Nghiên cứu một số đặc tính sinh học của chủng virus dịch tả vịt nhược độc và dịch tả vịt cường độc chủng 7 69 ứng dụng chủng virus dịch tả vịt cường độc 7 69 trong kiểm nghiệm vacxin

Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… i BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI  LA THỊ HƯƠNG NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ðẶC TÍNH SINH HỌC CỦA CHỦNG VIRUS DỊCH TẢ VỊT NHƯỢC ðỘC VÀ DỊCH TẢ VỊT CƯỜNG ðỘC CHỦNG 7/69. ỨNG DỤNG CHỦNG VIRUS DỊCH TẢ VỊT CƯỜNG ðỘC 7/69 TRONG KIỂM NGHIỆM VACXIN LUẬN VĂN THẠC SĨ HÀ NỘI – 2013 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… ii BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI  LA THỊ HƯƠNG NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ðẶC TÍNH SINH HỌC CỦA CHỦNG VIRUS DỊCH TẢ VỊT NHƯỢC ðỘC VÀ DỊCH TẢ VỊT CƯỜNG ðỘC CHỦNG 7/69. ỨNG DỤNG CHỦNG VIRUS DỊCH TẢ VỊT CƯỜNG ðỘC 7/69 TRONG KIỂM NGHIỆM VACXIN CHUYÊN NGÀNH : THÚ Y Mà NGÀNH : 60.64 01.01 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC : TS. TRỊNH ðÌNH THÂU PGS. TS. NGUYỄN THỊ LAN HÀ NỘI – 2013 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… ii LỜI CẢM ƠN  ðầu tiên cho tôi ñược bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới Ban quản lý ñào tạo -Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội và các Thầy Cô giáo ñã giảng dạy tôi trong suốt thời gian học tập tại trường. Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn và sự kính trọng sâu sắc tới TS.Trịnh ðình Thâu, PGS.TS Nguyễn Thị Lan ñã giành thời gian quý báu tận tình hướng dẫn, giúp ñỡ tôi trong quá trình nghiên cứu thực hiện ñề tài và hoàn thành luận văn tốt nghiệp. Cho tôi ñược gửi lời cảm ơn chân thành tới TS.Tạ Hoàng Long - Giám ñốc Trung tâm kiểm nghiệm thuốc thú y Trung ương I, cán bộ nhân viên trong Trung tâm ñã ñộng viên, tạo mọi ñiều kiện thuận lợi cho tôi trong suốt quá trình học tập và hoàn thành ñề tài tốt nghiệp. Qua ñây tôi xin cảm ơn các bạn bè ñồng nghiệp người thân và gia ñình ñã tạo ñiều kiện về vật chất và tinh thần cho tôi trong quá trình nghiên cứu và thực hiện ñề tài. Một lần nữa tôi xin ñược bày tỏ lòng biết ơn, cảm ơn chân thành tới những tập thể, cá nhân ñã tạo ñiều kiện giúp ñỡ tôi hoàn thành luận văn này. Tác giả LA THỊ HƯƠNG Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… iii LỜI CAM ðOAN  Tôi xin cam ñoan các kết quả nghiên cứu, số liệu ñược trình bày trong luận văn là trung thực và chưa từng ñược ai công bố trong bất cứ công trình nào khác cũng như chưa từng ñược sử dụng ñể bảo vệ một học vị nào. Mọi sự giúp ñỡ cho việc thực hiện luận văn ñã ñược cảm ơn và các thông tin trích dẫn trong luận văn ñã ñược chỉ rõ nguồn gốc. Tác giả LA THỊ HƯƠNG Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… iv MỤC LỤC Lời cảm ơn ii Lời cam ñoan iii Mục lục iv Danh mục bảng vii Danh mục hình viii Danh mục các chữ viết tắt ix MỞ ðẦU 1 Chương 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3 1.1 Lịch sử nghiên cứu bệnh dịch tả vịt 3 1.1.1 Lịch sử và phân bố bệnh 3 1.1.2 Tình hình nghiên cứu bệnh Dịch tả vịt trên thế giới. 5 1.1.3 Tình hình nghiên cứu bệnh Dịch tả vịt ở trong nước 6 1.2 Một số ñặc ñiểm của virus dịch tả vịt và bệnh dịch tả vịt 8 