Nghiên cứu một số đặc tính sinh học của virus newcastle cường độc chủng VN91 được lưu giữ tại trung tâm kiểm nghiệm thuốc thú y trung ương 1 và ứng dụng trong khảo nghiệm vacxin

Bộ giáo dục đào tạo Trờng Đại học nông nghiệp hà nội Ho ng thị thu hơng Nghiên cứu số đặc tính sinh học virus Newcastle cờng độc chủng VN91 đợc lu giữ Trung tâm Kiểm nghiƯm thc Thó y Trung −¬ng I v øng dơng khảo nghiệm vacxin chuyên ng nh: thú y mà sè: 60.62.50 Ng−êi h−íng dÉn khoa häc: Pgs.ts ngun h÷u nam H néi, 2012 L I C M ƠN ð u tiên cho tơi đư c bày t lịng bi t ơn chân thành t i Ban ðào t o Sau ñ i h c - Vi n ñào t o sau ñ i h c – Trư ng ð i h c Nông Nghi p Hà N i Th y Cơ giáo gi ng d y su t th i gian h c t p t i trư ng Tơi xin bày t lịng bi t ơn s kính tr ng sâu s c t i PGS TS Nguy n H u Nam, ngư i Th y ñã giành th i gian quý báu t n tình hư ng d n, giúp đ tơi q trình nghiên c u th c hi n đ tài hồn thành lu n văn t t nghi p Cho tơi đư c g i l i c m ơn chân thành t i Ths T Hồng Long Giám đ c Trung tâm ki m nghi m thu c thú y Trung ương I t p th cán b nhân viên Trung tâm ñã ñ ng viên, t o m i ñi u ki n thu n l i cho su t q trình h c t p hồn thành đ tài t t nghi p Qua tơi xin c m ơn b n bè ñ ng nghi p ngư i thân gia đình t o u ki n v v t ch t tinh th n cho tơi q trình nghiên c u th c hi n ñ tài M t l n n a tơi xin đư c bày t lịng bi t ơn, c m ơn chân thành t i nh ng t p th , cá nhân ñã t o u ki n giúp đ tơi hồn thành lu n văn Tác gi HOÀNG TH THU HƯƠNG Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… i L I CAM ðOAN Tơi xin cam đoan k t qu nghiên c u, s li u đư c trình bày lu n văn trung th c chưa t ng đư c cơng b b t c cơng trình khác chưa t ng đư c s d ng ñ b o v m t h c v M i s giúp ñ cho vi c th c hi n lu n văn ñã đư c c m ơn thơng tin trích d n lu n văn ñã ñư c ch rõ ngu n g c Tác gi HOÀNG TH THU HƯƠNG Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… ii M CL C L I C M ƠN i L I CAM ðOAN ii M C L C iii DANH M C CÁC CH VI T T T vi DANH M C CÁC B NG vii DANH M C CÁC HÌNH viii M ð U CHƯƠNG I T NG QUAN TÀI LI U 1.1 L CH S NGHIÊN C U B NH NEWCASTLE 1.1.1 L ch s b nh .3 1.1.2.Tình hình nghiên c u b nh Newcastle th gi i 1.1.3 Tình hình nghiên c u b nh Newcastle nư c 1.2 M T S ð C ðI M C A VIRUS NEWCASTLE VÀ B NH NEWCASTLE 11 1.2.1 Hình thái c u trúc c a Virus Newcastle: 11 1.2.2 ð c tính sinh h c c a virus Newcastle 12 1.2.3 Truy n nhi m h c 16 1.2.4 Các th b nh Newcastle 18 1.2.5 Tri u ch ng lâm sàng 19 1.2.6 B nh tích 19 1.2.7 Ch n đốn b nh 20 1.2.8 Mi n d ch b nh Newcastle 24 1.2.9 Vacxin phòng b nh b ng vacxin 25 CHƯƠNG II N I DUNG, NGUYÊN LI U VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C U 30 2.1 N I DUNG NGHIÊN C U 30 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nơng nghi p …………………… iii 2.1.1 Xác đ nh m t s đ c tính sinh h c c a virus Newcastle cư ng ñ c ch ng VN91 ñư c lưu gi t i Trung tâm ki m nghi m thu c thú y TW1 30 2.1.2 S d ng virus Newcastle cư ng ñ c VN91 ñư c lưu gi ti TTKNTTYTWI ñ kh o nghi m vacxin Avipro ND Lasota c ñ c, đơng khơ phịng b nh Newcastle cho gà 30 2.2 NGUYÊN LI U NGHIÊN C U 30 2.2.1 ð i tư ng nghiên c u 30 2.2.2 Các trang thi t b s v t ch t 30 2.2.3 ð a ñi m nghiên c u 31 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C U 31 2.3.1 Phương pháp ki m tra đ vơ trùng c a gi ng 31 2.3.2 Phương pháp ki m tra ñ thu n t c a gi ng 31 2.3.3 Phương pháp gây nhi m virus Newcastle cư ng ñ c ch ng VN91 vào xoang ni u nang phôi gà p – 11 ngày tu i 32 2.3.4 Phương pháp chu n ñ virus 33 2.3.5 Phương pháp l a ch n gà thí nghi m 33 2.3.6 Phương pháp xác đ nh th i gian ch t phơi trung bình (MDT) 33 2.3.7 Phương pháp xác ñ nh ch s gây b nh tiêm não gà ngày tu i 34 2.3.8 Phương pháp xác ñ nh ch s gây b nh tiêm tĩnh m ch gà