nghiên cứu nuôi cấy in vitro cây sâm ngọc linh (panax vietnamensis ha et grushv.

1 MỞ ĐẦU Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) là cây thuốc có giá trị dược liệu và giá trị kinh tế cao, được biết đến trên thế giới với tên gọi Vietnamese ginseng, ngoài ra còn có các tên khác như: sâm Việt Nam, sâm Khu V, Thuốc giấu, sâm Đốt trúc, Rợm con. Sâm Ngọc Linh phân bố ở vùng núi Ngọc Linh thuộc 2 tỉnh Kon Tum và Quảng Nam, còn có ở Langbian-Lâm Đồng. Đặc biệt, Việt Nam là nơi phân bố sâm Ngọc Linh duy nhất trên toàn thế giới. Điều đáng tự hào là ở sâm Ngọc Linh có thành phần ginsenosid được đánh giá vào loại nhiều nhất so với các loài khác của chi Panax trên thế giới. Ở phần thân rễ chứa các hợp chất saponin (hơn 50 loại), polyacetylen (7 loại), acid béo, acid amine, các hợp chất sterol, đường tự do, các vi lượng,… Thân và lá cũng có chứa nhiều loại saponin và vi lượng,… được dùng làm thuốc bổ, chữa viêm họng, huyết áp thấp, xuất huyết dạ dày, chống stress,… Sâm Ngọc Linh có thể chế biến thành dạng bột, dạng viên, dạng sâm nước để uống. Ngoài ra, sâm Ngọc Linh được đồng bào dân tộc Xê-đăng sử dụng như một vị thuốc trị bá bệnh, tăng lực, chống mệt mỏi, … [4, 6, 7]. Dựa trên nhiều bằng chứng nghiên cứu khoa học đã chứng minh loài sâm này có giá trị cao về mặt dược liệu, các nhà khoa học đã xếp sâm Ngọc Linh vào nhóm sâm quý của thế giới cùng với nhân sâm Triều Tiên (Panax ginseng C.A. Meyer), sâm Mỹ (Panax quinquefolium L.) và sâm Tam thất (Panax notoginseng (Burk.) F. H. Chen) [7]. Hiện nay, mặc dầu nhà nước đã có chủ trương bảo vệ nguồn cây thuốc quý này nhưng nguồn sâm tự nhiên vẫn bị khai thác lén lút, trái phép một cách nghiêm trọng, có thể dẫn đến cạn kiệt nguồn sâm tự nhiên. Vì vậy, cần có nhiều nghiên cứu, sản xuất, cũng như đánh giá chuẩn xác về giá trị y học và giá trị kinh tế của sâm Ngọc Linh. Trong các hướng nghiên cứu, hướng 1 2 nuôi cấy mô hứa hẹn sẽ đưa cây sâm Ngọc Linh phát triển cả về số lượng lẫn chất lượng, đáp ứng đủ nhu cầu của thị trường và mang lại hiệu quả kinh tế cao. Nhân giống hữu tính cây sâm Ngọc Linh bằng cách gieo hạt thông thường cho tỷ lệ hạt nảy mầm thấp khoảng 30-40% [5], còn nếu nhân giống vô tính bằng cách cắt đầu mầm của cây sâm sau khi thu hoạch giâm xuống đất, cho tỷ lệ sống cao (95%) nhưng cây con chỉ mọc vào tháng 2 đến tháng 4 dù trồng bất kỳ ở thời điểm nào trong năm và mỗi đầu mầm chỉ phát triển thành một cây con [7]. Vì vậy, nghiên cứu nhân giống vô tính in vitro cây sâm Ngọc Linh hết sức cần thiết, nhằm mục đích tạo nguồn cây giống dồi dào đáp ứng kịp thời cho nhu cầu mở rộng nguồn sâm nguyên liệu. Xuất phát từ những vấn đề trên, chúng tôi đã chọn đề tài “Nghiên cứu nuôi cấy in vitro cây sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.)” nhằm góp phần xác định môi trường nuôi cấy thích hợp cho nhân giống vô tính in vitro của loài sâm này. 