Nghiên cứu một số đặc tính sinh học của virus newcastle cường độc chủng VN91 được lưu giữ tại trung tâm kiểm nghiệm thuốc thú y trung ương 1 và ứng dụng trong khảo nghiệm vacxin

Chính vì vậy chúng tôi tiến hành nghiên cứu ñề tài: “Nghiên cứu một số ñặc tính sinh học của virus Newcastle cường ñộc chủng VN91 ñược lưu giữ tại Trung tâm Kiểm nghiệm thuốc Thú y Trun

Bộ giáo dục và đào tạo Trường Đại học nông nghiệp hà nội

và ứng dụng trong khảo nghiệm vacxin

chuyên ngành: thú y mã số: 60.62.50

Người hướng dẫn khoa học:

Pgs.ts nguyễn hữu nam

Hà nội, 2012

LỜI CẢM ƠN



đầu tiên cho tôi ựược bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới Ban đào tạo Sau ựại học - Viện ựào tạo sau ựại học Ờ Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội và các Thầy Cô giáo ựã giảng dạy tôi trong suốt thời gian học tập tại trường.

Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn và sự kắnh trọng sâu sắc tới PGS TS Nguyễn Hữu Nam, người Thầy ựã giành thời gian quý báu tận tình hướng dẫn, giúp ựỡ tôi trong quá trình nghiên cứu thực hiện ựề tài và hoàn thành luận văn tốt nghiệp

Cho tôi ựược gửi lời cảm ơn chân thành tới Ths Tạ Hoàng Long - Giám ựốc Trung tâm kiểm nghiệm thuốc thú y Trung ương I và tập thể cán

bộ nhân viên trong Trung tâm ựã ựộng viên, tạo mọi ựiều kiện thuận lợi cho tôi trong suốt quá trình học tập và hoàn thành ựề tài tốt nghiệp

Qua ựây tôi xin cảm ơn các bạn bè ựồng nghiệp người thân và gia ựình ựã tạo ựiều kiện về vật chất và tinh thần cho tôi trong quá trình nghiên cứu và thực hiện ựề tài

Một lần nữa tôi xin ựược bày tỏ lòng biết ơn, cảm ơn chân thành tới những tập thể, cá nhân ựã tạo ựiều kiện giúp ựỡ tôi hoàn thành luận văn này

Tác giả

HOÀNG THỊ THU HƯƠNG

LỜI CAM ðOAN



Tôi xin cam ñoan các kết quả nghiên cứu, số liệu ñược trình bày trong luận văn là trung thực và chưa từng ñược ai công bố trong bất cứ công trình nào khác cũng như chưa từng ñược sử dụng ñể bảo vệ một học

vị nào Mọi sự giúp ñỡ cho việc thực hiện luận văn ñã ñược cảm ơn và các thông tin trích dẫn trong luận văn ñã ñược chỉ rõ nguồn gốc

Tác giả

HOÀNG THỊ THU HƯƠNG

MỤC LỤC

LỜI CẢM ƠN i

LỜI CAM ðOAN ii

MỤC LỤC iii

DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT vi

DANH MỤC CÁC BẢNG vii

DANH MỤC CÁC HÌNH viii

MỞ ðẦU 1

CHƯƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3

1.1 LỊCH SỬ NGHIÊN CỨU BỆNH NEWCASTLE 3

1.1.1 Lịch sử bệnh 3

1.1.2.Tình hình nghiên cứu bệnh Newcastle trên thế giới 4

1.1.3 Tình hình nghiên cứu bệnh Newcastle ở trong nước 8

1.2 MỘT SỐ ðẶC ðIỂM CỦA VIRUS NEWCASTLE VÀ BỆNH NEWCASTLE 11

1.2.1 Hình thái và cấu trúc của Virus Newcastle: 11

1.2.2 ðặc tính sinh học của virus Newcastle 12

1.2.3 Truyền nhiễm học 16

1.2.4 Các thể bệnh Newcastle 18

1.2.5 Triệu chứng lâm sàng 19

1.2.6 Bệnh tích 19

1.2.7 Chẩn đốn bệnh 20

1.2.8 Miễn dịch bệnh Newcastle 24

1.2.9 Vacxin và phịng bệnh bằng vacxin 25

CHƯƠNG II NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30

2.1 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 30

2.1.1 Xác ñịnh một số ñặc tính sinh học của virus Newcastle cường ñộc chủng

VN91 ñược lưu giữ tại Trung tâm kiểm nghiệm thuốc thú y TW1 30

2.1.2 Sử dụng virus Newcastle cường ñộc VN91 ñược lưu giữ tại TTKNTTYTWI ñể khảo nghiệm vacxin Avipro ND Lasota nhược ñộc, ñông khô phòng bệnh Newcastle cho gà 30

2.2 NGUYÊN LIỆU NGHIÊN CỨU 30

2.2.1 ðối tượng nghiên cứu 30

2.2.2 Các trang thiết bị và cơ sở vật chất 30

2.2.3 ðịa ñiểm nghiên cứu 31

2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 31

2.3.1 Phương pháp kiểm tra ñộ vô trùng của giống 31

2.3.2 Phương pháp kiểm tra ñộ thuần khiết của giống 31

2.3.3 Phương pháp gây nhiễm virus Newcastle cường ñộc chủng VN91 vào xoang niệu nang phôi gà ấp 9 – 11 ngày tuổi 32

2.3.4 Phương pháp chuẩn ñộ virus 33

2.3.5 Phương pháp lựa chọn gà thí nghiệm 33

2.3.6 Phương pháp xác ñịnh thời gian chết phôi trung bình (MDT) 33

2.3.7 Phương pháp xác ñịnh chỉ số gây bệnh khi tiêm não gà con 1 ngày tuổi 34 2.3.8 Phương pháp xác ñịnh chỉ số gây bệnh khi tiêm tĩnh mạch gà 6 tuần tuổi (IVPI) 34

2.3.9 Phương pháp xác ñịnh liều gây chết 50% ñộng vật thí nghiệm (LD50) 35

2.3.10 Phương pháp khảo nghiệm vacxin 35

2.3.11 Phương pháp xử lý số liệu 37

CHƯƠNG III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 38

3.1 KẾT QUẢ XÁC ðỊNH MỘT SỐ ðẶC TÍNH SINH HỌC CỦA VIRUS NEWCASTLE CƯỜNG ðỘC CHỦNG VN91 38

3.1.1 Kết quả xác ñịnh hiệu giá virus giống Newcastle cường ñộc chủng VN91.40 3.1.2 Kết quả kiểm tra ñộ ổn ñịnh của giống virus Newcastle cường ñộc chủng VN91 42

3.1.3 Kết quả xác ñịnh thời gian chết phôi trung bình (MDT) 43

3.1.4 Xác ñịnh chỉ số gây bệnh khi tiêm virus vào não gà con 1 ngày tuổi (ICPI)46 3.1.5 Kết quả xác ñịnh chỉ số gây bệnh khi tiêm virus vào tĩnh mạch gà 6 tuần tuổi (IVPI) 47

3.1.6 Kết quả xác ñịnh liều gây chết 50% ñộng vật thí nghiệm (LD50) 49

3.2 KẾT QUẢ KHẢO NGHIỆM VACXIN AVIPRO ND LASOTA 56

3.2.1 Kết quả kiểm tra tính an toàn của vacxin 58

3.2.2 Kết quả kiểm tra hiệu lực bằng phương pháp công cường ñộc 60

3.2.3 Kết quả kiểm tra hiệu lực bằng phương pháp huyết thanh học 63

CHƯƠNG IV KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ 67

4.1 KẾT LUẬN 67

4.2 ðỀ NGHỊ 67

TÀI LIỆU THAM KHẢO 68

1 TÀI LIỆU TRONG NƯỚC 68

2 TÀI LIỆU NƯỚC NGOÀI 69

DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT

AGP Agar gel precipitation

FAO Food and Agriculture Organisation

ICPI Intra-Cerebral-Pathogenicity-Index in day-old chicks

IVPI Intra-Venous-Pathogencity-Index in 6-week-old chickens

HA Hemagglutination test

HGKTTB Hiệu giá kháng thể trung bình

MDT Mean Death Time-hr (Thời gian gây chết phôi trung bình)

LD 50 50 Percent Lethal Dose

OIE Office International de Epizooties

PBS Phosphate Buffered Saline

RT - PCR Reverce Transcription Polymerase Chain Reaction

TTKNTTYTW1 Trung tâm Kiểm nghiệm thuốc Thú y Trung ương 1

DANH MỤC CÁC BẢNG

Bảng 1.1 Tiêu chuẩn ñánh giá ñộc lực của virus Newcastle (FAO) 15

Bảng 1.2 Chỉ số ñộc lực của một số chủng virus Newcastle 22

Bảng 3.1 Kết quả kiểm tra vô trùng của giống 39

Bảng 3.2 Kết quả xác ñịnh hiệu giá virus giống Newcastle cường 41

Bảng 3.3 Kết quả kiểm tra ñộ ổn ñịnh của giống virus Newcastle cường ñộc chủng VN91 42

Bảng 3.4 Kết quả theo dõi số phôi chết sau khi gây nhiễm virus Newcastle cường ñộc chủng VN91 44

Bảng 3.5 Kết quả xác ñịnh chỉ số gây bệnh khi tiêm virus Newcastle cường ñộc chủng VN91 vào não gà con 1 ngày tuổi 46

Bảng 3.6 Kết quả xác ñịnh chỉ số gây bệnh khi tiêm virus Newcastle cường ñộc chủng VN91 vào tĩnh mạch gà 6 tuần tuổi 48

Bảng 3.7 Kết quả theo dõi số gà chết sau khi tiêm virus Newcastle cường ñộc chủng VN91 50

Bảng 3.8 Kết quả xác ñịnh LD50 sau khi tiêm virus Newcasle cường ñộc chủng VN91 52

Bảng 3.9 Kết quả so sánh ñặc tính sinh học của virus Newcastle cường ñộc chủng VN91với tiêu chuẩn giống gốc 53

Bảng 3.10 Kết quả kiểm tra kháng thể Newcastle trước khi sử dụng vacxin57 Bảng 3.11 Kết quả ñánh giá tính an toàn của vacxin 59

Bảng 3.12 Kết quả công cường ñộc bằng virus Newcastle chủng VN91 cho gà sau khi sử dụng vacxin 61

Bảng 3.13 Kết quả kiểm tra hiệu giá kháng thể của vacxin Avipro ND Lasota (HGKTTB ≥ 4 log2) 64

