Phân lập và khảo sát hoạt tính kháng nấm, kháng khuẩn của vi sinh vật nội sinh trong cây muồng trâu (Cassia alata L.)

B GIÁO DC VẨ ẨO TO TRNG I HC M TP. HCM   BÁO CÁO KHÓA LUN TT NGHIP Tên đ tài: PHÂN LP VÀ KHO SÁT HOT TÍNH KHÁNG NM, KHÁNG KHUN CA VI SINH VT NI SINH TRONG CÂY MUNG TRÂU (Cassia alata L.) KHOA: CÔNG NGH SINH HC CHUYÊN NGÀNH: NÔNG NGHIP - C t Linh SVTH : Phm Th Nguyt Hng MSSV: 1053010210 Khóa: 2010  2014 Tp. H Chí Minh, tháng 05 LI C   hoàn thành đ tài này, em xin gi li cm n đn các Thy Cô khoa Công Ngh Sinh Hc, Trng i hc M Thành ph H Chí Minh đã ging dy và truyn đt kin thc cho em trong sut nhng nm va qua đ em làm tt đ tài khóa lun này. Em xin gi cm n sâu sc ti cô Dng Nht Linh đã tn tình hng dn, ch bo em trong sut thi gian em thc hin đ tài. Em xin cm n thy Nguyn Vn Minh, ngi đã truyn đt cho chúng em nhiu kinh nghim quý báu. Em xin cm thy an Duy Pháp, ch Võ Ngc Yn Nhi và ch Nguyn Th M Linh, nhng ngi anh, ngi ch luôn ng h, giúp đ em trong lúc làm đ tài. Bên cnh đó, tôi xin cm n các bn ca tôi, các bn sinh viên hc vic Phòng thí nghim Công ngh Vi sinh đã luôn quan tâm, giúp đ tôi trong quá trình thc hin đ tài này. Cui cùng con xin cm n Ba, M, cm n gia đình đã luôn bên con, to mi điu kin tt nht đ con hoàn thành vic hc ca mình. Em xin gi li chúc sc khe đn tt c ngi thy, ngi cô đáng kính khoa Công ngh sinh hc, Trng i hc m Thành ph H Chí Minh, xin chúc thy cô ngày càng gt hái đc nhiu thành công. Tôi xin chúc các bn ca tôi s luôn luôn thành công trên con đng bc vào đi, cng hin tài nng và sc tr cho tng lai đt nc. Xin chân thành cm n. Sinh viên thc hin Phm Th Nguyt Hng Tháng 5/2014 KHÓA LUN TT NGHIP DANH MC SVTH: PHM TH NGUYT HNG i DANH MC HÌNH NH Hình 1.1 Cây mung trâu (Cassia alata L.) 8 Hình 2.1 Staphylococcus aureus 8 Hình 2.2 Escherichia coli 9 Hình 2.3 Salmonella typhi 10 Hình 2.4 Pseudomonas aeruginosa 11 Hình 3.1 Candida albicans 12 Hình 3.2 Microsporum gypseum 15 Hình 3.3 Trichophyton rubrum 16 Hình 3.4 Kt qu vòng kháng khun gây bnh ca vi khun th nghim 26 Hình 3.5 Kt qu vòng kháng khun gây bnh ca vi nm ni sinh 28 Hình 3.6 Kt qu kháng nm ca vi khun 30 Hình 3.7 Cách b trí mi kháng 31 Hình 3.8 Phân lp vi nm ni sinh trên PDA có b sung kháng sinh Chloramphenico41l 0,05% (A), phân lp vi khun ni sinh trên TSA (B) i chng (C). 43 Hình 3.9 Cy ria vi khun ni sinh trên NA (A), cnh ca si nm trên PDA (B).43 Hình 3.10 Hình nh nhum Gram ca mt s chng vi khun ni sinh. 46 Hình 3.11 nh tính kh S.typhi ca mt s chng vi khun ni sinh 48 Hình 3.12 nh tính kh Pseudomonas aeruginosa ca mt s chng vi nm ni sinh 51 Hình 3.13 nh tính kh m ca 4 chng vi khun ni sinh 54 Hình 3.14 nh tính kh m ca chng NR1 ni sinh 57 Hình 3.15 Kt qu quan sát vi th ca chng vi nm NR1 60 KHÓA LUN TT NGHIP DANH MC SVTH: PHM TH NGUYT HNG ii DANH MC BNG Bng 3.1 Kt qu i th