2 3 Chương 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1. KHÁI NIỆM VÀ SƠ LƯỢC LỊCH SỬ PHÁT TRIỂN NUÔI CẤY MÔ VÀ TẾ BÀO THỰC VẬT 1.1.1. Khái niệm Hai khái niệm, tính tạo hình và tính toàn năng quyết định sự hiểu biết trong nuôi cấy mô và tế bào thực vật và sự tái sinh cây. Nhiều quá trình phức tạp xảy ra trong các giai đoạn sinh trưởng và phát triển của cây trồng liên quan đến sự thích ứng với điều kiện của môi trường nuôi cấy [41]. Tính tạo hình có thể thay đổi quá trình trao đổi chất, tăng trưởng, và phát triển theo hướng tốt nhất khi thực vật được nuôi cấy trong môi trường phù hợp. Đặc biệt là khả năng có thể bắt đầu phân chia tế bào từ bất cứ loại mô nào của cây để tái sinh các bộ phận hoặc trải qua các con đường phát triển khác nhau khi có điều kiện kích thích sinh trưởng hợp lý. Khi tế bào thực vật và các mô được nuôi cấy trong ống nghiệm thường thể hiện tính tạo hình rất cao, một loại mô hoặc cơ quan có thể được hình thành từ một dạng mô khác và có thể được tái sinh cây hoàn chỉnh [13, 41]. Theo Haberlandt (1902), tất cả các tế bào của một cơ thể đa bào đều mang toàn bộ lượng thông tin di truyền của cơ thể đó và khi gặp điều kiện thích hợp, mỗi tế bào đều có khả năng tái sinh và phát triển thành một cá thể hoàn chỉnh. Tức là, mỗi tế bào riêng rẽ của một cơ thể đa bào đều chứa đầy đủ toàn bộ lượng thông tin di truyền cần thiết của cả sinh vật đó và nếu gặp điều kiện thích hợp thì mỗi tế bào có thể phát triển thành một cơ thể sinh vật hoàn chỉnh. Sự duy trì tiềm năng di truyền này được gọi là tính toàn năng. Thực tế trong nuôi cấy tế bào và tái sinh ở thực vật cung cấp bằng chứng thuyết phục nhất cho tính toàn năng. Nhưng việc xác định điều kiện nuôi cấy và chất kích 3 4 thích sinh trưởng có thể rất khó khăn để nhận thấy tính toàn năng ở thực vật, mà quá trình này chủ yếu dựa vào kinh nghiệm [3, 14, 41]. Kỹ thuật nuôi cấy mô và tế bào thực vật cho phép tái sinh chồi hoặc cơ quan từ các mô như lá, thân, hoa, rễ, củ hoặc đỉnh sinh trưởng. Trước kia người ta dùng phương pháp này để nghiên cứu các đặc tính cơ bản của tế bào như sự phân chia, đặc tính di truyền và ảnh hưởng của các hóa chất đối với tế bào và mô trong quá trình nuôi cấy [3, 41]. Nuôi cấy mô và tế bào thực vật là sự duy trì và nuôi dưỡng mô, tế bào, cơ quan hay cây hoàn chỉnh của thực vật trong điều kiện in vitro. Kỹ thuật nuôi cấy mô dùng cho cả mục đích nhân giống và cải thiện di truyền như sản xuất sinh khối các sản phẩm hóa sinh, bệnh học thực vật, duy trì và bảo quản nguồn gen quý,… Kỹ thuật nuôi cấy mô và tế bào thực vật là một trong những thành công sớm nhất và đã được ứng dụng rộng rãi nhất của công nghệ sinh học. Việc ứng dụng nhân giống vô tính in vitro đã thành công nhiều ở rất nhiều loài thực vật mà trước đây các phương thức nhân giống truyền thống gặp rất nhiều khó khăn [3, 14]. 