1.2.1 Hình thái, kích thước 8 1.2.2 Sức ñề kháng 8 1.2.3 ðộc lực 9 1.2.4 ðặc tính nuôi cấy 10 1.2.5 Truyền nhiễm học 12 1.2.6 Triệu chứng 14 1.2.7 Bệnh tích 15 1.2.8 Chẩn ñoán bệnh 16 1.2.9 Miễn dịch chống virus Dịch tả vịt 21 1.2.10 Vacxin và phòng bệnh bằng vacxin 24 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… v Chương 2 NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 2.1 ðối tượng nghiên cứu 26 2.2 Nguyên liệu nghiên cứu 27 2.2.1 Vacxin 27 2.2.2 Phôi vịt 27 2.2.3 ðộng vật thí nghiệm 27 2.2.4 Các trang thiết bị và cơ sở vật chất 27 2.2.5 ðịa ñiểm nghiên cứu 27 2.3 Nội dung nghiên cứu 27 2.3.1 Xác ñịnh ñặc tính sinh học của chủng virus Dịch tả vịt nhược ñộc ñược lưu giữ tại Trung tâm kiểm nghiệm thuốc thú y TW1 27 2.3.2 Xác ñịnh ñặc tính sinh học của chủng virus Dịch tả vịt cường ñộc 7/69 ñược lưu giữ tại Trung tâm kiểm nghiệm thuốc thú y TW1 28 2.1.3 Ứng dụng chủng virus Dịch tả vịt cường ñộc 7/69 ñể kiểm nghiệm vacxin Dịch tả vịt nhược ñộc, ñông khô do công ty Hanvet sản xuất 28 2.4 Phương pháp nghiên cứu 28 2.4.1 Phương pháp nghiên cứu một số ñặc tính sinh học chủng virus Dịch tả vịt nhược ñộc 28 2.4.2 Phương pháp nghiên cứu một số ñặc tính sinh học chủng virus Dịch tả vịt cường ñộc 7/69 31 2.4.3 Phương pháp kiểm nghiệm vacxin 33 2.3.4 Phương pháp xử lý số liệu 35 Chương 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 36 3.1 Kết quả xác ñịnh một số ñặc tính sinh học của chủng virus dịch tả vịt nhược ñộc 36 3.1.1 Kết quả xác ñịnh hiệu giá chủng virus Dịch tả vịt nhược ñộc 38 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… vi 3.1.2 Xác ñịnh chỉ số gây nhiễm trên phôi EID 50 39 3.1.4 Kết quả kiểm tra ñộ ổn ñịnh của chủng virus Dịch tả vịt nhược ñộc 42 3.2 Kết quả xác ñịnh một số ñặc tính sinh học của chủng virus dịch tả vịt cường ñộc 7/69 43 3.2.1 Kết quả xác ñịnh hiệu giá chủng virus Dịch tả vịt cường ñộc 7/69 45 3.2.2 Kết quả xác ñịnh liều gây chết 50% ñộng vật thí nghiệm (LD 50 ) 46 3.2.3 Kết quả kiểm tra ñộ ổn ñịnh của chủng virus Dịch tả vịt cường ñộc 49 3.3 Sử dụng chủng virus dịch tả vịt cường ñộc 7/69 ñể kiểm nghiệm vacxin dịch tả vịt 53 3.3.1 Kết quả kiểm tra cảm quan 53 3.3.2 Kết quả kiểm tra thuần khiết 53 3.3.3 Kiểm tra tính an toàn của vacxin 54 3.3.4 Kết quả kiểm tra hiệu lực bằng phương pháp công cường ñộc 54 KẾT LUẬN – KIẾN NGHỊ 57 1 Kết luận 57 2 Kiến nghị 57 TÀI LIỆU THAM KHẢO 58 1 TÀI LIỆU TRONG NƯỚC 58 2 TÀI LIỆU NƯỚC NGOÀI 59 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… vii DANH MỤC BẢNG STT Tên bảng Trang 2.1 Bố trí thí nghiệm kiểm nghiệm vacxin 34 3.1 Kết quả kiểm tra vô trùng của chủng virus Dịch tả vịt nhược ñộc 37 3.2 Kết quả xác ñịnh hiệu giá chủng virus Dịch tả vịt nhược ñộc 39 3.3 Kết quả xác ñịnh chỉ số EID 50 của chủng virus Dịch tả vịt nhược ñộc 40 3.4 Kết quả xác ñịnh chỉ số EID 50 của giống virus cường ñộc qua 2 ñợt thí nghiệm 41 3.5 Kết quả kiểm tra ñộ ổn ñịnh của chủng virus Dịch tả vịt nhược ñộc 42 3.6 Kết quả kiểm tra vô trùng của chủng virus Dịch tả vịt cường ñộc 7/69 44 3.7 Kết quả xác ñịnh hiệu giá chủng virus Dịch tả vịt cường ñộc 46 3.8 Kết quả xác ñịnh chỉ số LD 50 của chủng virus Dịch tả vịt cường ñộc 7/69 47 3.9 Kết quả xác