chng vi khun ni sinh 40 Bng 3.2 Kt qu i th nm ni sinh 41 Bng 3.3 Kt qu quan sát vi th vi khun ni sinh 44 Bng 3.4 Kt qu kh  háng vi khun gây bnh ca vi khun ni sinh t cây mung trâu 47 Bng 3.5 ng kính vòng kháng khun ca 3 chng vi khun ni sinh t cây mung trâu và Salmonella Typhi 48 Bng 3.6 Kt qu kh    n gây bnh ca vi nm ni sinh t cây mung trâu 50 Bng 3.7 ng kính vòng kháng khun ca 3 chng vi nm ni sinh t cây mung trâu và Pseudomonas aeruginosa 51 Bng 3.8 Kt qu nh tính kh m gây bnh ca vi khun ni sinh t cây mung trâu 52 Bng 3.9 ng kính vòng kháng nm gây bnh ca vi khun ni sinh t cây mung trâu 54 Bng 3.10 Kt qu nh tính kh m gây bnh ca vi nm ni sinh t cây mung trâu 56 Bng 3.11 ng kính vòng kháng vi nm gây bnh ca vi nm ni sinh t cây mung trâu 58 Bng 3.12 Kt qu nh danh sinh hóa chng R5 59 Bng 3.13 Kt qu nh danh sinh hóa chng L10 59 KHÓA LUN TT NGHIP DANH MC SVTH: PHM TH NGUYT HNG iii DANH MC BIU  Biu đ 3.1 So sánh ng kính vòng kháng Salmonella Typhi ca các chng vi khun th nghim 49 Biu đ 3.2 So sánh ng kính vòng kháng Pseudomonas aeruginosa ca các chng vi nm th nghim 52 Biu đ 3.3 So sánh ng kính vòng kháng Candida albicans ca các chng vi khun th nghim 55 Biu đ 3.4 So sánh ng kính vòng kháng Trichophyton rubrum ca các chng vi khun th nghim 56 KHÓA LUN TT NGHIP DANH MC SVTH: PHM TH NGUYT HNG iv DANH MC CÁC T VIT TT ANOVA One-way analysis of variance C. albicans Candida albicans Cs. Cng s E.coli Escherichia coli M. gypseum Microsporum gypseum NA Nutrient Agar P.aeruginosa Pseudomonas aeruginosa PDA Potato Dextrose Agar S. aureus Staphylococcus aureus S.typhi Salmonella typhi T. mentagrophytes Trichophyton mentagrophytes T. rubrum Trichophyton rubrum TSA Trypticase Soy Agar KHÓA LUN TT NGHIP MC LC SVTH: PHM TH NGUYT HNG v MC LC DANH MC HÌNH NH i DANH MC BNG ii DANH MC BIU  iii DANH MC CÁC T VIT TT iv MC LC v T VN  1 PHN 1: TNG QUAN TÀI LIU 4 1. VI SINH VT NI SINH VÀ CÂY MUNG TRÂU (Cassia alata L.) 5 1.1. c v vi sinh vt ni sinh 5 1.2. Tình hình nghiên cu trên th gii 6 1.3. Tình hình nghiên cc 7 1.4. c v cây mung trâu (Cassia alata L.) 7 2. TNG QUAN V VI KHUN GÂY BI 8 2.1. Staphylococcus aureus 8 2.2. Escherichia coli 9 2.3. Salmonella typhi 10 2.4. Pseudomonas aeruginosa 11 3. TNG QUAN V VI NM GÂY BI 12 3.1. Candida albicans 12 3.1.1. Phân loi 12 3.1.2. c tính sinh lý ca Candida albicans 13 KHÓA LUN TT NGHIP MC LC SVTH: PHM TH NGUYT HNG vi 3.1.3. Bnh do nm Candida gây ra 14 3.2. Dermatophytes 14 3.3. Microsporum gypseum 15 3.4. Trichophyton 16 PHN 2: VT LIU 18 1. M VÀ THI GIAN NGHIÊN CU 19 1.1. Vt liu 19 1.2. Thit b, dng cng 19 1.2.1.Thit b 19 1.2.2. Dng c 19 ng và hóa cht 20 M 20 2.1. B trí thí nghim 20  22 2.2.1. Ly mu 22 2.2.2. X lý mu và phân lp 22 2.2.3. Làm thun 23 nh kh i kháng vi khun, vi nm gây bnh ca vi sinh vt ni sinh 24 nh danh 