1.1.2. Sơ lược lịch sử phát triển của nuôi cấy mô và tế bào thực vật Lịch sử phát triển của nuôi cấy mô và tế bào thực vật có thể chia làm 3 giai đoạn như sau: 1) Giai đoạn khởi đầu từ năm 1902 – 1933, Gottlibe Haberlandt (1902), đưa ra giả thuyết về “tính toàn năng của tế bào thực vật”. Tuy nhiên, ông đã không thành công với các tế bào mô mềm, biểu bì do chúng không thể phân chia được. 2) Giai đoạn thứ hai từ năm 1934 – 1965, phát hiện ra các hormone sinh trưởng đầu tiên và xây dựng được các môi trường cơ bản. 4 5 3) Giai đoạn ba từ 1965 – 1978 – đến nay, phát hiện ra các kĩ thuật nuôi cấy mô có ý nghĩa như tạo cây đơn bội, nuôi cấy tế bào trần, kết hợp nuôi cấy mô tế bào với kỹ thuật gen,… Từ năm 1898, Gottlibe Haberlandt đã tiến hành nuôi cấy tế bào ở nhiều loài thực vật nhưng không thành công. Đến năm 1902, ông đưa ra phương pháp nuôi cấy tế bào thực vật để chứng minh cho tính toàn năng của tế bào và cho rằng mỗi tế bào bất kỳ của sinh vật nào cũng đều mang toàn bộ lượng thông tin di truyền của cơ thể đó và có khả năng phát triển thành cơ thể hoàn chỉnh khi gặp điều kiện thuận lợi [3]. Kotte và Robbins (1922) đã thành công khi nuôi cấy rễ cây ngô. Fritz Went (1926) đã tìm ra chất kích thích sinh trưởng (KTST) đầu tiên là 3-indoleacetic acid (IAA), đã giúp cho việc nuôi cấy mô thực vật có nhiều thuận lợi hơn. Cũng trong thời gian này, hàng hoạt vitamin nhóm B cũng được phát hiện như: thiamin (vitamin B1), pyridoxin (vitamin B6), nicotinic (vitamin B3),… có vai trò lớn thúc đẩy sinh trưởng trong nuôi cấy [19]. Năm 1939, Philip R. White đã nuôi cấy liên tục cây cà rốt và cây thuốc lá trong ống nghiệm, Folke Skoog phát hiện ra đặc tính mới và quan trọng của các KTST nhóm auxin, Skoog và Murashige phát triển môi trường dinh dưỡng chuẩn Murashige-Skoog (MS) được ứng dụng rộng rãi trong nuôi cấy mô và tế bào thực vật, Gautheret và Nobecourt đã duy trì được sự sinh trưởng của callus cà rốt (Daucus carota) trong một thời gian dài. Năm 1946, Ball đã tái sinh cây hoàn chỉnh từ nuôi cấy mô phân sinh chồi cà rốt, Morel và Martin tạo được cây Thược dược (Dahlia) sạch virus từ nuôi cấy mô phân sinh chồi của cây bị nhiễm [19]. Năm 1955, Miller và cs đã tìm ra cấu trúc và sinh tổng hợp kinetin (KIN), là một cytokinin trong nuôi cấy mô thực vật [10]. Skoog và Miller (1957) khám phá vai trò của tỷ lệ nồng độ auxin/cytokinin trong nuôi cấy mô thực vật. Cooking (1960) đã tạo ra số 5 6 lượng lớn tế bào trần ở những thực vật khác nhau nhờ sử dụng enzyme phân giải thành tế bào [12]. Năm 1966, Guha và cs đã nuôi cấy thể đơn bội từ bao phấn của cây cà độc dược thành công [12]. Bourgin và Nitsch (1967) tạo cây đơn bội thành công ở cây thuốc lá [10]. Với sự ra đời của enzyme giới hạn vào đầu những năm 1970, nuôi cấy mô bắt đầu hướng tới một lĩnh vực nghiên cứu công nghệ thực vật mới. Các tế bào toàn năng của thực vật có thể được thay đổi bằng cách chèn các