tu n tu i (IVPI) 34 2.3.9 Phương pháp xác ñ nh li u gây ch t 50% ñ ng v t thí nghi m (LD50) 35 2.3.10 Phương pháp kh o nghi m vacxin 35 2.3.11 Phương pháp x lý s li u 37 CHƯƠNG III K T QU 3.1 K T QU VÀ TH O LU N 38 XÁC ð NH M T S ð C TÍNH SINH H C C A VIRUS NEWCASTLE CƯ NG ð C CH NG VN91 38 3.1.1 K t qu xác ñ nh hi u giá virus gi ng Newcastle cư ng ñ c ch ng VN91.40 3.1.2 K t qu ki m tra ñ n ñ nh c a gi ng virus Newcastle cư ng ñ c ch ng VN91 42 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… iv 3.1.3 K t qu xác đ nh th i gian ch t phơi trung bình (MDT) 43 3.1.4 Xác đ nh ch s gây b nh tiêm virus vào não gà ngày tu i (ICPI)46 3.1.5 K t qu xác ñ nh ch s gây b nh tiêm virus vào tĩnh m ch gà tu n tu i (IVPI) 47 3.1.6 K t qu xác ñ nh li u gây ch t 50% đ ng v t thí nghi m (LD50) 49 3.2 K T QU KH O NGHI M VACXIN AVIPRO ND LASOTA 56 3.2.1 K t qu ki m tra tính an tồn c a vacxin 58 3.2.2 K t qu ki m tra hi u l c b ng phương pháp cơng cư ng đ c 60 3.2.3 K t qu ki m tra hi u l c b ng phương pháp huy t h c 63 CHƯƠNG IV K T LU N VÀ ð NGH 67 4.1 K T LU N 67 4.2 ð NGH 67 TÀI LI U THAM KH O 68 TÀI LI U TRONG NƯ C 68 TÀI LI U NƯ C NGOÀI 69 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… v DANH M C CÁC CH VI T T T AGP Agar gel precipitation ARN Acid ribonucleic ELD50 50% Embryo Infective Dose ELISA Enzime Linked Immunosozbent Assay FAO Food and Agriculture Organisation ICPI Intra-Cerebral-Pathogenicity-Index in day-old chicks IVPI Intra-Venous-Pathogencity-Index in 6-week-old chickens HA Hemagglutination test HI Hemagglutination Inhibition test HGKTTB Hi u giá kháng th trung bình MDT Mean Death Time-hr (Th i gian gây ch t phơi trung bình) LD50 50 Percent Lethal Dose OIE Office International de Epizooties PBS Phosphate Buffered Saline RT - PCR Reverce Transcription Polymerase Chain Reaction TTKNTTYTW1 Trung tâm Ki m nghi m thu c Thú y Trung ương WHO World Health Organisation Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… vi DANH M C CÁC B NG B ng 1.1 Tiêu chu n ñánh giá ñ c l c c a virus Newcastle (FAO) 15 B ng 1.2 Ch s ñ c l c c a m t s ch ng virus Newcastle 22 B ng 3.1 K t qu ki m tra vô trùng c a gi ng 39 B ng 3.2 K t qu xác ñ nh hi u giá virus gi ng Newcastle cư ng 41 B ng 3.3 K t qu ki m tra ñ n ñ nh c a gi ng virus Newcastle cư ng ñ c ch ng VN91 42 B ng 3.4 K t qu theo dõi s phôi ch t sau gây nhi m virus Newcastle cư ng ñ c ch ng VN91 44 B ng 3.5 K t qu xác ñ nh ch s gây b nh tiêm virus Newcastle cư ng ñ c ch ng VN91 vào não gà ngày tu i 46 B ng 3.6 K t qu xác ñ nh ch s gây b nh tiêm virus Newcastle cư ng ñ c ch ng VN91 vào tĩnh m ch gà tu n tu i 48 B ng 3.7 K t qu theo dõi s gà ch t sau tiêm virus Newcastle cư ng ñ c ch ng VN91 50 B ng 3.8 K t qu xác ñ nh LD50 sau tiêm virus Newcasle cư ng ñ c ch ng VN91 52 B ng 3.9 K t qu so sánh đ c tính sinh h c c a virus Newcastle cư ng ñ c ch ng VN91v i tiêu chu n gi ng g c 53 B ng 3.10 K t qu ki m tra kháng th Newcastle trư c s d ng vacxin 57 B ng 3.11 K t qu đánh giá tính an tồn c a vacxin 59 B ng 3.12 K t qu cơng cư ng đ c b ng virus Newcastle ch ng VN91 cho gà sau s d ng vacxin 61 B ng 3.13 K t qu ki m tra hi u giá kháng th c a vacxin Avipro ND Lasota (HGKTTB ≥ log2) 64 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… vii DANH M C CÁC HÌNH Hình 1.1 Hình thái c a virus Hình 3.1: Gây nhi m virus Newcastle cư ng ñ c VN91 phơi tr ng 10 ngày 54 Hình 3.2: Hàn tr ng b ng Paraffin 54 Hình 3.3: T p tr ng 370C 54 Hình 3.4: M thu ho ch tr ng 54 Hình 3.5:Phơi đ i ch ng 54 Hình 3.6: B nh tích phơi ch t th i m 36h-48h sau gây nhi m virus Newcastle cư ng ñ c VN91 54 Hình 3.7: Gà ngày tu i đ xác ñ nh ch s ICPI c a virus Newcastle cư ng ñ c VN91 55 Hình 3.8: Gà ñ i ch ng tu n tu i xác ñ nh ch s IVPI