31 ng kê s liu 38 PHN 3: KT QU NGHIÊN CU VÀ THO LUN 39 3. KT QU PHÂN LP VI SINH VT NI SINH VÀ THO LUN 40 KHÓA LUN TT NGHIP MC LC SVTH: PHM TH NGUYT HNG vii 3.1. i th 40 3.1.1. Vi khun ni sinh 40 3.1.2. Vi nm ni sinh 41 3.2. Quan sát vi th 44 3.3. Kt qu th i kháng gia vi sinh vt ni sinh và vi khun gây bnh. 46 3.3.1. Kt qu th hot tính kháng khun ca vi khun ni sinh t cây mung trâu 46 3.3.2. Kt qu th hot tính kháng khun ca vi nm ni sinh t cây mung trâu 49 3.4. Kt qu th i kháng gia vi sinh vt ni sinh và vi nm gây bnh 52 3.4.1.Kt qu th hot tính kháng vi nm ca vi khun ni sinh t cây mung trâu . 52 3.4.2.Kt qu th hot tính kháng vi nm ca vi nm ni sinh t cây mung trâu 56 3.5. Kt qu nh danh sinh hóa 58 3.5.1. Chng R5 58 3.5.2. Chng L10 59 3.6. Kt qu  chng vi nm NR1 60 3.7. Tho lun 60 PHN 4: KT LUN VÀ KIN NGH 62 4. KT LUN VÀ KIN NGH 63 4.1. Kt lun 63 4.2. Kin ngh 63 TÀI LIU THAM KHO 65 PH LC 70 KHÓA LUN TT NGHIP T V SVTH: PHM TH NGUYT HNG 1 T VN  [...]... ng trâu là r t cao T n hành th c hi n tài nghiên c PHÂN L P VÀ KH O SÁT HO T TÍNH KHÁNG N M, KHÁNG KHU N C A VI SINH V T N I SINH TRONG CÂY MU NG TRÂU (Cassia alata L.) M c tiêu nghiên c u: Phân l p vi khu n và vi n m n i sinh Kh o sát kh kháng vi khu n và vi n m gây b nh c a vi sinh v t n i sinh nh danh ch ng vi sinh v t n i sinh có hi u qu cao SVTH: PH M TH NGUY T H NG 3 KHÓA LU N T T NGHI P T NG QUAN... Candida albicans n i sinh trong các loài cây phân l u nghiên c u v vi khu n Vi n Th Thu Hà và cs c vi khu n n i sinh trong m t s lo i c Nguy n Ái Chi (2009), phân l cây khóm tr i p và c tính c a vi khu n n i sinh trong t phèn huy n B n L c, t nh Long An, Vi t Nam T lâu, mu c dân gian s d t bài thu c quý Mu ng trâu còn có tên khác là mu ng x c lác (Cassia alata L.), thu c d ng cây th o, cao kho ng 1,5m... QUAN TÀI LI U 1 .VI SINH V T N I SINH VÀ CÂY MU NG TRÂU (Cassia alata L.) 1.1 c v vi sinh v t n i sinh Vi khu n n i sinh là vi khu n s ng trong mô th c v thân, lá, qu c a th c v t Vùng r c tìm th y vùng r , r , t phát nhi u vi khu n n i sinh chui vào r , s ng n i sinh; sau khi xâm nh p vào cây ch có th t p trung t i v trí xâm nh p ho c di chuy n các h m ch c a r , thân, lá, hoa (Zinniel và cs y các quá... i sinh trong các loài cây Nguy n Th c Vi c vi khu n n i sinh trong m t s lo i Ph m Quang Thu và cs (2012) nghiên c u vi sinh v t n i sinh và các h p ch t hóa h c có ho t tính kháng n m gây b nh ng (Acacia mangium) Hi n nay các nghiên c u còn cho th y kh n c a d ch chi t lá mu ng trâu (Cassia alata L.) (Võ Th Mai H c m t flavonglucosid là kaempferol-3-O-sophorosid t d ch chi t c n c a lá cây mu ng trâu. .. 