ñịnh chỉ số LD 50 của chủng virus Dịch tả vịt cường ñộc 7/69 qua 2 ñợt thí nghiệm 48 3.10 Kết quả kiểm tra ñộ ổn ñịnh của chủng virus Dịch tả vịt cườn ñộc7/69 49 3.11 Kết quả công cường ñộc bằng virus Dịch tả vịt cường ñộc chủng 7/69 cho vịt sau khi sử dụng vacxin 55 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… viii DANH MỤC HÌNH STT Tên hình Trang 2.1 Chủng virus Dịch tả vịt nhược ñộc 26 2.2 Chủng Dịch tả vịt cường ñộc 7/69 26 2.3 Vacxin Dịch tả vịt nhược ñộc ñông khô 27 3.1 Gây nhiễm chủng virus Dịch tả vịt nhược ñộc trên phôi trứng 43 3.2 Hàn trứng bằng Parraffin 43 3.3 Phôi ñối chứng 43 3.4 Phôi chết sau khi gây nhiễm chủng virus Dịch tả vịt nhược ñộc 43 3.5 Gây nhiễm chủng virus Dịch tả vịt cường ñộc 50 3.6 Vịt ủ rũ sau khi gây nhiễm chủng virus Dịch tả vịt cường ñộc 50 3.7 Vịt có triệu chứng phù ñầu, mắt sưng 50 3.8 Vịt chết sau khi gây nhiễm chủng virus Dịch tả vịt cường ñộc 51 3.9 Gan xuất huyết hoại tử, tim phù thũng 51 3.10 Lách tụ huyết 51 3.11 Ruột xuất huyết 52 3.12 Lỗ huyệt xuất huyết 52 3.13 Dạ dày tuyến xuất huyết 52 3.14 Khí quản xuất huyết 53 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… ix DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Cs Cộng sự DNA Dezoxy ribonucleic acid EID 50 50% Embryo Infective Dose ELD 50 50% Embryo Lethal Dose ELISA Enzime Linked Immunosozbent Assay FAO Food and Agriculture Organisation HI Hemagglutination Inhibition test HGKTTB Hiệu giá kháng thể trung bình LD 50 50 Percent Lethal Dose OIE Office International de Epizooties PCR Polymerase Chain Reaction TTKNTTYTW1 Trung tâm Kiểm nghiệm thuốc Thú y Trung ương 1 WHO World Health Organisation [...]... tính kháng Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… 1 nguyên, ñ c tính sinh h c, ñ c l c và tính n ñ nh c a virus có th thay ñ i do nhi u y u t nh hư ng Chính vì v y chúng tôi ti n hành nghiên c u ñ tài: Nghiên c u m t s ñ c tính sinh h c c a ch ng virus D ch t v t như c ñ c và D ch t v t cư ng ñ c ch ng 7/ 69 ng d ng ch ng virus D ch t v t cư ng ñ c 7/ 69 trong. .. ki m nghi m vacxin 2 M c ñích c a ñ tài - Xác ñ nh ñư c m t s ñ c tính sinh h c c a ch ng virus D ch t v t như c ñ c, D ch t v t cư ng ñ c ch ng 7/ 69 ñư c lưu gi t i TTKNTTYTWI - K t qu c a ñ tài ñư c ng d ng trong ki m nghi m vacxin phòng b nh D ch t v t 3 Ý nghĩa khoa h c c a ñ tài Trên cơ s nghiên c u ñ c tính sinh h c c a ch ng virus D ch t v t như c ñ c, D ch t v t cư ng ñ c ch ng 7/ 69, t ñó giúp... ra b nh và lây lan nhanh nhi u nơi Các tác gi ñã ti n hành phân l p virus d ch t v t trên ñàn v t Phú Khánh Lê Văn Lãnh (1991) nghiên c u ñ c tính sinh h c c a virus vacxin d ch t v t ch ng Jansen và cho bi t virus vacxin có tính n ñ nh khi nuôi c y trên phôi gà và t bào xơ phôi gà 1 l p, ch s ELD50 bi n ñ ng trong kho ng 10-3,31/0,2 ml ñ n 10-3,36/0,2 ml, CPE50 bi n ñ ng t 10-4,36 ñ n 10-4,54 Vacxin. .. c n nhi u virus hơn và qua ñư ng mi ng c n lư ng virus l n nh t Theo Lê Huy Chính và cs (2003) cơ ch sinh b nh có th tóm lư c như sau.Khi Herpesvirus xâm nh p vào cơ th , nó s h p ph vào b m t t bào c m th nh các th th c a t bào Trong kho ng 6-8 gi ñ u tiên, virus xâm nh p vào nguyên tương t bào do s hòa màng, sau ñó