DANH MỤC CÁC HÌNH

Hình 1.1 Hình thái của virus 1

Hình 3.1: Gây nhiễm virus Newcastle cường ñộc VN91 trên phôi trứng 10 ngày 54

Hình 3.2: Hàn trứng bằng Paraffin 54

Hình 3.3: Tủ ấp trứng 370C 54

Hình 3.4: Mổ thu hoạch trứng 54

Hình 3.5:Phôi ñối chứng 54

Hình 3.6: Bệnh tích phôi chết ở thời ñiểm 36h-48h sau gây nhiễm virus Newcastle cường ñộc VN91 54

Hình 3.7: Gà 1 ngày tuổi ñể xác ñịnh chỉ số ICPI của virus Newcastle cường ñộc VN91 55

Hình 3.8: Gà ñối chứng 6 tuần tuổi xác ñịnh chỉ số IVPI của virus Newcastle cường ñộc VN91 55

Hình 3.9: Gà thí nghiệm 6 tuần tuổi xác ñịnh chỉ số IVPI của virus Newcastle cường ñộc VN91 55

Hình 3.10: Tiêm virus Newcastle cường ñộc VN91 vào não gà con 1 ngày tuổi 55

Hình 3.11: Tiêm virus Newcastle cường ñộc VN91 vào tĩnh mạch gà 6 tuần tuổi55 Hình 3.12: Gà Lương Phượng 7 ngày tuổi khảo nghiệm vacxin Avipro ND Lasota56 Hình 3.13: Gà miễn dịch sau công cường ñộc bằng chủng virus Newcastle VN91 62 Hình 3.14: Gà ñối chứng sau công cường ñộc bằng chủng virus Newcastle VN91 62 Hình 3.15: Phân nhớt,trắng xanh 62

Hình 3.16: Xuất huyết dạ dày tuyến 62

Hình 3.17: Lỗ huyệt xuất huyết 62

Hình 3.18: Ruột loét, xuất huyết 62

Hình 3.19: Phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu (HI) 63

Hình 3.20: Biến ñộng HGKTTB của ñàn gà sau khi nhỏ vacxin Avipro ND Lasota 1

MỞ ðẦU

1 TÍNH CẤP THIẾT CỦA ðỀ TÀI

Việt Nam là một nước nông nghiệp có truyền thống lâu ñời, trong ñó ngành chăn nuôi giữ vai trò hết sức quan trọng, nó góp phần vào việc phát triển kinh tế nông nghiệp và nâng cao chất lượng cho cuộc sống của nhân dân Cùng với sự phát triển của ngành kinh tế, chăn nuôi gà ñang dần trở thành ngành sản xuất hàng hóa, góp phần vào chương trình xóa ñói giảm nghèo cho nông dân ở một số vùng nông thôn nước ta

Cùng với sự ñi lên của ngành chăn nuôi nói chung và ngành chăn nuôi gia cầm nói riêng, sự phát triển của các phương thức chăn nuôi công nghiệp

hiện ñại cũng không tránh khỏi dịch bệnh xảy ra ðặc biệt với ñiều kiện khí hậu nhiệt ñới nóng ẩm cùng với sự ña dạng trong phương thức chăn nuôi nước ta càng thuận lợi cho những bệnh truyền nhiễm nguy hiểm như

Newcastle, Gumboro, Marek, Tụ huyết trùng….phát triển và gây nhiều thiệt hại Trong ñó bệnh Newcastle là một bệnh thường xuyên xảy ra, bệnh lây lan nhanh, làm chết hàng loạt gà ở mọi lứa tuổi Nguyên nhân gây bệnh là

do một loại virus ñược Doyle phân lập trong ổ dịch của gà tại Newcastle (Anh) (Doyle,1927)

Cho ñến nay, bệnh chưa có thuốc ñiều trị Biện pháp tốt nhất ñể kiểm

soát dịch bệnh là thực hiện an toàn sinh học và sử dụng vacxin phòng bệnh

ðể phòng bệnh, ở Việt Nam hiện nay ñã có vacxin Newcastle nhược ñộc và

vô hoạt ñể phòng bệnh Newcastle cho gà Nhưng ñể sản xuất ñược một vacxin phòng bệnh tốt và có hiệu quả, ñiều quan trọng là chúng ta phải có

ñược một giống virus cùng nguồn gốc với virus gây bệnh và có tính ổn ñịnh cao Nó không những phục vụ cho việc sản xuất vacxin mà nó còn có ý nghĩa cực kỳ quan trong trong việc kiểm tra tính hiệu quả của vacxin sau khi ñược

sử dụng

Hiện tại giống virus Newcastle cường ñộc chủng VN91 ñang ñược lưu giữ tại Trung tâm bằng phương pháp truyền thống rồi ñông khô và bảo quản

-500C Trong quá trình giữ giống, tính kháng nguyên, ñặc tính sinh học, ñộc lực và tính ổn ñịnh của virus có thể thay ñổi do nhiều yếu tố ảnh hưởng

Chính vì vậy chúng tôi tiến hành nghiên cứu ñề tài:

“Nghiên cứu một số ñặc tính sinh học của virus Newcastle cường ñộc chủng VN91 ñược lưu giữ tại Trung tâm Kiểm nghiệm thuốc Thú y Trung ương I và ứng dụng trong khảo nghiệm vacxin”

3 Ý NGHĨA KHOA HỌC CỦA ðỀ TÀI

Trên cơ sở nghiên cứu ñặc tính sinh học của giống virus Newcastle cường ñộc chủng VN91 từ ñó giúp ích cho việc giữ các chủng giống vi sinh vật thú y khác một cách có hệ thống

CHƯƠNG I

TỔNG QUAN TÀI LIỆU

1.1 LỊCH SỬ NGHIÊN CỨU BỆNH NEWCASTLE

1.1.1 Lịch sử bệnh

Newcastle là tên của một thành phố của nước Anh, lần ựầu tiên lưu

hành dịch tả gà với tình trạng bệnh lý cao, Doyle ựã lấy tên thành phố

ựặt cho bệnh

Bệnh dịch ở Anh xảy ra theo tài liệu ghi chép có liên quan ựến một con

tàu vận chuyển thịt ựông lạnh mang theo gà nuôi, di chuyển từ Châu á ựến

cảng của Newcastle (Alexander, 1988)

Trong một thời gian ngắn, virus có ựộc lực cao ựã gây ra bệnh không chỉ

ở Anh, Indonesia, Hàn Quốc mà còn ở một số nước khác như Philiplin, Ấn

độ, Ceylon, Nhật Bản

Một số nhà khoa học ựã dùng tổ chức phủ tạng ựể gây bệnh thắ nghiệm

cho gà, Doyle (1985) [31] mô tả bệnh có tỷ lệ chết cao, có thể lên tới 100%

Riêng ở California, bệnh xảy ra vào giữa những năm 1930 (Alexander, 1988) ựược gọi là bệnh Ộviêm não phổiỢ bệnh có tỷ lệ chết thấp,

hiếm khi tới 15%, với biểu hiện hô hấp nhẹ, ựôi khi có triệu chứng thần kinh

nhưng khác hẳn với bệnh ựã ựược Doyle mô tả

Năm 1964, dạng bệnh lý nhẹ ựã ựược Shope ựưa ra một học thuyết giải

thắch những dấu hiệu hoàn toàn khác của bệnh Newcastle

Năm 1951, bệnh lan tới Hawaii, Canada và tiếp tục lan rộng ở khắp

Châu Âu và nhiều vùng khác nhau ở Châu Phi.Tại Venezuela, Mexico tỷ lệ

chết của gà trưởng thành tới 100% (Brandly, 1965)

Năm 1966, bệnh xảy ra ở Iran với thể cấp tắnh Bệnh lan vào Châu Á rồi

từ Tây Âu qua Trung đông (Lancaster và Alexander, 1975)

Năm 1980, tại cuộc hội thảo về bệnh có sự tham gia của nhiều nhà nghiên cứu, theo (Hanson, 1980) virus Newcastle vẫn tồn tại với bản chất của

nó nhưng dưới dạng một số chủng khác nhau, vì vậy ñã gây ra những biểu hiện lâm sàng khác nhau

1.1.2.Tình hình nghiên cứu bệnh Newcastle trên thế giới

Bệnh Newcastle là một bệnh truyền nhiễm nguy hiểm, lây lan nhanh và mạnh của gia cầm, ñể hạn chế thiệt hại của bệnh của bệnh gây ra, ñã có nhiều công trình nghiên cứu bệnh một cách ñầy ñủ và toàn diện

*Bệnh Newcastle ở chim hoang dã

Chim hoang dã là loài cầm có khả năng mẫn cảm với bệnh Newcastle và

là một trong những nguồn lây lan dich bệnh Chính vì vậy trong thời gian dài chim hoang dã là ñối tượng ñược nghiên cứu rộng rãi ở khắp các nước trên thế giới nhằm ngăn chặn nguồn bệnh này

Qua nhiều năm nghiên cứu, (Luthgen, 1981), ñã lập một danh sách gồm

117 loài chim, trong ñó có 17 loài bị nhiễm virus Newcastle và thấy phần lớn

là do chim tiếp xúc với gia cầm ñã nhiễm bệnh

Ở Baghda, (Jumaily, 1989), dùng phản ứng HI kiểm tra 341 mẫu huyết thanh của 5 loài chim hoang dã, ông phát hiện có kháng thể kháng virus Newcastle ở một số mẫu với hiệu giá từ 1/2 - 1/128, trong ñó nhóm chim Columbalivia chiếm 8.0%, nhóm Strepiopelia ðecasoto chiếm 2.5%

Vindevolge (1997), nghiên cứu bệnh Newcastle ở chim hoang dã thấy virus nhiễm ở chim bồ câu hầu hết có tính hướng hệ hô hấp, chim có thể biểu hiện hoặc không Qua 236 loài chim nhiễm tự nhiên hoặc thí nghiệm thấy bệnh nghiêm trọng ñều ở ñường tiêu hoá hoặc có triệu chứng thần kinh Tác giả cho rằng những chim di cư bị nhiễm tự nhiên trong quá trình sinh sản cũng truyền kháng thể cho ñời sau qua lòng ñỏ

Estudillo (1972), ñã mô tả ổ dịch ở Mehico cho thấy gà lôi Nhật, Công, Vẹt, chim Yến có khả năng mẫn cảm với bệnh và có triệu chứng thần kinh do lây nhiễm virus Newcastle