c a virus Newcastle cư ng ñ c VN91 55 Hình 3.9: Gà thí nghi m tu n tu i xác đ nh ch s IVPI c a virus Newcastle cư ng ñ c VN91 55 Hình 3.10: Tiêm virus Newcastle cư ng ñ c VN91 vào não gà ngày tu i 55 Hình 3.11: Tiêm virus Newcastle cư ng ñ c VN91 vào tĩnh m ch gà tu n tu i 55 Hình 3.12: Gà Lương Phư ng ngày tu i kh o nghi m vacxin Avipro ND Lasota 56 Hình 3.13: Gà mi n d ch sau cơng cư ng đ c b ng ch ng virus Newcastle VN91 62 Hình 3.14: Gà đ i ch ng sau cơng cư ng đ c b ng ch ng virus Newcastle VN91 62 Hình 3.15: Phân nh t,tr ng xanh 62 Hình 3.16: Xu t huy t d dày n 62 Hình 3.17: L huy t xu t huy t 62 Hình 3.18: Ru t loét, xu t huy t 62 Hình 3.19: Ph n ng ngăn tr ngưng k t h ng c u (HI) 63 Hình 3.20: Bi n đ ng HGKTTB c a đàn gà sau nh vacxin Avipro ND Lasota Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… viii M ð U TÍNH C P THI T C A ð TÀI Vi t Nam m t nư c nơng nghi p có truy n th ng lâu đ i, ngành chăn ni gi vai trị h t s c quan tr ng, góp ph n vào vi c phát tri n kinh t nông nghi p nâng cao ch t lư ng cho cu c s ng c a nhân dân Cùng v i s phát tri n c a ngành kinh t , chăn ni gà d n tr thành ngành s n xu t hàng hóa, góp ph n vào chương trình xóa đói gi m nghèo cho nơng dân m t s vùng nông thôn nư c ta Cùng v i s lên c a ngành chăn ni nói chung ngành chăn ni gia c m nói riêng, s phát tri n c a phương th c chăn ni cơng nghi p hi n đ i không tránh kh i d ch b nh x y ð c bi t v i ñi u ki n khí h u nhi t đ i nóng m v i s ña d ng phương th c chăn nuôi nư c ta thu n l i cho nh ng b nh truy n nhi m nguy hi m Newcastle, Gumboro, Marek, T huy t trùng….phát tri n gây nhi u thi t h i Trong b nh Newcastle m t b nh thư ng xuyên x y ra, b nh lây lan nhanh, làm ch t hàng lo t gà m i l a tu i Nguyên nhân gây b nh m t lo i virus ñư c Doyle phân l p d ch c a gà t i Newcastle (Anh) (Doyle,1927) Cho ñ n nay, b nh chưa có thu c u tr Bi n pháp t t nh t đ ki m sốt d ch b nh th c hi n an tồn sinh h c s d ng vacxin phịng b nh ð phòng b nh, Vi t Nam hi n có vacxin Newcastle c đ c vơ ho t đ phịng b nh Newcastle cho gà Nhưng ñ s n xu t ñư c m t vacxin phịng b nh t t có hi u qu , ñi u quan tr ng ph i có đư c m t gi ng virus ngu n g c v i virus gây b nh có tính n đ nh cao Nó không nh ng ph c v cho vi c s n xu t vacxin mà cịn có ý nghĩa c c kỳ quan trong vi c ki m tra tính hi u qu c a vacxin sau ñư c s d ng Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… B ng 3.10 K t qu ki m tra kháng th Newcastle trư c s d ng vacxin (HGKT ≥ 3log2: dương tính) M u trư c tiêm STT S theo HGKT M u trư c tiêm Dương Âm tính tính dõi (HI) TT-01 log2 - TT-02 log2 TT-03 STT S theo HGKT Dương Âm tính tính dõi (HI) 26 TT-26 log2 - - 27 TT-27 log2 - log2 - 28 TT-28 log2 - TT-04 log2 - 29 TT-29 log2 - TT-05 log2 - 30 TT-30 log2 - TT-06 log2 - 31 TT-31 log2 - TT-07 log2 - 32 TT-32 log2 - TT-08 log2 - 33 TT-33 log2 - TT-09 log2 - 34 TT-34 log2 - 10 TT-10 log2 - 35 TT-35 log2 - 11 TT-11 log2 - 36 TT-36 log2 - 12 TT-12 log2 - 37 TT- 37 log2 - 13 TT-13 log2 - 38 TT-38 log2 - 14 TT-14 log2 - 39 TT-39 log2 - 15 TT-15 log2 - 40 TT-40 log2 - 16 TT-16 log2 - 41 TT-41 log2 - 17 TT-17 log2 - 42 TT-42 log2 - 18 TT-18 log2 - 43 TT-43 log2 - 19 TT-19 log2 - 44 TT-44 log2 - 20 TT-20 log2 - 45 TT-45 log2 - 21 TT-21 log2 - 46 TT-46 log2 - 22 TT-22 log2 - 47 TT-47 log2 - 23 TT-23 log2 - 48 TT-48 log2 - 24 TT-24 log2 - 49 TT-49 log2 - 25 TT-25 log2 - 50 TT-50 log2 - Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… 57 Ghi chú: TT : Trư c tiêm Qua b ng 3.10 th y, t ng s 50 m u huy t ki m tra có 41 m u cho k t qu âm tính (0 log2) chi m 82%, m u chưa đ đ b o h có hi u giá kháng th t log2 -2 log2 chi m 18% ði u ch ng t đàn gà chúng tơi s d ng ñ kh o nghi m ñ t tiêu chu n quy ñ nh 3.2.1 K t qu ki m