Phân lập và khảo sát hoạt tính kháng nấm, kháng khuẩn của vi sinh vật nội sinh trên cây dừa cạn (Catharanthus roseus L.)

B GIÁO DO I HC M TP. H CHÍ MINH  Tên đ tài: PHÂN LP VÀ KHO SÁT HOT TÍNH KHÁNG NM, KHÁNG KHUN CA VI SINH VT N (Catharanthus roseus L.) KHOA CÔNG NGH SINH HC CHUYÊN NGÀNH: VI SINH  SINH HC PHÂN T T LINH  MSSV : 1053010038 KHOÁ: 2010  2014  Li Cm n    khóa lu  tiên, Em xin gi c   c t       n tình ng dn, ch bo em trong sut thi gian thc hi tài. Em xin cy Nguyt cho chúng em nhiu kinh nghim quý báu. Em xin gi li cn các Thy Cô khoa Công Ngh Sinh Hc, Ti hc M Thành ph H ng dy và truyt  kin thc cho em trong sut nhv   này. Em xin cm anh  Võ Ngc Yn Nhi và ch Nguyn Th M Linh, nhi ch luôn ng h  tài.   Cui cùng con xin c, cluôn bên con, to mu kin tt nh con hoàn thành vic hc ca mình. Em xin gi li chúc sc khn tt c i th Công ngh sinh hc, i hc m Thành ph H Chí Minh, xin chúc thy cô ngày càng gc nhiu thành công. phòng thí nghim Công ngh Vi i hc M Thành ph H Chí Minh  Tôi xin chúc các bn ca tôi s ng , cng hic tr , cho c. Xin chân thành c .  KHO A LUA N TO T NGHIÊP GVHD DNG NHA T LINH SVTH LÊ SANH BAO i  MC LC I DANH MC HÌNH IV DANH MC BNG VI DANH M VII DANH MC CH VIT TT VIII  1  4 1.1  5 1.2  6 1.2.1  6 1.2.2  6 1.2.3  7 1.2.4  7 1.3             T 8 1.3.1 t 8 1.3.2  sinh 9 1.4  . 11 1.4.1 Escherichia coli 11 1.4.2 Salmonella typhi 12 1.4.3 Staphylococcus aureus 12 1.4.4 Pseudomonas aeruginosa 13 KHO A LUA N TO T NGHIÊ P GVHD DNG NHA T LINH SVTH LÊ SANH BAO ii 1.5  14 1.5.1 Candida albicans 14 1.5.2 Dermatophytes 17 1.6  19 1.6.1  19 1.6.2  20  21 2.1  22 2.2 VT LIU 22 2.3 THIT B, DNG CNG 22 2.3.1 Thit b 22 2.3.2  23 2.3.3 Môi tr 23 2.4 M 23 2.5  24 2.5.1  24 2.5.2  25 2.5.3  26 2.5.4  26 2.5.5  29 2.5.6   30 2.5.7   34 2.5.8  38 2.5.9  46 2.5.10  47 KHO A LUA N TO T NGHIÊ P GVHD DNG NHA T LINH SVTH LÊ SANH BAO iii  48 3.1.  49 3.2.            52 3.2.1. n gây bnh 53 3.2.2. m gây bnh 57 3.3.             61 3.3.1. n gây bnh 64 3.3.2. m gây bnh 67 3.4.  72 3.4.1.  72 3.4.2.  75 3.5. THO LUN 79  80 4.1.  81 4.2.  82 O 83 KHO A LUA N TO T NGHIÊ P GVHD DNG NHA T LINH SVTH LÊ SANH BAO iv  Hình 1.1: Cây da cn 7 Hình 1.2: Escherichia coli 11 Hình 1.3: Salmonella typhi 12 Hình 1.4: Staphylococcus aureus 13 Hình 1.5: Pseudomonas aeruginosa 14 Hình 1.6: Candida 15 Hình 1.7: Microsporum 17 Hình 1.8: Trichophyton 18  28 Hình 2.2: Kt qu vòng kháng khun gây bnh 32 Hình 2.3: Kt qu vòng kháng 34 Hình 2.4: Cách b trí mi kháng 35 Hình 3.1: i th chng BVR7 sau 24 gi nui cng NA 49 Hình 3.2: i th chng DVT63 sau 24 gi nui cng NA 50 Hình 3.3: i th chng HVT83 sau 24 gi nui cng NA 50 Hình 3.4: i th chng BNT41 sau 3 ngày nui cng PDA 50 Hình 3.5: i th chng DNT47 sau 3ngày nui cng PDA 51 Hình 3.6: i th chng DNT47 sau 3 ngày nui cng PDA 51 ng Escherichia coli 55 Pseudomonas aeruginosa c . 55 Staphylococcus aureus 56 Salmonella typhi c 56 Candida albicans. 59 Trichophyton mentagrophytesHVR26 59 Trichophyton rubrumHVR26 60 KHO A LUA N TO T NGHIÊ P GVHD DNG NHA T LINH SVTH LÊ SANH BAO v Hình 3.14: Kháng nm Microsporum gypseum ca chng HVR26 60 Escherichia coli 65  Staphylococcus aureus HNT60, DNT51, BNT41. 