Qua nghiên cứu bệnh Newcastle ở chim hoang dã , các tác giả cho thấy những dấu hiệu của bệnh rất khác nhau, bất kỳ thể bệnh nào ở gà cũng có thể

thấy ở các loài chim

* Bệnh Newcastle ở chim bồ câu (Pigeon)

Năm 1987, Pearson J.E, và cộng sự, báo cáo kết quả nghiên cứu chủng

virus PMV – 1 phân lập từ chim bồ câu có triệu chứng liệt, vẹo cổ, run rẩy, mất thăng bằng và chết Tác giả ñã dùng kháng thể ñơn dòng ñể xác ñịnh vius gây bệnh Chủng phân lập ñược dùng gây bệnh cho bồ câu bằng ñường tiêm

tĩnh mạch, thấy chim có biểu hiện bệnh như ngoài tự nhiên Nhưng gây bệnh bằng ñường mũi chỉ có một bồ câu có biểu hiện bệnh; thời gian chết khoảng

từ 4 – 25 ngày, virus bài xuất ñến 20 ngày, có bệnh tích viêm ruột dạ dày và

hoại tử tuyến tụy Nếu gây bệnh cho gà qua lỗ huyệt, mũi hoặc tiêm vào túi khí ở ñốt ngực thì gà vẫn khoẻ mạnh; tiêm vào não gà con chúng chỉ có ICPI giống nhóm Velogen và 4 trong 6 chủng virus phân lập có khả năng gây bệnh

theo hướng tác ñộng thần kinh cho gà 6 tuần tuổi

Nghiên cứu bệnh Newcastle ở chim bồ câu thấy tỷ lệ mắc chiếm từ 30% - 70%, tỷ lệ chết có thể thấp, hiếm khi vượt quá 100% nhưng cũng có

trường hợp tới 40% Thời gian ủ bệnh từ vài ngày ñến vài tuần Triệu chứng chủ yếu là thần kinh và ỉa chảy, ngoài ra còn triệu chứng ở ñưòng hô hấp, viêm mũi, viêm màng kết mạc mắt, run rảy, ngẹo cổ và thiếu sự kết

hợp (Alexander, 1986; Estudillo, 1972)

Ở Nhật Bản, Maeda M và cộng sự (1978) ñã nghiên cứu biến ñổi về tổ chức bồ câu bị mắc bệnh Newcastle Các tác giả thấy có hoại tử hoặc thoái hoá tổ chức lympho ở lách cũng như ở túi fabricius, tuyến ức, ruột, thận

Ngoài ra còn thấy tăng sinh tế bào lympho ở lách, hình thành những ựám tế bào lympho ở thận và viêm não không chứa mủ Dựa vào các thay ựổi về tổ

chức có thể thấy ựược chủng virus có hướng thần kinh hay nội tạng

* Bệnh Newcastle ở gà tây (Turkey)

Biểu hiện bệnh bình thường, ắt nghiêm trọng, với triệu chứng chủ yếu là

hô hấp và thần kinh Bệnh có thể ảnh hưởng ựến sản xuất trứng, trứng có vỏ mềm, mất hình dáng và chất lượng trứng giảm, gà có thể liệt 1-2 chân, trong ổ dịch quá cấp có tỷ lệ chết cao

* Bệnh Newcastle ở chim cút (Quail)

Theo Sharaway (1994), chim cút ắt mẫn cảm với vius Newcastle hơn

gà, thời gian ủ bệnh từ 2-15 ngày, trung bình 5-6 ngày Triệu chứng bệnh thay ựổi tuỳ theo ựộc lực của chủng gây bệnh Nếu nhiễm virus có ựộc lực cao, chim cút có biểu hiện ủ rũ, khó thở, bệnh kéo dài vài ngày rồi chết Quan sát thấy chim cút có thể bị sưng mắt và cổ, ỉa phân xanh ựôi khi có máu, chim cút run rẩy, liệt chân, ựôi khi liệt cánh Tỷ lệ chết có thể tới 90% ở chim cút hậu

bị và 50% ở chim cút trưởng thành

* Bệnh Newcastle ở loài thuỷ cầm

Vịt, ngan, ngỗng ựều có khả năng nhiễm bệnh Newcastle (Asplin,1947; Estudillo, 1972; Higgins,1971) Ở ngỗng và vịt mắc bệnh có biểu hiện liệt chân, cánh và không có triệu chứng hô hấp Tỷ lệ nhiễm của ngỗng ngan và vịt khoảng 10% hoặc ắt hơn Tỷ lệ chết chỉ có ở vịt và ngỗng khoảng 10%

* Bệnh Newcastle ở gà

Tại Newxealand, (Tisdal D.J., 1988) phát hiện ựược kháng thể ngăn cản

sự ngưng kết ựối với virus Newcastle ở gà, gà lôi và công Các loài này không

có biểu hiện triệu chứng lâm sàng nhưng vẫn phân lập ựược virus Newcastle thuộc nhóm Lentogen

Ở đài Loan trong 16 năm từ năm (1970 Ờ 1985) có 396 ổ dịch Newcastle trong ựó 93% là ở gà, còn lại là ở gà lôi, bồ câu, gà tây, ngỗng và chim cút

82% gà mắc bệnh dưới 2 tháng tuổi, virus gây bệnh thuộc chủng Velogen hướng nội tạng và thần kinh (Lu Y.S.,1986)

Lu Y.S (1986) ựã nhận ựịnh tình hình dịch tễ bệnh Newcastle xảy ra ở đài Loan từ tháng 2 ựến tháng 5/1984 như sau: Bệnh ựã xảy ra ở 245 trại gà trong 11 vùng với 2,76 triệu gà mắc bệnh ( 60%) và 0,57 triệu con chết Gà ở các trại ựã ựược tiêm phòng 3 lần vào ngày tuổi 4, 14 và 24 nhưng hầu hết gà mắc bệnh trước lần tiêm phòng thứ 3 Các yếu tố nghi ngờ gây ra ổ dịch là sự

ức chế miễn dịch do lây nhiễm virus IBD, dùng vacxin không thắch hợp ựã làm tăng tắnh gây bệnh của chúng

Năm 1989, (ở Nigeria Okoye, JOA, 1989) xảy ra ở ổ dịch Newcastle không ựiển hình, gà không có triệu chứng thần kinh, không xuất huyết da dày, chỉ có các dấu hiệu ủ rũ, ỉa phân xanh , tỷ lệ chết từ 50- 83,6% , mổ khám thấy dịch thẩm xuất ở ống khắ quản, lách teo, manh tràng xuất huyết có dấu hiệu hoại tử, các tế bào lympho giảm, ựã phân lập ựược virus Newcastle từ bệnh phẩm

Qua quan sát bệnh lý của gà, Flanagan M (1990), thấy khi gây nhiễm virus Newcastle chủng Velogen thể nội tạng cho gà không có miễn dịch, có thể phân lập ựược virus từ các tổ chức Ở những gà có kháng thể, virus thường ựược phân lập từ dạ dày tuyến, hạch manh tràng, túi fabricius và não,

gà có biểu hiện lâm sàng nhẹ hoặc không và virus vẫn ựược nhân lên ựến ngày thứ 19 sau khi công cường ựộc

Arzey G (1990) ựã nghiên cứu cơ chế lây truyền của bệnh Newcastle thấy

có vai trò của chim hoang dã, bồ câu, thịt gà, qua gió, con người, vai trò tiềm

ẩn của chim cảnh, sự di chuyển của gà, trứng, gà 1 ngày tuổi, vai trò của ruồi, ngoại ký sinh, nội ký sinh, loài gận nhấm, thịt gà ựông lạnh và thức ăn thừa Bell J.G (1988), ựã nghiên cứu sự lưu hành virus Newcastle ở 3 vùng có trại gà chăn nuôi theo kiểu công nghiệp và 3 vùng không có trại gà công nghiệp của Moroco vào mùa ựông năm 1986 -1987, bằng cách thu nhập mẫu huyết thanh và dich khắ quản từ 100 gà ở mỗi vùng ựể kiểm tra Thấy lưu

hành virus ở các vùng phụ thuộc vào phương thức chăn nuôi tập trung hoặc chăn thả, kết quả: Onjda 5%, Rabat 10%, đông Bắc Atlas 28%, Nam Atlas

425, Trung Atlas 80% và Larach 43%

* Bệnh Newcastle ở người

Suarez Ờ Hernander M, (1987) khảo sát huyết thanh học của virus Newcastle ở những công nhân chăn nuôi gà Kháng thể HI với virus bệnh Newcastle ựã ựược tìm ra ở 73/277 (26,3%) người làm việc trực tiếp ở trại gà

và ở 110/2304 (7,8%) người gián tiếp Sự khác nhau về số mẫu dương ở 2 nhóm người là không có ý nghĩa, vì bệnh ắt xảy ra ở người, nhưng bệnh có thể gây viêm kết mạc mắt, các hạch lâm ba ngoại biên, trong trường hợp bệnh nặng có thể gây khó thở, viêm phổi Trẻ em có thể bị viêm não, màng não

1.1.3 Tình hình nghiên cứu bệnh Newcastle ở trong nước

Bệnh Newcastle ựược Phạm Văn Huyến ựề cập lần ựầu tiên ở Việt Nam vào năm 1933 và gọi là dịch tả gà đông Dương

Năm 1938 một vụ dịch gà ở Nam Bộ ựược Vitor mô tả có triệu chứng giống bệnh Newcastle

Năm 1949, Jacottot và Lelouet ựã phân ựược virus Newcastle ở Nha Trang, sau dùng chủng này ựể gây bệnh cho gà và tiêm truyền trên phôi trứng bằngphản ứng ngưng kết hồng cầu và ức chế ngưng kết hồng cầu tác giả ựã xác ựịnh sự có mặt của virus Newcastle tại ổ dịch

Năm 1956 ở Sài Gòn Notter và N.B.Lương ựã phân lập ựược chủng virus Newcastle Miền Bắc từ cuối năm 1955-1957 qua ựiều tra tình hình dịch bệnh

ở 20 tỉnh thành, kiểm tra 189 bệnh phẩm (óc gà ốm) các tác giả thấy có 58 mẫu có virus Newcastle, chưa thấy có virus dịch tả gà điều này phù hợp với thông báo của Uỷ ban quốc tế phân loại virus gà Từ năm 1940 trở lại ựây trên thế gới không có bệnh Dịch tả gà cổ ựiển nữa

