ựộ vô trùng. điều ựó chứng tỏ giống virus ựược bảo quản rất cẩn thẩn và ựảm bảo tuyệt ựốị
*Kết quả kiểm tra ựộ thuần khiết của giống
Dùng 2 ống giống ựông khô, mỗi ống ựược hoàn nguyên 0,1ml dung dịch PBS PH 7,2 vô trùng, trộn lẫn 2 ống giống với nhaụ Thêm vào huyễn dịch trên 1,8ml dung dịch PBS PH 7,2 vô trùng ta ựược giống có ựộ pha loãng 10-1.
- Kết quả kiểm tra tạp nhiễm Mycoplasma
Lấy giống ựã pha loãng cấy vào môi trường canh thang PPLO và trên ựĩa thạch PPLO có bổ sung huyết thanh Ngựa và chất chiết nấm men, cấy 0,1ml trên 1 ựĩa thạch. để ở nhiệt ựộ 37oC theo dõi 14 ngàỵ Tại các thời ựiểm 3 ngày, 7 ngày, 10 ngày, 14 ngày lấy canh khuẩn ở môi trường lỏng ria cấy vào môi trường thạch PPLO (2 ựĩa). Ủ trong tủ ấm CO2 ở 37oC có 5% khắ CO2. Kết quả sau 18 ngày theo dõi giống kiểm tra không thấy có tạp nhiễm Mycoplasmạ
- Kết quả kiểm tra tạp nhiễm Salmonella
Dùng Sering hút giống ựã pha loãng cấy vào môi trường thạch MacConkey với nồng ựộ từ 1-2% dung tắch môi trường kiểm trạ Ủ môi trường vừa cấy giống trong tủ ở 37oC, theo dõi 48h-72h.
Qua thời gian theo dõi không thấy sự có mặt của vi khuẩn Salmonellạ Như vậy trong các môi trường kiểm tra ựều không có khuẩn lạc Mycoplasma và Salmonella mọc, chứng tỏ giống ựảm bảo ựộ thuần khiết.
3.1.1. Kết quả xác ựịnh hiệu giá virus giống Newcastle cường ựộc chủng VN91 VN91
Hiệu giá virus giống gốc là một chỉ tiêu quan trọng phải ựược xác ựịnh và ựược lưu vào hồ sơ giống gốc. Căn cứ theo hiệu giá của virus giống gốc,
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 41 giúp chúng tôi xác ựịnh ựược ựộ pha loãng, liều gây nhiễm virus trong cấy truyền ựể kiểm nghiệm và khảo nghiệm vacxin hoặc ựể nghiên cứụ
Hiệu giá virus giống Newcastle cường ựộc chủng VN91 ựược chuẩn ựộ trên phôi gà ấp 9 Ờ 11 ngày tuổi (phương pháp tiến hành ựược mô tả ở mục 2.3.4). để chuẩn ựộ hiệu giá virus chúng tôi tiến hành kiểm tra 3 lần. Kết quả xác ựịnh ựược tắnh toán theo công thức Reed and Muench (1938).
Kết quả xác ựịnh hiệu giá virus giống Newcastle cường ựộc chủng VN91 ựược trình bày ở bảng 3.2.