gen ngoại lai đặc trưng để tạo ra cây trồng biến đổi gen [48]. Trong vòng 30 năm trở lại đây, kỹ thuật nhân giống in vitro đã tạo nên cuộc cách mạng lớn trong nhân giống thực vật và hướng tới mục tiêu áp dụng kỹ thuật này để sản xuất cây giống thương mại. Kỹ thuật nhân giống in vitro đã trở thành một phương pháp nhân giống chuẩn và phổ biến đối với nhiều loại cây trồng như: cây công nghiệp, cây lâm nghiệp, cây cảnh, cây dược liệu, cây ăn trái và rau xanh. Hiện nay, kỹ thuật nuôi cấy mô và tế bào thực vật kết hợp với các kỹ thuật gen được ứng dụng rộng rãi trong nông nghiệp, lâm nghiệp, y học,… để nhân giống, chọn dòng, lai xa nhiều loài thực vật, chuyển gen vào cây trồng, sản xuất giống cây trồng, cung cấp nguồn dược liệu,… 1.2. NHÂN GIỐNG IN VITRO CÂY TRỒNG 1.2.1. Môi trường nuôi cấy in vitro Trong nuôi cấy in vitro, tất cả các nhu cầu của các tế bào thực vật, cả chất hóa học và tác dụng của nó phải đáp ứng được trong bình nuôi cấy: môi trường phát triển và môi trường bên ngoài (ánh sáng, nhiệt độ,…). Môi trường phát triển cần cung cấp đầy đủ các các ion khoáng chất cần thiết cho sự tăng trưởng và phát triển. Trong nhiều trường hợp cũng phải cung cấp bổ sung thêm chất hữu cơ như amino acid và vitamin. Trong các điều kiện 6 7 nuôi cấy không quang hợp thì cũng yêu cầu bổ sung một nguồn carbon cố định ở dạng đường (thường là sucrose). Một thành phần quan trọng khác cũng phải được cung cấp đó là nước, chính là dung môi của các quá trình sinh học. Các yếu tố vật lý như pH, nhiệt độ, môi trường khí, ánh sáng (chất lượng, thời gian), và áp lực thẩm thấu cũng phải được duy trì trong giới hạn [3, 14, 41]. Trong môi trường nuôi cấy mô và tế bào thực vật, thành phần phụ gia quan trọng nhất quyết định kết quả nuôi cấy là các chất điều khiển sinh trưởng. Có bốn nhóm chất điều hòa sinh trưởng chung đó là auxin, cytokinin, gibberellin và abscisic acid, những chất này có vai trò quan trọng trong nuôi cấy mô. Tỷ lệ của các chất điều hòa sinh trưởng cần cho sự tạo rễ và chồi rất khác nhau, và mô là nơi dường như liên quan trực tiếp với lượng chất điều hòa sinh trưởng được tổng hợp nội sinh ở các tế bào của mẫu nuôi cấy [3, 30, 31, 32, 33]. Cơ sở cho việc xây dựng các môi trường nuôi cấy là xem xét các thành phần cần cho sự sinh trưởng và phát triển của cây. Thành phần môi trường nuôi cấy tế bào và mô thực vật thay đổi tùy theo loài và bộ phận nuôi cấy. Đối với cùng một mẫu cấy nhưng tùy theo mục đích thí nghiệm thì thành phần môi trường cũng sẽ thay đổi tùy theo giai đoạn phân hóa của mẫu cấy [3, 14, 41]. 