Năm 1970 Nông trường An Khánh, bệnh phát ra chỉ trong vòng 1 tháng, chết 7000 con gà Nông trường gà Thành Tô năm 1973 chỉ trong vòng 10

ngày gần 10 vạn gà bị tiêu diệt Năm 1974 xắ nghiệp gà Cầu Diễn chết 2/3 trong tổng số 30 vạn con gà chỉ trong vòng 2 tháng Các xắ nghiệp gà khác như Nhân Lễ, đông AnhẦ cũng ựều bị dịch Newcastle gây thiệt hại nặng nề Nguyễn Thu Hồng (1985 Ờ 1989), ựã ựưa ra kết quả nghiên cứu lịch sử dụng vacxin tuỳ theo tình hình dịch của từng cơ sở Cơ sở thường xuyên có dịch 3 ngày tuổi nhỏ Lasota, 18 ngày tuổi uống Lasota và 35 ngày tuổi tiêm vacxin hệ I Cơ sở bị dịch ựe doạ, gà 7 ngày tuổi nhỏ Lasota, 20-30 ngày uống Lasota và 45 ngày tiêm vacxin Hệ I Cơ sở an toàn dịch: Uống lúc 10-15 ngày tuổi, uống nhắc lại lúc 30 ngày tuổi và tiêm Hệ I lúc 45-50 ngày tuổi

Trần đình Từ và cộng sự (1979 Ờ 1984), ựã xác ựịnh ựộc lực của các chủng virus 3 vacxin Newcastle ựang sử dụng ở Việt Nam bằng phương pháp

ựã chẩn ựoán hoá của FAO độc lực ựược xác ựịnh trên 3 chỉ số MDT, ICPI, IVPI, kết quả cho thấy 3 chủng virus Newcastle ựang sử dụng hiện nay có ựộc lực ổn ựịnh Chủng Hệ I thuộc nhóm Mesogen, cùng loại với chủng II nhưng

có ựộc lực cao hơn và ựặc tắnh gây bệnh khác với chủng II, do ựó Hệ I có thể

có nguồn gốc từ chủng Mukteswar

Vũ đạt và cộng sự (1989), nghiên cứu những tác nhân gây ảnh hưởng ựến quá trình ựáp ứng miễn dịch chống bệnh Newcastle Tác giả thấy kháng thể thụ ựộng và kháng sinh dùng trước hoặc sau vacxin ựều ảnh hưởng ựến quá trình hình thành kháng thể

Vài năm gần ựây, nhiều công trình nghiên cứu và thử nghiệm vacxin Newcastle có khả năng chịu nhiệt như: Nguyễn Thu Hồng và cộng sự (1993) [8], thử nghiệm vacxin chịu nhiệt V4 phòng bệnh cho gà ở Việt Nam Kết quả cho thấy vacxin V4 có ưu ựiểm hơn Lasota về tắnh chịu nhiệt và thời gian bảo quản, ở nhiệt ựộ thường bảo quản ựược hơn 1 tháng Mặt khác, vacxin có ựặc tắnh gây miễn dịch qua tiếp xúc

Năm 1991, Bunpon Sirivong, tiến hành nghiên cứu tại Việt Nam ựặc tắnh

sinh học của một số chủng virus Newcastle, trong ựó chủng VL88 phân lập từ

ổ dịch của Lào có MDT = 72,8 giờ, ICPI = 1,94; IVPI = 2,6; Tác giả xác ựịnh

ñó là chủng có ñộc lực mạnh, thuộc nhóm Velogen là nguyên nhân gây ra dịch bệnh ở cơ sở chăn nuôi của Lào

Năm 1995, Nguyễn Tiến Dũng và cộng sự, nghiên cứu chủng virus cường ñộc Newcastle VN91, chủng có các chỉ số sinh học như sau:

MDT = 57 giờ, ICPI = 1,77; IVPI = 2,67

ELD50 = 9,4log/ml và LD50 = 7,9log/ml

Chủng VN91 ñược dùng làm chủng cường ñộc ñể công thử thách trong kiểm nghiệm vacxin

Năm 1994, Phan Lục, nghiên cứu sự biến ñộng hàm lượng kháng thể Newcastle ở gà nuôi tập trung và ñưa ra lịch sử dụng vacxin phòng bệnh phù hợp với ñặc ñiểm riêng của mỗi cơ sở Tác giả nhận thấy, hàm lượng kháng

thể của gà ở vụ hè thu cao hơn vụ ñông xuân

Phan Lục và cộng sự (1996), ñã theo dõi 6 cơ sở nuôi gà ở các tỉnh phía Bắc, từ năm 1980 – 1991 Các cơ sở ñều ñạt tiêu chuẩn vệ sinh thú y, quy cách chăn nuôi, nhưng ñã xảy ra 5 vụ dịch Newcastle Trong số các vụ dịch

này, có 4 vụ ở gà nhỏ, 1 vụ ở gà trưởng thành, dịch xảy ra vào các vụ ñông xuân từ tháng 10 ñến tháng 3 năm sau Do ñó tác giả ñã ñề xuất lịch sử dụng vacxin thích hợp là: 7 ngày, 21-28 ngày, 50-58 ngày và 133-140 ngày; Vacxin

sử dụng là Lasota và Hệ 1, bằng phương pháp nhỏ mũi và tiêm dưới da tuỳ từng loại vacxin

Kết quả nghiên cứu bệnh Newcastle, vacxin và sử dụng vacxin của các

tác giả trong nước và trên thế giới ñã góp phần to lớn ñể ngăn chặn và hạn chế thiệt hại về kinh tế của bệnh Newcastle

1.2 MỘT SỐ ðẶC ðIỂM CỦA VIRUS NEWCASTLE VÀ BỆNH NEWCASTLE

1.2.1 Hình thái và cấu trúc của Virus Newcastle:

Virus Newcastle thuộc họ Paramyxoviridae, là một ARN virus, có cấu tạo xoắn, ña hình thái: hình tròn, hình trụ, hình sợi Virus có vỏ bọc lipit bên ngoài Kích thước virion chưa thống nhất nhưng nói chung từ 150-400nm Virus có cấu trúc nucleo capsit dạng xoắn ốc dài 1000mm, ñường kính 17-18nm Vỏ bọc ñược phủ các gai (glycoproteinHN-F) dài 8-12 nm

Hệ gen của virus Newcastle là chuỗi ñơn ARN ñể truyền thông tin ARN

và mật mã di truyền các protein của virus Virus có trọng lượng phân tử ARN nặng 5,2-5,7x 106 dalton xấp xỉ 15 kilobaes (Kb), (Kolakofsky, 1974) Mật

mã di truyền của ARN virus chứa 6 gen mã hoá các thông tin di truyền tổng hợp các protein cấu trúc sau:

- Haemgglutinin – Neuraminidaes (HN): có chức năng ngưng kết hồng cầu và có hoạt tính cua men Neuraminidase, tạo thành 2 chỗ nhô ra lớn ở bề mặt hạt virus

Hình 1.1 Hình thái của virus

- Fusion protein (F): là phần nhô ra nhỏ trên bề mặt hạt virus, có vai trò liên hiệp các tế bào bị nhiễm virus với nhau ñể tạo thành tế bào khổng lồ ña nhân

- Large polymerazase protein (L): là một ARN polymerase liên kết với nucleocapsid

- Matrix protein (M): có tác dụng gắn ARN của virus với vỏ bọc

- Nucleo protein Phospho (NP): hình ống dài và xoắn ốc nhiều vòng, cũng chưa rõ chức năng

1.2.2 ðặc tính sinh học của virus Newcastle

Virus Newcastle là virus có vỏ bọc, có hoạt tính bề mặt nên nó có một số ñặc tính sinh học ñặc trưng sau:

*Ngưng kết hồng cầu

Burnet (1942), là người ñầu tiên phát hiện ñặc tính của virus Newcastle:

- Có khả năng làm ngưng kết hồng cầu một số loài như hồng cầu gà, người, chuột lang, chuột bạch

- Chỉ một vài chủng virus làm ngưng kết hồng cầu bò, dê, cừu, lợn, và ngựa

- Hồng cầu loài lưỡng thê, bò sát và loài chim bị ngưng kết với virus Newcastle ở các mức ñộ khác nhau

Hiện tượng ngưng kết hồng cầu là do hồng cầu liên kết với các ñiểm quyết ñịnh kháng nguyên trên bề mặt virus Quá trình ngưng kết xảy ra hai giai ñoạn:

- Giai ñoạn ñầu: virus tìm các ñiểm thụ cảm trên bề mặt hồng cầu –

Haemagglutinin làm ngưng kết hồng cầu

- Giai ñoan tiếp theo: virus tách khỏi bề mặt tế bào do men Neuramidaza

cắt ñứt các thụ thể trên bề mặt hồng cầu

Theo Tolba và Eskarous (1962), hoạt tính ngưng kết hồng cầu tuỳ thuộc theo từng chủng virus, không nhất thiết bị vô hoạt cùng thời gian với hoạt tính

gây nhiễm Một vài chủng virus khi xử lý ở nhiệt ñọ 560C với thời gian 5 phút, hoạt tính ngưng kết hồng cầu bị phá huỷ nhưng vẫn còn khả năng gây nhiễm phôi hoặc vật chủ khác Ngược lại có một số chủng ñược xử lý ở 560C với thời gian 25 phút vẫn còn khả năng gây nhiễm và gây ngưng kết hồng cầu (Hanson, 1978)

ðặc tính này dùng ñể phân biệt giữa các chủng virus Newcastle với nhau

và cũng là ñể phân biệt với virus cúm

* Ức chế ngưng kết hồng cầu: (Haemagglutination Inhibition – HI)

Virus Newcastle bị trung hoà bởi huyết thanh dương tính Newcastle, khi

bị trung hoà virus không còn khả năng gây ngưng kết hồng cầu; bằng phản ứng HI sẽ phát hiện kháng thể làm ngăn trở ngưng kết hồng cầu gà Dựa vào ñặc tính này ñể phát hiện gián tiếp sự nhiễm virus Newcastle của ñàn gà, xác ñịnh hiệu giá ñáp ứng miễn dịch Newcastle với vacxin và ñể phân biệt các chủng virus Newcastle Sự khác nhau giữa các chủng thuộc virus thuộc vào nguồn gốc phát sinh bệnh

Phản ứng ngưng kết hồng cầu gà (HA) và phản ứng ức chế ngưng kết hồng cầu gà (HI) ñược sử dụng ñể phát hiện kháng nguyên và kháng thể Newcastle, phản ứng có thể ñược thực hiện trong ống nghiệm hoặc ñĩa ngưng kết 96 lỗ có ñáy chữ