tra tính an tồn c a vacxin ði u quan tr ng nh t ñ i v i m t lo i vacxin ph i an toàn không gây ph n ng nghiêm tr ng ñ i v i v t ñư c s d ng ð ki m tra tính an tồn, s d ng 50 gà Lương phư ng ngày tu i, chưa s d ng vacxin Newcastle Vacxin ñư c hoàn nguyên tr l i b ng nư c mu i sinh lý hoăc dung d ch PBS vơ trùng M i gà đư c s d ng 10 li u vacxin quy ñ nh b ng cách nh m t, nh mũi Gà ñ i ch ng khơng s d ng vacxin đư c ni cách ly v i lơ thí nghi m Theo dõi liên t c 28 ngày sau nh vacxin M i ngày quan sát l n K t qu ki m tra an tồn đư c chúng tơi trình bày b ng 3.11 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… 58 B ng 3.11 K t qu đánh giá tính an tồn c a vacxin Các ch tiêu theo dõi Lô I Lơ II (Lơ đ i ch ng) (Lơ thí nghi m) 100 50 120-150g 120-150g Kho Kho Li u dùng Không 10 li u vacxin ðư ng cho thu c Không Nh m t,mũi S l n s d ng vacxin 01 S ch t 02 T l ch t (%) 1100 -1200g 1100 -1200g T t T t Th khó b t thư ng Không Không Quá m n Không Không B ăn Không Không Khác Không Không S dùng kh o nghi m Tr ng lư ng trung bình trư c kh o nghi m Tình tr ng gà dùng trình kh o nghi m Tr ng lư ng trung bình sau kh o nghi m Th tr ng gà sau kh o nghi m Các tri u ch ng khác: Qua b ng 3.11 chúng tơi th y: - Tr ng lư ng trung bình c a gà lơ thí nghi m trư c s d ng vacxin (120 -150g) thí nghi m k t thúc (1100-1200g) ði u ch ng t s d ng vacxin khơng nh hư ng đ n s phát tri n bình Trư ng ð i h c Nơng nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… 59 thư ng c a gà - Ki m tra nh ng ph n ng b t l i tri u ch ng lâm sàng liên quan ñ n b nh Newcastle Theo dõi trình kh o nghi m có gà ch t, chúng tơi ti n hành m khám b nh tích khơng phát hi n th y b nh tích liên quan đ n vacxin dùng kh o nghi m T l gà ch t 4% T l không nh hư ng đ n q trình kh o nghi m K t qu ñã ñáp ng ñư c nh ng quy ñ nh c a Trung tâm ki m nghi m thu c thú y nhà nư c (1994) tiêu chu n c a ASEAN (2002) svà OIE (2008) Do v y vacxin Avipro ND Lasota ñ m b o an tồn cho đàn gà s d ng 3.2.2 K t qu ki m tra hi u l c b ng phương pháp cơng cư ng đ c ð ki m tra hi u l c c a vacxin, s d ng 350 gà Lương Phư ng ngày tu i, gà kh e m nh khơng có kháng th Newcastle M i gà đư c s d ng li u vacxin quy ñ nh theo ñư ng nh m t, nh mũi 100 gà đ i ch ng khơng s d ng vacxin đư c ni cách ly v i gà thí nghi m Tồn đàn đư c theo dõi 28 ngày sau s d ng vacxin th i ñi m 14 ngày sau s d ng vacxin, 20 gà mi n d ch 10 gà lơ đ i ch ng ñư c th thách v i ch ng virus Newcastle cư ng ñ c VN91, li u 106 ELD50/con Theo dõi 10 ngày Lơ vacxin đ t tiêu chu n n u: Gà mi n d ch b o h nh t 80%; Gà đ i ch ng ch t nh t 80% K t qu cơng cư ng đ c đư c trình bày b ng 3.12 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… 60 B ng 3.12 K t qu cơng cư ng đ c b ng virus Newcastle ch ng VN91 cho gà sau s d ng vacxin Các ch tiêu theo dõi Lơ thí nghi m Lơ đ i ch ng S gà thí nghi m (con) 350 100 Nh m t, nh mũi - 20 10 ðư ng ñưa vacxin S gà cơng cư ng đ c (con) 106 ELD50/0,5ml Li u cơng cư ng đ c ðư ng cơng cư ng ñ c 10 10 10 19 S Tiêm b p 95 Th i gian theo dõi (ngày) Tiêm b p gà có tri u ch ng lâm sàng (ho c) ch t (con) S gà s ng sau cơng cư ng đ c (con) T l b o h (%) Qua k t qu b ng 3.12 cho th y: Lô mi n d ch 20 gà ñư c s d ng li u vacxin theo quy đ nh, sau 10 ngày cơng cư ng ñ c 19/20 gà s ng kh e, t l b o h ñ t 95% Trong gà lơ đ i ch ng khơng s d ng vacxin sau th i gian theo dõi c 10 gà ñ u ch t h t v i tri u ch ng, b nh tích n hình c a b nh Newcastle như: gà rũ, ch y nư c rãi, phân tr ng xanh, d dày n xu t huy t, ru t xu t huy t, van h i manh tràng xu t huy t T l b o h đ t 0% ði u ch ng t , gà c a lô mi n d ch ñư c s d ng vacxin Avipro ND Lasota ñã t o ñáp ng mi n d ch giúp gà b o h ch ng l i virus Newcastle Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… 