- ĐC: Môi trường cơ bản MS không bổ sung chất KTST.
a.Callus sau 3 tuần nuôi cấy; b Callus sau 6 tuần nuôi cấy; c, d Callus sau
8 tuần nuôi cấy; Thước 1
3.1.2.2. Ảnh hưởng phối hợp 2,4-D và TDZ đến khả năng tạo callus
Trong nhiều nghiên cứu nuôi cấy in vitro ở thực vật, nhiều tác giả đã phối hợp thành công giữa TDZ và nhóm auxin cho kết quả hình thành callus [22]. Chẳng hạn như: Huân và cs (2004) phối hợp giữa 0,1 mg/l NAA 0,01 mg/l TDZ trong môi trường nuôi cấy hoa lan Cymbidium (Vacin và Went), kết quả đạt tỷ lệ 50% mẫu tạo callus [24]; Semiha E. và cs (2010) nghiên cứu nuôi cấy in vitro cây Astragalus cariensis đã phối hợp (0,2, 0,4 và 0,6 mg/l) TDZ và (0,2 và 1,0 mg/l) NAA trong môi trường MS, kết quả đạt 100% số mẫu cấy hình thành callus [43]; Nhựt và cs. (2010) đã phối hợp 1,0 mg/l 2,4-D và 0,2 mg/l TDZ trong nuôi cấy tạo callus từ củ sâm Ngọc linh 10 năm tuổi, cho trọng lượng tươi callus đạt 520 mg [6].
Ở thí nghiệm này, chúng tôi phối hợp giữa 2,4-D và TDZ ở các nồng độ khác nhau trong môi trường MS cơ bản để thăm dò khả năng tạo callus từ mẫu cấy ban đầu. Kết quả sau 8 tuần nuôi cấy được đánh giá trong bảng 3.4.
Bảng 3.4. Ảnh hưởng phối hợp 2,4-D và TDZ đến khả năng tạo callus
Chất KTST (mg/l) TĐC (sau … ngày) TLC (%) KLT (mg) 2,4-D TDZ 0,0 0,0 - - - 1,0 0,1 14 8,60 280c 1,0 0,2 14 79,80 511a 1,0 0,3 14 11,20 348b
Các chữ cái khác nhau trên cùng một cột chỉ ra sự sai khác có ý nghĩa thống kê của trung bình mẫu với p<0,05 (Duncan's test).
Kết quả ở bảng 3.4 cho thấy, khi phối hợp 2,4-D 1,0 mg/l và TDZ 0,2 mg/l trong môi trường cơ bản MS cho tỷ lệ hình thành callus (79,80 %) và
khối lượng tươi của callus (511 mg) cao nhất. Trong quá trình nuôi cấy chúng tôi nhận thấy callus đã tăng trưởng nhanh, có màu trắng đục và xốp (Hình 3.3 a,b).
So sánh bảng 3.2, 3.3 và 3.4 cho thấy, callus hình thành trên môi trường MS bổ sung phối hợp nồng độ 1,0 mg/l 2,4-D với 0,2 mg/l TDZ cho tỷ lệ tạo callus và khối lượng callus cao hơn so với chỉ bổ sung 2,4-D hoặc kết hợp giữa 2,4-D và KIN.
Biểu đồ 3.4. So sánh ảnh hưởng nồng độ phối hợp giữa 2,4-D và TDZ đến khả năng tạo callus
Hình 3.3. Callus hình thành trên môi trường MS có bổ sung phối hợp 1,0 mg/l 2,4-D và 0,2 mg/l TDZ