* Nuôi cấy virus Newcastle:

- Trên phôi gà:

Virus có thể nhân lên trong xoang allantonic (xoang niệu mô) của trứng

gà có phôi 9-11 ngày tuổi, ñặc tính này ñược ứng dụng ñể nuôi cấy và phân lập virus từ bệnh phẩm Khi nuôi cấy trên phôi gà, những chủng virus Newcastle có ñộc lực mạnh gây chết phôi tử 20-48 giờ kể từ khi gây nhiễm, những chủng ñộc lực trung bình và yếu thời gian gây chết phôi trên 60 giờ

Mổ khám những phôi chết thấy bệnh tích xuất huyết tổ chức liên kết dưới da vùng ñầu, cổ, toàn thân, màng phôi thuỷ thũng sưng dày lên

- Trên tế bào phôi gà:

Các chủng virus Newcastle ñều phát triển trên môi trường tế bào và gây hiện tượng bệnh lý tế bào (Cytophathic efect -CPE) Hệ thống tế bào thường dùng là tế bào phôi gà, thận gà một lớp (Beach, 1984)

Chandra và Kumar (1972) ñã nhân virus Newcastle trên tế bào phôi gà thấy hiện tượng kết dính, sau 1-2 giờ tế bào bị co lại, ñến 48 giờ bị thoái hoá cuối cùng tế bào một lớp hoàn toàn bị phá huỷ Như vậy, sau khi tế bào hấp thụ virus, màng virus hoà hợp với màng tế bào, nucleo capsit và chui vào tế bào Virus nhân lên trong tế bào chất, ñạt tối ña lúc 5-6 giờ

Sự hình thành ñầu tiên là kháng nguyên NP (phospho Nucleopotein) ở trong tế bào chất gần nhân tế bào (Rott, 1964), sau ñến kháng nguyên ngưng kết hồng cầu và neuramidaza ở khắp tế bào chất, 4 giờ sau ở bên trong màng

tế bào xuất hiện những cấu trúc giống như virion thành thục

- Trên ñộng vật thí nghiệm: có thể dùng gà dò ñể tiêm truyền nuôi cấy,

virus phát triển và gây bệnh cho gà như gà mắc bệnh tự nhiên

* ðộc lực của virus Newcastle

Virus Newcastle ñược phân lập ở nhiều nước trên thế giới, chúng có mức ñộ ñộc lực và khả năng gây bệnh khác nhau ðể thống nhất cách ñánh giá các chủng virus phân lập, tổ chức FAO (Allan H Lancaster JE và Toth B, 1978), ñã chuẩn hoá cách ñánh giá theo mức ñộ dộc lực và phân virus thành 3 nhóm sau:

- Nhóm Velogen: Là các chủng cường ñộc, có ñộc lực cao ðây là

những chủng virus gây ra bệnh Newcastle trong tự nhiên hay còn gọi là virus Newcastle ñường phố

- Nhóm Mesogen: Gồm những chủng có ñộc lực vừa, chúng chỉ có thể

gây bệnh nặng ở gà con nhưng chỉ gây bệnh nhẹ ở những gà trên 6 tuần tuổi

Ví dụ: Chủng HH (erfoshire); chủng (MMukteswar)

Hầu như các chủng virus Newcastle thuộc nhóm Mezogen ñều ñược tạo

ra bằng phương pháp nhân tạo như tiếp truyền liên tếp nhiều ñời qua phôi gà

Người ta thường dùng các chủng virus này chế tạo vacxin ñể tiêm phòng bệnh cho gà gọi là vacxin Newcastle hệ I

- Nhóm Lentogen: Gồm những virus có ñộc lực thấp, chúng không có

khả năng gây bệnh hoặc chỉ gây bệnh nhẹ ở gà con dưới 1 tuần tuổi

Ví dụ: Chủng Lasota, chủng B1, chủng V4…

ðây là các chủng virus yếu tự nhiên và có thể xâm nhập qua niêm mạc

gà Người ta dùng chế vacxin ñể phòng bệnh cho gà con dưới 2 tháng tuổi và gọi là vacxin hệ II

* ðể ñánh giá ñộc lực của Virus Newcastle, theo FAO Food Agriculture Organization (Tổ chức lương thực thế giới) cần căn cứ vào các chỉ số sau ñây:

Bảng 1.1 Tiêu chuẩn ñánh giá ñộc lực của virus Newcastle (FAO)

- MDT (Mean Death Time-hr): Chỉ số thời gian gây chết phôi trung bình

phôi gà với liều gây chết nhỏ nhất của virus

- EID50 (Embryo Infective Dose): Chỉ số liều gây nhiễm cho 50% phôi gà

- ICPI (Intra-Cerebral-Pathogenicity-Index in day-old chicks): Chỉ số gây chết khi tiêm vào não gà con một ngày tuổi

- IVPI (Intra-Venous-Pathogencity-Index in 6-week-old chickens): Chỉ

số gây chết khi tiêm vào tĩnh mạch gà 6 tuần tuổi

- Các chủng virus Newcastle có ICPI ≥ 1,6 và IVPI có giá trị gần bằng 3 thì ñược xếp vào nhóm Velogen

* Sức ñề kháng của virus Newcastle

Sức ñề kháng của virus Newcastle ñược xác ñịnh bằng khả năng gây nhiễm của virus, tính ngưng kết hồng cầu, tính gây miễn dịch Các khả năng này bị phá huỷ khi tiếp xúc trực tiệp với các yếu tố như nhiệt ñộ, ánh sáng, tia

tử ngoại, quá trình oxy hoá, ñộ PH của môi trường Do virus có vỏ bọc ngoài

là Lipit nên rất mẫn cảm với các chất hoá học như ete, cồn, clorofoc, formol

và phênol, làm mất khả năng gây nhiễm nhưng không làm ảnh hưởng tới khả năng sinh miễn dịch của virus

Virus bị tiêu diệt ở 600C trong 30 phút, 1000C trong 1 phút, 4-200C virus

có thể tồn tại hàng tháng, ở nhiệt ñộ âm virus có thể tồn tại hàng năm

PH < 2 hoặc PH > 10 làm virus mất khả năng gây nhiễm

Ánh sáng mặt trời có thể chiêú thẳng diệt virus trong 48 giờ nhưng ánh sáng của tháng 5-6 làm virus mất hoạt tính hoàn toàn trong 1 giờ

Với hoá chất như dung dịch xút 0,5% phá huỷ sau 30 phút, formol 1-2% phá huỷ trong 30 phút, lizon sau 20 phút…

1.2.3 Truyền nhiễm học

* Dịch tễ học

- Loài vật mắc bệnh

+ Gà mọi nòi giống, mọi lứa tuổi ñều mắc bệnh

+ Gà con nở ra từ những trứng của gà mẹ khỏi bệnh hoặc ñược tiêm phòng vacxin thì có sức ñề kháng với bệnh trong vài tuần lễ ñầu Tuy nhiên những trứng gà này chỉ có thể có kháng thể từ ngày ấp thứ 15 do kháng thể ñi vào máu, còn từ ngày thứ 15 trở về trước những trứng này cũng cảm thụ với bệnh như những trứng bình thường khác

+ Trong thiên nhiên bồ câu, chim sẻ, chim cút và một số loài chim khác cũng cảm thụ với bệnh

+ Vịt và ngỗng có thể bị nhiễm bệnh nhưng không hoặc ít biểu hiện triệu chứng lâm sàng, mặc dù có thể mắc với chủng gây chết cho gà

- ðường xâm nhập và cách thức lây lan

Theo (Alexander 1988), virus có trong thức ăn, nước uống, phân theo ñường tiêu hoá (miệng, hầu, thực quản) hoặc qua không khí theo ñường hô hấp khi gia cầm hít thở sẽ xâm nhập vào cơ thể gây bệnh

Mức ñộ truyền lây phụ thuộc vào ñộc lực của virus ñường xâm nhập, liều lượng lây nhiễm và sức ñề kháng của gia cầm

Việc truyền lây còn qua ñường vận chuyển các sản phẩm của gia cầm như thịt, xác chết, phân thải, thức ăn thừa hoặc tiếp xúc giữa các gia cầm nuôi với chim hoang dã

Khả năng truyền dọc từ trứng nhiễm bệnh ở ñường sinh dục mẹ chưa rõ ràng (Beard và Hanson, 1984) Gà mái nhiễm virus Newcastle chủng Velogen

có thể ngừng ñẻ nhưng gà mái nhiễm chủng Lentogen và có miễn dịch vẫn tiếp tục ñẻ Phôi nhiễm bệnh trước khi nở thường bị chết, nhưng vẫn có thể nở khi virus không có ñộc lực (French và cộng sự, 1967)

Trên bề mặt trứng nhiễm virus Newcastle thì sau khi nở, gà có thể mắc bệnh do virus từ phân bám vào vỏ trứng và sống trong thời gian ấp trứng Bệnh xảy ra quanh năm nhưng thường tập trung vào vụ ñông xuân Bệnh lây lan nhanh và mạnh Tỷ lệ ốm và tỷ lệ chết cao

- Chất chứa và bài xuất virus

Trong cơ thể gà bệnh, hầu hết các cơ quan phủ tạng ñều chứa virus Thường 44 giờ sau khi nhiễm có thể tìm thấy virus ở thận, lách, túi Fabricius, ñường hô hấp, tụy và não Máu chứa virus nhưng không thường xuyên

Virus ñược bài xuất qua phân, nước mắt, nước mũi Cơ thể bài xuất virus bắt ñầu từ 20 -24 giờ trước khi xuất hiện triệu chứng lâm sàng và kéo dài suốt thời kỳ bệnh cho ñến khi ra khỏi hoặc chết Gà lành bệnh trở thành vật mang trùng và bài xuất virus ra môi trường xung quanh trong khoảng 2 tuần có khi kéo dài ñến 5 tuần (Lancaster, 1966)

- Cơ chế sinh bệnh

Thông thường virus theo ñường tiêu hoá xâm nhập vào cơ thể, qua niêm mạc hầu họng rồi vào máu gây huyết nhiễm trùng Cũng trong thời gian ñó

căn bệnh ñi vào hầu hết các cơ quan tổ chức của cơ thể gây ra viêm hoại tử Nội mô thành huyết quản bị phá hoại, gây xuất huyết làm thâm nhiễm dịch thẩm xuất vào các cơ quan trong cơ thể