61 cư ng ñ c ch ng VN91 th thách cư ng ñ c.Tham chi u tiêu chu n ngành TCN 181 – 93 (C c Thú y, 1994) khuy n cáo c a OIE, 2008, vacxin Avipro ND Lasota ñ t ch tiêu hi u l c phòng b nh Newcastle Hình 3.13: Gà mi n d ch sau cơng cư ng Hình 3.14: Gà đ i ch ng sau cơng cư ng đ c đ c b ng ch ng virus Newcastle VN91 b ng ch ng virus Newcastle VN91 Hình 3.15: Phân nh t,tr ng xanh Hình 3.16: Xu t huy t d dày n Hình 3.17: L huy t xu t huy t Hình 3.18: Ru t loét, xu t huy t Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… 62 3.2.3 K t qu ki m tra hi u l c b ng phương pháp huy t h c ð ki m tra hi u l c c a vacxin, chúng tơi b trí thí nghi m sau: Lơ mi n d ch s d ng 350 gà ngày tu i, kh a m nh, chưa s d ng vacxin Newcastle Lô ñ i ch ng s d ng 100 gà l a tu i ngu n g c Vacxin ñư c hoàn nguyên tr l i b ng nư c mu i sinh lý ho c dung d ch PBS vô trùng lô mi n d ch, m i ñư c s d ng li u vacxin theo quy ñ nh b ng phương pháp nh m t, nh mũi Lơ đ i ch ng gà khơng ñư c s d ng vacxin, ñư c nh t riêng Theo dõi 28 ngày M i ngày quan sát l n th i ñi m 14, 21, 28 ngày sau s d ng vacxin, l y m u máu ng u nhiên 100 gà l y 1ml máu lô mi n d ch 50 gà lơ đ i ch ng M i tĩnh m ch, chi t l y huy t dùng ñ xét nghi m b ng ph n ng HI K t qu ki m tra hi u l c c a vacxin đư c trình bày b ng 3.13 Hình 3.19: Ph n ng ngăn tr ngưng k t h ng c u (HI) Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… 63 B ng 3.13 K t qu ki m tra hi u giá kháng th c a ñàn gà sau nh vacxin Avipro ND Lasota (HGKTTB ≥ log2) Giai ño n sau mi n d ch S lư ng m u ki m tra (n) HGKTTB Hi u giá kháng th (log2) < 4log2 4log2 – 8log2 >8log2 n % n % n % n (log2) M ub oh T l (n) b oh (%) % 41 82 18 0 0 0,26 0 100 0 7 93 93 0 4,54 93 93 ðC 50 46 92 0 0 0,12 0 100 0 2 92 92 6 5,4 98 98 ðC 50 50 100 0 0 0 0 MD 28 ngày 50 MD 21 ngày ðC MD 14 ngày 100 6 90 90 4 4,93 94 94 Ghi chú: ðC : ð i ch ng MD: Mi n d ch Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… 64 Qua b ng 3.13 cho th y, đàn gà chúng tơi kh o nghi m có đáp ng mi n d ch t t sau ñư c nh vacxin th i ñi m 14 ngày sau nh vacxin hi u giá kháng th trung bình c a đàn gà mi n d ch đ t 4,54 log2 có 93 m u hi u giá kháng th ñ t t log2 – log2 chi m t l 93% ñây t l b o h c a ñàn gà th i ñi m m u có hi u giá kháng th log2 Gà ñ i ch ng có hi u giá kháng th trung bình ñ t 0,26 log2 ñó 41 m u âm tính chi m 82% ch có m u cho hi u giá kháng th < log2 chi m 18% v n khơng đ b o h cho ñàn gà T i th i ñi m 21 ngày sau nh vacxin hi u giá kháng th trung bình c a đàn gà mi n d ch ñ t 5,4 log2 ñó có 92 m u có hi u giá kháng th đ t t log2 – log chi m t l 92% m u có hi u giá kháng th < log chi m 2% có m u hi u giá kháng th ñ t > log2 chi m t l 6% t ng s m u ki m tra Trong 100 m u huy t ki m tra có T l b o h 98% Gà đ i ch ng có hi u giá kháng th trung bình đ t 0,12 log2 46 m u âm tính chi m 92% ch có m u cho hi u giá kháng th < log chi m 8% th i ñi m 28 ngày sau nh vacxin hi u giá kháng th trung bình c a đàn gà mi n d ch gi m t 5,4 log2 – 4,93 log2 M c dù hi u giá kháng th c a ñàn gà gi m v n ñ kh b o h ch ng b nh Newcastle Trong có 90 m u đ t hi u giá kháng th t log2 – log2 chi m t l 90% m u ñ t hi u giá kháng th > log2 chi m t l 4% t ng s m u ki m tra T l b o h gi m 93% Gà ñ i ch ng 50/50 m u cho hi u giá kháng th âm tính (0 log2) chi m t l 100% Qua cho th y lơ gà đ i ch ng khơng s d ng vacxin hi u giá kháng th g n cho k t qu âm tính Ch m t s m u 14, 21 ngày cho k t qu hi u giá kháng th ñ t < log2 v n khơng đ kh b o h cho gà Ngun nhân có th lư ng kháng th t m truy n cho ñ n th i Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nơng nghi p …………………… 65 m 28 ngày sau lư ng kháng th hồn tồn h t Còn gà mi n d ch sau nh vacxin chúng tơi th y r ng