66 Salmonella typhiBNR3, BNR5, BNL77. 66 Trichophyton mentagrophytes 68 Trichophyton mentagrophytes 69 Trichophyton rubrum 70 Trichophyton rubrum 70 Microsporum gypseum 71 Microsporum gypseum 71   72  73  74  75  76  77 Hình 3.30: Quan sát khun lc BNT43 trên PDA 77 Hình 3.31: Bào t chi kính hin vi 78 Hình 3.32: Quan sát khun lng PDA 78 Hình 3.33: Chi kình hin vi 79 KHO A LUA N TO T NGHIÊ P GVHD DNG NHA T LINH SVTH LÊ SANH BAO vi  Bng 2.1: Biu hin các mc phát trin ca khóm nm 47  49  52 nh kh i kháng ca vi sinh vt ni sinh vi vi khun gây bnh 53 Bng 3.4: K 57  61 t qu nh kh n gây bnh ca các chng vi nm ni sinh 64 B 67 nh khTrichophyton mentagrophytes h 68 nh khTrichophyton rubrum   69 nh khMicrosporum gypseum   71 Bng 3.11. Kt qu nh danh sinh hóa chng DVR12, VVL131. 73 Bng 3.12: Kt qu th nh danh sinh hóa chng HVR26, GVT70 75 KHO A LUA N TO T NGHIÊ P GVHD DNG NHA T LINH SVTH LÊ SANH BAO vii   24  2.2: Quy trình th kháng khun 37 KHO A LUA N TO T NGHIÊ P GVHD DNG NHA T LINH SVTH LÊ SANH BAO viii   LPCB Lactophenol Cotton Blue NA: Nutrient Agar NB: Nutrient Broth PDA: Potato Dextrose Agar TSA: Trypticase Soy Agar NXB:  Cs:  CFU : Colony Forming Unit    hình thành khun lc SDA : Sabouraud Dextrose Agar S. aureus: Staphylococcus aureus E. coli: Escherichia coli S. typhi: Salmonella typhi P. aeruginosa: Pseudomonas aeruginosa C. albicans: Candida albicans M. gypseum Microsporum gypseum T. rubrum: Trichophyton rubrum T.mentagrophytes Trichophyton mentagrophytes [...]... M, KHÁNG KHU N C A VI SINH V T N I SINH TRÊN Catharanthus roseus L.) : - Phân l p vi khu n, vi n m n i sinh gi a vi sinh v t n i sinh - 3 4 1.1 H là nh ng nh ng vi sinh v t (ch y u là n m và vi khu n) s em 0; Wellington và Marcela, 2004) ng c t b ov c nh ng ng, vi khu n n i sinh th c v t t o thành nh ng xâm chi m và n vùng không gian t cây Nh ng vi khu gi a các t bào, chúng có th ng xâm chi m vào c phân. .. ch t vincristine, vinblastine có tác d ng ch ng ung (Gupta và cs., 2005) o sát h p ch t ti sinh trên cây d a c ng vi khu n n i c Vibrio cholerae, Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, Candida albicans gây b Bacillus cereus, Vi sinh v t n i sinh là nh ng vi sinh v t (ch y u là n m và vi khu n) s em u nghiên c p trung vào các ho (Strobel, 2003) Trong h h c c a vi n m và vi khu n n i sinh i nh - mô th... t tính sinh h khu n khác c phân l p t b m t cây tr ng ho n vùng r ho c vi t (Dowler và cs., 1974; Andrews, 1992) công b 2 t n i sinh có kh t ng d ti s n xu n ng c a ch t kháng khu Kigelia africana Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Escherichia coli t n i sinh th c v t có m t ti tl p ch t kháng n m, kháng khu n có ho ch ph m sinh h c dùng cho phòng tr chúng tôi PHÂN L P VÀ KH O SÁT HO T TÍNH KHÁNG... Th s lo i c c vi khu n n i sinh trong m t Nguy n Th Ng c Bích, Cao Ng khu n n t r n i sinh trong cây lúa b p (2009) nh n di n vi t PCR- ARDRA IGS Cao Ng c p và Nguy tr i sinh trong các loài p vi khu n n i sinh