Virus tác ñộng gây rối loạn tuần hoàn và tác ñộng vào trung khu hô hấp của hệ thầnh kinh trung ương gây hiện tượng khó thở nghiêm trọng

Tuỳ thuộc vào từng chủng virus và ñộc lực của chúng mà bệnh có thể ở

dạng quá cấp tính, cấp tính hay mạn tính

1.2.4 Các thể bệnh Newcastle

Dựa vào ñặc tính sinh học và ñặc ñiểm gây bệnh của mỗi chủng, bệnh

ñược chia thành 5 thể khác nhau (Beard và Hanson, 1984)

*Thể Doyle (Viscerotropic Velogenic): Là thể ñược Doyle nhận ra ñầu

tiên vào năm 1927, gây ra bởi chủng Velogen Bệnh ở thể cấp tính gây chết nhiều ở gà mọi lứa tuổi, tỷ lệ chết cao từ 90-100% Bệnh tích ñặc trưng là

xuất huyết ñường tiêu hoá

* Thể Beach (Neurotropic Velogenic): Là thể bệnh ñược Beach phát

hiện vào năm 1942, gây ra bởi chủng Velogen Bệnh ở thể cấp tính, gây chết nhanh ở gà mọi lứa tuổi, gây bệnh tích ở hệ hô hấp và thầnh kinh mà không

gây bệnh tích ở hệ tiêu hoá Thể bệnh này ñược gọi là bệnh hô hấp thần kinh hoặc Pneumoencephatitis

* Thể Beuaudette (Mesogenic): Là thể bệnh ñược Beaudette mô tả vào

năm 1946, bệnh biểu hiện hô hấp cấp tính, gây triệu chứng thần kinh ñối với gia cầm non và gây chết, nhưng ít gây chết ñối với gia cầm trưởng thành Virus gây ra thể bệnh này thuộc chủmg Mesogen, do ñó có thể dùng ñể chế

vacxin

* Thể Hitchner (Respiratory): Bệnh gây ra bởi virus nhóm Lentogen

như chủng B1, F, Lasota Thể bệnh ñược Hitchner diễn tả năm 1948 Bệnh

nhẹ không biểu hiện rõ triệu chứng hô hấp

* Thể ñường ruột (Asymptomatic enteric): Thể nhiễm ñường tiêu hoá

không có triệu chứng lâm sàng Virus có thể phân lập từ phân, dạ dày gà bệnh

(French và cộng sự,1967) ðây là chủng có ñộc lực thấp như Lister -20C, V4, nên có thể dùng chế vacxin

1.2.5 Triệu chứng lâm sàng

Thời gian nung bệnh thường từ 3-5 ngày, cá biệt chỉ có 2 ngày nhưng cũng có trường hợp dài hơn một tuần Bệnh tiến triển theo 3 thể chính: Thể quá cấp tính, thể cấp tính và thể mạn tính

* Thể quá cấp tính: Thường chỉ xuất hiện ở ñầu ổ dịch, bệnh tiến triển

rất nhanh, con vật ủ rũ cao ñộ sau vài giờ thì chết

* Thể cấp tính: ñây là thể bệnh phổ biến:

Trong ñàn gà xuất hiện một số con ủ rũ, kém hoạt ñộng, bỏ ăn, lông xù lên, cánh xoã ra như khoác áo tơi Gà con chậm chạp ñứng chụm lại thành ñám, gà lớn thích ñứng một mình, con trống thôi gáy con mái ngừng ñẻ Nền chuồng thấy nhiều bãi phân trắng như cứt cò Gà sốt cao 42,5 -430C Gà khó thở, chảy nước mũi màu ñỏ nhạt hay trăng xám hơi nhớt, gà bệnh hát hơi vẩy

mỏ liên tục thường kêu thành tiếng “toác toác”

Gà bị rối loạn tiêu hoá trầm trọng: Bỏ ăn, uống nước nhiều, khi cầm chân dốc ngược lên mồm sẽ chảy ra một nước nhớt mùi chua khắm Bệnh kéo dài vài ngày thì sinh ỉa chảy màu trắng xám, lông ñuôi dính bết phân, niêm mạc hậu môn xuất huyết có những tia máu ñỏ Mào yếm tím bầm Gà chết sau vài ba ngày và tỷ lệ chết có thể lên ñến 100%

* Thể mạn tính: Biểu hiện bệnh là rối loạn thần kinh trung ương Cơ

năng chuyển ñộng bất thường do tổn thương tiểu não như: vặn ñầu ra sau, ñang ñi bỗng dừng lại, ñi giật lùi, ñi vòng tròn, mổ không trúng thức ăn, bị kích thích bởi tiếng ñộng thì ngã lăn ra ñất…Gà ñẻ tỷ lệ ñẻ giảm, bệnh kéo dài vài tuần

1.2.6 Bệnh tích

* Thể quá cấp tính: Bệnh tích thường khơng rõ ràng, đơi khi chỉ thấy

những xuất huyết ở ngoại tâm mạc, màng ngực và niêm mạc đường hơ hấp

* Thể cấp tính: Xác chết gầy, mào yếm tím bầm Xoang mũi và miệng

chứa nhiều dịch nhớt màu đục, niêm mạc miệng, hầu, họng, khí quản xuất huyết, viêm và phủ màng giả fibrin Một số trường hợp quan sát thấy tổ chức liên kết vùng đầu, cổ, hầu bị phù thũng, thấm nhiễm dịch thẩm xuất màu vàng

dễ đơng như gelatin

Bệnh tích điển hình thường tập trung ở đường tiêu hố: Niêm mạc dạ dày tuyến xuất huyết thành những chấm màu đỏ trịn to bằng đầu đinh ghim, mỗi điễm tương ứng với một lỗ đổ ra của tuyến tiêu hố Nhiều trường hợp xuất huyết thành vệt ở đoạn đầu và cuối của cuống mề

Loét ở niêm mạc ruột non Vết loét cĩ thể nhìn thấy từ mặt ngồi cĩ hình trịn, hình trứng hay hình hạt đậu, cĩ màu mận chín Mổ ra thấy vết loét dày cộm lên trên bề mặt niêm mạc màu nâu dễ bĩc Cĩ khi nốt loét giống như hình cúc áo, các vết loét này cĩ thể lan tới ruột già Ngồi ra ở hậu mơn cĩ xuất huyết lấm tấm màu đỏ

Lách khơng sưng, gan cĩ đám thối hố mỡ màu vàng nhạt, thận hơi sưng, dịch hồn, buồng trứng xuất huyết thành vệt, từng đám Trứng non bị

vỡ lịng đỏ tích đầy trong xoang bụng

1.2.7 Chẩn đốn bệnh

* Dựa vào triệu chứng lâm sàng và bệnh tích mổ khám để chẩn đốn bệnh

- Bệnh gây ra bởi chủng Velogen là virus cĩ độc lực cao, thường ở thể quá cấp tính Bệnh xảy ra nhanh chĩng, gia cầm chết bất thình lình, khơng biểu hiện triệu chứng lâm sàng ðiển hình của bệnh là bỏ ăn, ủ rũ, ỉa chảy, phù đầu, thần kinh co thắt và cĩ hội chứng hơ hấp.Tỷ lệ chết cao, cĩ thể lên tới 100% ở

gà, 30% - 70% ở bồ câu, 90% ở cút hậu bị và 50% ở cút trưởng thành

- Bệnh gây ra bởi chủng Mesogen là chủng có ñộc lực vừa thì bệnh biểu hiện hô hấp nghiêm trọng, sau ñó có triệu chứng thần kinh Tỷ lệ chết ở gà có thể lên tới 50% hoặc hơn

- Bệnh gây ra bởi chủng Lentogen là virus có ñộc lực thấp thường không gây bệnh ở gia cầm trưởng thành, còn ở gia cầm non thể hiện bệnh nhẹ ở ñường hô hấp

* Phân lập virus:

Bệnh phẩm ñể phân lập virus là phân, các chất chứa trong ống tiêu hoá,

hô hấp, ổ nhớp, các cơ quan phủ tạng và não của gia cầm sống hoặc chết Xử

lý bệnh phẩm, huyễn dịch thu ñược tiêm cho phôi trứng 9-11 ngày tuổi Trứng ñược ấp tiếp ở nhiệt ñộ 370C, theo dõi trứng từ 5 -7 ngày, thu hoạch nước trứng và kiểm tra bằng phản ứng HA, HI ñể xác ñịnh virus phân lập là virus Newcastle hoặc không

* Xác ñịnh ñộc lực của virus Newcastle:

Virus Newcastle có thể ñược phân lập từ những gia cầm có hoặc không

có dấu hiệu lâm sàng Theo OIE (2008), FAO (1978) ñể ñánh giá tính ñộc lực của chủng virus phân lập, phải xác ñịnh các chỉ số sinh học MDT, ICPI, IVPI như sau:

Xác ñịnh thời gian trung bình gây chết phôi MDT (Mean death time): Virus phân lập, tiêm cho trứng gà có phôi từ 9 -10 ngày tuổi Thời gian trung bình gây chết phôi ñược tính ở ñộ pha loãng cao nhất làm chết 100% số phôi Thời gian trung bình gây chết phôi của các chủng virus Newcastle ñược phân vào 3 nhóm:

Virus phân lập từ nước trứng ñược tiêm vào não gà con 1 ngày tuổi Chỉ số ñược tính theo ñiểm quy ñịnh cho biểu hiện bệnh Chủng có ñộc lực cao như Velogen IVPI tiến gần ñến 2,0, chủng có ñộc lực thấp như Lentogen tiến dần tới 0,0

Bảng 1.2 Chỉ số ñộc lực của một số chủng virus Newcastle

những virus độc lực cao, giá trị IVPI gần đến 3,0 trong khi đĩ chủng Mesogen

và Lentogen cĩ giá trị gần bằng 0,0

* Chẩn đốn Virus học

- Gây bệnh thí nghiệm: Lấy bệnh phẩm là não, gan, lách, phổi của gà bệnh mới chết, nghiền hồ với nước sinh lý thành huyễn dịch 20% Lọc, ly tâm, bố sung kháng sinh để diệt tạp khuẩn Tiêm cho gà con, hoặc gà dị chưa đuợc tiêm vacxin Liều lượng 1ml vào dưới da hay bắp thịt Sau 3-5 ngày xuất hiện các triệu chứng bệnh Sau 7-10 ngày mổ khám thấy bệnh tích giống như

gà mắc bệnh tự nhiên

- Gây bệnh cho phơi: Dùng huyễn dịch bệnh phẩm trên tiêm cho 5 phơi gà

từ 9-11 ngày tuổi vào xoang niệu mơ, mỗi phơi 0,2ml, tốt nhất là lấy phơi gà của đàn gà SPF (specific – pathogen – free) hoặc gà khơng cĩ kháng thể Newcastle Sau đĩ ấp tiếp trong tủ ấm 370C Virus Newcastle cường độc thường gây chết phơi sau 4-7 ngày, thu hoạch lấy nước trứng, kiểm tra bằng phản ứng HA, nếu bệnh phẩm cĩ virus Newcastle thì phản ứng HA là dương tính