đàn gà có ñáp ng mi n d ch t t v i vacxin Avipro ND Lasota c đ c đơng khơ, cho đàn gà kh b o h ch ng b nh Newcastle cao 93% - 98% Di n bi n hi u giá kháng th c a ñàn gà sau nh vacxin Avipro ND Lasota c a Lohmann th i ñi m khác ñư c th hi n hình 3.20: Th i m Ghi chú: ðC: ð i ch ng; MD: Mi n d ch Hình 3.20: Bi n đ ng HGKTTB c a ñàn gà sau nh vacxin Avipro ND Lasota Qua hình 3.20 cho th y, hi u giá kháng th trung bình c a đàn gà mi n d ch tăng d n, cao nh t log2 Sau lơ th i ñi m 21 ngày sau nh vacxin ñ t 5,4 th i ñi m 28 ngày hi u giá kháng th trung bình l i gi m d n xu ng cịn 4,93 log2 Trong ñư ng bi u di n lô gà ñ i ch ng không s d ng vacxin HGKTTB r t th p, khơng đ kh b o h cho ñàn gà ñ n 28 ngày cho k t qu 100% âm tính (0 log2) Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… 66 CHƯƠNG IV K T LU N VÀ ð NGH 4.1 K T LU N Ch ng virus Newcastle cư ng ñ c VN91 ñ m b o vô trùng, thu n t, không b gi m ñ c l c, n ñ nh v m t s đ c tính sinh h c: - Ch s ELD50 n ñ nh qua l n chu n ñ , bi n ñ ng t 109,16/0,1ml ñ n 109,32/0,1ml ELD50 trung bình c a ch ng đ t 109,24/0,1ml - Ch ng virus có tính thích ng cao n đ nh phơi gà 10 ngày tu i Virus nhân lên phôi, gây ch t phơi v i b nh tích đ c trưng, th i gian ch t phơi trung bình (MDT) c a virus 57,6 gi - Ch s gây b nh tiêm vào não gà ngày tu i (ICPI) = 1,75 - Ch s gây b nh tiêm tĩnh m ch gà tu n tu i (IVPI) = 2,66 - Li u gây ch t 50% gà thí nghi m (LD50) c a virus 7,84 log/ml K t qu ki m tra ch t lư ng vacxin: - K t qu ki m tra an tồn: Gà đư c s d ng vacxin theo ñư ng nh m t, nh mũi v i 10 li u quy ñ nh ñ u kho m nh, phát tri n bình thư ng - K t qu ki m tra hi u l c: + B ng phương pháp huy t h c: Xác ñ nh hi u giá kháng th Newcastle huy t c a gà ñư c s d ng vacxin th i ñi m 14, 21 28 ngày sau mi n d ch ñ u cho k t qu ñ t tiêu chu n b o h + B ng phương pháp cơng cư ng đ c: Cơng th thách ch ng virus Newcastle VN91 cho gà ñã s d ng vacxin cho k t qu ñ t tiêu chu n hi u l c theo tiêu chu n ngành 10 TCN 181 – 93 khuy n cáo c a OIE 2008 4.2 ð NGH Trên s nghiên c u đ c tính sinh h c c a gi ng virus Newcastle cư ng ñ c VN91 ti p t c nghiên c u c u trúc sinh h c phân t ñ so sánh v i ngân hàng gen th gi i Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… 67 TÀI LI U THAM KH O TÀI LI U TRONG NƯ C Bunpon Sirivong (1991), Nghiên c u đ c tính sinh h c m t s ch ng virus Newcastle Lu n án phó ti n s KHNN C c thú y, Trung tâm ki m nghi m thu c thú y Nhà nư c (1994), Qui trình k thu t ki m nghi m v cxin dùng thú y, NXBNN, Hà N i Nguy n Ti n Dũng Nguy n Văn Quang (1993), Bi n ch ng virus Newcastle c đ c ch u nhi t, T p chí khoa h c k thu t Thú y, t p 1, s 1, trang 13 – 20 Nguy n Ti n Dũng Nguy n Văn Quang (1995), Nghiên c u xác đ nh m t s đ c tính c a virus Newcastle cư ng ñ c VN91,T p chí KHKT Thú y, t p s 4, trang 6-11 Nguy n Ti n Dũng - Nguy n Văn Quang c ng s (1996), S d ng virus Newcastle ch ng Lasota ch u nhi t làm vacxin phịng b nh, T p chí KHKT Thú y, t p s 4, trang 40 – 44 Vũ ð t c ng s (1989), Nghiên c u nh ng tác nhân gây nh hư ng ñ n s ñáp ng mi n d ch phòng b nh Newcastle, Báo cáo t i H i ngh KHKT B NN CNTP Nguy n Thu H ng (1989), K t qu nghiên c u s d ng vacxin thích h p phòng b nh Newcastle s chăn nuôi gà t p trung Vi t Nam, K t qu nghiên c u KHKT Thú y (1985 – 1989), trang 30 – 34 Nguy n Thu H ng (1993), Kh o sát virus Newcastle gây d ch l n nh ng năm 70 nghiên c u m t s vacxin phịng b nh cho đàn gà nư c ta, Lu n án phó ti n sĩ KHNN Lâm Tr n Khanh (2006), M t s ñ c ñi m d ch t , tri u ch ng lâm sàng bi n ñ i b nh lý b nh cúm gia c m t i Hà Tây vùng giáp ranh, Lu n án Th c s Nông nghi p Phan L c (1994), M t s ñ c ñi m c a nh ng v d ch Newcastle l ch vaxin phòng b nh thích h p cho s chăn ni gà cơng nghi