dõi các giai đoạn phát triển của tuyến sinh dục của 100 cá thể theo các tháng được tổng hợp và thể hiện qua Hình 3.3.
Hình 3.9: Tỷ lệ các giai đoạn phát triển tuyến sinh dục theo thời gian thu mẫu (n = 100)
Từ tháng 3 đến tháng 7 tuyến sinh dục của trùng trục ở dạng nghỉ giai đoạn 0: Kích thước tuyến sinh dục nhỏ, tháng 3-5 ở dạng trong suốt, 6-7 bắt đầu tích lũy dinh dưỡng cho sự hình thành giao tử sau này. Lúc này các mô liên kết chiếm toàn bộ tuyến sinh dục.
Giao tử bắt đầu hình thành vào tháng 8 với 10% và tháng 9 với 22%, hệ số sinh dục GSI tiếp tục tăng do tích lũy vật chất cho sự sản sinh giao tử. Quan sát lát cắt tuyến sinh dục đã thấy sự xuất hiện của nang trứng và nang tinh tăng kích thước. Trong tháng 10 có 50% số cá thể trùng trục có tuyến sinh dục ở giai đoạn I và 35% ở giai đoạn II. Tuyến sinh dục của trùng trục đã thành thục ở tháng 10 với tỷ lệ 15%.
Sang tháng 11 đã có 50% cá thể trùng trục có tuyến sinh dục ở giai đoạn IIIA và 30% ở giai đoạn IIIB. Trùng trục bắt đầu sinh sản khi điều kiện môi trường thuận lợi, tuyến sinh dục lúc này căng phồng chiếm toàn bộ tuyến ruột và kéo xuống cả phần chân. Lúc này đã quan sát thấy trứng và tinh trùng xuất hiện ngoài vách túi nang trên lát cắt mô. Tuy nhiên vẫn còn 20% số cá thể có tuyến sinh dục ở giai đoạn II.
Ở tháng 12 trùng trục tập trung sinh sản. Qua quan sát thấy 100% số cá thể trùng trục ở giai đoạn chín muồi sinh dục với 50% số cá thể có tuyến sinh dục ở giai đoạn IIIB, 25% số cá thể đã tham gia sinh sản tuyến sinh dục ở giai đoạn IIIC và 25% tuyến sinh dục ở giai đoạn IIIA. Hệ số sinh dục giảm do các cá thể tham gia sinh sản, phát thải sản phẩm sinh dục.
Tháng 1, hệ số thành thục của sinh dục giảm mạnh do trùng trục đã tham gia sinh sản. Có tới 70% số cá thể quan sát tuyến sinh dục ở giai đoạn IIIC và 20% số cá thể có tuyến tinh dục ở giai đoạn IV. Chỉ còn 10% cá thể có tuyến sinh dục ở giai đoạn IIIB.
Tháng 2 không còn xuất hiện sự sinh sản của trùng trục. Tuyến sinh dục lúc này chuyển sang giai đoạn IV và giai đoạn nghỉ 0.
Trong tuyến sinh dục của trùng trục cũng như nhiều động vật thân mềm khác, ngoài sác sản phẩm sinh dục ở giai đoạn thành thục thì luôn có các sản phẩm sinh dục ở giai đoạn non, tuy nhiên với số lượng ít. Sau khi đẻ, các noãn bào đã thành thục được thoát ra ngoài còn lại các noãn bào non thì tiếp tục phát triển lên. Sự phát triển từ giai đoạn non I, II đến giai đoạn phát dục giai đoạn III thường chịu sự tác động của các yếu tố môi trường hơn từ giai đoạn phát dục lên giai đoạn thành thục.
Tỷ lệ phần trăm (%) số cá thể thành thục giai đoạn (III, IV) và hệ số sinh dục (GI) có thể được sử dụng để phân biệt một giai đoạn khi các tuyến sinh dục trong một thời gian nghỉ ngơi hoặc bắt đầu của giao tử, một giai đoạn khi phát triển tuyến sinh dục đã diễn ra, một giai đoạn của sự trưởng thành và sinh sản, và giai đoạn kiệt sức vào cuối của chu kỳ sinh sản (Darriba et al.,2005).
Hình 3.10. Tỷ lệ % trùng trục thành thục sinh dục ở giai đoạn III, IV
Từ hình 3.4 cho thấy các cá thể thành thục giai đoạn III, IV chỉ có ở các tháng từ tháng 10 - 2 năm sau, tỷ lệ thành thục cao nhất vào tháng 11 - 12 - 1. Từ tháng 1 tỷ lệ thành thục giảm nhanh đến tháng 2. Từ tháng 3 đến tháng 9 tuyến sinh dục của trùng trục ở trạng thái chưa thành thục và bắt đầu thành thục lại từ tháng 10, tăng nhanh trong cuối tháng 10 - đầu tháng 11 từ 15% lên 80% tháng 11.