là s c i v và ph c h p DNA – protein s di chuy n vào nhân t bào v t ch trong vòng... 1944 b nh x y ra n ð và tái phát vào năm 1963 Năm 1968, Jansen công b b nh x y ra Trung Qu c Khi nghiên c u v b nh này, Mukerji xác nh n ch ng virus c a n ð và ch ng virus c a Hà Lan có cùng tính ch t kháng nguyên Năm 1 976 , 1 977 b nh ñã phát ra Thái Lan gây thi t h i t i 650.000 v t (Voxapeer Suwathanaviroij, 1 978 ) Năm 1 979 ñã có báo cáo v s xu t hi n b nh d ch t v t ñàn v t tr i và v t Muscovy Trư... cho nên vi c nghiên c u, ch t o các lo i vacxin m i và c i ti n nâng cao hi u l c phòng b nh các lo i vacxin ñã có, v n còn ñòi h i các nhà khoa h c ph i quan tâm gi m t l nhi m b nh và tăng tác d ng c a vi c dùng vacxin phòng b nh * M t s vacxin phòng b nh D ch t v t ñang lưu hành t i Vi t Nam Vacxin phòng b nh d ch t v t có 2 lo i: Vacxin như c ñ c và vacxin vô ho t - Vacxin như c ñ c: Virus cư ng... i l a tu i v t, hi u l c c a vacxin cao Vacxin ñư c ch bi n dư i 2 d ng là vacxin tươi và vacxin ñông khô Vacxin tươi thư ng ñư c ñóng ña là 4 tháng Ampulle 100 li u, ch b o qu n t i kho l nh và ph i dùng không quá 6 gi khi ñã pha loãng vacxin b ng nư c sinh lý Vacxin ñông khô thì th i gian b o qu n dài hơn (kho ng 1 năm) và ít b m t hi u l c khi g p ñi u ki n b t l i Vacxin ñông khô có th ñóng Ampulle... 1.1.2.Tình hình nghiên c u b nh D ch t v t trên th gi i * Nghiên c u v mi n d ch và vacxin phòng b nh Nh ng nghiên c u v ñáp ng mi n d ch d ch th , mi n d ch t bào và xác ñ nh ñ dài c a tiêm ch ng vacxin D ch t v t qua t ng qui trình cũng ñư c nhi u tác gi nghiên c u Th c hi n tiêm phòng vacxin thương m i cho v t nhi u l a tu i và công cư ng ñ c sau tiêm ch ng 14 ngày b ng ch ng KLM7 và KPV8 K t qu... c m t ch ng virus cùng ngu n g c v i virus gây b nh và có tính n ñ nh cao Nó không nh ng ph c v cho vi c s n xu t vacxin mà còn có ý nghĩa r t quan trong trong vi c ki m tra tính hi u qu c a vacxin sau khi ñư c s d ng Hi n t i ch ng virus D ch t v t như c ñ c, D ch t v t cư ng ñ c ñang ñư c lưu gi t i Trung tâm b ng phương pháp truy n th ng, r i ñông khô và ñư c b o qu n nhi t ñ -500C Trong quá trình... như b i Trong nhân, h t virus có ñư ng kính là 93,5 nm, trong nguyên sinh ch t có ñư ng kính là 136 nm và thành th c không bào v i ñư ng kính 250 nm B ng phương pháp l c qua màng l c Hess and Dardini (1968) ñã nh n xét, virus d ch t v t như c ñ c ch ng Jansen và virus cư ng ñ c có kích thư c 150 - 250 nm 1.2.2 S c ñ kháng V i nhi t ñ , 220C virus gi m d n tính gây nhi m ñ n 30 ngày thì ch t Virus b . hành nghiên cứu ñề tài: Nghiên cứu một số ñặc tính sinh học của chủng virus Dịch tả vịt nhược ñộc và Dịch tả vịt cường ñộc chủng 7/69. Ứng dụng chủng virus Dịch tả vịt cường ñộc 7/69 trong kiểm. NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ðẶC TÍNH SINH HỌC CỦA CHỦNG VIRUS DỊCH TẢ VỊT NHƯỢC ðỘC VÀ DỊCH TẢ VỊT CƯỜNG ðỘC CHỦNG 7/69. ỨNG DỤNG CHỦNG VIRUS DỊCH TẢ VỊT CƯỜNG ðỘC 7/69 TRONG KIỂM NGHIỆM VACXIN CHUYÊN. NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ðẶC TÍNH SINH HỌC CỦA CHỦNG VIRUS DỊCH TẢ VỊT NHƯỢC ðỘC VÀ DỊCH TẢ VỊT CƯỜNG ðỘC CHỦNG 7/69. ỨNG DỤNG CHỦNG VIRUS DỊCH TẢ VỊT CƯỜNG ðỘC 7/69 TRONG KIỂM NGHIỆM VACXIN