p, Lu n án phó ti n s KHNN Phan L c c ng s (1996), M t s ñ c ñi m c a nh ng v d ch Newcastle l ch vacxin phòng b nh thích h p cho gà m t s xí nghi p gà công nghi p, Tuy n t p cơng trình nghiên c u KHKT gia c m,1986 – 1996, Nhà XBNN, trang 211 – 215 Lê Văn Năm (2004), 100 câu h i ñáp quan tr ng dành cho cán b thú y ngư i chăn nuôi gà, Nhà XBNN Hà n i Lê H ng M n (2003), Hư ng d n k thu t chăn ni gà cơng nghi p, NXB lao đ ng, Hà N i Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… 68 Nguy n Vĩnh Phư c (1978), Giáo trình b nh truy n nhi m gia súc, Nhà XBNN, trang 387 – 398 Tiêu chu n, quy trình ngành Thú y (2006), Quy trình ch n đốn b nh Newcastle, B NN PTNT C c Thú y, Nhà XBNN, trang 221 – 234 Nguy n Như Thanh, Nguy n Bá Hiên, Tr n Th Lan Hương (2001), Vi sinh v t thú y, Nhà xu t b n Nông nghi p Hà N i Tr n ðình T (1985), Nghiên c u xác ñ nh ñ c l c ch ng virus vacxin Newcastle hi n ñang s d ng Vi t Nam, K t qu nghiên c u KHKT Thú y 1979 – 1984, Nhà XBNN, trang 119- 146 TÀI LI U NƯ C NGOÀI Alexander D.J and Parsons G (1984), “Avian paramyxovirus type infections of racing pigeon Pathogenicity experiments in pigeons and chickens”, Veterinary Record, 114, p.466 - 469 Alexander D.J and Parsons G (1986), Pathogenicity for chickens of avian paramyxovirus type isolates obtained from pigeeons in Great Britain during 1983 – 1985, Avian pathol, 15: p 487 – 493 Alexander D.J (1988), Historical aspects, Klwer academic publ Boston, p 1-10 Alexander D J (1989), Newcastle disease In: A Laboratory Manual for the Isolation and Identification of Avian Pathogens, 3rd Ed., AAAP, Univ Pennsylvania, USA Alexander D.J (1997), Newcastle disease and other Avian paramyxoviridae infections Disease of poultry, Printed in the United States of America, International publishers limited, p20: 541 – 562 Alexander D.J and Senne D.A (2008), "Newcastle diseases” Disease of Poultry, Twelfth edition, IOWA, USA p 75 - 100 Allan W.H, Lancaster J.E and Toth B (1978), Newcastle disease vaccines, FAO, ROM ASEAN Cooperation in Food, Agriculture and Forestry (2002), Asean standards for animal vaccines, Second Edition, Livestock Publication series No.2A Asplin E.D (1947), Newcastle disease in duck and geese,Vet Rê Record, p 621 – 624 Beard C.W and Hanson R.P (1984), Newcastle disease, Disease of poultry, IOWA State university press, Ames, pp 452 – 470 Brandly C.A, Hanson R.P (1965), Newcastle disease in disease of poultry, Biester and Schwarte fifth edition, The IOWA State university press, Ames, IOWA,USA, 22, p 633 – 674 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… 69 Burnet F.M (1942), Affinity of NDV to the influenza virus group, Aust J Exp Biol, Med Sci, 20, p 81 – 88 Carpenter (1998), Genetic charaterization of CDV in serengeti carrivoros Doyle T.M (1985), Pathology of Newcastle disease,48, p 144 – 169 Estudillo J (1972), Newcastle disease Poultry Dis, Conf Caliornia, Davis, p 70 – 73 University of French E.L, George T.D and J J Perey (1967), Infection of chickens ưith recently isolated NDV of low virulên, Aust, Vet, 43, p 404 – 409 Hanson R.P and Spalatin J (1978), Thermostability of the hemaglutinin of NDV and strain marker in epizootiologocal studies, Avian Dis, 22, p 659 – 665 Hanson R.P (1980), Newcastle disease, in S.B Hitchner (eds) In isolation and identigication of avian pathogens, Amer asso of avian pathologists, p63 Higgins D.A (1971), Nine disease outbreak associated with myxoviruses among ducks in Hong Kong, Trop Animal health productin, 3, p 232 – 240 Ide P.R (1987), Virological studies of paramyxovirus type infection of pigeons, Canadian Vet, Jour, 28,p 601 – 603 Irrio RM and Bratt M.A (1983), Monoclonal antibody in NDV, delincation of four wpitopes on