1.2.1.1. Các thành phần của môi trường nuôi cấy * Các nguyên tố đa lượng Trong môi trường nuôi cấy cung cấp các nguyên tố đa lượng cần thiết cho sự tăng trưởng và phát triển của thực vật. Các nguyên tố đa lượng gồm: nitrogen, phosphore, potassium, magnesium, calcium, sulphur. Những nguyên tố này thường chiếm 0,1% trọng lượng khô của thực vật [3, 41]. * Các nguyên tố vi lượng 7 8 Các nguyên tố vi lượng cần thiết với hàm lượng rất thấp cho thực vật sinh trưởng, phát triển và nhiều vai trò sinh lý khác. Các nguyên tố vi lượng thường bao gồm: manganese, iodine, copper, cobalt, boron, molybdenum, iron và zinc [3, 11, 14, 41]. * Hữu cơ bổ sung Hai loại vitamin là thiamine (vitamin B1) và myo-Inositol (được xem là một loại vitamin B), được cho là cần thiết cho nuôi cấy in vitro tế bào thực vật và các amino acid thường sử dụng nhất là arginine, asparagin, aspartic acid, alanine, glutamic acid, glutamine và proline [3, 41]. * Nguồn carbon Nguồn carbon được sử dụng gồm: sucrose, glucose, maltose, galactose và sorbitol. Nhưng sucrose được sử dụng phổ biến nhất do nó dễ tìm, giá rẽ, dễ hấp thu và tương đối ổn định. Các nguồn carbon khác cũng có thể được sử dụng nếu nó thật sự tối ưu hơn so với sucrose [3, 11, 41]. * Các tác nhân làm rắn môi trường Khi nuôi cấy in vitro tế bào thực vật trên môi trường rắn, các gel tạo một giá đỡ cho mô sinh trưởng trong điều kiện tĩnh. Agar là một loại polysaccharide thu được từ một số loài tảo, chúng có ưu điểm hơn các tác nhân tạo gel. Gelatin ở nồng độ cao (10%) cũng có hiệu quả tạo gel nhưng bị hạn chế sử dụng vì nó nóng chảy ở nhiệt độ thấp (25 o C). Các hợp chất khác đã được thử nghiệm thành công bao gồm methacel, alginate, phytagel và gel- rite [3, 41]. Tóm lại, các thành phần này là những nhu cầu hóa chất cơ bản của môi trường nuôi cấy tế bào thực vật. Tuy nhiên, tùy vào các điều kiện của mô hình thí nghiệm mà chúng ta có thể thiết kế một môi trường tối ưu cho sự sinh trưởng và phát triển trong nuôi cấy tế bào thực vật. 8 9 1.2.1.2. Điều chỉnh sự phát triển của thực vật và nuôi cấy mô Các chất điều hòa sinh trưởng thực vật là các thành phần quan trọng quyết định hướng phát triển của các tế bào thực vật. Các chất điều hòa sinh trưởng thực vật được sử dụng nhất thường là các hormone tự nhiên của thực vật hoặc các chất điều hòa sinh trưởng được tổng hợp. Trong nuôi cấy tế bào thực vật các nhóm chất điều hòa sinh trưởng được sử dụng gồm: * Auxin Auxin là nhóm chất điều hòa sinh trưởng được sử dụng rộng rãi trong nuôi cấy mô thực vật. Trong đó, IAA là auxin tự nhiên có trong mô thực vật, còn NAA, IBA, 2,4-D là các auxin nhân tạo, thường các auxin nhân tạo có hoạt tính mạnh hơn. Tên viết tắt / Tên Tên hóa học 2,4-D 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid 2,4,5-T 2,4,5-trichlorophenoxyacetic acid Dicamba 2-methoxy-3 ,6- dichlorobenzoic acid IAA Indole-3-acetic acid IBA Indole-3-butyric acid MCPA 2-Methyl-4- chlorophenoxyacetic acid NAA 1-Naphthylacetic acid NOA 2-Naphthyloxyacetic acid Picloram 4-amino-2,5,6- trichloropicolinic acid 9 10 Auxin có ở các bộ phận của cây như mô phân sinh đỉnh, các bộ phận non của cây (auxin nội sinh). Khi sử dụng auxin trong nuôi cấy cần lưu