trong cây khóm t phèn huy n B n L c, t nh Long An và huy Giang Cao Ng n, t nh Kiên p và c ng s phát hi n vi khu n n i sinh trong cây lúa mùa c s n (Oryza sativa L.) tr ng H ng Hi p và Cao Ng ng... Long Nghiên c u c a p (2011), phân l p và nh n di n vi khu n n i sinh trong cây n i sinh và các h p ch t hóa h c có ho t tính kháng n m gây b nh u vi sinh v t các dòng Keo ng kh o nghi m t i Th a Thiên Hu 20 21 2.1 U c th c hi n trong th i gian t 05/11/2013 nghi m Công ngh 2.2 i h c M Tp H 25/05/2014 t i phòng thí 3) V T LI U Các ch ng vi n m, vi khu n gây b nh Công ngh Vi sinh T c cung c p b i phòng... c a cây, bao g m c h t gi ng ( c tìm th y trong h u h t Vi i sinh th c v t các loài th c v thành m t lo t các m i quan h vi khu n, a chúng hình n , c ng sinh dinh ng, h i sinh, Vi khu n n trò là m y th c v u hòa sinh h c (He và cs, 2009) i ta cho r ng ho h sinh c a th c v t có s hi n di n c a vi sinh v t n sinh h ng t ch t "kích ho t kích ho t các h th ng ph n ng m t cách nhanh nh m i th c v c h sinh. .. albicans i sinh Curvularia lunata Bacillus subtilis, Salmonella paratyphi, Proteus vulgaris, Vibrio cholerae, Staphylococcus aureus, Escherichia coli chi c bi t c các h p ch t Vincristine, Vinblastine, Catharanthine, and Vindoline t lá cây d a c n có kh 2013, ng c vi n m n i sinh Fusarium oxysporum phân l p t cây d a c n có kh p vincristine và vinblastine ng d s n xu t thu c ch 1.6.2 u nghiên c u v cây nh... mì (Weitzman, 1995) 1.6 C 1.6.1 Trên th ng s (1997), ra r ng vi khu n n i sinh có kh c m m b nh trên th c v t, nghiên c u c a Azevedo và c ng s (2000) vi khu n n i sinh có kh c m m b nh nghiên c u c a Hallmann và c ng s sinh có kh ra r ng vi khu n n i c m m b nh c v vi sinh v t n an mn cao kh tuy n trùng Trong nh ng n c m r ng nghiên c g n m tra s i v i th c v t (Hyde và Soytong, 2008) Nghiên c u c... Qu T a c n ch ho ch l y thân, lá và r c tr ng làm c c tr thu ch thu c 1.3 , 1.3.1 t Vi sinh 8 trong h c (Strobel, 2003) ghiên c u vi sinh v t n i sinh và các h p ch t hóa h c có ho t tính kháng n m gây b nh ng kh o nghi m t i Th a Thiên Hu g (Strobel, 2003) (B N khu n n i sinh m i Hevea brasiliensis ki m soát sinh h c ch ng l i các tác nhân gây b nh r , 1997) 1.3.2 9 Trên th gi i 1.3.2.1 Rhyncholacis... tròn hay hình b u d c, sinh s n b ng cách n y ch i hay cho s m gi và bào t bao d y C albicans là thành vi n c a h vi sinh v t da và niêm m c Nó là nhân t gây nhi m khi có s và cho phép nó phát tri ngoài t m ki m soát C albicans ng s ng vô h i ng v t máu nóng (mi ng, ru nh ng xuyên u ki n nh nh p vào màng nh màng nh y c ng không ki m soát và gây nh ng b i và trên da nh, n m men phân hóa thành d ng s . tài: PHÂN L P VÀ KHO SÁT HOT TÍNH KHÁNG NM, KHÁNG KHUN CA VI SINH VT N (Catharanthus roseus L. ) KHOA CÔNG NGH SINH HC CHUYÊN NGÀNH: VI SINH  SINH HC PHÂN. L P VÀ KHO SÁT HOT TÍNH KHÁNG NM, KHÁNG KHUN CA VI SINH VT NI SINH TRÊN Catharanthus roseus L. )   Ni dung nghiên cu: - Phân l p vi khun, vi nm ni sinh. - .    Bacillus cereus,  Vi sinh vt ni sinh l nhng vi sinh vt (ch yu l nm và vi khun) s e