- Gây nhiễm cho mơi trường tế bào: Thường sử dụng mơi trường tế bào

xơ phơi gà 1 lớp Nếu bệnh phẩm cĩ virus sau 72 giờ gây nhiễm thì virus gây bệnh tích tế bào

* Chẩn đốn huyết thanh học: Cĩ thể sử dụng nhiều phản ứng khác

nhau như; Phản ứng AGP, Elisa, phản úng ngăn trở ngưng kết hồng cầu (HI) , phản ứng trung hồ…để phát hiệnh bệnh Newcastle Ngồi ra cịn sử dụng kỹ thuật RT – PCR, kỹ thuật hố mơ miễn dịch trong chẩn đốn bệnh Newcastle

* Chẩn đốn phân biệt:

- Chẩn đốn phân biệt với bệnh Cúm gia cầm

Các biểu hiện lâm sàng của bệnh cúm gia cầm rất giống bệnh Newcastle với các biểu hiện bệnh: Ỉa chảy nhiều, ho hen, thần kinh, tốc độ lây lan nhanh,

tỷ lệ chết cao, giảm đẻ nhanh… Khi mổ khám thấy viêm, xuất huyết dạ dày tuyến, ruột, tá tràng, niêm mạc hậu mơn, viêm buồng trứng, ống dẫn trứng Nhưng ở bệnh cúm gia cầm cịn cĩ những biến đổi đặc thù của bệnh như:

Mào tắch thâm tắm, phù nề, xuất huyết và hoại tử (với gà trưởng thành) Gà cũng có dãi chảy ra từ miệng, có xuất huyết ở khắ quản gà mắc bệnh bị xuất huyết mỡ bụng, mỡ màng treo ruột, mỡ vành tim Thấy có xuất huyết cơ ựùi,

cơ ngực, cơ tim và cơ màng treo ruột

1.2.8 Miễn dịch bệnh Newcastle

Khi kháng nguyên (virus, vi trùngẦ) xâm nhập vào cơ thể, sẽ kắch thắch

cơ thể sản sinh ựáp ứng miễn dịch ựặc hiệu ựể chống lại chúng

Miễn dịch ựặc hiệu ựược chia làm 2 loại: Miễn dịch dịch thể và miễn dịch qua trung gian tế bào

đối với bệnh Newcastle, khi virus xâm nhập vào cơ thể sẽ kắch thắch co thể sinh ra ựáp ứng miễn dịch dịch thể Burnet (1942) là người ựầu tiên phát hiện ra tắnh gây ngưng kết của virus Newcastle và kháng thể ựặc biệt gây ức chế hiện tượng này

Trong cơ thể, có 2 nhóm tế bào lympho chủ yếu tham gia vào quá trình ựáp ứng miễn dịch, các tế bào này có chức năng khác nhau

- Nhóm tế bào lympho T: Nhóm tế bào phụ thuộc tuyến ức

- Nhóm tế bào lympho B: Nhóm tế bào phụ thuộc túi Fabricius

Trong thời gian gần ựây, lĩnh vực kháng thể ựơn dòng ựã ựược sử dụng rộng rãi ựể nghiên cứu phân biệt các chủng virus Newcastle khác nhau (Irrio

và Brrat, 1983)

Meulemans và cộng sự (1987) ựã mô tả, MAB7D4 chỉ kết hợp với Lasota mà không kết hợp với Hichner B1 hoặc Ulster bởi phản ứng HI

* Miễn dịch trung gian tế bào:

đáp ứng miễn dịch ựầu tiên khi nhiễm virus Newcastle là miễn dịch trung gian tế bào Miễn dịch này có thể ựược phát hiện sớm, khoảng 2-3 ngày sau khi nhiểm chủng virus vacxin sống (Timms, Alexander, 1977) điều này ựã giải thắch khả năng bảo vệ sớm của cơ thể chống lại virus Newcastle trước khi kháng thể dịch thể ựược xác ựịnh (Alexander, 1997)

Tầm quan trọng của miễn dịch trung gian tế bào ñối với việc bảo hộ của vacxin ở lần 2 không thể hiện rõ

* Miễn dịch dịch thể:

Sự hình thành kháng thể ức chế ngưng kết là kháng thể trực tiếp chống lại kháng nguyên bề mặt (Glucoprotein HN-F) có thể trung hòa virus Newcastle (Russell, 1988)

Kháng thể thường xuất hiện vào ngày thứ 4 -5 sau khi bị kích thích bởi kháng nguyên virus tự nhiên hoặc vacxin Mức ñộ kháng thể phụ thuộc phần lớn vào chủng nhiễm Kháng thể tăng dần, cao nhất vào tuần 3 – 4, sau không tăng nữa

Nếu không nhận ñược kích thích lại của kháng nguyên thì kháng thể trong máu sẽ giảm dần (Spradbrow, 1987) Kháng thể có thể tồn tại trong máu khoảng 1 năm ở gia cầm ñã ñược hồi phục, hoặc sau khi tạo miễn dịch với vacxin Cơ thể ñược tái nhiễm, ñáp ứng miễn dịch lần 2 sẽ xảy ra mạnh và chắc chắn hơn lần ñầu (Allan, 1978)

* Miễn dịch thụ ñộng:

Heller and Nathan (1977), kháng thể ở mẹ chống bệnh Newcastle ñược truyền cho ñời sau qua túi lòng ñỏ, ñi vào máu trong quá trình phát triển của phôi Mức ñộ kháng thể ở gà con 1 ngày tuổi có liên quan trực tiếp với hàm lượng kháng thể của mẹ Hàm lượng kháng thể thụ ñộng cao hoặc thấp khác nhau ở gà con một ngày tuổi có ý nghĩa quan trọng ñối với gà con trong tuần

lễ ñầu Kháng thể thụ ñộng giảm dần ñến tuần thứ 4 thì hầu như không phát triển nữa Vì vây vệc kiểm tra kháng thể thụ ñộng của gà con là cần thiết ñể xác ñịnh thời ñiểm vacxin lần ñầu

1.2.9 Vacxin và phòng bệnh bằng vacxin

* Khái niệm vacxin

Khái niệm “Vacxin” ñược bắt nguồn từ chữ latin “Vacca” có nghĩa là

“bò cái” Nhờ có vacxin phòng bệnh ñã cứu hàng triệu người không chết vì bệnh ñậu mùa, bệnh dại, bệnh lao, Nhiều bệnh truyền nhiễm, nguy hiểm ñối với con người và ñộng vật ñược khống chế và từng bước ñược loại trừ khỏi từng phần Tuy nhiên, cuộc ñấu tranh với bệnh tật, ñặc biệt là bệnh truyền nhiễm ñể bảo vệ sức khoẻ của con người và ñộng vật vẫn còn khá gay go, phức tạp, cho nên việc nghiên cứu, chế tạo các loại vacxin mới và cải tiến nâng cao hiệu lực phòng bệnh các loại vacxin ñã có, vẫn còn ñòi hỏi các nhà khoa học phải quan tâm

* Những yêu cầu về chất lượng vacxin

Vacxin phải có một số tính chất (hoá, lý, kháng nguyên) nhất ñịnh, sau khi ñưa vào cơ thể gia súc, gia cầm một liều lượng chuẩn sẽ tạo cho chúng một sức miễn dịch chủ ñộng chống lại bệnh Một vacxin ñáng tin cậy, thuần khiết, an toàn, có hiệu lực và hiệu quả là nhu cầu tối thiểu ñể duy trì sức khoẻ ñộng vật và là hoạt ñộng thành công của những chương trình bảo vệ sức khoẻ ñộng vật Miễn dịch cho gia súc, gia cầm bằng những vacxin có chất lượng cao là phương tiện chủ yếu ñể khống chế dịch bệnh Mặt khác vacxin còn ñược sử dụng trong các chương trình khống chế, thanh toán bệnh dịch trong một quốc gia (OIE, 2008)

Xác ñịnh ñộ thuần khiết, an toàn, hiệu lực và hiệu quả của mỗi loại vacxin theo các phương pháp khác nhau nhưng cơ bản phải ñảm bảo ñưa ra một sản phẩm có hiệu lực chắc chắn, chất lượng cao Bên cạnh ñó, người sử dụng vacxin phải có một kiến thức và hiểu biết về mầm bệnh, ñặc ñiểm dịch

tễ của bệnh cũng như khả năng phòng chống bệnh của vacxin ñược sử dụng Một trong những ñiều kiện ñưa tới thành công của việc khống chế bệnh là phải có một vacxin phòng bệnh ổn ñịnh, bền vững và ñạt chất lượng cao về mọi mặt

*Cơ sở của việc tiêm phịng bằng vacxin

Nguyên lý của việc tiêm phịng bằng vacxin là gây ra trong cơ thể sống một đáp ứng chủ động của hệ thống miễn dịch nhằm tạo ra kháng thể dịch thể hay tế bào chống lại những nhĩm quyết định kháng nguyên của yếu tố cĩ khả năng gây bệnh và nhờ đĩ làm mất khả năng này Biện pháp tiêm phịng bằng vacxin đã mang lại cho y học, thú y học những thành tựu lớn trong phịng bệnh do virus và vi khuẩn gây ra

Gần đây, do sự hiểu biết về lý thuyết miễn dịch, sự khơng ngừng cải tiến trong kỹ thuật chẩn đốn, sự phát triển liên tục của những sản phẩm mới

và phương thức sử dụng vacxin mới đã làm cho việc phịng bệnh bằng vacxin được giải quyết một cách hồn thiện

Tiêm phịng bằng vacxin đĩng vai trị cĩ ích nhưng nĩ khơng phải

là thuốc trị bệnh và càng khơng thể thay thế cho việc chăm sĩc con vật thường ngày