1,5 x 108 vi khu n/ mL 2 M 2.1 B trí thí nghi m D a vào m tài chúng tôi ti n hành thí nghi SVTH: PH M TH NGUY T H NG 20 KHÓA LU N T T NGHI P V T LI Ch n nh ng m c li u kh e m nh X lý m u Phân l p vi khu n n i sinh trên môi ng TSA, và n m n i sinh trên môi ng PDA vi Làm thu n sinh v t i th và vi th Kh o sát ho t tính các ch ng vi sinh v t n i sinh có kh c vi khu n, vi n m gây b nh nh danh vi sinh v t... ch safranin trong 30 giây, r - Quan sát b ng v t kính d - Vi khu n Gram (+) b t màu tím crystal violet, vi khu n Gram (-) b t màu h ng c, th m khô i 1.000 l n safranin 2 nh kh nh kh i kháng vi khu n, vi n m gây b nh c a vi sinh v t n i sinh kháng vi khu n gây b nh c a vi sinh v t n i sinh nh kh n gây b nh c a vi khu n n i sinh Chúng tôi ti n hành th kh n b nh c a các ch ng vi khu n n i sinh th nghi... m u L ym u tiên và quan tr ng nh t trong quá trình tìm ki m và phân l p m t ch ng vi sinh v t Vi c ch n l a ph c a ch ng vi sinh v t là cao nh t M m b o sao cho kh hi n di n c l y, t t nh t là ti n hành ngay quá trình phân l p tuy n ch n Vi sinh v t n c ti n hành phân l p t các lá, mô thân và r s ng c a cây mu ng trâu kh e m nh, không sâu b nh M gi tính t khi m c ti n hành phâp l p trong vòng 6 c thu... mu ng trâu (Cassia alata L.) (Võ Th c m t flavonglucosid là kaempferol-3-O- sophorosid t d ch chi t c n c a lá cây mu ng trâu (Planichamy và Nagarajan, 2007) Vì th i ng r t thích h sinh vì mu ng trâu là m t lo i cây hoang d i, n d i phát tri n r t t nghiên c u v vi khu n n i c tr ns u này cho th y kh n n i sinh bên trong cây mu ng trâu là r t cao T n hành th c hi n tài nghiên c PHÂN L P VÀ KH O SÁT HO... 1.1 Cây mu ng trâu (Cassia alata L.) 2 T NG QUAN V VI KHU N GÂY B I c, vi khu n gây b c coi là sinh th th ba trên th gi i và là nguyên nhân gây ra các b nh r i lo s c kh e Vi khu n xâm nh khác v qua da, mi ng và niêm m c, mi n là trong ng có l i, chúng s cùng lúc truy n b nh Vi khu n gây ra các ph n ng d ng, làm gi m s kháng c mãn tính Khi vi khu n xâm nh b h mi n d ch y 2.1 , khi d nhi m b nh và m... h sinh (Bandara và cs., 2006; Strobel và Daisy, 2003) 1.2 Tình hình nghiên c u trên th gi i D a Ryan và c ng s cho th y có nhi u báo cáo liên n vi sinh v t n i sinh N l p và mô t cs m vi khu n n i sinh t các loài th c v t khác nhau Và m t nghiên c u khác d a trên n n t ng nghiên c u c a Hallmann và cs (1997) và Lodewyckx và cs (2002), Rosenblueth và Martinezdi n c a vi khu n n m t danh sách toàn c phân . chit cn ca l cây mung trâu (Planichamy và Nagarajan, 200 7). 1.4. S l c v cây mung trâu (Cassia alata L. ) Mung trâu hay còn gi l mung xc l c (Cassia alata L. ), cây nh cao 1,50. 1 .VI SINH VT NI SINH VÀ CÂY MUNG TRÂU (Cassia alata L. ) 1.1. S l c v vi sinh vt ni sinh Vi khun ni sinh l vi khun sng trong mô thc vc tìm thy  vùng r, r, thân, l ,. TRÂU (Cassia alata L. )   Mc tiêu nghiên cu:  Phân l p vi khun và vi nm ni sinh.  Kho sát kh  kháng vi khun và vi nm gây bnh ca vi sinh vt ni sinh  nh danh chng vi sinh