Hình 3.11: Biến thiên hệ số GSI của trùng trục theo các tháng
Dựa trên hệ số thành thục sinh dục GSI người ta có thể chia sự phát triển của tuyến sinh dục trùng trục trong năm thành năm giai đoạn của chu kỳ sinh sản như sau i) tuyến sinh dục phát triển, ii) trưởng thành, iii) sinh sản, iv) thái hóa, và v) thời gian nghỉ ngơi.
Đường biểu diễn hệ số thành thục sinh dục trên đồ thị hình 3.5 cho thấy hệ số sinh dục thấp nhất ở tháng 3 - 7, từ tháng 8 - 9 hệ số sinh dục tăng và đạt cao nhất vào tháng 10 - 1. Cho thấy thời kỳ sinh sản của trùng trục trong nghiên cứu này từ cuối tháng 10 đến đầu tháng 1 năm sau và một khoảng thời gian nghỉ ngơi từ cuối tháng 2 đến nửa đầu tháng 8. Từ nửa cuối tháng 8 đến tháng 10 là thời gian phát triển của tuyến sinh dục.
Hình 3.12. Hệ số sinh dục của trùng trục đực và cái theo các tháng trong năm
Các đường biểu diễn trên các đồ thị hình 20 cho thấy hệ số sinh dục của cả con đực và con cái đều cao ở các tháng 11 - 12. Các tháng sau đó hệ số sinh dục giảm xuống rất thấp và thấp nhất vào tháng 3-7 ở cả con đực và con cái. Hệ số sinh dục của
trùng trục giảm từ tháng 1 - 7 và từ tháng 8 - 10 lại tăng lên nhưng ở giá trị thấp. Hệ số sinh dục của con cái cao hơn con đực từ tháng 10 - 12 và thấp hơn con đực ở các tháng 9, 1 đến tháng 2 năm. Hệ số thành thục của con cái cao hơn con đực ở mùa vụ sinh sản và ngược lại. Tỷ lệ thành thục ở cả con đực và con cái đều cao ở các tháng 11- 12, sau đó giảm nhanh. Tỷ lệ thành thục ở con cái thấp nhất vào tháng 3-7, sang tháng 8-10 tỷ lệ thành thục của cả đực và cái đều tăng.
Qua những nhận định trên có thể thấy mùa vụ sinh sản của trùng trục vào thời gian từ tháng 11 đến tháng 1 năm sau, trong đó thời gian tháng 11, 12 là thời gian đẻ rộ nhất. Thời gian còn lại từ tháng 2 đến tháng 7 tuyến sinh dục của trùng trục ở trạng thái nghỉ và bắt đầu phát triển từ tháng 8, phát triển nhanh nhất trong tháng 10 đạt giai đoạn chín sinh dục, sinh sản trong tháng 11 khi nhiệt độ, độ mặn thuận lợi nhất cho sự sinh trưởng và phát triển của phôi, ấu trùng trùng trục.
3.1.3. Tuổi và kích thước sinh sản l n đ u
Kích thước thành thục lần đầu tiên được xác định cho nhóm cá thể kích thước nhỏ nhất có tuyến sinh dục phát triển giai đoạn III, IV chiếm tỷ lệ 50% trong số các cá thể của nhóm. Cỡ của nhóm cá thể khi chín sinh dục lần đầu được xác định qua đồ thị ở điểm mà tại đó 50% số cá thể khi chín sinh dục.
Bảng 3.1. Tỷ lệ thành thục sinh dục trùng trục theo nhóm kích thước Nhóm kích thước (mm) Tổng số cá thể Số cá thể thành thục (Giai đoạn 3,4) Tỷ lệ thành thục (%) ≤ 20 97 31 32,0 21-30 81 60 74,1 31-40 89 80 89,9 41-50 125 120 96,0 51-60 103 97 94,2 > 70 83 78 94,0
Trong quá trình thực hiện đề tài, chúng tôi tiến hành kiểm tra giai đoạn phát triển tuyến sinh dục theo nhóm kích thước chiều dài vỏ của 578 cá thể thời gian kiểm tra từ tháng 11 - 12/2012. Từ kết quả Bảng 3 và Hình 3.7 có thể xác định được kích thước thành thục lần đầu của trùng trục lần đầu là 25 mm tính theo chiều dài của vỏ và khi