ý đến đặc điểm của đối tượng cần nghiên cứu, đặc tính của auxin (ngoại sinh) để xác định khoảng nồng độ và loại auxin cần thiết. Auxin có khả năng thúc đẩy sự phân chia tế bào và phát triển của tế bào, tạo và nhân nhanh callus, tạo phôi soma (2,4-D), kích thích sự phân hoá của các mô dẫn, kích thích tạo chồi bất định (khi auxin ở nồng độ thấp) [3, 11, 31, 41]. * Cytokinin Các cytokinin là dẫn xuất của adenine. Các cytokinin được sử dụng thường xuyên nhất là BAP, zeatin và 2-iP là các cytokinin tự nhiên, còn BA và KIN là các cytokinin nhân tạo. Tên viết tắt / Tên Tên hóa học BAP 6-Benzylaminopurine 2iP (IPA) N 6 - (2-Isopentyl) adenine Kinetin 6-Furfurylaminopurine Thidiazuro n 1-Phenyl-3 (1,2,3-thiadiazol-5-yl) urea Zeatin 4-Hydroxy-3-methyl-trans-2- butenylaminopurine Cytokinin có khả năng kích thích phân chia tế bào, tạo và nhân callus, kích thích phát sinh chồi trong nuôi cấy mô, tạo chồi bất định (khi ở nồng độ cao), ức chế sự hình thành rễ [3, 11, 41, 32]. * Gibberelin 10 [...]... sâm Ngọc Linh trên thị trường thế giới Trong đó, kỹ thuật nhân giống in vitro cho hệ số nhân giống cao, nên đây là giải pháp cần thiết góp phần phát triển đáp ứng kịp thời nguồn sâm nguyên liệu trong công tác nhân giống để mở rộng diện tích sâm trồng và sản xuất sản phẩm sâm Ngọc Linh Hình 1 Cây sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) a Cây sâm Ngọc Linh mọc tự nhiên; b Cây sâm Ngọc Linh trong... xếp vào nhóm sâm quý trên thế giới Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) thuộc: Bộ (ordo): Apiales Họ (familia): Araliaceae Phân họ (subfamilia): Aralioideae Chi (genus): Panax 2.2 NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.2.1 Nguyên liệu Nguyên liệu nuôi cấy ban đầu là đỉnh sinh trưởng, thân củ, cuống lá của cây sâm Ngọc Linh tự nhiên 5 năm tuổi Mẫu được thu tại vùng núi Ngọc Linh, huyện Nam... mọc tự nhiên; b Cây sâm Ngọc Linh trong vườn trồng; c Mẫu sâm Ngọc Linh tự nhiên được thu thập tại vùng núi Ngọc Linh 1, 2, 3, 4, 5 Cây sâm Ngọc Linh có độ tuổi tương ứng: 3 tháng và 1, 2, 3, 5 năm tuổi 25 25 Chương 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU Đối tượng nghiên cứu của chúng tôi là sâm Ngọc Linh, đây là loài sâm chỉ phân bố ở Việt Nam, được xếp đầu bảng trong “Sách... thể trên vùng núi Ngọc Linh về phía triền núi Kon Tum và đặt tên là sâm Đốt trúc với tên khoa học là Panax articulatus Năm 1976, công trình nghiên cứu sơ bộ của Nguyễn Thới Nhâm tại Ba lan cho thấy thành phần saponin của sâm Ngọc Linh khá giống nhân sâm Vào năm 1985, tên khoa học của sâm Ngọc Linh được xác định là Panax vietnamensis Ha et Grushv., thuộc họ nhân sâm (Araliaceae), loài sâm thứ 20 được... saponin damaran gồm ginsenosid-Rb1, ginsenosid-Rd, ginsenosid-Rg1, vina-ginsenosid-R11 và majonosid-R2 Các kết quả nghiên cứu cho thấy sâm Ngọc Linh trồng chứa thành phần saponin tương tự cây sâm mọc