- SLP: số lượng phôi hình thành (phôi/cụm).
3.4.2.Ảnh hưởng của phối hợp BA và NAA trong môi trường SH đến khả năng tạo chồi từ phôi soma
h. Chồi in vitro phát sinh từ phôi soma trên môi trường SH Thước 1 cm.
3.4.2.Ảnh hưởng của phối hợp BA và NAA trong môi trường SH đến khả năng tạo chồi từ phôi soma
trường SH đến khả năng tạo chồi từ phôi soma
Khả năng tạo chồi khi cấy cụm phôi soma (1,0×1,0 cm) trên môi trường SH bổ sung kết hợp giữa 1,0 mg/l BA với 0,3-1,0 mg/l NAA sau 8 tuần nuôi cấy, kết quả được trình bày ở bảng 3.9.
Bảng 3.9. Ảnh hưởng của phối hợp BA và NAA trong môi trường SH đến khả năng tạo chồi từ phôi soma
Chất KTST (mg/l) Số lượng chồi (chồi/cụm) Chiều cao chồi (cm) BA NAA 0,0 0,0 - - 1,0 0,1 0,00c 0,00d 1,0 0,3 0,75c 0,40c 1,0 0,5 68,77a 1,38a 1,0 1,0 6,15b 0,89b
Các chữ cái khác nhau trên cùng một cột chỉ ra sự sai khác có ý nghĩa thống kê của trung bình mẫu với p<0,05 (Duncan's test).
Sự phối hợp nồng độ hai chất KTST này trên môi trường SH cho cảm ứng tạo chồi từ phôi soma, đây cũng chính là môi trường chúng tôi đã sử dụng trong thí nghiệm cảm ứng tạo phôi soma ở mục 3.3.2. Cụm chồi được hình thành và tăng trưởng tốt nhất trên môi trường bổ sung phối hợp giữa 1,0 mg/l BA với 0,5 mg/l NAA, kết quả đạt được 68,77 chồi/cụm và chiều cao chồi là 1,38 cm (Hình 3.6 e, f, g). Trên môi trường đối chứng SH không bổ sung chất KTST, phôi không có khả năng phát sinh chồi (Bảng 3.9).
Dựa vào bảng 3.8 và 3.9 cho thấy, sự phối hợp giữa 1,0 mg/l BA với 0,5 mg/l NAA trong môi trường SH cho số lượng chồi (68,77 chồi/cụm) và chiều cao chồi (1,38 cm) lớn hơn so với trong môi trường ½ MS (45,95 chồi/cụm, chồi cao 1,15 cm). Trong quá trình theo dõi thí nghiệm, chúng tôi
thấy cùng nồng độ phối hợp này, nhưng các chồi phát triển trên môi trường SH (Hình 3.6 a, b) khỏe hơn, xanh hơn so với trên môi trường ½ MS.
Biểu đồ 3.9. So sánh ảnh hưởng của nồng độ phối hợp 1,0 mg/l BA và NAA (mg/l) trên môi trường SH đến khả năng tạo chồi từ phôi soma
3.5. TẠO RỄ
Auxin là nhóm chất điều hòa sinh trưởng thực vật được sử dụng thường xuyên trong nuôi cấy mô và tế bào thực vật. Các auxin có nguồn gốc tự nhiên hoặc tổng hợp, được sử dụng cho việc phân chia tế bào và phân hóa rễ,…[3, 31]. Trong đó, 2,4-D và NAA là chất KTST thuộc nhóm auxin được sử dụng rộng rãi trong môi trường tạo rễ [8, 21, 31].
Các thí nghiệm được tiến hành trên các môi trường MS, ½ MS, SH, White có bổ sung riêng rẽ chất KTST nhóm auxin là 2,4-D và NAA để thăm dò khả năng tạo rễ ở chồi in vitro. Riêng trên môi trường White, chúng tôi còn thăm dò hàm lượng sucrose bổ sung ở 3 nồng độ 10, 30, 50 g/l.
Chồi in vitro (1,0-1,5 cm) được cấy lên các môi trường thí nghiệm tạo rễ. Tuy nhiên, chồi chỉ có khả năng tạo rễ trên môi trường ½ MS bổ sung (1,0- 2,0 mg/l) NAA. Kết quả được trình bày ở bảng 3.10
Bảng 3.10. Ảnh hưởng của nồng độ NAA trong môi trường ½ MS đến khả năng tạo rễ Nồng độ NAA (mg/l) Tỷ lệ chồi tạo rễ (%) Chiều dài rễ (cm) 0,0 - - 1,0 44,39b 1,15b 2,0 67,76a 1,69a 3,0 0,00c 0,00c
Các chữ cái khác nhau trên cùng một cột chỉ ra sự sai khác có ý nghĩa thống kê của trung bình mẫu với p<0,05 (Duncan's test).
Kết quả trình bày ở bảng 3.10 cho thấy, rễ không có khả năng hình thành trên môi trường đối chứng và môi trường bổ sung 3,0 mg/l NAA. Trên môi trường ½ MS bổ sung 2,0 mg/l NAA, rễ được hình thành và tăng trưởng tốt nhất, với tỷ lệ 67,76 % chồi tạo rễ và chiều dài rễ đạt 1,69 cm. Theo dõi quá trình nuôi cấy cho thấy, mỗi chồi in vitro chỉ hình thành 1 rễ cọc và chồi tăng trưởng không đáng kể (Hình 3.8). Đặc biệt trên môi trường ½ MS bổ sung 3,0 mg/l NAA, thấy có sự tái hình thành callus.
Biểu đồ 3.10. So sánh ảnh hưởng của nồng độ NAA trong môi trường ½ MS đến khả năng tạo rễ
Hình 3.7. Tạo rễ cho chồi in vitro sau 6 tuần nuôi cấy KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
1. KẾT LUẬN
Trên cơ sở các kết quả thu được chúng tôi rút ra một số kết luận:
1. Thời gian khử trùng mẫu bằng HgCl2 0,1% tốt nhất là 7 phút (tỷ lệ mẫu sống không nhiễm cao nhất đạt 87,07%).
2. Môi trường MS có bổ sung phối hợp 1,0 mg/l 2,4-D với 0,2 mg/l TDZ thích hợp nhất cho tạo callus (đạt tỷ lệ 79,80 % mẫu tạo callus, khối lượng tươi 0,511 g) và nhân nhanh callus (đạt 3,406 g).
3. Môi trường SH bổ sung kết hợp 1,0 mg/l BA và 0,5 mg/l NAA thích hợp cho quá trình tạo phôi soma từ callus (đạt tỷ lệ 49,24 % callus hình thành
phôi và 72,51 phôi/cụm) và tạo chồi từ phôi soma (đạt 68,77 chồi/cụm, chiều cao chồi 1,38 cm).
4. Môi trường ½ MS bổ sung 2,0 mg/l NAA là thích hợp nhất cho tạo rễ của chồi in vitro (66,76 % chồi tạo rễ, chiều dài rễ 1,69 cm).
2. KIẾN NGHỊ
Tiếp tục nghiên cứu hoàn chỉnh quy trình nhân giống in vitro sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.).