Cơ sở của việc tiêm phịng bằng vacxin là phải nhận thức được vacxin khơng loại trừ mối đe doạ nào của tất cả các bệnh truyền nhiễm do virus, vi khuẩn gây ra, vacxin chỉ cĩ ích trong việc giúp con vật tránh sự tấn cơng ồ ạt của những dịch bệnh nghiêm trọng Tiêm phịng bệnh bằng vacxin cĩ tác dụng duy trì sức khoẻ đối với cả một quần thể gia súc, gia cầm và ít cĩ ý nghĩa phịng trước mắt cho một cá thể

ðể tiêm phịng cĩ hiệu quả, việc chọn thời điểm sử dụng vacxin là vơ cùng quan trọng Những trường hợp sử dụng vacxin một cách vội vã trong khi thơng tin về những vacxin này khơng đầy đủ gây nên sự bất lợi cho việc nghiên cứu lưu hành bệnh trong đàn, bởi vì khi đã dùng vacxin rồi thì việc phân biệt kháng thể do tiêm vacxin kích thích tạo ra hay kháng thể do bản thân gia súc đã nhiễm bệnh mà cĩ rất khĩ khăn, đặc biệt là trong trường hợp

sử dụng vacxin virus nhược độc

Vì vậy, muốn sử dụng vacxin có hiệu quả, hạn chế ñược tổn thất do dịch bệnh gây ra, người sử dụng vacxin phải có sự hiểu biết về các bệnh truyền nhiễm cũng như dịch tễ học của bệnh

Việc thành công trong tiêm phòng bằng vacxin không chỉ phụ thuộc vào vacxin mà bên cạnh ñó các biện pháp vệ sinh cần ñược tiến hành ñồng thời Cải thiện ñiều kiện sinh thái, vệ sinh chuồng trại, vệ sinh môi trường xung quanh sẽ góp phần ñáng kể vào việc làm giảm tỷ lệ nhiễm bệnh và tăng tác dụng của việc dùng vacxin phòng bệnh

* Một số vacxin phòng bệnh Newcastle ñang lưu hành tại Việt Nam

Việc sử dụng vacxin phòng bệnh Newcastle cho gà là vấn ñề quan tâm của nhiều nhà khoa học Cho ñến nay, có rất nhiều loại vacxin có chất lượng tốt, giá trị sử dụng cao, ñược sử dụng rộng rãi ở các quốc gia ñể phòng bệnh cho gà Những vacxin này có thể ñược chế tạo ở dạng sống (nhược ñộc) hay dạng chết (vô hoạt), có thể ở dạng ñơn giá (chỉ có một thành phần kháng nguyên) hay ở dạng ña giá (kết hợp nhiều thành phần kháng nguyên),

Hiện nay, tại Việt Nam vacxin phòng bệnh Newcastle có thể ñược sản xuất trong nước hay nhập khẩu từ nước ngoài và có rất nhiều chủng loại khác nhau:

Xí nghiệp thuốc thú y Trung ương ñã sản xuất vacxin Newcastle nhược ñộc ñông khô ñược sử dụng phòng bệnh Newcastle cho gà trên 2 tháng tuổi theo ñường tiêm bắp hoặc tiêm dưới da, vacxin LaSota nhược ñộc ñông khô phòng bệnh Newcastle cho gà dưới 2 tháng tuổi theo ñường nhỏ mắt, nhỏ mũi

và cho uống

Công ty TNHH một thành viên thuốc thú y trung ương (Navetco) có vacxin Newcastle hệ F phòng bệnh Newcastle cho gà từ 1 ngày tuổi theo ñường nhỏ mắt, nhỏ mũi và cho uống, Vacxin La Sota phòng bệnh Newcastle cho gà từ 2 tuần tuổi trở lên theo ñường nhỏ mắt, nhỏ mũi và cho uống, vacxin Newcastle hệ M phòng bệnh Newcastle gà cho gà trên 2 tháng tuổi theo ñường tiêm dưới da hoặc bắp thịt Vacxin Newcastle chịu nhiệt là vacxin

nhược ñộc ñông khô ñược sản xuất từ virus Newcastle chủng AVF/HR-NDV phòng bệnh Newcastle cho gà khoẻ mạnh ở mọi lứa tuổi theo các ñường khác nhau như nhỏ mắt, nhỏ mũi, cho uống, cho ăn

Ngoài hai công ty sản xuất vacxin chính, tại Việt nam còn hai cơ sở sản xuất vacxin khác ñó là Phân viện thú y Miền trung và Xưởng sản xuất thực nghiệm thuốc thú y - Trực thuộc Viện thú y Quốc gia Hai cơ sở sản xuất vacxin này có các sản phẩm vacxin phòng bệnh Newcastle cho gà: Vacxin

La Sota phòng bệnh Newcastle cho gà từ 10 ngày tuổi theo ñường nhỏ mắt, nhỏ mũi và cho uống Vacxin LaSota chịu nhiệt phòng bệnh Newcastle cho gà mọi lứa tuổi theo ñường nhỏ mắt, nhỏ mũi, cho uống hoặc cho ăn

Các vacxin nhập khẩu phòng bệnh Newcastle cho gà hiện ñang lưu hành tại Việt Nam rất ña dạng và phong phú cả về số lượng và chủng loại Các sản phẩm nhập khẩu ñược ñóng gói ở nhiều hình thức khác nhau Có thể

ở dạng ñơn giá, nhược ñộc như: Nobilis ND Hichner của công ty Intervet – Hà Lan; Newcastle B1 type La Sota strain, Newcastle disease B1 type B1 strain của công ty Ford dodge animal health - Mỹ; Cevac New L của công ty Ceva – Phylaxia veterinary biologicals Co Ltd – Hungary, Medivac ND Lasota và Medivac ND clone 45 của công ty P.T MEDION… Có thể ñược sản xuất ở dạng ñơn giá vô hoạt như: Newcastle K (New- Vac K) của công ty Ford dodge animal health - Mỹ, Medivac ND Emulsion của công ty P.T MEDION…

Hình thức ñóng gói vacxin ña giá của các công ty nhập khẩu rất ña dạng, một lọ sản phẩm có thể là sự kết hợp của hai, ba, bốn hoặc năm thành phần kháng nguyên và có thể ở dạng nhược ñộc như Nobilis IB+ND của công

ty Intervet – Hà Lan, Newcastle La Sota + Bron Mass của công ty Ford dodge animal health - Mỹ, Newcastle Bronchitis vaccine, B1 Type của công ty Ford dodge animal health - Mỹ, Hoặc có thể ñược sản xuất ở dạng vô hoạt như Nobilis IB+G+ND, Nobilis IB multi + G+ND của công ty Intervet – Hà Lan, Medivac ND-IB-IBD Emulsion của công ty P.T MEDION – Indonexia, Cevac ND-IB-IBD K của công ty CEVASANTE ANIMALE - Pháp,

CHƯƠNG II

NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP

NGHIÊN CỨU

2.1 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU

2.1.1 Xác ñịnh một số ñặc tính sinh học của virus Newcastle cường ñộc chủng VN91 ñược lưu giữ tại Trung tâm kiểm nghiệm thuốc thú y TW1

- Xác ñịnh liều gây chết 50% phôi trứng (ELD50)

- Xác ñịnh thời gian chết phôi trung bình (MDT)

- Xác ñịnh chỉ số gây bệnh khi tiêm não gà con 1 ngày tuổi (ICPI)

- Xác ñịnh chỉ số gây bệnh khi tiêm tĩnh mạch gà 6 tuần tuổi (IVPI)

- Xác ñịnh liều gây chết 50% ñộng vật thí nghiệm (LD50)

2.1.2 Sử dụng virus Newcastle cường ñộc VN91 ñược lưu giữ tại TTKNTTYTWI ñể khảo nghiệm vacxin Avipro ND Lasota nhược ñộc, ñông khô phòng bệnh Newcastle cho gà

- Kiểm tra an toàn

- Kiểm tra hiệu lực

2.2 NGUYÊN LIỆU NGHIÊN CỨU

2.2.1 ðối tượng nghiên cứu

- Chủng virus Newcastle cường ñộc VN91 ñược lưu giữ tại

TTKNTTYTW1

- Vacxin Avipro ND Lasota nhược ñộc, ñông khô do Lohmann Animal Health GmbH & Co KG, Germany sản xuất

2.2.2 Các trang thiết bị và cơ sở vật chất

Các trang thiết bị và cơ sở vật chất của phòng Virus - Trung tâm Kiểm

nghiệm thuốc thú y Trung ương I, Cục Thú y

2.2.3 ðịa ñiểm nghiên cứu

- Phòng Virus – Trung tâm kiểm nghiệm thuốc thú y trung ương I

- Trại gà của bà Lê Thị Mơ – Thị trấn Phùng – ðan Phượng – Hà Nội

2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.3.1 Phương pháp kiểm tra ñộ vô trùng của giống

Giống virus Newcastle cường ñộc VN91 ñược kiểm tra vô trùng theo 10TCN 161 – 92 “Quy trình kiểm tra vô trùng” (Cục thú y, 1994) [2]

Giống virus ñông khô, ñược hoàn nguyên trở lại bằng nước muối sinh

lý hoặc dung dịch PBS vô trùng

Cấy huyễn dịch virus giống (lượng cấy kiểm tra bằng 1 – 2% dung tích môi trường) vào 5 loại môi trường: Thạch máu, thạch nấm, thạch thường,

nước thịtvà nước thịt gan yếm khí, mỗi loại 2 ống Môi trường ñã cấy kiểm tra ñược theo dõi 7 ngày ở 370C Riêng môi trường nấm ñể ở nhiệt ñộ phòng (25 – 300C)

2.3.2 Phương pháp kiểm tra ñộ thuần khiết của giống

* Kiểm tra tạp nhiễm mycoplasma

- Tiến hành

Giống ñược cấy kiểm tra trên môi trường canh thang PPLO với nồng ñộ

từ 1-2% giống ñã pha loãng trong 100ml môi trường và trên ñĩa thạch PPLO

có bổ sung huyết thanh ngựa và chất chiết nấm men với thể tích 0,1ml kháng thể trên 1 ñĩa

Theo dõi môi trường lỏng trong 14 ngày ở nhiệt ñộ từ 33-37oC Tại các thời ñiểm 3 ngày, 7 ngày, 10 ngày, 14 ngày lấy canh khuẩn ở môi trường lỏng trên ria cấy vào môi trường thạch PPLO (2 ñĩa) Ủ trong tủ ấm CO2 ở 37oC có 5% khí CO2, theo dõi trong 28 ngày Kết quả: Mẫu giống ñược xem là ñạt khi không có khuẩn lạc mycoplasma mọc trên môi trường kiểm tra