hoang trong tự nhiên (hàm lượng saponin thô trong sâm trồng là 19,7%, gần tương đương với sâm thiên nhiên 21,3%) [7, 25] 1.3.3.5 Tác dụng dược lý Các công trình nghiên cứu dược lý và lâm sàng cho thấy sâm Ngọc. .. nghiên cứu vai trò của polyamine và các con đường trao đổi chất trong phôi soma của nhân sâm (Panax ginseng) trong nuôi cấy lỏng Khả năng tạo phôi từ callus trong nuôi cấy lỏng là một quá trình gồm ba thử nghiệm: nuôi cấy huyền phù tế bào có bổ sung một hỗn hợp auxin/cytokinin, chỉ bổ sung auxin và chỉ bổ sung cytokinin Kết quả cho thấy khi kết hợp các polyamine hoặc tiền chất của nó (arginine và ornithine)... cấu trúc mới Ngoài thành phần saponin, trong sâm Ngọc Linh đã xác định có 17 loại acid amin, 20 chất khoáng vi lượng và 0,1% hàm lượng tinh dầu [4, 7, 20, 25] Bộ phận nằm dưới mặt đất của cây sâm Ngọc Linh trồng có khuynh hướng phát triển thành một rễ củ thay vì một thân rễ như ở cây mọc hoang dại Từ bộ phận này của cây sâm Ngọc Linh trồng tại Trại Dược liệu Trà Linh, tỉnh Quảng Nam, các nhà khoa học... hưởng đến sự tăng trưởng sinh khối tế bào và sản phẩm saponin, kết quả cho thấy nồng độ 19 19 sucrose 50 g/l là tối ưu nhất cho sự sinh trưởng của rễ bất định với khối lượng khô (KLK) là 1,62 ± 0,19 g [9] 1.3.2 Một số nghiên cứu nuôi cấy in vitro sâm Ngọc Linh Năm 1968, Vũ Đức Minh đã tìm thấy cây thuốc này tại vùng núi Ngọc Linh và đặt tên là sâm Khu 5 Năm 1973, đoàn điều tra cây thuốc của Ban Dân y... có 26 loại saponin thường thấy ở sâm Triều Tiên, sâm Mỹ, sâm Nhật Bản, đại diện chính là Ginsenoside-Rb1, Ginsenosid-Rg1, Ginsenosid-Rd và 26 loại saponin mới phát hiện trong sâm Ngọc Linh, đại diện chính là: majonosid-R1, majonosid-R2 Đặc biệt majonosid-R2 chiếm 50% hàm lượng saponin toàn phần của sâm Ngọc Linh Trong lá và cuống lá đã phân lập được 19 saponin dammaran, trong đó 8 saponin có cấu trúc... và 30% xanh là tốt nhất Sau 6 tháng trồng ngoài khu vực vườn ươm cho thấy tốc độ sinh trưởng nhanh hơn so với cây sâm Ngọc Linh gieo bằng hạt với tỷ lệ sống sót của 1000 cây sâm in vitro là 87% [6] 21 21 Nguyễn Thị Liễu và cs (2011) đã nghiên cứu khả năng tạo rễ bất định của sâm Ngọc Linh, mẫu cấy được thu thập từ củ sâm tươi có kích thước 1,0×1,0×0,25 cm trên môi trường MS có bổ sung 50 g/l sucrose, . tài Nghiên cứu nuôi cấy in vitro cây sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv. )” nhằm góp phần xác định môi trường nuôi cấy thích hợp cho nhân giống vô tính in vitro của loài sâm này. 2 3 Chương. 1.3.2. Một số nghiên cứu nuôi cấy in vitro sâm Ngọc Linh Năm 1968, Vũ Đức Minh đã tìm thấy cây thuốc này tại vùng núi Ngọc Linh và đặt tên là sâm Khu 5. Năm 1973, đoàn điều tra cây thuốc của. phần saponin của sâm Ngọc Linh khá giống nhân sâm. Vào năm 1985, tên khoa học của sâm Ngọc Linh được xác định là Panax vietnamensis Ha et Grushv. , thuộc họ nhân sâm (Araliaceae), loài sâm thứ