the Ha Noi flucoprotein, America sociaty fo microbiglogy, p 440 -450 Jumaily W.T, Al – Atar M.A and Mansour A.D (1989), The incidence of salomonellae and serological incidence of ND in some wild bird from Baghdad area.,Journal of Biological Science Research, 20, p 213 – 219 Lan (2006,2008), Patholigal and Molecular biological studies on Canine Distemper Lancaster J.E (1966), Newcastle disease, A review of some of the literature published between 1926 and 1964, Ottawa, Canada Department of Agriculture Lancater J.E and Alexander D.J (1975), Newcastle disease, virus and spred Monograp No 11, Canada department of Agriculture, p 56 – 60 Lu Y.S., Tsai H.J and D.f (1986), Occurrence of ND in Taiwan from 1970 to 1985 Journal of Chinese Society of Vet, Science, 12,p 365 – 374 Luthgen W (1981), Newcastle disease in free living and pet birds, ADV Veterinary medicine, 31, p 63 – 71 Meulemans G and Gonze M (eds) (1987), Evaluation of the use of monoclonal antibodies to haemagglutination and fution glycoprotein of Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… 70 Newcastle disease virus identification and strain differentiation purooses, Arch Virol, 92: 55 – 62 Maeda M Koizumi and Okubo T (1978), Histopathological changes in Newcastle disease affecting racing pigeons in Japan, Japanese journl of Vet, Se, 49:2, p 589 – 592 OIE (World organisation for animal health) (2008), Manual of dianostic tests and vaccines for terrestrial animal, Sixth Edition Okoye j.O.A, Komolafe O.O, Anene BM (1989) Oubreaks of atypical Newcastle disease in Nigeria Bulletin of animal health and production in africe, 37, p 231 – 233, ref Pearson J.E, Senne D.A and Alaxander D.J(1987), Characterization of NDV isolated from pigeons, Avian Disease, 21, p 105 – 111 Reed L.J and Muench H (1938), "A simple method for estimating fifty percent endpoints", American Journal of Hygienics, 27, p 493 - 497 Rott R (1964), Antigenicity of Newcastle disease virus: an envolvin pathogen, University of Wisconsin Press, Madion, p 133 Russell P.H (1988), Monoclonal antibody in research diagnosis and epizotiology of ND, Kluwer Academie Pub, Boston, pp 131 – 146 Sharaway (1994),Common disease of quail Quail production systems areview by M M Sharaway food and Agriculture Organization of the United Nation, Rom, p 890 – 901 Spradbow P.B, Samuel J.I (1987), Newcastle disease in poultry New food pellet vaccine Australian centre for International Agriculture Research, p 44 – 49 Tisdal D.J (1988), Newcastle disease, Surveillance, 15, p 26 – 27 Tolba M.K and Eskarous J.K (1962) Effect of temperature on the haemagglutination activities and infectivity to chickens ambryos of different strain of Newcastle disease and fowl plague viruses, Arc F, kreislauflorsch, 38, p 234 Vindevolgel H, Duchatel J.P (1997) Virus infection in feral birds, a genaral review Bulletion de ta Societe Royale, Sciences de Liege (Celgium), 66 ( 1-3), p 167 – 174 http://www.thuvienkhoahoc.com/tusach/H%C3%B3a_mi%E1%BB%85 n_d%E1%BB%8Bch_t%E1%BB%95_ch%E1%BB%A9c Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… 71 ... virus Newcastle cư ng ñ c ch ng VN 91 L nc y ð pha Li u g? ?y chuy n loãng virus nhi m (ml) 10 -1 – 10 -11 0 ,1 10 -1 – 10 -11 0 ,1 109,25ELD50/0 ,1 ml Hi u giá virus 10 9 ,16 ELD50/0 ,1 ml -1 -11 -1 -11 10 ... virus gi ng Newcastle cư ng ñ c ch ng VN 91 L n ki m ð pha Li u g? ?y tra loãng virus nhi m (ml) 10 -1 – 10 -11 0 ,1 -1 -11 -1 -11 10 – 10 10 – 10 0 ,1 0 ,1 Hi u giá Hi u giá virus virus trung bình 10 9,32... 10 – 10 10 -1 – 10 -11 10 – 10 Hi u giá virus 10 9,39 0 ,1 10 9,54 0 ,1 gi ng g c 10 9,24 ELD50/ 10 9,32 ELD50/0 ,1 ml 0 ,1 ELD50/0 ,1 ml 0 ,1 ml ELD50/0 ,1 ml Qua b ng 3.3 cho th y: Hi u giá virus Newcastle