Bảng 3.2. Kết quả xác ựịnh hiệu giá virus giống Newcastle cường ựộc chủng VN91 Lần kiểm tra độ pha loãng virus Liều gây
nhiễm (ml) Hiệu giá virus
Hiệu giá virus trung bình 1 10-1 Ờ 10-11 0,1 109,32 ELD50/0,1 ml 2 10-1 Ờ 10-11 0,1 109,16 ELD50/0,1 ml 3 10-1 Ờ 10-11 0,1 109,25 ELD50/0,1 ml 109,24 ELD50/ 0,1 ml
Từ kết quả trong bảng 3.2 cho thấy: Qua 3 lần kiểm tra, hiệu giá virus giống Newcastle cường ựộc chủng VN91 tương ựối ổn ựịnh, dao ựộng từ 109,16 Ờ 109,32 ELD50/ 0,1ml, trung bình là 109,24 ELD50/0,1 ml. Kết quả xác ựịnh hiệu giá virus giống Newcastle cường ựộc chủng VN91 tương ựương với kết quả của Nguyễn Tiến Dũng và cộng sự, (1995). Theo tác giả, hiệu giá virus giống Newcastle cường ựộc chủng VN91 là 109,4 ELD50/0,1 ml. Như vậy, qua nhiều năm bảo quản, khi chuẩn ựộ lại, hiệu giá virus giống Newcastle cường ựộc chủng VN91 vẫn ổn ựịnh. Kết quả thu ựược cho thấy, chủng virus Newcastle cường ựộc có tắnh thắch ứng cao và ổn ựịnh trên phôi gà 9 Ờ 11 ngày tuổị Virus nhân lên trong phôi, gây chết phôi với bệnh tắch
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 42 ựặc trưng (xuất huyết toàn phôi, màng phôi thủy thũng, phù phôi). Việc bảo quản và vận chuyển không làm ảnh hưởng ựến hiệu giá của virus.
3.1.2. Kết quả kiểm tra ựộ ổn ựịnh của giống virus Newcastle cường ựộc chủng VN91
Việc kiểm tra ựộ ổn ựịnh của vi sinh vật là yêu cầu thiết yếu cho mỗi loại giống sử dụng ựể bảo tồn và lưu trữ. đánh giá sự ổn ựịnh của virus giống gốc Newcastle cường ựộc chủng VN91, bằng cách cấy chuyển liên tiếp trên phôi gà ấp 9 Ờ 11 ngày tuổi ựến ựời thứ 5. Sau mỗi ựời cấy chuyển tiến hành xác ựịnh hiệu giá virus của giống. Kết quả ựược trình bày tại bảng 3.3.
Bảng 3.3. Kết quả kiểm tra ựộ ổn ựịnh của giống virus Newcastle cường ựộc chủng VN91 Lần cấy chuyển độ pha loãng virus Liều gây
nhiễm (ml) Hiệu giá virus
Hiệu giá virus giống gốc 1 10-1 Ờ 10-11 0,1 109,16ELD50/0,1 ml 2 10-1 Ờ 10-11 0,1 109,25ELD50/0,1 ml 3 10-1 Ờ 10-11 0,1 109,39ELD50/0,1 ml 4 10-1 Ờ 10-11 0,1 109,54ELD50/0,1 ml 5 10-1 Ờ 10-11 0,1 109,32 ELD50/0,1 ml 109,24 ELD50/ 0,1 ml
Qua bảng 3.3 cho thấy:
Hiệu giá virus Newcastle cường ựộc chủng VN91 tương ựối ổn ựịnh qua 5 lần cấy chuyển, dao ựộng từ 109,16 Ờ 109,54 ELD50/0,1 ml, thấp nhất ở lần cấy chuyển thứ nhất là 109,16 ELD50/ 0,1ml và cao nhất ở lần cấy chuyển thứ 4 là 109,54 ELD50/0,1 ml. Nhưng so sánh với hiệu giá virus giống gốc 109,24ELD50/ 0,1ml thì hiệu giá virus của các lần cấy chuyển là tương ựương nhaụ
Theo OIE, (2008), giống virus ựược kết luận là ổn ựịnh không có sự biến ựộng hiệu giá virus ắt nhất sau 4 ựời cấy chuyển trong tổng số 5 ựời cấy chuyển, vi sinh vật vẫn thể hiện ựầy ựủ các ựặc tắnh của giống gốc. Như vậy,
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 43 các giống virus Newcastle cường ựộc chủng VN91 sử dụng trong nghiên cứu ựảm bảo ựược yêu cầu của OIẸ